专利名称：来自菌类的生理活性物质eem－s、其制造方法和药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及至少一种选自香菇、火菇、真姬菇(ブナシメジ)、侧耳属、奇果菌属、小包脚菇属、滑菇(ナメコ)、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、多孔菌类的灵芝和木层孔菌属(メシマコブ)的食用菌类得到的，具有抗癌活性、抗变态反应活性、免疫赋活性、抗氧化活性等生理活性的物质及其制造方法，和含有该生理活性物质的制剂。
从基于庞大的研究数据确实研究的结果得知，特别是菌类的抗癌作用，是由其含有的多糖决定的，本发明者对作为菌类多糖类的葡聚糖进行了研究。但是，判断出纯粹的单纯多糖类葡聚糖虽然通过注射显示活性，但是通过口服不显示效果。
通过注射给药只能在医院等进行，另外，由于口服给药对于接受给药的患者来说可大大减少痛苦，因此强烈需要提供口服有效的来自菌类的活性成分。
本发明的课题是选择高浓度含有通过口服给药具有抗癌作用、免疫赋活作用等生理活性物质的菌类，提供高效采集这些生理活性物质的方法，同时提供适用于使用这些得到的活性物质的制剂。
即，本发明提供了用水、亲水性溶剂或它们的混合溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇属、灵芝和木层孔菌属的菌类，然后，将该萃取物用分子筛法处理，通过采集分子量6,000～60,000的部分得到的生理活性物质EEM-S。
另外，本发明提供了上述生理活性物质EEM-S的制造方法。
图2是实施例2得到的生理活性物质EEM-SS的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图3是实施例3得到的生理活性物质EEM-SM的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图4是实施例4得到的生理活性物质EEM-SN的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图5是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE的紫外可见吸收曲线图。溶剂是水。
图6是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB用ATR法测定的红外吸收曲线图。
图7是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE用ATR法测定的红外吸收曲线图。
图8是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB的1H-NMR(D2O)的图。
图9是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE的1H-NMR(D2O)的图。
图10是实施例1得到的生理活性物质EEM-SB的13C-NMR(D2O)的图。
图11是实施例5得到的生理活性物质EEM-SE的13C-NMR(D20)的图。
实施发明的最佳方式本发明的生理活性物质EEM-S是通过用水和/或亲水性溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇属、灵芝和木层孔菌属的被供于食用的菌类的子实体和/或菌丝体的细微粉碎物(以下记载为“菌”)得到的。作为该萃取中使用的亲水性溶剂，优选使用碳原子数1～4的低级醇。
从上述菌类进行的含有生理活性物质EEM-S馏分的萃取，例如，可以向作为原料的菌类中添加适量水或低级醇等亲水性溶剂，例如，在80～98℃左右，在水的情况下优选在90～98℃的温度条件下，回流下，通过1至4小时，优选2至4小时的萃取进行。萃取后，相对于菌类的重量，可使用3至10倍重量左右的溶剂。
如上得到的萃取液，可根据需要通过过滤等分离固形杂质后，通过减压蒸除溶剂，可以固形物的形式收集萃取物。
这样得到的固形物，即使本身口服给药也可显示活性，可以直接使用，但是为了提高活性，可将萃取液用分子筛处理除去不需要的部分，将再次在减压下浓缩得到的分子量6,000～60,000的部分作为生理活性物质EEM-S使用。
作为上述目的中使用的分子筛，可列举分子筛膜(平膜)、中空过滤膜、透析膜、分子筛色谱等，生理活性物质EEM-S的分离获得可适当应用使用这些的方法。
下面，以使用模型(model type)中空过滤的情况为例对生理活性物质EEM-S的分离获得方法进行说明。即，将如前所述萃取得到的菌类的水和/或亲水性溶剂萃取液(含有生理活性物质EEM-S的馏分)，首先，用低分子划分膜模型，例如，AIP-3013、AIP-2013、或AIP-1010(旭化成工业社制)处理除去低分子量物质(分子量6,000以下的物质)。然后，将除去了低分子物质的浓缩液用高分子划分膜模型，例如，AHP-3013、AHP-2013、或AHP-1010(旭化成制)处理除去高分子物质(分子量60,000以上)，外液再次用低分子划分膜模型浓缩。通过划分，可得到分子量6,000～60,000的生理活性物质EEM-S。
另外，使用一般的分子筛法时，由于分子的形状导致在筛内的悬挂方式不同，可能与用其他方法求得的分子量不同。因此，本发明中，分子量是指用分子筛法求得的分子量，更准确地说，低分子侧的分子量是使用AIP-3013或与其同等的低分子划分膜模型测定的值。同样，高分子侧的分子量是使用AHP-3013或与其同等的低分子分化膜模型测定的值。
这样得到的菌类的生理活性物质，总体记为EEM-S，但是来自菌类的生理活性物质，将菌类菌丝体作为原料使用时，由于培养条件不同收率不同，选择最佳的培养基、培养温度等是必要的。另外，由于菌类的种类不同可能显示若干不同的物理化学性状。
例如，以真姬菇为原料制造的生理活性物质EEM-S(以下，有时称为“EEM-SB”)，显示后述实施例1中所示的物理化学性状。另外，以火菇为原料制造的生理活性物质EEM-S(以下，有时称为“EEM-SE”)，显示后述实施例5中所示的物理化学性状。另外，从香菇、奇果菌属和滑菇得到的生理活性物质EEM-S(以下，有时分别称为“EEM-SS”、“EEM-SM”’、“EEM-SN”)，分别显示图1～图5的紫外线可见光吸收。
这样，在物理化学性质中，即使有一些不同，但如后述实施例6所示，与各种菌中单纯的热水萃取物相比都具有更高的生理活性，可以说保持有共通的性质。
以上说明的生理活性物质EEM-S，是通过口服给药可发挥生理活性的物质，但是为使其发挥所期望的效果的口服摄取量，根据人的年龄、体重、目的等变化，通常，成人每天以EEM-S计摄取200～5000mg的范围，优选1000～3000mg的范围，该剂量1天分数次服用是合适的。
另外，本发明的生理活性物质EEM-S，可通过常规方法制成散剂、颗粒剂、胶囊剂、液体制剂使用，但由于其直接在大气中放置的话会发生吸湿变色、变质，优选以施用了薄膜包衣的片剂使用。作为该目的中使用的薄膜包衣材料，优选大豆肽、贝壳树脂材料等，其他的薄膜包衣材料有不能充分防止吸湿的情况，会发生变色、变质。
这样得到的EEM-SS，通过冷冻干燥可制成固体粉末，进一步通过将其压片，可制成片剂。
所得的生理活性物质EEM-SM的水溶液中的紫外线吸收曲线如图3所示。
所得的生理活性物质EEM-SN的水溶液中的紫外线吸收曲线如图4所示。实施例5将1000g火菇用热水回流的同时萃取，得到热水萃取物107g。将其溶解在水中后，放入透析管中进行透析，得到透析内膜的含有高分子物质(分子量6,000以上)的级分。将该含高分子物质的级分用分子筛膜PM-10处理，除去高分子物质(50,000以上)，冷冻干燥，得到分子量6,000～50,000的EEM-SE高含有物质。将其制成粉末剂。[EEM-SE的物理化学性质]生理活性物质EEM-SE的物理化学性质(1)紫外线吸收(测定水溶液中370～190nm的UV吸收)最大值258.4nm(吸收曲线用图5表示)(2)红外线吸收(用ATR法测定)最大值(cm-1)3279、2927、1578、1400、1043(吸收曲线用图7表示)(3)1H-NMR(在D2O中测定)图谱用图9表示。(4)1C-NMR(在D2O中测定)图谱用图11表示。(5)蛋白含量12.7％(6)糖含量9.8％(7)主要糖构成比葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖＝16∶3∶1(8)氨基酸组成天冬氨酸9.1％、谷氨酸17.7％、甘氨酸14.8％、丙氨酸21.9％、缬氨酸11.8％、精氨酸；6.8％、鸟氨酸12.6％(9)元素分析C36.5％、H6.6％、N3.5％
发明效果通过本发明，可从食用菌类高效简单地得到生理活性强的物质，可得到作为药品或保健品有用的制品。
权利要求
1.生理活性物质EEM-S，是用水、亲水性溶剂或它们的混合溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、灵芝和木层孔菌属的菌类，然后，将该萃取物用分子筛法处理，收集分子量6,000～60，000的部分得到的。
2.权利要求1记载的生理活性物质EEM-S，在水溶液中的紫外线吸收的最大值是255～260nm。
3.权利要求1至2记载的生理活性物质，亲水性溶剂是碳原子数1～4的低级醇。
4.生理活性物质EEM-SB，是将真姬菇用水、碳原子数1～4的低级醇或它们的混合溶剂萃取，然后用分子筛法处理得到的，分子量是6,000～60,000，在水溶液中的紫外线吸收的最大值是255～260nm，红外线吸收的最大吸收波数为1560、1396、1032cm-1(每个都包括±50cm-1以内的误差)，蛋白含量是20％～30％，糖含量是22％～32％，氨基酸的组成(摩尔比)是天冬氨酸9.0％、谷氨酸16.1％、甘氨酸9.1％、丙氨酸12.5％、缬氨酸5.7％、精氨酸5.6％、鸟氨酸7.8％(每个都包括±3％以内的误差)，作为构成糖主要是葡萄糖。
5.生理活性物质EEM-SE，是将火菇用水、碳原子数1～4的低级醇或它们的混合溶剂萃取，然后用分子筛法处理得到的，分子量是6,000～60,000，在水溶液中的紫外线吸收的最大值是255～260nm，红外线吸收的最大吸收波数为3259、2927、1578、1400、1043cm-1(每个都包括±50cm-1以内的误差)，蛋白含量是8％～18％，糖含量是5％～10％，氨基酸的组成(摩尔比)是天冬氨酸9.1％、谷氨酸17.7％、甘氨酸14.8％、丙氨酸21.9％、缬氨酸11.8％、精氨酸6.8％、鸟氨酸12.6％(每个都包括±3％以内的误差)，作为构成糖主要是葡萄糖。
6.生理活性物质EEM-S的制造方法，其特征在于用水、亲水性溶剂或它们的混合溶剂萃取至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、エリンギ、蘑菇、灵芝和木层孔菌属的菌类，然后，将该萃取物用分子筛法处理，收集分子量6,000～60,000的部分。
7.权利要求6记载的生理活性物质EEM-S的制造方法，亲水性溶剂是碳原子数1～4的低级醇。
8.权利要求6或7记载的生理活性物质EEM-S的制造方法，分子筛法是使用分子筛膜(平膜)、中空过滤膜、透析膜或分子色谱的方法。
9.含有权利要求1至5任一项中记载的生理活性物质作为有效成分的药物。
10.权利要求9记载的药物是抗癌剂。
11.权利要求9或10记载的药物是片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂或液体制剂。
12.权利要求9、10或11记载的药物是用大豆肽和/或贝壳树脂薄膜包衣剂包衣的片剂。
全文摘要
本发明公开了通过分子筛法处理至少一种选自香菇、火菇、真姬菇、侧耳属、滑菇、奇果菌属、小包脚菇属、ハタケシメジ、ェリンギ、蘑菇、灵芝和木层孔菌属的菌类的热水或低级醇萃取物，除去低分子和高分子部分得到的EEM－S及其制剂。该EEM－S显示抗癌作用、免疫赋活作用、抗氧化作用、降低血压和血糖作用等生理作用。
文档编号A61K9/08GK1416349SQ01806435
公开日2003年5月7日 申请日期2001年1月11日 优先权日2000年1月12日
发明者池川哲郎, 池川昭子, 岛田文武 申请人:有限会社生命科学研究所