酵培养基质量的5%，继续在20°C下发酵72 h，得到发酵产物；发酵期间，间隔12 h翻拌一次，并且采用中压风机进行通风；通风的具体方式为:0 h?6 h，静止培养不通风；6 h?12h，间断通风；12 h?24 h，持续通风；24 h?30 h，静止培养不通风；30 h?36 h，间断通风；36 h?72 h，持续通风；72 h?96 h，间断通风；
步骤五、发酵产物的灭菌、干燥与粉碎:将所得发酵产物置于115°C高压蒸汽灭菌25min，然后采用滚筒加风方式在60 °C进行干燥，干燥至发酵产物含水量10% ;最后将其粉碎至40目，即得到植物蛋白混合物；该植物蛋白混合物的粗蛋白含量为32.09%。
[0022]所述发酵室的杀菌方法为甲醛熏蒸配合紫外杀菌，方法如下:开启空调机让甲醛气体扩散30 min，关闭空调机，熏蒸7 h?10 h，在熏蒸的同时进行紫外线照射20 min，杀菌结束后打开空调机进行排气。其中所述甲醛的用量为每I m3用量0.2 mL。
[0023]实施例2
一种植物蛋白混合物的制备方法，包括以下步骤:
步骤一、灭菌:取酒糟90份、水130份、麸皮15份和尿素2.5份，充分混合后，将所得混合物置于121°C条件下灭菌处理30 min，冷却，得到固体发酵培养基，备用；利用蒸汽的热效应，在高温下使木质素熔化，纤维素分子断裂、降解，同时脱毒、杀菌、除臭。
[0024]步骤二、铺料:首先对发酵室进行杀菌；然后将冷却的固体发酵培养基搅拌均匀后，铺到发酵室内的发酵池中；操作方法为，按照16 cm的厚度铺到发酵池底部所安装距池底0.4 m的透气网上；所述发酵池的长度为6 m，宽度为2 m，底部倾斜度为8°。
[0025]步骤三、种子培养:分别配制LB液体培养基、YPD液体培养基和PDA液体培养基，备用；从斜面上挑取枯草芽孢杆菌活化菌，接种于LB液体培养基中，在37°C、150 r/min条件下摇床培养24 h，得到处于对数生长期的枯草芽孢杆菌菌液；从斜面上挑取产朊假丝酵母活化菌，接种于YPD液体培养基中，在28°C、150 r/min条件下摇床培养24 h，得到处于对数生长期的产朊假丝酵母菌菌液；从斜面上挑取白地霉活化菌，接种于PDA液体培养基中，在28°C、150 r/min条件下摇床培养20 h，得到处于对数生长期的白地霉菌菌液；图1为三种菌的生长曲线图。
[0026]步骤四、接种与培养:分别将处于对数生长期的枯草芽孢杆菌菌液和白地霉菌菌液喷洒接种到固体发酵培养基上，接种量分别为固体发酵培养基质量的5%和10%，然后在30°C下发酵24 h ;再将处于对数生长期的产朊假丝酵母喷洒接种到固体发酵培养基上，接种量为固体发酵培养基质量的5%，继续在20?30 °C下发酵72 h，得到发酵产物；发酵期间，间隔12 h翻拌一次，并且采用风压9.80 kPa风机进行通风；通风的具体方式为:0 h?6h，静止培养不通风；6 h?12 h，间断通风；12 h?24 h，持续通风；24 h?30 h，静止培养不通风；30 h?36 h，间断通风；36 h?72 h，持续通风；72 h?96 h，间断通风；
步骤五、发酵产物的灭菌、干燥与粉碎:将所得发酵产物置于115°C高压蒸汽灭菌25min，然后采用滚筒加风方式在80 °C进行干燥，干燥至发酵产物含水量10% ;最后将其粉碎至60目，即得到植物蛋白混合物；该植物蛋白混合物的粗蛋白含量为32.09%ο
[0027]所述发酵室的杀菌方法为甲醛熏蒸配合紫外杀菌，方法如下:开启空调机让甲醛气体扩散30 min，关闭空调机，熏蒸7 h?10 h，在熏蒸的同时进行紫外线照射30 min，杀菌结束后打开空调机进行排气。其中所述甲醛的用量为每I m3用量0.5 mL。
[0028]实施例3
一种植物蛋白混合物的制备方法，包括以下步骤:
步骤一、灭菌:取酒糟90份、水130份、麸皮12份和尿素2.2份，充分混合后，将所得混合物置于121°C条件下灭菌处理28 min，冷却，得到固体发酵培养基，备用；利用蒸汽的热效应，在高温下使木质素熔化，纤维素分子断裂、降解，同时脱毒、杀菌、除臭。
[0029]步骤二、铺料:首先对发酵室进行杀菌；然后将冷却的固体发酵培养基搅拌均匀后，铺到发酵室内的发酵池中；操作方法为，按照18 cm的厚度铺到发酵池底部所安装距池底0.35 m的透气网上；所述发酵池的长度为6 m，宽度为2 m，底部倾斜度为8°。
[0030]步骤三、种子培养:分别配制LB液体培养基、YPD液体培养基和PDA液体培养基，备用；从斜面上挑取枯草芽孢杆菌活化菌，接种于LB液体培养基中，在37°C、150 r/min条件下摇床培养24 h，得到处于对数生长期的枯草芽孢杆菌菌液；从斜面上挑取产朊假丝酵母活化菌，接种于YPD液体培养基中，在28°C、150 r/min条件下摇床培养24 h，得到处于对数生长期的产朊假丝酵母菌菌液；从斜面上挑取白地霉活化菌，接种于PDA液体培养基中，在28°C、150 r/min条件下摇床培养20 h，得到处于对数生长期的白地霉菌菌液；图1为三种菌的生长曲线图。
[0031]步骤四、接种与培养:分别将处于对数生长期的枯草芽孢杆菌菌液和白地霉菌菌液喷洒接种到固体发酵培养基上，接种量分别为固体发酵培养基质量的5%和10%，然后在20?30°C下发酵24 h ;再将处于对数生长期的产朊假丝酵母喷洒接种到固体发酵培养基上，接种量为固体发酵培养基质量的5%，继续在28°C下发酵72 h，得到发酵产物；发酵期间，间隔12 h翻拌一次，并且采用风压10.13 kPa风机进行通风；通风的具体方式为:0 h?6 h，静止培养不通风；6 h?12 h，间断通风；12 h?24 h，持续通风；24 h?30 h，静止培养不通风；30 h?36 h，间断通风；36 h?72 h，持续通风；72 h?96 h，间断通风；
步骤五、发酵产物的灭菌、干燥与粉碎:将所得发酵产物置于115°C高压蒸汽灭菌25min，然后采用滚筒加风方式在75 °C进行干燥，干燥至发酵产物含水量10% ;最后将其粉碎至55目，即得到植物蛋白混合物；该植物蛋白混合物的粗蛋白含量为32.09%ο
[0032]所述发酵室的杀菌方法为甲醛熏蒸配合紫外杀菌，方法如下:开启空调机让甲醛气体扩散30 min，关闭空调机，熏蒸8 h，在熏蒸的同时进行紫外线照射25 min，杀菌结束后打开空调机进行排气。其中所述甲醛的用量为每I m3用量0.4mL。
【主权项】
1.一种植物蛋白混合物的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤一、灭菌:取酒糟90份、水130份、麸皮10?15份和尿素2?2.5份，充分混合，将所得混合物121°C蒸汽灭菌处理25?30 min，冷却，得到固体发酵培养基，备用； 步骤二、铺料:首先对发酵室进行杀菌；然后将冷却的固体发酵培养基搅拌均匀后，铺到发酵室内的发酵池中；操作方法为，按照15 cm?20 cm的厚度铺到发酵池底部所安装距池底0.3 m?0.4 m的透气网上；所述发酵池的长度为6 m，宽度为2 m，底部倾斜度8。?10。； 步骤三、种子培养:分别配制LB液体培养基、YPD液体培养基和PDA液体培养基，备用；从斜面上挑取枯草芽孢杆菌活化菌，接种于LB液体培养基中，在37°C、150 r/min条件下摇床培养24 h，得到处于对数生长期的枯草芽孢杆菌菌液；从斜面上挑取产朊假丝酵母活化菌，接种于YPD液体培养基中，在28°C、150 r/min条件下摇床培养24 h，得到处于对数生长期的产朊假丝酵母菌菌液；从斜面上挑取白地霉活化菌，接种于PDA液体培养基中，在28°C、150 r/min条件下摇床培养20 h，得到处于对数生长期的白地霉菌菌液； 步骤四、接种与培养:分别将处于对数生长期的枯草芽孢杆菌菌液和白地霉菌菌液喷洒接种到铺到发酵池中的固体发酵培养基上，接种量分别为固体发酵培养基质量的5%和10%，然后在20?30°C下发酵24 h ;再将处于对数生长期的产朊假丝酵母喷洒接种到固体发酵培养基上，接种量为固体发酵培养基质量的5%，继续在20?30°C下发酵72 h，得到发酵产物；发酵期间，间隔12 h翻拌一次，并且采用风压为9.80 kPa?10.13 kPa的风机进行通风；通风的方式为:0 h?6 h，静止培养不通风；6 h?12 h，间断通风；12 h?24 h，持续通风；24 h?30 h，静止培养不通风；30 h?36 h，间断通风；36 h?72 h，持续通风；72 h?96 h，间断通风； 步骤五、发酵产物的灭菌、干燥与粉碎:将所得发酵产物置于115°C高压蒸汽灭菌25min，然后采用滚筒加风方式在60?80°C进行干燥，干燥至发酵产物含水量10% ;最后将其粉碎至40?60目，即得到植物蛋白混合物；该植物蛋白混合物的粗蛋白含量为32.09%。2.如权利要求1所述的植物蛋白混合物的制备方法，其特征在于:所述发酵室的杀菌方法为甲醛熏蒸配合紫外杀菌，方法如下:开启空调机让甲醛气体扩散30 min，关闭空调机，熏蒸7 h?10 h，在熏蒸的同时进行紫外线照射20?30 min，杀菌结束后打开空调机进行排气。3.如权利要求2所述的植物蛋白混合物的制备方法，其特征在于:所述甲醛的用量为每I m3用量0.2?0.5 mLo4.如权利要求1所述的植物蛋白混合物的制备方法，其特征在于:所述发酵室底部坡度为9°。5.如权利要求1所述的植物蛋白混合物的制备方法，其特征在于:步骤二中所述固体发酵培养基所铺的厚度为16 cm?18 cm。
【专利摘要】一种植物蛋白混合物的制备方法，涉及微生物发酵技术领域；制备步骤为，取酒糟、水、麸皮和尿素混合后蒸汽灭菌，得到固体发酵培养基；然后将冷却的固体发酵培养基搅拌均匀后，铺到发酵池中；分别将枯草芽孢杆菌菌液和白地霉菌菌液喷洒接种到固体发酵培养基上，然后在20～30℃下发酵24？h；再将产朊假丝酵母喷洒接种到固体发酵培养基上，继续在20～30℃下发酵72？h，得到发酵产物；发酵期间通风，且间隔12小时翻拌一次；所得发酵产物的灭菌、干燥与粉碎，即得到粗蛋白含量为32.09%的植物蛋白混合物；本发明植物蛋白混合物的制备方法是一种节能、低成本、绿色、高效的工业化生产植物蛋白质的方法，为我国酒糟的高效利用提供了一种新途径。
【IPC分类】A23K1/00, A23K1/14, A23K1/06
【公开号】CN105010731
【申请号】CN201510237062
【发明人】刘建学, 焦肖飞, 韩四海, 李璇, 张卫卫, 李佩艳, 徐宝成, 罗登林, 辛莉, 袁云霞
【申请人】河南科技大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年5月12日