专利名称：杂环取代的吡唑啉酮的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及杂环取代的吡唑啉酮，包括含有该物质的药物组合物，诊断试剂盒，测定标准物或试剂，和使用该物质作为治疗药的方法。本发明也涉及中间体和这些新颖化合物的制备方法。
背景技术：
蛋白激酶在细胞生长和分化的控制中起关键性的作用。蛋白激酶中的迷行表达或突变已经显示出导致不受控制的细胞增生，如恶性肿瘤生长和发育中的各种缺陷，包括细胞移行或侵入，和血管生成。因此，蛋白激酶对于在与异常细胞增生有关的疾病和紊乱中细胞增生的控制，调节和调变是关键的。蛋白激酶也已经被指出为如下疾病中的靶物中枢神经系统紊乱如阿尔茨海默病，炎症性紊乱如牛皮癣，骨疾病如骨质疏松症，动脉粥样硬化，再狭窄，血栓形成，代谢紊乱如糖尿病，和感染病如病毒性感染和真菌感染。
涉及激酶调节的最常用研究的途径之一是从细胞表面的受体到细胞核的细胞信号。一般情况下，每个受体的功能由如下确定它的表达方式，配体可得性，和由特定受体活化的下游信号变异途径的排列。这种途径的一个例子包括激酶的级联，其中生长因子受体酪氨酸激酶的组分通过磷酸化作用传送信号到其它激酶，如Src酪氨酸激酶，和Raf，Mek和Erk丝氨酸/苏氨酸激酶属。这些激酶的每种由几种起相关，但功能不同作用的属组分表示。生长因子信号途径调节的损失在癌症以及其它疾病态中是经常发生的事情。参见Fearon，人体癌症中的遗传病变，分子肿瘤学，1996，143-178。
可以通过已知癌基团产物ras活化raf1丝氨酸/苏氨酸激酶。raf激酶通过Raf/MEK/ERK蛋白激酶级联，阳性地调节细胞分裂。此活化是蛋白激酶MEK1的cRaf1催化磷酸化的结果，该激酶将蛋白激酶ERK磷酸化和活化。ERK磷酸化和调节要求用于细胞分裂的转录因子。Avruch等，TIBS，1994(19)279-283。CRaf1通过Bc1-2，凋亡的关键调节剂，活性的调变，阴性地调节细胞死亡。此调节涉及Bc1-2族组分的直接磷酸化。Gajewski和Thompso，Cell，1996(87)619-628。
细胞增生的cRaf1-为媒介的调节的这些方面要求cRaf1的激酶活性。也已经有报导Raf蛋白质水平的降低与体内小鼠模型中的肿瘤生长率的降低相关联。Monia，Johnston，Geiger，Muller和Fubro，NatureMedicine，卷2，No.6，1996年6月，668-674。因此，cRaf1激酶活性的抑制应当提供对于许多种人类癌症的有效治疗。
通过抑制涉及的一种或多种激酶，MAP信号途径的活化代表对于肿瘤治疗有吸引力的目标。蛋白质的MAP激酶属的其它组分是p38激酶，或者称为细胞因子抑制性药物结合蛋白质或反应性激酶，RK。这种激酶的活化已经暗示在前炎症性细胞因子如IL-1和TNF的生产中。因此，这种激酶的抑制提供对于疾病状态的治疗，其中涉及未调节的细胞因子生产。
通过调节细胞周期的过程，由激酶转导的信号也已经显示可控制细胞生长，细胞死亡和细胞中的分化。由称为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的激酶属控制通过直核细胞周期的进展。在高增生性疾病和癌症中，CDK控制的损失是通常发生的事情。
涉及转导或保持特定疾病状态的激酶的抑制剂表示对于这些紊乱的新颖治疗。这样激酶的例子包括如下激酶的抑制Src，raf和癌症中的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)1，2，和4，再狭窄中的CDK2和PDGFR激酶，在阿尔茨海默病中的CDK5和GSK3激酶，骨质疏松症中的c-Src激酶，2-型糖尿病中的GSK-3激酶，炎症中的p38激酶，血管生成中的VEGF-R 1-3和TIE-1和-2激酶，病毒性感染中的UL97激酶，骨和造血病中的GSF-1R激酶，和自动免疫疾病和移植排异中的Lck激酶。
因此，需要新颖类别的化合物，该化合物显示针对受体和非受体类型蛋白激酶的活性。已经发现一类化合物，在此称为杂环取代的吡唑啉酮，可用作蛋白激酶调节的试剂。因此，本发明涉及用于上述紊乱治疗的治疗剂的用途。
发明概述因此，本发明的一个目的是提供是激酶抑制剂的新颖化合物。在某些目的中，本发明的化合物是以下物质的一种或多种的抑制剂血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶，trkA酪氨酸激酶(trkA)，混合血统激酶(MLK)或纤维形成生长因子受体激酶(FGFR)。
本发明的另一个目的是提供一种药物组合物，该组合物包括药学上可接受的载体和治疗有效量的至少一种本发明的化合物，或其药用盐。
本发明的另一个目的是提供治疗或预防与蛋白质激酶迷行活性有关的紊乱的新方法。在某些目的中，紊乱的特征在于以下物质的一种或多种的迷行活性血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶，trkA酪氨酸激酶(trkA)，混合血统激酶(MLK)或纤维形成生长因子受体激酶(FGFR)，和该方法包括向需要这样治疗或预防的宿主给予治疗有效量的至少一种本发明的化合物。
本发明的另一个目的是提供抑制体液样品中蛋白质激酶的方法。在某些目的中，该方法包括采用有效量的至少一种本发明的化合物，处理体液样品，以抑制一种或多种蛋白质激酶。
本发明的另一个目的是提供试剂盒或容器，以用作诊断剂，标准物或试剂，其中包含有效量的至少一种本发明的化合物。
这些和其它重要目的，在以下详细描述期间是显然的，已经由本发明人的发现达到，该发现是下式I化合物或其立体异构体，立体异构体的混合物或其药用盐，它们是有效的激酶抑制剂 其中R1，R2，R3，R4，R5，和Het如下文定义。实施方案的详细描述因此，在第一个实施方案中，本发明提供下式I的新化合物或其立体异构体或其药用盐 其中Het是杂环；R1选自H，被0-5个R6取代的C1-10烷基，被0-5个R6取代的C2-8链烯基，被0-5个R6取代的C2-8炔基，NRaRa，C(＝O)Rb，C(＝O)NHRa，CO2Rc，和被0-5个R6取代的杂环；条件是当R1和Het均为2-吡啶基时，R2和R3不是4-二乙氨基-2-苯基；以及当R1是4-羧基-苯乙基时，Het和R2或R3之一均不是二甲氨基-噻吩；R2和R3各自独立地选自H，被1-5个R6取代的C1-2烷基，被0-5个R6取代的C3-10烷基，被0-5个Ri取代的C2-8链烯基，C2-6炔基，Cl，Br，I，CN，(CH2)rNRaRa，(CH2)rORc，(CH2)rSRc，(CH2)rNC(＝O)Rb，(CH2)rCO2Rc，(CH2)rOC(＝O)Rb，(CH2)rC(＝O)NRaRa，(CH2)rNRaC(＝O)Rb，(CH2)rNRaC(＝O)ORb，(CH2)rOC(＝O)NHRa，(CH2)rNRaS(＝O)Rb，(CH2)rS(＝O)2NRaRa，(CH2)rS(O)pRb，被0-5个R4取代的(CH2)r碳环，和被0-5个R4取代的(CH2)r杂环；条件是R2和R3不能同时为H或同时为SCH3；以及当R2是H和R3是苯基时，杂环不能是2-呋喃基；另外，R2和R3一起可形成被0-4个R4取代的杂环，条件是该杂环不是2-噻唑烷基或5-甲基-2-噁唑烷基；所述的R4各自独立地选自H，F，Cl，Br，I，CN，CF2CF3，CF3，NO2，CN，OH，NRaRa，ORc，C(＝O)Rb，CO2Rc，OC(＝O)Rb，NRaC(＝O)Rb，C(＝O)NRaRa，OC(＝O)NRaRa，NRaC(＝O)ORb，NRaS(＝O)2Rb，S(＝O)NRaRa，NRaC(＝S)Rb，C(＝S)NRaRa，NRaC(＝O)NRaRa，NRaC(＝S)NRaRa，CH＝NORc，CHNRa，CH＝NNRaRa，(CH2)rS(O)pRb，O(CH2)qNRaRa，O(CH2)qORc，(CH2)rORd，(CH2)rC(＝O)Rd’，(CH2)rNHRd，(CH2)rS(O)pRd′，被0-5个R6取代的C1-10烷基，被0-5个R6取代的C2-8链烯基，被0-5个R6取代的C2-8炔基，被0-5个R6取代的碳环，被0-5个R6取代的杂环；R5或者不存在，或者选自H，C1-8烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，(CH2)rC3-6环烷基，和(CH2)r苯基；R6，在每种情况下，独立地选自被0-5个Rh取代的碳环C1-6烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，F，Cl，Br，I，CN，CF2CF3，CF3，NO2，CN，NRfRf，ORf，C(＝O)Rf，CO2Rf，OC(＝O)Rg，NRfC(＝O)Rf，C(＝O)NRfRf，OC(＝O)NRfRf，NReC(＝O)ORg，NReS(＝O)2Rg，S(＝O)2NRfRf，NRaC(＝S)Rg，C(＝S)NRfRf，NRfC(＝O)NRfRf，NRfC(＝S)NRfRf，CH＝NORe，CH＝NRe，CH＝NNReRe，S(O)pRf，O(CH2)pNRfRf，O(CH2)pNRf，ORd，NHRd，C(＝O)Rd’，S(O)pRd’，被0-5个Rh取代的碳环，被0-5个Rh取代的杂环，P(＝O)(ORC)2，和C5-7单糖，其中单糖的每个羟基是未取代的或被选自如下的基团取代H，C1- 4烷基，C1-4烷氧基，和OC(＝O)C1-4烷基；Ra，在每种情况下，独立地选自H，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，(CH2)rC3-6环烷基，和(CH2)r苯基，其中当Ra不是H时，Ra被0-5个Rh取代；或者，两个Ra可结合以形成选自(CH2)qO(CH2)q，(CH2)qS(CH2)q，和(CH2)m的链接，其中链接被0-5个Rh取代；Rb，在每种情况下，独立地选自C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，(CH2)r苯基，和(CH2)r杂环，其中Rb被0-5个Rh取代；Rc，在每种情况下，独立地选自H，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，C3-6环烷基，和(CH2)r苯基，其中当Rc不是H时，Rc被0-5个Rh取代；Rd，在每种情况下，独立地选自在除去羧基的羟基之后氨基酸的残基；Rd’，在每种情况下，独立地选自在除去胺的氢之后氨基酸的残基；Re，在每种情况下，独立地选自在H和C1-6烷在；Rf，在每种情况下，独立地选自在H，被0-5个Rh取代的C1-6烷基，和被0-5个Rh取代的(CH2)r苯基；Rg，在每种情况下，独立地选自在被0-5个Rh取代的C1-6烷基，和被0-5个Rh取代的(CH2)r苯基；Rh，在每种情况下，独立地选自在F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，CF2CF3，C1-4烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，烷氧基，C3-7环烷基，羧基，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，新戊酰基，己酰基，乙酰氨基，乙酸酯，氨基甲酰基，羧基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，苯基，苄基，苯乙基，萘基，杂环基和酮基；Ri，在每种情况下，独立地选自在F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，CF2CF3，C1-4烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，烷氧基，C3-7环烷基，羧基，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，新戊酰基，己酰基，乙酰氨基，乙酸酯，氨基甲酰基，羧基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，苯基，苄基，苯乙基；m选自2，3，4，和5；n选自0，1，2，3，4，和5；p选自0，1，和2；q选自1，2，3，和4；和
r选自0，1，2，3和4。
如由熟练技术人员容易理解的那样，通式I结构中双键的位置会依赖于R5的本质。例如，在某些其中R5不存在的实施方案中，通式I可具有如下结构 在其中R5是氢的另一实施方案中，通式I可具有如下结构 在其中R5是取代基的其它实施方案中，通式I可具有如下结构 在某些优选的实施方案中，通式I具有如下结构 其中R1选自氢和烷基。在其它优选的实施方案中，R2或R3选自H和烷基。
在其它优选的实施方案中，杂环取代的吡唑啉酮由以下通式表示 其中R2或R3是H。
在其它优选的实施方案中，Het选自a)包含1-3个杂原子的6-元杂环，杂原子选自O，N和S；和b)包含如下之一的5-元杂环1)一个氧原子，一个氮原子，或一个硫原子；2)硫和氮原子，氧和氮原子，或两个氮原子；或3)三个氮原子，一个氧原子和两个氮原子，或一个硫原子和两个氮原子。
在其它优选的实施方案中，Het是杂芳族的。在其它优选的实施方案中，Het选自 其中X选自O，S，NH，和N-烷基。
在其它实施方案中，Het是非芳族的。在某些优选的实施方案中，Het选自 在某些实施方案中，R4选自F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，乙烯基，丙烯基，丁烯基，乙炔基，丙炔基，丁炔基，甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，苯基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，CO2H，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，苯基，和杂芳基，和酮(C＝O)。在其它优选的实施方案中，n选自0，1，和2。
在某些实施方案中，R3是选自如下的杂环a)包含1-3个杂原子的6-元杂环，杂原子选自O，N和S；b)包含如下之一的5-元杂环
1)一个氧原子，一个氮原子，或一个硫原子；2)硫和氮原子，氧和氮原子，或两个氮原子；或3)三个氮原子，一个氧原子和两个氮原子，或一个硫原子和两个氮原子。
在其它的优选实施方案中，R2或R3之一是芳族杂环。在其它的优选实施方案中，R2或R3之一选自 其中X选自O，S，NH，和N-烷基。
在其它的优选实施方案中，R2或R3之一是非芳族杂环。在其它的优选实施方案中，R2或R3之一选自 在其它实施方案中，通式I的化合物由在表1和1a中给出的那些化合物表示。
在其它实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其中包括通式I的化合物，其立体异构体或其药用盐，和制药可接受的载体。在优选的组合物中，通式I的化合物是在表1和1a中给出的一个。
在其它实施方案中，本发明提供抑制蛋白激酶活性的方法，包括以足以引起有效抑制的数量提供通式I的化合物。在优选的实施方案中，激酶受体是血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶，trkA酪氨酸激酶(trkA)，混合血统激酶(MLK)或纤维形成生长因子受体激酶(FGFR)。
在其它实施方案中，本发明提供治疗或预防特征为蛋白激酶的迷行活性紊乱的方法，该方法包括向需要这样治疗或预防的宿主，提供治疗有效量的通式I化合物。
在其它实施方案中，本发明提供治疗或预防疾病的方法，其中的疾病包括血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶，trkA酪氨酸激酶(trkA)，混合血统激酶(MLK)或纤维形成生长因子受体激酶(FGFR)引起的病理性状态，该方法包括以足够的数量提供通式I的化合物，以使受体与有效抑制量的化合物接触。
在其它的实施方案中，本发明提供治疗或预防血管生成紊乱的方法，该方法包括向需要这样治疗或预防的宿主，提供治疗有效量的通式I化合物。在优选的实施方案中，血管生成紊乱是实体肿瘤癌，眼疾病，斑退化，子宫内膜异位症，糖尿病性视网膜炎，牛皮癣，或成血管细胞瘤。
在其它的实施方案中，本发明提供治疗或预防由选自如下的激酶介导的疾病的方法ab1，AKT，bcr-ab1，Blk，Brk，Btk，c-kit，c-met，c-src，CDK1，CDK2，CDK4，CDK6，chk1，chk2，cRaf1，CSF1R，CSK，EGFR，ErbB2，ErbB3，ErbB4，ERK(Eph)，Fak，fes，FGFR1，FGFR1，FGFR3，FGFR4，FGFR5，MLK1，MLK2，MLK3，DLK，trkA，trkB，trkC，Fgr，FLK-4，fit-1，Fps，Frk，Fyn，GSK，Hck，IGF-lR，INS-R，Jak，JNK，VEOFR1，VEGFR2，VEGFR3，Lck，Lyn，MEK，p38，PDGFR，PIK，PKC，PYK2，ros，tie1，tie2，UL97，Yes和Zap70，该方法包括向需要这样治疗或预防的患者，提供治疗有效量的通式I化合物。
在其它的实施方案中，本发明提供治疗或预防疾病的方法，其中选自激酶ab1，AKT，bcr-ab1，Blk，Brk，Btk，c-kit，c-met，c-src，CDK1，CDK2，CDK4，CDK6，chk1，chk2，cRaf1，CSF1R，CSK，EGFR，ErbB2，ErbB3，ErbB4，ERK(Eph)，Fak，fes，FGFR1，FGFR1，FGFR3，FGFR4，FGFR5，MLK1，MLK2，MLK3，DLK，trkA，trkB，trkC，Fgr，FLK-4，fit-1，Fps，Frk，Fyn，GSK，Hck，IGF-lR，INS-R，Jak，JNK，VEOFR1，VEGFR2，VEGFR3，Lck，Lyn，MEK，p38，PDGFR，PIK，PKC，PYK2，ros，tie1，tie2，UL97，Yes和Zap70促成的病理状态，该方法包括以足够的数量提供通式I化合物，使受体与有效抑制量的该化合物接触。
在其它的实施方案中，本发明提供治疗或预防如下疾病的方法阿尔茨海默病，肌萎缩侧索硬化，帕金森病，中风，局部出血，享廷顿病，爱滋病，痴呆，癫痫，多发性硬化症，周围神经病，脑或脊柱索损伤，癌症，再狭窄，骨质疏松症，炎症，病毒性感染，骨或造血疾病，自身免疫病或移植排异，该方法包括向需要这样治疗或预防的宿主给予治疗量的权利要求1的化合物。
在某些实施方案中，本发明涉及抑制Src，raf，和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)1，2，和4中的一种或多种，用于癌症的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及抑制CDK2或PDGF-R激酶中一种或多种，用于再狭窄的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及抑制CDK5或GSK3激酶中的一种或多种，以治疗阿尔茨海默病。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种cSrc激酶的抑制，用于骨质疏松症的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种GSK-3激酶的抑制，用于2型糖尿病的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种p38激酶的抑制，用于炎症的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种VEGF-R 1-3，TIE-1，或TIE-2激酶的抑制，用于血管形成的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种UL97激酶的抑制，用于病毒性感染的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种CSF-1R激酶的抑制，用于骨或造血疾病的治疗。
在某些实施方案中，本发明涉及一种或多种Lck激酶的抑制，用于治疗自身免疫疾病或移植排异。
在某些实施方案中，本发明提供治疗或预防由局部异构酶Topo-I或TopoII介导的疾病的方法，用于癌症的治疗。定义以下术语和表达具有指定的意义。在此使用的“稳定化合物”或“稳定结构”意指示这样的化合物，它是足够稳定的，以从反应混合物分离到有用的纯净程度存在，和优选能配制成有效的治疗剂。本发明仅涉及稳定化合物。在此使用的“取代的”意指示在指示的基团上的一个或多个氢原子被在此称为“取代基”的选择基团代替，条件是不超过被取代原子的价数，和取代导致稳定的化合物。当术语“取代的”涉及包含(CH2)r或(CH2)p的基团，如(CH2)r苯基时，它指的是取代基可位于基团，即苯基，或CH2链上。通过说明，可进一步被取代的基团包括，但不限于烷基，链烯基，炔基，烷氧基，酰基，碳环和杂环，以及包含这些部分的另外基团。取代基团优选含有1-5个独立选择的取代基。优选的取代基包括，但不限于F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，CF2CF3；烷基包括，但不限于甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，叔丁基和戊基；烯基包括，但不限于乙烯基，丙烯基，和丁烯基；炔基包括，但不限于乙炔基，丙炔基，和丁炔基；烷氧基包括，但不限于甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基，和叔丁氧基；环烷基包括，但不限于环丙基，环丁基，环戊基，和环己基；羧基，酰基包括，但不限于甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，新戊酰基，和己酰基；酰氨基，氨基甲酰基，羧基，羟氨基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，(CH2)r碳环包括，但不限于苯基，苄基，苯乙基和萘基；杂环，和酮(C＝O)。
在此使用的术语“烷基”表示含有1-8个碳原子的直链，或支链烷基，如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基，1-乙基丙基，己基，和辛基。在此使用的“环烷基”意表示单环，双环或三环烷基包括，但不限于环丙基，环丁基，环戊基，和环己基等。
在此使用的“链烯基”意在包括具有直链或支化构型和一个或多个不饱和碳-碳键的烃链，该键可在链上的任何稳定点出现，如乙烯基，丙烯基等。
在此使用的“炔基”意在包括具有直链或支化构型和一个或多个三重碳-碳键的烃链，该键可在链上的任何稳定点出现，如乙炔基，丙炔基等。
在此使用的“烷氧基”意在包括通过氧键合的直链或支化构型的烃链。烷氧基包括，但不限于甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基，和叔丁氧基等。
在此使用的“碳环”意在表示由碳原子组成的任何稳定的单环、双环或三环，它们可以是饱和的，部分不饱和的，或不饱和的。碳环意在包括，但不限于在此称为“环烷基”的化合物。碳环也意在包括“芳基”或“芳族”化合物。芳基化合物的实例包括，但不限于苯基，联苯基，萘基，2，3-二氢化茚基，金刚烷基，或四氢萘基(四氢化萘)。
在此使用的“杂环”或“杂环的环”意在包括稳定的单环、双环或三环杂环的环，它是饱和的，部分不饱和的，或不饱和的环。因此，杂环可以是芳族的或非芳族的。杂环优选由碳原子的杂原子组成，杂原子优选独立地选自N，O和S。氮或硫杂原子可选择地被氧化。杂环可以在任何杂原子或碳原子处连接到它的侧基上，导致稳定的结构。如果获得的化合物是稳定的，在此所述的杂环可以在例如，碳或氮原子上被取代。具体而言，杂环中的氮可选择地被季铵化。优选当杂环中S和O原子的总数目超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。优选杂环中S和O原子的总数目不大于1。
在此使用的“杂芳族”或“杂芳基”意在表示稳定的杂环，它是芳族的和由碳原子和杂原子组成，其中杂原子优选独立地选自N，O和S。
杂环的例子包括，但不限于2-吡咯烷酮基，2H-吡咯基，4-哌啶酮基，6H-1，2，5-噻二嗪基，2H，6H-1，5，2-二噻嗪基，呋喃基，呋咱基，咪唑烷基，咪唑啉基，咪唑基，异噁唑基，吗啉基，噁二唑基，1，2，3-噁二唑基，1，2，4-噁二唑基，1，2，5-噁二唑基，1，3，4-噁二唑基，噁唑烷基，噁唑基，哌嗪基，哌啶基，蝶啶基，哌啶酮基，4-哌啶酮基，蝶啶基，嘌呤基，吡喃基，吡嗪基，吡唑烷基，吡唑啉基，吡唑基，哒嗪基，吡啶基，吡啶基、嘧啶基，吡咯烷基，吡咯啉基，四氢呋喃基，6H-1，2，5-噻二嗪基，1，2，3-噻二唑基，1，2，4-噻二唑基，1，2，5-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，噻唑基，噻吩基，噻吩并噻唑基，噻吩并噁唑基，噻吩并咪唑基，噻吩基，三嗪基，1，2，3-三唑基，1，2，4-三唑基，1，2，5-三唑基，1，3，4-三唑基，和四唑。也包括的是稠合环和螺环化合物，其中包含例如上述杂环。合适的杂环也公开于化学和物理手册(TheHandbook of Chemistry Physics)，76版，CRC Press，Inc.，1995-1996，2-25至2-26页，它们的公开内容在此引入作为参考。
由氮原子形成的优选杂环基团包括，但不限于吡咯烷基，哌啶基，哌啶子基，吗啉基，吗啉代基，硫代吗啉代基，N-甲基哌嗪基，吲哚基，异吲哚基，咪唑，咪唑啉，噁唑啉，噁唑，三唑，噻唑啉，噻唑，异噻唑，噻二唑，三嗪，异噁唑，羟吲哚，3-羟基吲哚，吡唑，吡唑啉酮，嘧啶，吡嗪，喹啉，异喹啉，和四唑基团。
由氧原子形成的优选杂环基团包括，但不限于呋喃，四氢呋喃，吡喃，苯并呋喃，异苯并呋喃，和四氢吡喃基团。由硫原子形成的优选杂环基团包括，但不限于噻吩，硫茚，四氢噻吩，四氢噻喃，和苯并噻吩。
优选的杂芳基包括，但不限于吡啶基，嘧啶基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，咪唑基，三唑基，四唑基，喹啉基，异喹啉基，苯并咪唑基，噻唑基，吡唑基，和苯并噻唑基。
在此使用的术语“单糖”具有作为简单糖的惯常意义。在此使用的术语“氨基酸”表示包含氨基和羧基两者的分子。氨基酸的实施方案包括α-氨基，β-氨基，γ-氨基酸。在此使用的术语“α-氨基酸”是具有通式HOOC-CH(NH2)-(侧链)的羧酸。氨基酸的侧链包括天然和非天然的部分。非天然(非自然)氨基酸侧链是用于代替天然氨基酸侧链的部分，例如氨基酸类似物。参见，例如，Lehninger，生物化学，第二版，Worth Publishers，Inc，1975，73-75页，它们的公开内容在此引入作为参考。在某些实施方案中，通式Rd的取代基包括在除去其羧基的羟基部分之后的氨基酸的残基，即通式-C(＝O)CH-(侧链)-NHR’的基团，其中R’是H，C1-6烷基，或胺保护基团。在某些实施方案中，通式Rd’的取代基包括在除去其氨基的氢之后的氨基酸的残基，即通式-NH-CH-(侧链)-C(＝O)OR’的基团，其中R’是H，C1-6烷基，或羧基保护基团。
在通式I化合物或中间体化合物上存在的官能团也可包含保护基团。优选的保护基团包括苄氧羰基(Cbz；Z)和叔丁氧羰基(Boc)。其它保护基团可在Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，有机合成中的保护基团，第二版，Wiley & Sons，1991，本领域的通常文献，它的公开内容在此引入作为参考。
在此使用的，通常用于描述治疗剂在生物体系、测定等的效果的术语，具有所在领域通常的意义。在此使用的，用于修饰术语“功能”和“存活”的术语“效果”表示阳性或阴性的改变或变化。阳性的效果在此称为“增强”或“增强的”，阴性的效果在此称为“抑制”或“抑制的”。
在此使用的，用于修饰术语“功能”和“存活”时的术语“增强”或“增强的”表示与不存在本发明化合物的细胞相比，杂环取代吡唑啉酮化合物的存在对营养因子响应细胞的功能和/或存活具有阳性的效果。例如，但不受限制的情况是，关于如胆碱能神经元的存活，与胆碱能神经元族不存在这样的化合物时相比，如果处理的族群比未处理的族群具有相对更大的功能周期，化合物可增强胆碱能神经元种群处于死亡危险(如由于损伤，疾病状态，退化状态或天然增长)时的存活。在此使用的“可抑制”和“抑制”表示在杂环取代的吡唑啉酮化合物存在下，规定材料的特定响应(如酶活性)相对降低。
在此使用的术语“trk”表示高亲合力神经营养蛋白(neurotrophin)受体，目前包括trkA，trkB和trkC，和神经营养蛋白可以结合的其它膜相关蛋白质。
在此使用的术语“癌症”和“癌症的”是指哺乳动物中细胞的任何恶性增生。例子包括前列腺癌，良性前列腺过度增生，卵巢癌，乳腺癌，脑癌，肺癌，胰腺癌，结肠直肠癌，胃癌，实体肿瘤，头和颈癌，成神经细胞瘤，肾细胞癌，淋巴癌，白血病，造血系统的其它可识别的恶性肿瘤，和其它可识别的癌症。
在此使用的术语“神经元”、“神经元系细胞”和“神经元细胞”包括，但不限于具有单个或多个递质和/或单个或多重功能的异种族神经元类型；优选，这些是胆碱能和感觉神经元。在此使用的术语“胆碱能神经元”表示中枢神经系统(CNS)和周围神经系统(PNS)的神经元，它们的神经递质是乙酰胆碱；实例是基底前脑、纹状体和脊柱索神经元。在此使用的术语“感觉神经元”包括响应于来自如皮肤、肌肉和关节的环境信号(如温度，移动)的神经元，实例是来自脊神经节的神经元。
在此使用的“营养因子响应细胞”是包括营养因子可以特异结合的受体的细胞；例子包括神经元(如胆碱能和感觉神经元)和非神经元细胞(如单核细胞和瘤细胞)。
在此使用的“治疗有效量”表示有效预防或治疗特定疾病的本发明化合物的量。这样的疾病包括，但不限于与在此描述的受体迷行活性有关的病理和神经性紊乱，其中治疗或预防包括通过将受体与通式I化合物接触，以抑制、诱导或增强其活性。
在此使用的术语“药用的”表示那些化合物、材料、组合物和/或剂量形式，它们是在合理医疗判断范围之内，适于与人体和动物的组织接触，而没有过量的毒性、刺激、过敏反应，或没有与合理的益处/危险定量比相当的其它并存的问题。
在此使用的“药用盐”表示公开化合物的衍生物，其中通过制备成其酸或碱盐而改性该母化合物。药用盐的例子包括，但不限于碱性残基如胺的无机或有机酸盐；酸性残基如羧基的碱或有机盐等。药用盐包括母体化合物的常规非毒性盐或季铵盐，从例如非毒性无机或有机酸形成。例如，这样的常规非毒性盐包括衍生自如下无机酸的那些盐如盐酸，氢溴酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸，硝酸等；和从如下有机酸制备的盐如乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，抗坏血酸，pamoic acid，马来酸，羟基马来酸，苯乙酸，谷氨酸，苯甲酸，水杨酸，磺胺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，富马酸，甲苯磺酸，甲磺酸，乙烷二磺酸，草酸，羟乙磺酸等。
本发明的药用盐可以从包含碱性或酸性部分的母体化合物，通过常规的化学方法制备。一般情况下，这样的盐可以通过反应这些化合物的游离酸或碱形式在水或有机溶剂中，或在两者的混合物中与化学计量的合适碱或酸反应而制备。一般情况下，非水介质如醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇或乙腈是优选的。合适盐的列举在如下文献中找到Remington’s Pharmaceutical Sciences，17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，p.1418，它的公开内容在此引入作为参考。
在此使用的“药物前体”意在包括任何共价键合的载体，当在体内将这样的药物前体给予哺乳动物对象时，它们可释放出本发明通式(I)的母体药物或其它形式的化合物。由于已知药物前体可增强药物的许多所需品质(如溶解性，生物可利用性，制造等)，本发明的化合物可以药物前体的形式给予。因此，本发明包括要求保护化合物的药物前体，包含该物质的组合物，和施用该物质的方法。
本发明化合物，例如通式I的药物前体，可以通过以一定的方式改性化合物中存在的官能团来制备上述改性产物可以通常的操作或在体内分解成母体化合物。因此，药物前体包括在把其中的羟基、氨基或羧基键合到任何基团的本发明化合物的药物前体施于哺乳动物时，它们可分别分解成游离羧基、游离氨基或羧酸。例子包括，但不限于醇和胺官能团的乙酸酯，甲酸酯和苯甲酸酯衍生物；和烷基，碳环，芳基和烷芳基酯如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，环丙基，苯基，苄基和苯乙基的酯等。合成可以采用本领域技术人员公知的许多方式，制备本发明的化合物。例如，可以通过下述方法，或在其上被熟练技术人员理解的变化后的方法合成该化合物。可以理解的是，与本发明有关公开的所有方法可以在任何规模上实施，包括在毫克，克，多克，千克，多千克或工业规模生产。
本发明的化合物可适当地包含一个或多个不对称取代的碳原子，因此可以旋光活性或外消旋形式分离。因此，除非具体指出特定的立体化学或异构体形式，指的是所有结构的手性、非对映体、外消旋和所有几何异构体形式。在本领域公知的是如何制备和分离这样的旋光形式。例如，立体异构体的混合物可以通过常规技术制备，常规技术包括，但不限于外消旋形式的拆分，正相、反相和手性色谱，优选盐的形成，再结晶等，或从手性原料通过手性合成或通过有目的的生成目标手性中心。
如容易理解的那样，在合成期间，在通式I化合物上存在的官能度可包含保护基团。例如，可以采用保护基团，如苄氧基羰基或叔丁氧基羰基取代通式I化合物的氨基酸侧链取代基。保护基团自身是已知的化学官能团，它们可以选择性地连接到官能基上或从官能基除去，官能基如羟基和羧基。这些基团在化合物中存在，以使这样的官能基对于化合物要经历的化学反应条件是惰性的。任何种类的保护基团可以在本发明中采用。优选的保护基团包括包括苄氧基羰基(Cbz；Z)和叔丁氧基羰基(Boc)。其它保护基团可在Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，《有机合成中的保护基团》，第二版，Wiley & Sons，1991。
例如，如在流程1-6中所示，可以制备通式(I-i)或(I-ii)的化合物
对于某些实施方案，β-酮酯(V)作为制备I-i到I-ii的关键中间体。 在某些实施方案中，本发明的化合物可包含杂环，它可进一步取代。可以通过本领域技术公知的各种方法，获得进一步取代的杂环化合物(包括另外的杂环)。例如，可用于β-酮酯(V)合成的开始材料以及方法可在如下文献中找到Thompson和Gaudino，J.Org.Chem.1984，49，5237-5243；和Kamal M.R.等，Phosphorous，Sulfur，Silicon Relat.Elem.1997，126，65-74；它们的公开内容在此引入作为参考。
一般情况下，例如，可以通过在流程1中设定的方法制备通式(V)的化合物。流程1 杂环甲基酯，酰卤或咪唑烷(imidazolide)(III)，与烯醇酸酯反应，得到化合物(V)(流程1a)。例如，相似的方法教导在如下文献中Bunting，J.W.；Kanter，J.P.，J.Am.Chem.Soc.，1993，115，11705-11715，它的公开内容在此全文引入作为参考。通过进一步的指引，向杂环羧酸酯(III)(1当量)在乙酸甲酯的溶液(0.5-1mL/mmol酯)中，加入NaH(在矿物油中60％分散体，1.1当量)，连续搅拌大约0.5小时。优选将反应混合物在回流下搅拌约2.5小时，冷却到室温，倾入水中(1ml/mmol酯)，和用合适的溶剂如乙醚萃取。用浓酸中和水相，和采用极性溶剂如二氯甲烷重复萃取。优选在有机层结合，和真空浓缩，以提供粗制β-酮酯(V)，它可用于吡唑啉酮生产而不要求进一步的精制。
或者，可以使用碳酸二烷基酯，通过杂环甲基酮的羧基-烷基化，制备通式(V)的化合物(流程1b)。例如，以此方式制备的β-酮酯的合成也描述在如下文献中Krapcho，A.P.；Diamanti，J.；Cayen，C.；Bingham，R.，Org.Synth.，1973，5，198-201，它的公开内容在此全文引入作为参考。通过进一步的指引，在回流下，向NaH(2.9当量)和碳酸二乙酯(2当量)在干燥甲苯中的剧烈搅拌悬浮液(1.5mL/mmol甲基酮)中，滴加所需杂环甲基酮(II)(1当量)在甲苯中的溶液。在加入之后，可以在回流下搅拌混合物大约0.5小时。优选将混合物冷却到室温，和采用合适的酸如冰乙酸酸化。在加入冷水之后，可以用合适的溶剂如甲苯萃取混合物。在处理之后，可以蒸发溶剂以提供粗β-酮酯(V)，它可用于吡唑啉酮生产而不要求进一步的精制。
中间体(V)也可以从杂环化合物(IV)，按照金属化和与乙基丙炔氯的反应而获得(流程1c)。此方法进一步描述在如下文献中Morales-Rios等，杂环，1996，43，1483-96，它的公开内容在此全文引入作为参考。
通过任何上述方法制备的β-酮酯(V)，例如可以与各种肼衍生物反应(流程2)。流程2
与肼的反应提供4-未取代的吡唑啉酮(VI)(流程2a)。通过进一步的指引，向β-酮酯(V)在绝对乙醇的混合物(3-5mL/mmolβ-酮酯)中，加入水合肼(5-10倍过量)，和将混合物在回流下保持大约3-5小时。优选将混合物冷却到室温和蒸发溶剂。可以通过过滤(如果注意到固体分离)或闪蒸色谱，使用合适的色谱溶剂体系如EtOAc/甲醇，分离吡唑啉酮。随后采用醚或乙酸乙酯研磨可有助于进一步的纯化。也可以通过杂环炔丙基酯(VII)与过量肼的反应，获得4-未取代吡唑啉酮(VI)(流程2b)。
与合适取代的羰基化合物进行Knoevenagel缩合反应，由吡唑啉酮(VI)提供所需的吡唑啉酮类似物(I-i)(流程3)。流程3 通过进一步的指引，可以在80-90℃下，将合适的吡唑啉酮(1当量)和所需醛(1.1当量)在绝对乙醇的混合物(2.5-3mL/mmol吡唑啉酮)，搅拌大约1-5小时。可以通过过滤和采用少量质子溶剂如乙醇洗涤，以固体分离出产物(从热反应混合物或在冰浴中的随后冷却时)。固体的NMR优选指出是一种几何异构体。例如，其它方法教导在如下教科书中《有机合成》，G.Jones，由R.Adams编辑，John Wiley & Sons，INC.，New York，1967，pp204-599，它的公开内容在此全文引入作为参考。
另外，首先使β-酮酯(V)与适当取代的羰基化合物缩合，得到中间体(VIII)，随后将其转化为吡唑啉酮(I-i)(流程4)。流程4 可以通过单取代肼(或二取代肼，如当R1不是所需的氢)与β-酮酯(V)或乙炔衍生物(VII)的反应，获得带有R5取代基的吡唑啉酮衍生物(分别为流程5a和5b)。例如，然后可以采用醛和仲胺引入在4位的取代基(流程5c)。例如，可以在亲核杂环存在下，通过化合物(XI)与甲醛的反应，制备化合物，其中R2是通过杂原子连接的杂环(流程5d)。流程5 或者，已经带有取代基β-酮酯(X)，可以随后转化成吡唑啉酮类似物(I-ii)。可以通过杂环甲基酯、酰卤或咪唑化物(III)，与合适取代的烯醇酯反应，制备化合物(X)(流程6a)。或者，可以通过将杂环β-酮酯脱质子，和将烯醇酯与合适取代的烷基卤化物、甲磺酸烷基酯或其它物质反应，制备化合物(X)(流程6b)。流程6 也可以从吡唑啉酮(I-i)，通过用合适还原剂，如NaBH4、LiBH4等处理，制备通式(I-ii)和/或(I-iii)的化合物(流程7)。如由本领域技术人员所理解的那样，可以在合适的条件下将通式(I-ii)或(I-iii)的化合物进一步反应，以加入R5基团，其中R5不是氢。流程7 在如下实例性实施方案的描述中，本发明的其它特征会是显然的。在此实施例用于说明的目的，而不是限制本发明的范围。实施例某些缩写在此使用并定义如下“EtOAc”表示乙酸乙酯，“MeOH”表示甲醇，“EtOH”表示乙醇，“DMSO-d6”表示氘化二甲基亚砜，“rt”表示室温，“d”表示双重峰，“dd”表示双重的双重峰，“t”表示三重峰，“m”表示多重峰，“J”表示偶合常数，“br”表示宽峰，“eq”或“equiv”表示当量，“mg”表示毫克，“mL”表示毫升，“H”表示氢，“hr”或“h”表示小时，“mmol”表示毫摩尔，“min”或“m”表示分钟，“1H-NMR”表示质子核磁共振(NMR)光谱，“Hz”表示赫兹，“HPLC”表示高效液相色谱，“Rt”为保留时间，“M”表示质量，“MS”表示质谱，和“NMR”表示核磁共振谱。实施例14-(吲哚-3-基亚甲基)-3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物25)的制备(a)3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(VIa)在回流下，向剧烈搅拌的NaH(在矿物油中60％的悬浮液，904mg，22.64mmol，2.9当量)和碳酸二乙酯(1.9mL，15.69mmol，1.99当量)在干燥甲苯(15mL)的悬浮液中，滴加(在1h的时间内)甲基酮(2-乙酰基噻唑)(1g，7.87mmol)在甲苯(5mL)中的溶液。在加入之后，在回流下将混合物搅拌0.5h。将混合物冷却到室温和采用冰乙酸酸化。在加入冷水之后，将混合物采用乙酸乙酯萃取3次。将结合的有机萃取物采用水和盐水洗涤。在通过MgSO4干燥之后，蒸发溶剂以提供粗β-酮酯。向粗产物中加入绝对乙醇(5mL)和水合肼(0.5mL)。在回流下将混合物保持3h。在真空下蒸发溶剂。通过闪蒸色谱(EtOAc∶MeOH 95∶5)精制固体物质。将获得的固体在EtOAc中搅拌15min.，过滤和干燥以得到吡唑啉酮(VIa)(237mg，18％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.5(br s，1H)，11.00(br s，1H)，7.74(s，1H)，7.57(s，1H)，5.7(s，1H)，MS168(M+H).
(b)化合物25的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIa)(50mg，0.30mmol)和吲哚-3-甲醛(47mg，0.32mmol，1.08当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。将固体过滤和采用乙醇洗涤，在真空下干燥，以单一几何异构体提供65mg(74％)的化合物25。1H-NMR(DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，9.83(s，1H)，9.42(s，1H)，8.05(d，J＝3.17Hz，1H)，7.80(m，2H)，7.58(m，1H)，7.30(m，3H).MS295(M+H).HPLCRt＝10.10min.实施例2
4-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)亚甲基)-3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物26)的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIa)(50mg，0.30mmol)和3，5-二甲基-1H-吡咯-2-甲醛(40mg，0.32mmol，1.08当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。过滤以固体分离产物和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供65mg(74％)的化合物26。1H-NMR(DMSO-d6)δ14.39(s，1H)，12.01(s，1H)，8.70(s，1H)，7.95(d，J＝3.17Hz，1H)，7.74(d，J＝3.18Hz，1H)，6.26(s，1H)，2.36(s，3H)，2.27(s，3H).MS273(M+H).HPLCRt＝10.54min.实施例34-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)亚甲基)-3-(2-呋喃基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物28)的制备(a)3-(2-呋喃基)-2-吡唑啉-5-酮(VIb)在回流下，向剧烈搅拌的NaH(在矿物油中60％的悬浮液，2.28g，56.6mmol，2.9当量)和碳酸二乙酯(4.7mL，38.83mmol，1.99当量)在干燥甲苯(30mL)的悬浮液中，滴加(在1h的时间内)甲基酮，1-呋喃-2-基-乙酮(2.14g，19.51mmol)在甲苯(5mL)中的溶液。在加入之后，在回流下将混合物搅拌0.5h。将混合物冷却到室温和采用冰乙酸酸化。在加入冷水之后，将混合物采用乙酸乙酯萃取3次。将结合的有机萃取物采用水和盐水洗涤。在通过MgSO4干燥之后，蒸发溶剂以提供粗β-酮酯，3-呋喃-2-基-氧代-丙酸乙酯。向粗产物中加入绝对乙醇(10mL)和水合肼(1mL)。在回流下将混合物保持3h。在真空下蒸发溶剂。通过闪蒸色谱(EtOAc)精制固体物质。将获得的固体在EtOAc中搅拌15min.，过滤和干燥以得到吡唑啉酮(VIb)(1.23g，42％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.1(br s，1H)，9.5(br s，1H)，7.64(s，1H)，6.63(s，1H)，6.51(s，1H)，5.64(s，1H).MS151(M+H).
(b)化合物28的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIb)(50mg，0.30mmol)和3，5-二甲基-1H-吡咯-2-甲醛(45mg，0.36mmol，1.09当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。冷却混合物(冰浴)，过滤以固体分离产物和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供58mg(69％)的化合物28。1H-NMR(DMSO-d6)δ14.47(s，1H)，11.81(s，1H)，7.82(s，1H)，7.78(s，1H)，6.86(d，J＝3.30Hz，1H)，6.61(s，1H)，6.22(s，1H)，2.35(s，3H)，2.27(s，3H).MS256(M+H).HPLCRt＝10.51m.实施例43-(2-呋喃基)-4-(吲哚-3-基亚甲基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物29)的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIb)(50mg，0.30mmol)和吲哚-3-甲醛(53mg，0.36mmol，1.09当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。将混合物中冰浴中冷却，和将产物过滤和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体分离36mg(40％)的化合物29。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.55(br s，1H)，11.62(s，1H)，9.82(s，1H)，8.45(s，1H)，7.89(m，2H)，7.56(m，1H)，7.28(m，2H)，6.96(m，1H)，6.66(m，1H).MS278(M+H).HPLCRt＝9.80m.实施例54-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)亚甲基)-3-(3-噻吩基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物37)的制备(a)3-(3-噻吩基)-2-吡唑啉-5-酮(VIc)在回流下，向剧烈搅拌的NaH(在矿物油中60％的悬浮液，830mg，20.3mmol，2.85当量)和碳酸二乙酯(1.7mL，14.04mmol，1.99当量)在干燥甲苯(15mL)的悬浮液中，滴加(在1h的时间内)甲基酮，1-噻吩-3-基-乙酮(900mg，7.14mmol)在甲苯(5mL)中的溶液。在加入之后，在回流下将混合物搅拌0.5h。将混合物冷却到室温和采用冰乙酸酸化。在加入冷水之后，将混合物采用乙酸乙酯萃取3次。将结合的有机萃取物采用水和盐水洗涤。在通过MgSO4干燥之后，蒸发溶剂以提供粗β-酮酯，3-氧代-3-噻吩-3-基-丙酸乙酯。向粗产物中加入绝对乙醇(5mL)和水合肼(0.5mL)。在回流下将混合物保持4h。在真空下蒸发溶剂。通过闪蒸色谱(EtOAc)精制固体物质。以固体获得吡唑啉酮(VIc)(940mg，79％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ11.8(br s，1H)，9.7(br s，1H)，7.68(d，J＝1.98Hz，1H)，7.55(m，1H)，7.38(d，J＝4.92Hz，1H)，5.74(s，1H).MS167(M+H).
(b)化合物(37)的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIc)(50mg，0.30mmol)和3，5-二甲基-1H-吡咯-2-甲醛(41mg，0.33mmol，1.11当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌3h。将以固体分离的产物过滤和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供64mg(79％)的化合物37。1H-NMR(DMSO-d6)δ14.44(br s，1H)，11.68(s，1H)，7.89(d，J＝1.60Hz，1H)，7.64(m，1H)，7.46(s，1H)，7.38(m，1H)，6.18(s，1H)，2.34(s，3H)，2.23(s，3H).MS272(M+H).HPLCRt＝10.75m.实施例64-(吲哚-3-基亚甲基)-3-(2-噻吩基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物38)的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIc)(50mg，0.30mmol)和吲哚-3-甲醛(47mg，0.32mmol，1.06当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。将以固体分离的产物过滤和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供65mg(74％)的化合物38。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.48(br s，1H)，11.48(s，1H)，9.81(s，1H)，8.13(s，1H)，8.00(d，J＝1.95Hz，1H)，7.83(m，1H)，7.68(m，1H)，7.54(m，1H)，7.45(d，J＝5.02Hz，1H)，7.24(m，2H).MS294(M+H).HPLCRt＝10.27m.实施例73-苯并[d]呋喃-2-基-4-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)亚甲基]-2-吡唑啉-5-酮(化合物57)的制备(a)3-苯并[d]呋喃-2-基-2-吡唑啉-5-酮(VId)的制备在回流下，向剧烈搅拌的NaH(在矿物油中60％的悬浮液，2.6g，65mmol，3.32当量)和碳酸二乙酯(4.7mL，38.83mmol，1.99当量)在干燥甲苯(30mL)的悬浮液中，滴加(在1h的时间内)甲基酮，1-苯并呋喃-2-基-乙酮(1g，7.87mmol)在甲苯(5mL)中的溶液。在加入之后，在回流下将混合物搅拌0.5h。将混合物冷却到室温和采用冰乙酸酸化。在加入冷水之后，将混合物采用乙酸乙酯萃取3次。将结合的有机萃取物采用水和盐水洗涤。在通过MgSO4干燥之后，蒸发溶剂以提供粗β-酮酯，3-苯并呋喃-2-基-氧代-丙酸乙酯。向粗产物中加入绝对乙醇(10mL)和水合肼(1.5mL，过量)。在回流下将混合物保持4h。在真空下蒸发溶剂。分离固体，将固体过滤和采用EtOH洗涤。在干燥之后，得到1.87g(42％)的吡唑啉酮(VId)。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.5(br s，1H)，10.1(br s，1H)，7.62-7.18(系列多重峰，4H)，7.10(s，1H)，5.87(s，1H).MS201(M+H)(b)化合物57的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VId)(75mg，0.375mmol)和3，5-二甲基-1H-吡咯-2-甲醛(50mg，0.40mmol，1.07当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。将以固体分离的产物过滤和(采用乙醇)洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供105mg(92％)的化合物57。1H-NMR(DMSO-d6)δ14.5(br s，1H)，12.04(br s，1H)，7.93(s，1H)，7.67(m，2H)，7.36-7.24(重叠m & s，3H)，6.26(s，1H)，2.37(s，3H)，2.33(s，3H).MS306(M+H).HPLCRt＝13.46m.实施例8
4-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)亚甲基)-3-吡嗪-2-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物37)的制备(a)3-吡嗪-2-基-2-吡唑啉-5-酮(VIe)在回流下，向剧烈搅拌吡嗪-2-羧酸甲酯(2.51g，18.18mmol)在乙酸甲酯(10mL)的溶液中，加入NaH(在矿物油中60％的悬浮液，815mg，20.37mmol，1.12当量)，连续搅拌0.5h。在回流下将混合物搅拌2.5h。将反应混合物冷却到室温和倾入水中。将混合物采用乙醚萃取(2次)。将水层采用浓HCl中和，采用盐饱和，和采用二氯甲烷重复萃取。在处理和溶剂蒸发之后，将获得的粗β-酮酯直接用于吡唑啉酮的形成，而不进行进一步的精制。向粗产物中加入绝对乙醇(40mL)和水合肼(3mL，过量)。在回流下将混合物保持4h。分离固体，将固体过滤和采用MeOH洗涤。在干燥之后，得到1.57g(52％)的吡唑啉酮(VIe)。1H-NMR(DMSO-d6)δ9.00(s，1H)，8.50(s，1H)，8.41(d，J＝2.37Hz，1H)，5.84(s与水和其他可变质子结合，1H).MS163(M+H).
(b)化合物74的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIe)(50mg，0.30mmol)和3，5-二甲基-1H-吡咯-2-甲醛(42mg，0.34mmol，1.13当量)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌4h。将以固体从热反应混合物过滤，和采用热乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供40mg(50％)的化合物(74)。1H-NMR(DMSO-d6)δ14.5(br s，1H)，12.10(s，1H)，9.14(d，J＝0.82Hz，1H)，8.71(s，1H)，7.67(d，J＝1.81Hz，1H)，8.58(d，J＝2.47Hz，1H)，6.24(s，1H)，2.36(s，3H)，2.25(s，3H).MS268(M+H).HPLCRt＝9.89m.实施例94-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)亚甲基)-3-吲哚-3-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物76)的制备
(a)1-(2，2-二甲基乙氧基羰基)-吲哚-3-羧酸甲酯的制备将1H-吲哚-3-羧酸甲酯(8.95g，50mmoles)和二碳酸二叔丁酯(11.5g，52mmoles)溶于乙腈(100mL)，加入固体4-二甲基氨基吡啶(0.610g，5mmol)，和将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空下浓缩反应混合物，和将残余物溶于乙酸乙酯(300mL)，随后依次采用饱和盐水，冰冷(～5℃)1N HCl溶液和饱和盐水溶液洗涤。将有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤和在真空下浓缩得到透明液体(13.9g)。
(b)3-吲哚-3-基-3-氧代丙酸乙酯(Va)的制备在干冰-丙酮浴中，在氩气气氛下，冷却二异丙胺(13mL，100mmol)和四亚甲基二胺(15mL，100mmol)在THF(150mL)中的溶液。在30分钟内，加入正丁基锂己烷(40mL，100mmol)的2.5N溶液，和加入EtOAc(10mL，108mmol)，和将溶液再搅拌30分钟。快速加入N-BOC吲哚-3-羧酸甲酯(IIIa) (6.875g，25mmol)在THF(50mL)中的溶液，和将反应混合物在-78℃下搅拌1h，和然后在-15℃下再搅拌1h。允许反应混合物升温到15℃，和采用冰乙酸(10mL)使反应停止。加入乙酸乙酯(250mL)，和随后将有机层依次用1N柠檬酸溶液(2×150mL)，饱和盐水(2×100mL)洗涤，过滤和在真空下干燥。采用闪蒸色谱通过硅胶精制粗产物，使用1∶1的乙酸乙酯和己烷作为洗脱剂，以提供所需的产物(Va)(1.2g)和它的N-BOC衍生物(Vb)(1.2g)，结合收率为30％。
(c)3-吲哚-3-基-2-吡唑啉-5-酮的制备将化合物(Va)(600mg，3mmol)加入到绝对乙醇(7mL)和水合肼(1mL)的混合物中。在回流下将混合物保持4h。蒸发溶剂和将残余物在乙酸乙酯(20mL)中溶解，依次采用水和盐水洗涤。将乙酸乙酯层通过MgSO4干燥，以得到暗棕色固体，它显示有两种主要斑点。在乙醇中搅拌固体和过滤固体。蒸发溶剂以得到粘稠胶体化合物(VIf)(126mg，35％)。
(d)化合物76的制备在85℃下，将在绝对乙醇(1.3mL)中的化合物(VIf)(60mg，0.3mmol)、3，5-二甲基-1H-吡咯-2-甲醛(41mg，0.33mmol，1.11当量)，以及2-3滴哌啶的混合物搅拌3h。过滤分离固体产物，采用乙醇洗涤和在真空下干燥(58mg，63％)。实施例104-[(3，5-二甲基吡咯-2-基)甲基)-3-吲哚-3-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物77)的制备将化合物76(38mg，0.12mmol)在二甲亚砜和甲醇(1∶1，1.5mL)的溶剂混合物中的溶液分批加入硼氢化钠(45mg，1.2mmol)中。在15min之后，采用乙酸和水(10mL)使反应停止。采用乙酸乙酯萃取混合物，和采用水和盐水洗涤有机层。将溶剂通过MgSO4干燥和蒸发，以得到红棕色残余物，它在加入醚时沉淀为淡棕色固体，得到化合物77，(27mg，71％)。实施例114-[(2，6-二氟苯基)(5-氧代-3-吡嗪-2-基(2-吡唑啉-4-基)甲基]-3-吡嗪-2-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物78)的制备在85-90℃下，将吡唑啉酮(VIe)(30mg，0.18mmol)和2，6-二氟苯甲醛(37mg，0.26mmol)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌21.5hrs。在干燥之后，分离68mg的化合物78。
1H-NMR(DMSO-d6)δ11.5(br s，2H)，8.85(s，2H)，8.3(d，J＝2.16Hz，2H)，8.07(s，2H)，7.06(s，1H)，6.96(m，1H)，6.66(m，2H)，4.4(br s，2H)，MS471(M+Na).HPLCRt＝6.18m.
实施例1-21的化合物，以及通过与上述实施例和合成流程的教导相一致的方法制备的其它化合物，见表1和表1a。这些化合物用以说明本发明，而不是用于限制其范围。 表1. (a)R2和R3一起表示所示基团，即R2和R3＝[-CH2CH2-N(CH3)-CH2CH2-]表1a 在表1和表1a中，符号X1，X2，X3，X4分别表示取代基R1，R2，R3和R4的连接点。
使用质谱(MS)和高效液相色谱(HPLC)鉴定表1和表1a中的化合物。结果见表2。
表2
方法A-Zorbax C8，10％AcCN 90％H2O；100％AcCN，在20min内，流速1.6mL/min，柱为HP1100。
方法B-Zorbax C8，10％AcCN 90％H2O；100％AcCN在20min内，流速1.6mL/min，柱为HP1050。
方法C-Zorbax C8，10％AcCN 90％H2O；100％AcCN在20min内，流速1.6mL/min，柱为HP1090。实施例124-[(1-甲基吲哚-3-基)亚甲基]-3-(4-(2-萘基)(1，3-噻唑-2-基))-2-吡唑啉-5-酮(化合物118)的制备(a)3-(4-(2-萘基)-1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(VIg)的制备在回流下，将溴乙基-2-萘基酮(1.78g，6.8mmol)，2-硫代-草酸乙酯(1g，7.5mmol)在EtOH(绝对)中的混合物保持6h。将混合物冷却到室温。将以固体分离的产物，过滤，采用乙醇洗涤和干燥，以提供所需的酯，4-(2-萘基)-1，3-噻唑-2-羧酸乙酯，(IIIb)(0.862g，48％收率)。MS284(M+H)。向酯(IIIb)(800mg，2.82mmol)在干燥乙酸甲酯(10mL)的混合物中，加入NaH(在矿物油中60％的悬浮液，135mg，3.37mmol)。将混合物在室温下搅拌0.5h和在回流下搅拌2h。将混合物倾入冷水中和采用浓HCl中和。在采用NaCl饱和混合物之后，将混合物采用二氯甲烷萃取(两次)。采用盐水洗涤合并的萃取物。在通过硫酸镁干燥之后，蒸发溶剂以提供β-酮酯，3-(4-(2-萘基)(1，3-噻唑-2-基)-3-氧代丙酸乙酯，它用于下一步骤，而不进行进一步的精制。向上述β-酮酯中加入绝对乙醇(10mL)和水合肼(1mL，过量)。将混合物在回流下保持4h。在冷却之后，从反应混合物蒸发溶剂。将所得的混合物通过硅胶进行色谱纯化和采用EtOAc洗脱。产物吡唑啉酮(VIg)分离为固体，进一步通过采用乙醚洗涤精制(即在～50mL乙醚中搅拌，随后采用过滤和乙醚洗涤)。得到287mg，(在两步中35％)。MS294(M+H)。
(b)化合物118的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIg)(50mg，0.17mmol)，吲哚-3-甲醛(30mg，0.19mmol)在绝对乙醇(1mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌3h。固体经过滤分离，和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供52mg的化合物118。实施例134-[(5-甲基(2H-1，3-间二杂环戊烯并[4，5-f]吲哚-7-基)亚甲基]-3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物144)的制备(a)5，6-亚甲基二氧-1-甲基-吲哚-3-甲醛的制备向DMF(50mL，过量)的冰冷溶液中，滴加POCl3(8mL，85.7mmol)。在加入之后，将混合物在0℃下搅拌5min和在室温下搅拌45min。将混合物冷却到0℃和分批加入5，6-亚甲二氧基-吲哚(10g，62.1mmol)。在完全加入之后，将混合物在0℃下搅拌10min和在室温下搅拌20min和最后在60℃下搅拌6h。将混合物冷却到室温，然后再冷却至0℃，和随后加入1N NaOH溶液(150mL)。将混合物在室温下搅拌30min，结果获得均匀的溶液。向混合物中加入100mL水和在室温下连续搅拌过夜。将以固体分离的产物，5，6-亚甲二氧基-吲哚-3-甲醛过滤，洗涤(水，然后用己烷)和干燥。在采用乙酸乙酯萃取(3次)时，也提供另外的产物。随后采用水和盐水依次洗涤结合的有机层。在通过MgSO4干燥之后，蒸发溶剂。将获得的固体悬浮于100mL乙醚中，超声波几分钟和过滤。将固体采用乙醚进一步洗涤和干燥。将合并的粗产物，8.08g(69％)5，6-亚甲二氧基-吲哚-3-甲醛进行N-甲基化，而不进行进一步的精制。向5，6-亚甲二氧基-吲哚-3-甲醛(如上)(8g，42.32mmol)在干燥DMF(40mL)中的冷(0℃)溶液中，加入NaH(在矿物油中60％的悬浮液，2.1g，52.5mmol)。将获得的混合物在0℃下搅拌30min.。将碘甲烷(5mL，80.3mmol)滴加到反应混合物中。将反应混合物在0℃下搅拌15min和在室温下搅拌2h。将混合物冷却到0℃和采用水使反应停止。进一步采用水(～700mL)释稀混合物。将以固体分离的产物，5，6-亚甲二氧基-1-甲基-吲哚-3-甲醛过滤，洗涤(水，然后己烷)和干燥，以提供6.2g(72％收率)的所需产物。MS204(M+H)。
(b)化合物144的制备在2-3滴哌啶存在下，当黄-橙色固体开始出现时，将吡唑啉酮(VIa)(0.030g，0.17mmol)、5，6-亚甲二氧基-1-甲基-吲哚-3-甲醛(0.040g，0.197mmol)和乙醇(2mL)的混合物于～85℃加热1小时。将混合物在冰浴中冷却和将固体过滤出，采用乙醇洗涤和干燥以提供化合物144(54mg，90％收率)，为黄-橙色固体。实施例144-[(4-氯-1-甲基吲哚-3-基)亚甲基]-3-吡嗪-2-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物189)的制备(a)3-吡嗪-2-基-2-吡唑啉-5-酮，(VIh)的制备将吡嗪-2-羧酸乙酯(10g，66mmol)在乙酸甲酯(40mL)中的淤浆和NaH(在矿物油中60％的悬浮液，3.7g，97mmol，1.47当量)回流一小时。将反应混合物冷却到室温，采用乙酸中和及采用乙酸乙酯萃取。蒸发溶剂以得到白色固体的β-酮酯(Vc)(6.35g)。[MS179，(M-H)]。将酯(Vc)(0.5g，2.8mmol)、甲基肼(0.16g，3.48mmol)在乙醇中的混合物回流过夜。过滤获得的沉淀物以提供为橙色固体的吡唑啉酮(VIh)(0.3g，1.7mmol)。
(b)化合物189的制备回流吡唑啉酮(VIh)(0.035g，0.2mmol)、哌啶(0.01mmol)、乙醇(1mL)和4-氯-1-甲基吲哚-3-甲醛(0.046g，0.24mmol)的混合物。过滤获得的沉淀物以提供为亮橙色固体的化合物189(0.36g，0.10mmol)。实施例153-[5-(二甲氨基)(1，3，4-噻二唑-2-基)]-4-[(1-甲基吲哚-3-基)亚甲基]-2-吡唑啉-5-酮(化合物190)的制备(a)3-[5-(二甲氨基)-1，3，4-噻二唑-2-基]-2-吡唑啉-5-酮(VIi)的制备将4，4-二甲基-3-氨基硫脲(2.0g，16.8mmol)和氯-氧代-乙酸乙酯(2.3g，16.8mmol)的溶液在惰性气氛下混合，和在冰浴中冷却到0℃。缓慢加入硫酸(2mL)。在泡腾停止之后，除去冰浴和允许反应升温到室温和搅拌3小时。向白色非均相混合物中加入乙酸乙酯(100mL)，和以2％碳酸氢钠和盐水洗涤有机层两次。将有机层通过无水硫酸镁干燥和蒸发。将残余的固体溶于乙酸乙酯，和采用醚沉淀所需的化合物，以得到5-(二甲氨基)-1，3，4-噻二唑-2-羧酸乙酯(IIIc)(1.9g，9.4mmol)。将酯(IIIc)溶于无水乙酸甲酯(4mL)和采用惰性净化溶液。向此黄色溶液中，加入氢化钠(在矿物油中60％的悬浮液，0.53g，13.25mmol)，提供淡黄色沉淀物。然后将混合物加热至65℃，使其转化成浅绿色沉淀物。另加入乙酸甲酯(4mL)，在十分钟内反应混合物变成棕褐色固体。将反应除去热源和加入另外的乙酸甲酯(20mL)。采用乙酸中和混合物。过滤出固体和蒸发滤液。将从滤液得到的固体以乙醚洗涤，以得到所需的β-酮酯，3-[5-(二甲氨基)(1，3，4-噻二唑-2-基)]-3-氧代丙酸乙酯，(Vd)(5.2mmol)，为黄色固体。将β-酮酯(Vd)(1.2g，1.31mmol)、乙醇(2mL)和水合肼(0.063g，1.96mmol)于65℃加热2小时。过滤沉淀物，以获得吡唑啉酮(VIi)(0.075g，0.36mmol)，为淡黄色固体。
(b)化合物190的制备将吡唑啉酮(VIi)(0.035g，0.166mmol)、1-甲基吲哚-3-甲醛(0.032g，0.2mmol)和乙醇(1mL)的混合物加热到65℃和搅拌过夜。过滤形成的橙色沉淀物以获得化合物190(0.024g，0.068mmol)。实施例164-[(1-甲基-4-苯基吲哚-3-基)亚甲基]-3-吡嗪-2-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物202)的制备(a)4-苯基-1-甲基-吲哚-3-甲醛的制备向DMF(5mL，过量)的冰冷溶液中，滴加POCl3(0.8mL，8.57mmol)。在加入之后，将混合物在0℃下搅拌5min和在室温下搅拌45min。将混合物冷却到0℃和分批加入4-溴吲哚(1g)。在完全加入之后，将混合物在0℃下搅拌10min和在室温下搅拌20min，和最后在60℃下搅拌6h。将混合物冷却到室温和然后冷却到0℃，和随后加入1N NaOH溶液(15mL)。当在水处理期间形成固体时，将混合物在室温下搅拌30min，它在初步升温时并不进入溶液。将固体过滤和洗涤和干燥，以得到0.77g产物，将它进行N-甲基化，而不进行进一步的精制。
向4-溴-吲哚-3-甲醛(0.767g，3.4mmol)在干燥DMF(2mL)中的冷(0℃)溶液中，加入NaH(在矿物油中60％的分散体，173mg，4.37mmol)。将获得的混合物在0℃下搅拌20min.。将碘甲烷(0.8mL，过量)滴加到反应混合物中。除去冷却浴和将获得的混合物在室温下搅拌1.5h。将混合物用水停止反应和采用EtOAc重复萃取。将结合的有机萃取物采用水(两次)和盐水洗涤。在通过硫酸镁干燥之后，除去溶剂。将获得的固体溶于己烷和超声波处理30min，过滤以提供产物，4-溴-1-甲基-吲哚-3-甲醛(0.687g，85％收率)。将DMF(4mL)中的4-溴-1-甲基-吲哚-3-甲醛(109mg，0.45mmol)、苯基硼酸(85mg，0.69mmol)的混合物脱气(氩气)。向混合物中加入双(三苯基膦)-钯II氯化物(25mg，0.035mmol)，随后加入2M Na2CO3溶液(2mL，4mmol)，和将混合物在氩气下，在100℃下搅拌18.5h，然后在回流下搅拌3h。将混合物冷却到室温。将反应混合物采用水稀释和采用乙酸乙酯重复萃取。将结合的萃取物采用水(两次)和盐水洗涤。在通过无水硫酸镁干燥之后，在真空下除去溶剂和将粗产物通过闪蒸色谱(己烷∶EtOAc1∶1)精制。将所需的产物以浆液形式分离(79％收率)。MS236，238。
(b)化合物202的制备在80-90℃下，将吡唑啉酮(VIe)(40mg，0.24mmol)和4-苯基-1-甲基-吲哚-3-甲醛(84mg，0.35mmol)在绝对乙醇(2mL)中的混合物，以及2-3滴哌啶搅拌2h。将以固体分离的产物过滤和采用乙醇洗涤。在干燥之后，以单一几何异构体提供81mg的化合物202。实施例174-[(4-溴-1-甲基吲哚-3-基)亚甲基]-3-(1-甲基(1H-吲唑-3-基))-2-吡唑啉-5-酮(化合物205)的制备(a)3-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-2-吡唑啉-5-酮，(VIj)的制备使吲唑-3-羧酸(5g，31mmol)、氯三甲基硅烷(34g，310mmol)和甲醇(50mL)的混合物搅拌过夜。蒸发溶剂后得到黄色产物(4g，产率74％)将甲基酯(4g，23mmol)、NaH(1.3g，35mmol)和THF(60mL)的淤浆混合过夜。将混合物中和及采用乙酸乙酯萃取。所需产物(IIId)收集为黄色固体(4g，21mmol)。将酯(IIId)(4g，21mmol)、NaH(1.2g，32mmol)和乙酸甲酯(40mL)的淤浆回流四小时。将混合物采用乙酸中和，将产物采用乙酸乙酯萃取，在真空下浓缩以提供所需的β-酮酯，3-(1-甲基(1H-吲唑-3-基))-3-氧代丙酸乙酯(Ve)，为橙色胶体(4.6g)。将β-酮酯(Ve)(4.6g，20mmol)、水合肼(0.77g，24mmol)和乙醇(10mL)的混合物回流过夜。过滤获得的沉淀物，以获得吡唑啉酮(VIj)，为白色固体(1.2g，30％收率)。
(b)化合物205的制备将吡唑啉酮(VIj)(0.043g，0.2mmol)、4-溴-1-甲基吲哚-3-甲醛(0.052g，0.22mmol)、哌啶(0.01mmol)和乙醇(1mL)的混合物回流3.5h。过滤获得的沉淀物，以获得亮橙色固体(0.052g，60％收率)。实施例184-[(4-碘-1，6-二甲基吲哚-3-基)亚甲基]-3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物223)的制备(a)6-甲基-4-碘-吲哚-3-甲醛的制备将三氟乙酸铊(III)(1g，1.84mmol)在三氟乙酸(15mL)中的溶液加入到6-甲基-吲哚-3-甲醛(200mg，1.25mmol)中，和将获得的混合物的在30℃下搅拌2h。在真空(旋转蒸发器)下除去溶剂。向残余物中，加入碘化钾的水溶液(2g，12mmol，在20mL水中)，和将混合物在室温下搅拌过夜。将固体偏亚硫酸氢钠加入到反应混合物中，直到变黄。将混合物采用NaOH水溶液碱化和采用乙醚重复萃取。将结合的有机物采用盐水洗涤和通过硫酸镁干燥。蒸发溶剂得到粗产物，使用EtOAc作为洗脱剂，将粗产物通过闪蒸色谱精制。将产物，6-甲基-4-碘-吲哚-3-甲醛分离为固体，得到283mg(79％)的所需产物。MS286。
(b)1，6-二甲基-4-碘-吲哚-3-甲醛的制备向6-甲基-4-碘-吲哚-3-甲醛(265mg，0.92mmol)在干燥DMF(2mL)中的冷(0℃)溶液中，加入NaH(在矿物油中60％的悬浮液，50mg，1.25mmol)。将获得的混合物在0℃下搅拌20min.。将碘甲烷(0.5mL，过量)滴加到反应混合物中。除去冷却浴和将混合物在室温下搅拌1.5h。将混合物采用水使反应停止，和采用EtOAc重复萃取。将结合的有机萃取物采用水(两次)和盐水洗涤。在通过硫酸镁干燥之后，除去溶剂。将以固体获得的产物1，6-二甲基-4-碘-吲哚-3-甲醛悬浮于己烷中，搅拌几分钟和过滤。将产物进一步采用更多的己烷洗涤和干燥，以提供213mg(77％)的所需产物。MS300(M+H)，322(M+Na)。
(c)化合物223的制备在2-3滴哌啶存在下，当黄-橙色固体开始出现时，将吡唑啉酮(VIa)(0.010g，0.059mmol)，1，6-二甲基-4-磺-吲哚-3-甲醛(0.040g，0.197mmol)和乙醇(2mL)的混合物加热到约～85℃约2h。将混合物在冰浴中冷却和将固体过滤出，采用乙醇洗涤和干燥以提供化合物223(21mg)，为(E∶Z)异构体的70∶30混合物。HPLCRt14.41min.和12.73min(方法C)。实施例194-[(1-甲基-4-苯基吲哚-3-基)亚甲基]-3-吡啶并[3，4-e]吡啶-2-基-2-吡唑啉-5-酮(化合物295)的制备(a)3-吡啶并[3，4-e]吡啶-2-基-2-吡唑啉-5-酮(VIk)的制备向1，6-二氮杂萘-2-羧酸(1g，5.7mmol)和100mL甲醇的混合物中，仔细加入～0.5mL的浓H2SO4。在回流下将混合物保持过夜。将混合物冷却到室温和蒸发溶剂。向残余物中仔细加入(二氧化碳溢出)半饱和碳酸氢钠溶液以中和酸。将混合物采用乙酸乙酯萃取(三次)和将结合的有机物采用盐水洗涤。在通过无水MgSO4干燥之后，蒸发溶剂。将产物，1，6-二氮杂萘-2-羧酸甲酯(IIIe)分离为固体(932mg，87％收率)，它用于下一步骤而不进行进一步的精制。采用NaH(在矿物油中60％的悬浮液，100mg，2.5mmol)处理酯(IIIe)(322mg，1.71mmol)和乙酸甲酯(干燥，10mL)的混合物，和将获得的混合物在回流下保持2h，在此期间注意到形成饼状物。将反应混合物冷却至室温并蒸发溶剂。以～20mL的水处理残余物。采用浓HCl中和混合物。将获得的固体过滤，洗涤(采用水，随后采用己烷)和干燥。产量158mg(40％)。将产物3-氧代-3-吡啶并[3，4-e]吡啶-2-基-丙酸乙酯(Vf)用于下步骤，而不进行进一步的精制。
将上述β-酮酯(Vf)(153mg，0.66mmol)、水合肼(25μl，0.8mmol)和绝对乙醇(5mL)的混合物保持在回流下。在1h之后，加入更多的水合肼(75μl，2.4mmol)和连续回流。分离出固体。在3h之后，冷却混合物(冰浴)和将固体过滤，洗涤(冷乙醇)和干燥以分离产物，1，6-二氮杂萘基吡唑啉酮(VIk)，66mg(47％收率)。MS213。
(b)化合物295的制备在85-90℃下，将上述吡唑啉酮(VIk)(10mg，0.047mmol)、5，6-亚甲二氧基-1-甲基-吲哚-3-甲醛(11mg，0.054mmol)在1mL的绝对乙醇中的混合物与一滴哌啶进行搅拌。分离固体。在2h之后，将混合物冷却到室温和将固体过滤，采用乙醇洗涤和干燥以分离产物(11mg，59％收率)。MS398(M+H)。实施例204-[(二甲氨基)亚甲基)]-3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物296)的制备向吡唑啉酮(VIa)(250mg，1.5mmol)在干燥THF(12mL)的溶液中，加入N，N-二甲基甲酰胺二叔丁基乙缩醛(0.319g，1.05当量)，和将反应混合物在回流下加热15min.。TLC(10％甲醇-氯仿)显示吡唑啉酮(Rf＝0.08)向新产物(Rf＝0.17)的完全转化。反应物浓缩得到为固体的产物。(在此插入P89数据1)；1H-HMR(d6-DMSO)δ11.26(s，1H，enolic)，8.69(s，1H，＝CH)，7.86(s，1H)，7.67(s，1H)，3.79(s，3H)，3.33(s，3H)；电雾化MS，m/z223[M+1]+基础峰；HPLC Rt＝5.01min.吡唑啉酮Rt＝4.06min.(VIa)，(方法A)。实施例214-[(2-羟基吲哚-3-基)亚甲基)]-3-(1，3-噻唑-2-基)-2-吡唑啉-5-酮(化合物297)的制备在无水乙醇(18mL)中溶解化合物296和加入叔丁醇钾(0.5mL，在THF中1.0M溶液)，随后加入羟吲哚(200mg，1.5mmol)，将反应在回流下搅拌和通过HPLC和TLC(10％甲醇-氯仿)监测。在4.5h之后，HPLC显示11.20min的保留时间时有新组分(方法A)。在46h之后停止反应，和将反应混合物浓缩以提供粗产物(215mg)，为暗红色固体电雾化MS，m/z311[M+1]+。使用15％乙腈-水到60％乙腈-水的梯度洗脱，在C8 CEP-PAK柱(35cc尺寸)上通过色谱精制粗产物样品(35mg)。从包含产物的级分蒸发溶剂，提供产物298(11mg)，为淡红-黄色固体。1H-NMR(DMSO-d6)δ13.22(bs，1H)，11.61(s，IH)，8.94(s，1H)，8.05(s，1H)，7.80(s，1H)，7.5(m，1H)，7.22(m，1H)，7.11(m，1H)，7.00(m，1H)，3.66(bs，1H)；13CNMR(DMSO-d6)δ171.2，163.0，159.2，157.0，146.6，144.8，138.7，131.7，128.4，127.3，123.7，121.6，119.5，117.9，112.0.MS311(M+H)，HPLCRt＝11.19min(方法A)。
原料杂环甲基酮或酯或是市购的，或是从相应的市售酸，通过常规步骤(如，Fischer酯化，醇和TMS氯化物(实施例17)，使用TMS-重氮甲烷或重氮甲烷)转化得到的。根据以下文献的方法Shafiee，A.Lalezari，I.；Mirrashed，M.；Nercesian，D.，J.Heterocyclic Chem.，1997，14，567-571，制备如下杂环衍生物、[1，2，3]噻二唑-5-羧酸乙酯和4-苯基-[1，2，3]噻二唑-5-羧酸乙酯，和按照流程(1)，(2)和(3)和实施例8描述的类似步骤，将这些衍生物分别用于如下化合物的合成183，186，194，195，196，201，209，218，224，226，231，235，238，240，241，244，245，247，248，249，250，252，265，273，286和198。[1，2，3]硒二唑-5-羧酸乙酯按照如下的文献所述方法制备Lalezari，I.；Shafiee，A.；Yalpani，M.，J.Org.Chem.，1971，36，2836，和遵照在实施例8中描述的类似步骤，将它用于化合物188和192的合成。1-甲基-5-甲氧基-4-硝基-吲哚-3-甲醛根据Naylor，M.；Jaffar，M.；Nolan，J.；Stephens，M.A.；Butler，S.；Patel，K.B.；Everett，S.A.；Adams，G.E.；Stratford，I.，J.Med.Chem.，1997，40，2335制备，和用于化合物170，180和182的制备，如在实施例1中所述。
通过采用铊化学，4-碘-5-甲氧基-吲哚-3-甲醛可根据Moody，C.J.；Swann，E.，J.Chem.Soc.Perkin 1，1993，21，2561的步骤制备，5-氯-4-碘-吲哚-3-甲醛根据Ohta，T.；Yamato，Y.；Tahira，H.；Somei M.，Heterocycles，1987，11，2817(和其中的参考文献)的步骤制备。随后，在DMF中，将衍生物与NaH和碘甲烷反应，以提供相应的N-甲基衍生物，和遵照在实施例1中描述的类似步骤，它们可用于化合物190，280和212的制备。遵照Ohta，T.；Yamato，Y.；Tahira，H.；Somei M.，Heterocycles，1987，11，2817(和其中的参考文献)的一般步骤，如上述用于5-氯-4-碘-吲哚-3-甲醛制备，通过铊-媒介化学，使用(i)与三-三氟乙酸铊的反应，随后通过(ii)与亲电子试剂，如KI或CuBr2的反应，制备对于许多市售5-或6-取代的吲哚-3-甲醛的4-卤代衍生物。随后在吲哚N-位置，将获得的4，5-或4，6-二取代吲哚-3-甲醛甲基化，如在实施例13和16中所述。将产物用于与实施例1中所述的吡唑啉酮的缩合，以提供所需的化合物。化合物203，266，267，281，214，221，220，222，223，289，218，219，225，226，227，228，229，和230遵照下述步骤的顺序衍生。
1-(2-氰乙基)-吲哚-3-甲醛可根据Blume，R.C.；Lindwall，H.G.，JOrg.Chem.，1945，255所述方法制备，和遵照实施例1中所述的类似步骤，用于化合物64，65，66和67的制备。4，5，6，7-四氢-吲哚-2-甲醛根据Sun，Li.；Tran，N.；Liang，C.；Hubbard.，S.；Tang，F.；Lipson，K.；Schreck，R.；Zhou，Y.；McMahon，O.；Tang，C.，J.Med.Chem.，1994，25，4307的方法制备，和将它用于化合物277，278，279和288的制备。
使用各种亲电子试剂，在吲哚氮位置，使用NaH/DMF，按实施例13的一般步骤，将吲哚-3-甲醛官能化。使用5-氯-吲哚-3-甲醛以制备N-乙基和N-烯丙基衍生物，它们分别用于化合物132，148和化合物149的制备。如由如下描述的一般方法Gungr，T.；Malabre P.；Teulon，J-M.；Camborde，F.；Meignen，J.；Hertz，F.；Virone-Oddos，A.；Caussade，F.；Cloarec，A.，J.Med.Chem.，1994，25，4307，使用K2CO3/DMF，用于制备(a)N-CH2CH2-OBn类似物，它用于化合物71和72的制备；(b)N-异丁基类似物，遵照实施例1中描述的类似步骤，它用于化合物73的制备。
使用Cs2CO3，在室温下和丙酮中，根据Macor，J.E.；Blank，D.H.；Post，R.，J.Tetrahedron Lett.，1994，35，45，所述方法使5-羟基吲哚与炔丙基溴进行选择性O-烷基化，然后按照实施例13和16中描述的方法，转化为N-甲基和3-甲酰基衍生物。遵照在实施例1中描述的类似步骤，此醛用于化合物155的制备。相似地，制备许多4-，5-，6-或7-烷氧基取代的吲哚衍生物，用于相应吡唑啉酮类似物的合成。(见表1)。
遵照在实施例16中描述的相似步骤，从6-溴-吲哚制备6-苯基-1-甲基-吲哚-3-甲醛，和将它用于化合物215的合成。
根据在实施例13和16中描述的方法，将5-和6-甲酯基-吲哚转化成相应的N-甲基-3-甲醛衍生物的类似物，和这些酯随后水解成相应的羧酸。5-COOMe甲醛衍生物用于化合物237，238，239和255的合成。相应的5-COOH甲醛用于化合物251和255的合成。相似地，6-COOMe甲醛衍生物用于化合物115，116，和117的合成，和相应的6-COOH甲醛衍生物用于化合物222的合成。
将许多三环衍生的吲哚，如5，6-亚甲二氧基-1-甲基-吲哚和1H-吡咯并[3，2-H]喹啉转化成相应的N-甲基和C-甲酰基(即甲醛)衍生物，和用于制备吡唑啉酮衍生物。分别地，前者用于制备化合物139，144，209，262，289，294和295；后者醛用于制备化合物284和285。
其中，本发明的杂环取代吡唑啉酮可用作治疗剂。具体地，化合物可用于蛋白激酶抑制。杂环取代的吡唑啉酮可抑制例如选自如下的激酶ab1，AKT，bcr-ab1，Blk，Brk，Btk，c-kit，c-met，c-src，CDK1，CDK2，CDK4，CDK6，chk1，chk2，cRaf1，CSF1R，CSK，EGFR，ErbB2，ErbB3，ErbB4，ERK(Eph)，Fak，fes，FGFR1，FGFR1，FGFR3，FGFR4，FGFR5，MLK1，MLK2，MLK3，DLK，trkA，trkB，trkC，Fgr，FLK-4，fit-1，Fps，Frk，Fyn，GSK，Hck，IGF-lR，INS-R，Jak，JNK，VEOFR1，VEGFR2，VEGFR3，Lck，Lyn，MEK，p38，PDGFR，PIK，PKC，PYK2，ros，tie1，tie2，UL97，Yes和Zap70。
因此，本发明化合物的性能，在治疗中是有益的。可以利用杂环取代吡唑啉酮针对某些酶的活性以对抗这些酶的缺失影响。例如，血管内皮生长因子受体(VEGFR)的抑制意味着可用于如下疾病例如，其中血管生成起重要作用的疾病，如实体肿瘤癌，子宫内膜异位症，糖尿病性视网膜炎，牛皮癣，成血管细胞瘤，以及其它眼病和癌症。trk的抑制意味着在如下疾病中的效用例如，前列腺疾病如前列腺癌和良性前列腺过度增生，和炎症疼痛的治疗。血小板衍生生长因子受体(PDGFR)的抑制意味着在如下疾病中的效用例如，各种形式的瘤形成，类风湿性关节炎，肺纤维症，骨髓纤维化症，异常创伤治愈，心血管端点的疾病如动脉粥样硬化、再狭窄、血管形成术后再狭窄等。混合性同系激酶(MLK)的抑制意味着在如下疾病中的效用例如，阿尔茨海默病；运动神经元紊乱(如，肌萎缩侧索硬化)；帕金森病；脑血管紊乱(如，中风，局部出血)；享廷顿病；爱滋病痴呆；癫痫；多发性硬化症；周围神经病(如，在与周围神经有关的化疗中影响DRG神经元的那些)包括糖尿性神经病；由兴奋性氨基酸诱导的紊乱；和与脑或脊柱索的震荡或穿透损伤有关的紊乱。
纤维形成生长因子受体激酶(FGFR)的抑制意味着在如下疾病中的效用例如，再狭窄，血管形成术后再狭窄，动脉粥样硬化，肺纤维症，各种癌症包括，但不限于前列腺癌，乳腺癌，异常创伤治愈，和良性前列腺过度增生。
通过促进神经元的存活，杂环取代的吡唑啉酮的活性对营养性因子响应细胞的功能和存活也有阳性的影响。关于胆碱能神经元的存活，例如，如果处理的种群比未处理的种群具有相对更大周期的功能性，与不存在这样的胆碱能神经元相比，化合物可保护胆碱能神经元种群处于死亡危险时的存活。
各种神经障碍特征在于处于死亡等的危险时，神经元细胞可死亡、受损伤、功能受危害、承受轴突退化。这些紊乱包括，但不限于阿尔茨海默病；运动神经元紊乱(如，肌萎缩侧索硬化)；帕金森病；脑血管紊乱(如，中风，局部出血)；享廷顿病；爱滋病痴呆；癫痫；多发性硬化症；周围神经病(如，在与周围神经有关的化疗中影响DRG神经元的那些)包括糖尿性神经病；由兴奋性氨基酸诱导的紊乱；和与脑或脊柱索的震荡或穿透损伤有关的紊乱。
化合物可作为其它神经元细胞类型，如dopaminergic或glutamatergic的存活促进剂。通过小GTP结合蛋白质ras，rac，和cdc42的信号级联下游，生长因子可调节神经元的存活(Denhardt，D.T.，Biochem.J.，1996，318，729)。具体地，ras的活化导致细胞外受体活化的激酶(ERK)的磷酸化和活化，它与生物生长和分化过程相联。
rac/cdc42的刺激导致JNK和p38活化的增加，响应与应激、调亡和炎症有关。尽管生长因子主要通过ERK途径响应，后者过程也可影响导致神经元存活的其它机理，该机理可能模拟增强存活性能的生长因子(Xia等，科学，1995，270，1326)。通过相关，但不同于生长媒介存活的机理，例如，通过JNK和p38 MAPK途径的抑制，调亡细胞死亡过程，它可导致存活，化合物也可作为用于神经元和非神经元细胞的存活促进剂。
本发明化合物也可用于与降低ChAT活性或死亡有关的疾病，对脊柱索运动神经元损伤的治疗，和也在如下疾病中具有效用例如，与中枢神经和周围神经系统、免疫系统的凋亡细胞死亡有关的疾病，和也在炎症性疾病中有效用。ChAT催化神经介质的合成，和认为它是用于功能性胆碱能神经元的酶标记物。通过染料(如，钙黄绿素)对存活神经元的特定吸收和酶转化，测定神经元的存活。在此所述的化合物也可用于治疗涉及恶性细胞增生的疾病状态，如许多癌症的治疗。
另外，Src，raf，和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)1，2，和4的抑制也可用于癌症的治疗。CDK2激酶的调节也可用于再狭窄的治疗。一种或多种CDK5或GSK3激酶的调节也可用于阿尔茨海默病的治疗。一种或多种c-Src激酶的调节也可用于骨质疏松症的治疗。对一种或多种GSK-3激酶的调节也可用于2型糖尿病的治疗。一种或多种p38激酶的调节也可用于炎症的治疗。一种或多种TIE-1，或TIE-2激酶的调节也可用于血管形成的治疗。一种或多种UL97激酶的调节也可用于病毒性感染的治疗。一种或多种CSF-1R激酶的调节也可用于骨或造血疾病的治疗。一种或多种Lck激酶的调节也可用于治疗自身免疫疾病或移植排异。局部异构酶Topo-I或TopoII的调节也可用于癌症的治疗。
由于它们的可变应用，杂环取代的吡唑啉酮的性能可以用于其它环境，如研究。例如，化合物可用于神经元体外存活功能、识别模型的开发，或用于其它合成化合物的筛选，它们具有与杂环取代的吡唑啉酮化合物相似的活性。因此，由本发明提供的化合物可用作用于确定试剂在制药研究程序中活性的测试或测定的标准物或参考化合物。
化合物也可用于研究、定义和确定与功能响应相关的分子目标。例如，通过放射性标记与特定细胞功能相关的杂环取代吡唑啉酮化合物，衍生物结合到其上的目标实体可以识别，分离，和精制用于鉴定。通过进一步的说明，化合物可用于对化合物在相关紊乱和疾病的机理方面的抑制作用理解的进一步增强的试验和模型的开发。因此，本发明的化合物在例如本文所述的诊断试验中用作诊断试剂。
例如，可以使用如下试验，确定本发明杂环取代的吡唑啉酮的酶活性抑制作用1.血管内皮生长因子受体-1激酶抑制试验(VEGFR1)2.血管内皮生长因子受体-2激酶抑制试验(VEGFR2)3.trkA酪氨酸激酶-1(trkA)抑制试验4.混合血统激酶-1(MLK1)抑制试验5.混合血统激酶-2(MLK2)抑制试验6.混合血统激酶-3(MLK3)抑制试验7.纤维形成生长因子受体激酶(FGFR1)抑制试验。
这些试验的描述，和其中获得的结果如下。结果是说明性的，不用于限制本公开的内容。对方便起见，某些缩写用于描写结果，它们定义在文本的主体中。其它缩写如下“μg”表示微克，“mg”表示毫克，“g”表示克，“μL”表示微升，“mL”表示毫升，“L”表示升，“nM”表示纳摩尔，“μM”表示微摩尔，“mM”表示毫摩尔，“M”表示摩尔，“nm”表示纳米。在约100μM-约10μM的浓度下，在此处所述的试验中，本发明的化合物优选显示可测量的抑制作用。更优选，在约10μM-约1μM的浓度下，本发明的化合物优选显示可测量的抑制作用。甚至更优选，在低于约1μM的浓度下，本发明的化合物优选显示可测量的抑制作用。血管内皮生长因子受体-1激酶活性的抑制VEGFR1激酶活性测定利用ELISA-基格式，在96-穴FluoroNUNCMaxisorp板中，采用时间解析的荧光读数。在Tris缓冲的盐水(TBS)中40μg/ml的浓度下，采用100μL/穴的底物溶液(重组体人类PLC-γ/GST)涂敷板。在100-μL测定混合物中，测定VEGFR1活性，混合物包含50mMHEPES(pH7.4)、30μM ATP、10mM MnCl2、0.1％BSA、2％DMSO和300ng/ml磷酸化重组体人类杆状病毒群表达的VEGFR1细胞质区。筛选化合物用于在1μM浓度下的VEGFR1激酶活性的抑制。允许激酶反应在37℃进行15分钟。在阻滞缓冲剂中，以1∶5000稀释液(在TBST中3％BSA)加入检测抗体，铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Wallac #CR04-100)。在37℃下孵化1小时之后，加入100μL增强溶液(Wallac #1244-105)，和轻微搅拌该板。在5分钟之后，使用BMG Fluostar(型号#403)，测量获得溶液的荧光。结果见表3。
表3杂环取代的吡唑啉酮对VEGF-1受体激酶活性的抑制效果
血管内皮生长因子受体-2激酶活性的抑制如下文用于trkA激酶所述进行测定。96-穴微量滴定板(FluoroNUNC Maxisorp)采用40μg/ml重组体人类磷脂酶C-γ1/谷光甘肽S-转移酶融合蛋白涂敷。抑制作用的研究在100-μL测定混合物中进行，混合物包含50mM HEPES pH7.4，30μM ATP，10mM MnCl2，0.1％BSA，2％DMSO和1μM测试化合物。通过加入磷酸化重组体人类杆状病毒群VEGFR2细胞质区引发反应。使反应在37℃进行15分钟。在阻滞缓冲剂中以1∶5000稀释液(在TBST中3％BSA)加入检测抗体，铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Wallac #CR04-100)。在37℃下孵化1小时之后，加入100μL增强溶液(Wallac #1244-105)，和轻微搅拌该板。在5分钟之后，使用BMG Fluostar(型号#403)测量获得溶液的荧光。结果见表4杂环取代的吡唑啉酮对VEGF-2受体激酶活性的抑制效果
trkA酪氨酸激酶活性的抑制使用前文所述的ELISA-基试验方法，测试选择的杂环取代吡唑啉酮对于杆状病毒群表达的人类trkA细胞质区的激酶活性的抑制能力(Angeles等，Anal.Biochem.，23649-55，1996)。简言之，采用底物溶液(重组体人类磷脂酶C-γ1/谷光甘肽S-转移酶融合蛋白)涂敷96-穴微量滴定板(Rotin等，EMBO J.，11559-567，1992)。抑制研究在100-μL测定混合物中进行，混合物包含50mM HEPES pH7.4，40μMATP，10mM MnCl2，0.1％BSA，2％DMSO，和各种浓度的抑制剂。通过加入trkA激酶引发反应，使反应在37℃进行15分钟。然后加入对磷酸酪氨酸(UBI)的抗体，随后加入次级酶共轭抗体，碱性磷酸酶标记的山羊抗小鼠IgC(Bio-Rad)。通过增强测试系统(Gibco-BRL)，测量结合酶的活性。使用GraphPad Prism中的S形剂量-响应(可变斜率)公式，分析抑制数据。结果见表5。
表5杂环取代的吡唑啉酮对trkA激酶活性的抑制效果
血小板衍生生长因子受体激酶活性的抑制使用上述trkA激酶ELISA，探察杂环取代的吡唑啉酮对于杆状病毒群表达的PDGFβ受体激酶区的抑制效果。在底物(PLC-γ/GST)-涂敷的96-穴微量滴定板中进行测定。每100μl反应混合物包含50mMHEPES pH7.4，20μM ATP，10mM MnCl2，0.1％BSA，2％DMSO，和各种浓度的抑制剂。通过加入预磷酸化重组体人类酶(10ng/mlPDGFβ)而引发反应，使反应在37℃进行15分钟。在使用之前，通过在4℃下，在缓冲剂中孵化1小时而制备预磷酸化的酶，缓冲剂包含20μMATP，10mM MnCl2。通过加入辣根过氧化物酶(HRP)-共轭的抗磷酸酪氨酸抗体(UBI)进行磷酸化产物的检测。然后，加入包含3.3’，5，5’-四甲基联苯胺和过氧化氢的HRP底物溶液，和在室温下孵化该板10分钟。采用酸使反应停止，和使用微量板生物动力学阅读器(MicroplateBio-kinetics Reader)(Bio-Tek Instrument EL 312e)，在450nm下将获得的吸光率读数。使用GraphPad Prism中的S形剂量-响应(可变斜率)公式，分析抑制数据。混合同系激酶-1活性的抑制使用如用于蛋白激酶C的Millipore Multiscreen TCA“板内”格式(Pitt & Lee，J.Biomol.Screening，147-51，1996)，测定MLK1的激酶活性。简言之，每50μl试验混合物包含20mM HEPES pH7.0，1mMEGTA，10mM MgCl2，10mM DTT，25mM β-甘油磷酸酯，60μM ATP，0.25μCi[γ-32P]ATP，0.1％BSA，500μg/ml髓磷酯碱性蛋白质(UBI#13-104)，2％ DMSO，1μM测试化合物，和1μg/ml杆状病毒群GST-MLKKD。样品在37℃下孵化15分钟。通过加入冰冷的50％TCA而停止反应，和使蛋白质在4℃下沉淀30分钟。然后采用冰冷的25％TCA洗涤该板。加入超混合的闪烁混合物，和在使用Wallac MicroBeta 1450 PLUS闪烁计数器计数之前，将该板平衡1-2小时。结果见表6。
表6杂环取代吡唑啉酮对MLK-1激酶活性的抑制效果
混合同系激酶-2活性的抑制使用如MLK-1所述的Millipore Multiscreen板格式进行测定。每50μl测定混合物包含20mM HEPES pH7.1，1mM EGTA，10mMMgCl2，10mM DTT，25mM β-甘油磷酸酯，10μM ATP，0.25μCi[γ-32P]ATP，0.1％BSA，500μg/ml髓磷酯碱性蛋白质(UBI#13-104)，2％ DMSO，各种浓度的测试化合物，和3μg/ml杆状病毒群GST-MLK2KDLZ。样品在37℃下孵化15分钟。通过加入冰冷的50％TCA而停止反应，和允许蛋白质在4℃下沉淀30分钟。然后采用冰冷的25％TCA洗涤该板。加入超混合闪烁混合物，和在计数之前使该板平衡1-2小时。结果见表7。
表7杂环取代吡唑啉酮对MLK-2激酶活性的抑制效果
混合同系激酶-3活性的抑制使用如MLK-1所述的Millipore Multiscreen板格式进行测定。简言之，每50μl测定混合物包含20mM HEPES pH7.1，1mM EGTA，10mMMgCl2，10mM DTT，25mM β-甘油磷酸酯，100μM ATP，0.25μCi[γ-32P]ATP，0.1％BSA，500μg/ml髓磷酯碱性蛋白质(UBI#13-104)，2％DMSO，各种浓度的测试化合物，和2μg/ml杆状病毒群GST-MLK3KD。样品在37℃下孵化15分钟。通过加入冰冷的50％TCA而停止反应，和允许蛋白质在4℃下沉淀30分钟。然后采用冰冷的25％TCA洗涤该板。加入超混合闪烁混合物，和在计数之前使板平衡1-2小时。结果见表8。
表8杂环取代吡唑啉酮对MLK-3激酶活性的抑制效果
成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR1)激酶活性的抑制采用如用于trkA激酶所述的时间-解析的荧光读数，在96-穴FluoroNUNIC Maxisorp板中，使用ELISA-基格式，测量FGFR1激酶活性。在Tris缓冲的盐水(TBS)中10μg/ml的浓度下，采用100μL/穴的底物溶液(重组体人类PLC-γ/GST)涂敷板。在100-μL测定混合物中，测定FGFR1活性，该混合物包含50mM HEPES(pH7.4)，20μM ATP，10mMMnCl2，0.1％BSA，2％DMSO，和15ng/ml重组体人类杆状病毒群表达的FGFR1细胞质区。筛选化合物在1μM浓度下的FGFR1激酶活性的抑制。使激酶反应在37℃进行15分钟。在阻滞缓冲剂中以1∶5000稀释液(在TBST中3％BSA)加入检测抗体，铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Wallac#CR04-100)。在37℃下孵化1小时之后，加入100μL增强溶液(Wallac#1244-105)，和轻微搅拌该板。在5分钟之后，使用BMG Fluostar(型号#403)测量获得溶液的荧光。结果见表9。
表9杂环取代的吡唑啉酮对成纤维细胞因子活性的抑制效果
剂量和制剂对于治疗用途，本发明的化合物可以通过任何方式用药，这些方式导致活性剂与在哺乳动物体内试剂的作用位置的接触。化合物可以通过与药物一起使用的常规方式，或以单独的治疗剂或以治疗剂结合物中的形式给药。它们优选以在药物组合物中单一活性剂的方式给药，或者，它们可用于与其它活性成分，如其它生长因子结合使用，在疾病或紊乱中其它生长因子有助于神经元存活或轴突再生。化合物优选与药物载体结合，根据给药的选择途径和标准制药实践选择载体。
例如，采用与药物可接受非毒性赋形剂和载体的混合物，化合物可配制成药物组合物。组合物可以制备成用于胃肠外给药，特别是以液体溶液或悬浮液的形式；或口服给药，特别是以片剂或胶囊的形式；或鼻内给药，特别是以粉末、滴鼻液、或气溶胶的形式；或经皮给药，例如通过经皮贴剂。
组合物通常可以单位剂量形式用药，和可以通过在制药领域任何公知的方法制备，例如，在Remington’s Pharmaceutical Sciences(MackPub.Co.，Easton，PA，1980)中描述的方法。用于胃肠外给药的制剂可包含作为通常赋形剂的无菌水或盐水，聚亚烷基二醇如聚乙二醇，油和植物起源物，氢化萘等。特别是生物相容的生物可降解的交酯聚合物，交酯/乙交酯共聚物，或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物也可用作赋形剂，以控制活性化合物的释放。
用于这些活性化合物的其它潜在可用的胃肠外输送系统包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物粒子，渗透泵，可植入输液系统，和脂质体。用于吸入给药的配制剂包含作为赋形剂例如乳糖，或可以是水溶液，水溶液中包含例如聚氧乙烯-9-十二烷基醚，甘氨胆酸酯和脱氧胆酸酯，或以滴鼻液形式的给药用油性溶液，或以鼻内应用的凝胶。用于胃肠外给药的制剂也可包括用于面颊给药的甘氨胆酸酯，用于直肠给药的水杨酸盐，或用于阴道给药的柠檬酸。用于经皮肤贴剂的制剂优选是亲脂性乳液。
通式I的化合物及其药用盐可以口服或非口服给药，如以软膏或注射注给予。本发明化合物在药物组合物中的浓度可以变化。浓度依赖于如下因素如用药的总剂量，所用化合物的化学性能(如，疏水性)，给药的途径，患者的年龄、体重和症状等。本发明的化合物可以含水生理缓冲溶液提供，该溶液包含约0.1-10％w/v用于胃肠外给药的化合物。典型的剂量范围是每天约1mg-约1μg/kg体重；优选的剂量范围是每天约0.01mg/kg-约100mg/kg体重；和优选约0.1-20mg/kg，每天一到四次。要给予药物的优选剂量也依赖于如下变量如疾病或紊乱的类型和病程，特定患者的总体健康状况，选择的化合物的相对生物率，和化合物赋形剂的配制剂型，和其给药途径。
可以将有效量的通式I化合物或其药用盐作为活性成分，和制药可接受的载体均匀地混合，而制备根据本发明的药物组合物。根据适于给药的组合物的形式，载体可以采用许多种形式。需要以适于口服或非口服给药的单位剂量形式制备这样的药物组合物。用于非口服给药的形式包括软膏和注射液。
可以使用赋形剂如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇和甲基纤维素，崩解剂如淀粉、藻酸钠、羧甲基纤维素钙和结晶纤维素，润滑剂如硬脂酸镁和滑石粉，粘合剂如明胶、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素和甲基纤维素，表面活性剂如蔗糖脂肪酸酯和山梨糖醇脂肪酸酯等，以常规的方式制备片剂。优选每个片剂包含15-300mg的活性成分。
可以使用赋形剂如乳糖和蔗糖，崩解剂如淀粉，粘合剂如明胶等，以常规方式制备颗粒剂。可以使用赋形剂如乳糖和甘露糖醇等，以常规的方式制备粉剂。可以使用明胶，水，蔗糖，阿拉伯胶，山梨糖醇，甘油，结晶纤维素，硬脂酸镁，滑石粉等以常规的方式制备胶囊。优选每个胶囊包含15-300mg的活性成分。
可以使用糖如蔗糖，水，乙醇等，以常规的方式制备糖浆制剂。
可以使用软膏基质如凡士林、液体石蜡、羊毛脂和聚乙烯二醇，乳化剂如十二烷基乳酸钠，氯苄烷铵(benzalkonium chloride)，脱水山梨糖醇单脂肪酸酯，羧甲基纤维素钠和阿拉伯胶等，以常规的方式制备软膏。
可以使用溶剂如水、生理盐水、植物油(如榄橄油和花生油)、油酸乙酯和丙二醇，增溶剂如苯甲酸钠、水杨酸钠和尿烷，等渗剂如氯化钠和葡萄糖，防腐剂如苯酚、苯甲酚、对羟基苯甲酸酯和氯丁醇，抗氧化剂如抗坏血酸和焦亚硫酸钠等，以常规的方式制备注射制剂。
如本领域技术人员可以理解的那样，在上述教导的指引下，本发明的许多改进和变化是可能的。因此可以理解的是，在所附范围之内，实施本发明不是如在此具体描述的那样，本发明的范围还包括所有这样的变化。
权利要求
1.下式I化合物或其立体异构体或其药用盐 其中Het是杂环；R1选自H，被0-5个R6取代的C1-10烷基，被0-5个R6取代的C2-8链烯基，被0-5个R6取代的C2-8炔基，NRaRa，C(＝O)Rb，C(＝O)NHRa，CO2Rc，和被0-5个R6取代的杂环；条件是当R1和Het均为2-吡啶基时，R2和R3不是4-二乙氨基-2-苯基；以及当R1是4-羧基-苯乙基时，Het和R2或R3之一均不是二甲氨基-噻吩；R2和R3各自独立地选自H，被1-5个R6取代的C1-2烷基，被0-5个R6取代的C3-10烷基，被0-5个Ri取代的C2-8链烯基，C2-6炔基，Cl，Br，I，CN，(CH2)rNRaRa，(CH2)rORc，(CH2)rSRc，(CH2)rNC(＝O)Rb，(CH2)rCO2Rc，(CH2)rOC(＝O)Rb，(CH2)rC(＝O)NRaRa，(CH2)rNRaC(＝O)Rb，(CH2)rNRaC(＝O)ORb，(CH2)rOC(＝O)NHRa，(CH2)rNRaS(＝O)Rb，(CH2)rS(＝O)2NRaRa，(CH2)rS(O)pRb，被0-5个R4取代的(CH2)r碳环，和被0-5个R4取代的(CH2)r杂环；条件是R2和R3不能同时为H或同时为SCH3；以及当R2是H和R3是苯基时，杂环不能是2-呋喃基；另外，R2和R3一起可形成被0-4个R4取代的杂环，条件是该杂环不是2-噻唑烷基或5-甲基-2-噁唑烷基；所述的R4各自独立地选自H，F，Cl，Br，I，CN，CF2CF3，CF3，NO2，CN，OH，NRaRa，ORc，C(＝O)Rb，CO2Rc，OC(＝O)Rb，NRaC(＝O)Rb，C(＝O)NRaRa，OC(＝O)NRaRa，NRaC(＝O)ORb，NRaS(＝O)2Rb，S(＝O)NRaRa，NRaC(＝S)Rb，C(＝S)NRaRa，NRaC(＝O)NRaRa，NRaC(＝S)NRaRa，CH＝NORc，CHNRa，CH＝NNRaRa，(CH2)rS(O)pRb，O(CH2)qNRaRa，O(CH2)qORc，(CH2)rORd，(CH2)rC(＝O)Rd’，(CH2)rNHRd，(CH2)rS(O)pRd′，被0-5个R6取代的C1-10烷基，被0-5个R6取代的C2-8链烯基，被0-5个R6取代的C2-8炔基，被0-5个R6取代的碳环，被0-5个R6取代的杂环；R5或者不存在，或者选自H，C1-8烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，(CH2)rC3-6环烷基，和(CH2)r苯基；R6，在每种情况下，独立地选自被0-5个Rh取代的C1-6烷基，C2-8链烯基，C2-8炔基，F，Cl，Br，I，CN，CF2CF3，CF3，NO2，CN，NRfRf，ORf，C(＝O)Rf，CO2Rf，OC(＝O)Rg，NRfC(＝O)Rf，C(＝O)NRfRf，OC(＝O)NRfRf，NReC(＝O)ORg，NReS(＝O)2Rg，S(＝O)2NRfRf，NRaC(＝S)Rg，C(＝S)NRfRf，NRfC(＝O)NRfRf，NRfC(＝S)NRfRf，CH＝NORe，CH＝NRe，CH＝NNReRe，S(O)pRf，O(CH2)pNRfRf，O(CH2)pNRf，ORd，NHRd，C(＝O)Rd’，S(O)pRd’，被0-5个Rh取代的碳环，被0-5个Rh取代的杂环，P(＝O)(ORC)2，和C5-7单糖，其中单糖的每个羟基是未取代的或被选自如下的基团取代H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，和OC(＝O)C1-4烷基；Ra，在每种情况下，独立地选自H，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，(CH2)rC3-6环烷基，和(CH2)r苯基，其中当Ra不是H时，Ra被0-5个Rh取代；或者，两个Ra可结合以形成选自(CH2)qO(CH2)q，(CH2)qS(CH2)q，和(CH2)m的链接，其中链接被0-5个Rh取代；Rb，在每种情况下，独立地选自C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，(CH2)r苯基，和(CH2)r杂环，其中Rb被0-5个Rh取代；Rc，在每种情况下，独立地选自H，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，C3-6环烷基，和(CH2)r苯基，其中当Rc不是H时，Rc被0-5个Rh取代；Rd，在每种情况下，独立地选自在除去羧基的羟基之后氨基酸的残基；Rd’，在每种情况下，独立地选自在除去胺的氢之后氨基酸的残基；Re，在每种情况下，独立地选自H和C1-6烷基；Rf，在每种情况下，独立地选自H，被0-5个Rh取代的C1-6烷基，和被0-5个Rh取代的(CH2)r苯基；Rg，在每种情况下，独立地选自被0-5个Rh取代的C1-6烷基，和被0-5个Rh取代的(CH2)r苯基；Rh，在每种情况下，独立地选自F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，CF2CF3，C1-4烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，烷氧基，C3-7环烷基，羧基，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，新戊酰基，己酰基，乙酰氨基，乙酸酯，氨基甲酰基，羧基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，苯基，苄基，苯乙基，萘基，杂环基和酮基；Ri，在每种情况下，独立地选自F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，CF2CF3，C1-4烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，烷氧基，C3-7环烷基，羧基，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，新戊酰基，己酰基，乙酰氨基，乙酸酯，氨基甲酰基，羧基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，苯基，苄基，苯乙基；m，在每种情况下，独立地选自2，3，4，和5；n独立地选自0，1，2，3，4，和5；p，在每种情况下，独立地选自0，1，和2；q，在每种情况下，独立地选自1，2，3，和4；和r，在每种情况下，独立地选自0，1，2，3和4。
2.根据权利要求1的化合物，具有如下通式
3.根据权利要求2的化合物，其中R1选自氢和烷基。
4.根据权利要求3的化合物，其中R2或R3选自H和烷基。
5.根据权利要求1的化合物，具有如下通式 其中R2或R3是H。
6.根据权利要求5的化合物，其中Het选自a)包含1-3个杂原子的6-元杂环，杂原子选自O，N和S；和b)包含如下一组杂原子的5-元杂环1)一个氧原子，一个氮原子，或一个硫原子；2)硫和氮原子，氧和氮原子，或两个氮原子；或3)三个氮原子，一个氧原子和两个氮原子，或一个硫原子和两个氮原子。
7.根据权利要求5的化合物，其中Het是芳族的。
8.根据权利要求5的化合物，其中Het选自 其中X选自O，S，NH，和N-烷基。
9.根据权利要求5的化合物，其中Het是非芳族的。
10.根据权利要求9的化合物，其中Het选自
11.根据权利要求5的化合物，其中R3选自a)包含1-3个杂原子的6-元杂环，杂原子选自O，N和S；和b)包含如下任意一组杂原子的5-元杂环1)一个氧原子，一个氮原子，或一个硫原子；2)硫和氮原子，氧和氮原子，或两个氮原子；或3)三个氮原子，一个氧原子和两个氮原子，或一个硫原子和两个氮原子。
12.根据权利要求11的化合物，其中R3是芳族杂环。
13.根据权利要求8的化合物，其中R3选自 其中X选自O，S，NH，和N-烷基。
14.根据权利要求5的化合物，其中R3选自
15.根据权利要求13的化合物，其中R4选自F，Cl，Br，I，OH，NO2，CN，CF3，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，乙烯基，丙烯基，丁烯基，乙炔基，丙炔基，丁炔基，甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，苯基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，CO2H，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，NH2，单烷基氨基，二烷基氨基，苯基，和杂芳基；和n选自0，1，和2。
16.一种药物组合物，包括权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
17.一种抑制激酶的方法，激酶选自trk激酶，VEGFR，MLK，和FGFR，该方法包括以足以导致有效抑制的量提供权利要求1的化合物。
18.一种治疗或预防血管生成紊乱的方法，该方法包括向需要这样治疗或预防的宿主给予治疗量的权利要求1的化合物。
19.根据权利要求18的方法，其中血管生成紊乱是实体肿瘤癌，子宫内膜异位症，糖尿病性视网膜炎，牛皮癣，成血管细胞瘤，眼病或斑退化。
20.一种治疗或预防如下疾病的方法阿尔茨海默病，肌萎缩侧索硬化，帕金森病，中风，局部出血，享廷顿病，爱滋病，痴呆，癫痫，多发性硬化症，周围神经病，脑或脊柱索损伤，癌症，再狭窄，骨质疏松症，炎症，病毒性感染，骨或造血疾病，自身免疫病或移植排异，该方法包括向需要这样治疗或预防的宿主给予治疗量的权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明涉及新颖杂环取代的吡唑啉酮,包括含有该物质的药物组合物,诊断试剂盒,测定标准物或试剂,和使用该物质作为治疗药的方法。本发明也涉及中间体和这些新颖化合物的制备方法。
文档编号A61K31/427GK1387528SQ00814898
公开日2002年12月25日 申请日期2000年11月1日 优先权日1999年11月4日
发明者贾斯伯·辛格, 拉宾德拉纳特·特里帕蒂 申请人:赛福伦公司