专利名称：腺苷－激酶抑制剂性质的衍生自4－苯胺喹唑啉的化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及衍生自4-苯胺喹唑啉的化合物，它们是腺苷-激酶抑制剂。本发明还涉及一种保护受局部缺血影响的组织和器官，如心脏、脑和肾脏的方法，以及治疗心功能不全、心肌梗塞、高血压、动脉粥样硬化、血管成形术后的冠状再-狭窄、慢性肾功能不全、脑血管意外、慢性炎性疾病(例如，类风湿性关节炎)的方法。本发明还扩展到先前被描述为EGF家族酪氨酸-激酶抑制剂的喹唑啉衍生物[Fry等人，Science 1994，265，1093和专利号PI 9708640-1A和566226A1]作为腺苷-激酶抑制剂的作用。为了更好地理解本发明，定义并描述了一些已知的化合物及它们的性质，以及与本发明有关的特定术语。
腺苷。腺苷是一种调节多种细胞功能的嘌呤核苷，并且其作用由位于几乎所有种类细胞的细胞膜中的至少4种PI嘌呤能受体，即A1、A2a、A2b和A3介导[Fredholm等人，Pharmacol Rev 2001，53527]。尽管事实上作用于生物的所有细胞和器官，但它的主要作用是在心脏、脑、肾脏和免疫系统细胞中观察到的。因为它的作用限于释放它的部位，因此腺苷被认为是自体有效物质[形成Greek自体-自我(autos-self)和akos-缓解、治愈]。通常，它的复杂作用导致代谢活性降低和保护免受与细胞活性持续增加有关的生理学和病理学刺激。它对局部缺血/再灌注损害作用、促炎物质的保护作用，及其作为止痛剂、与睡眠有关的神经元活性的调节剂、抗交感神经剂、血栓形成聚集抑制剂、嗜中性白细胞粘附抑制剂、自由基产生抑制剂和血管舒张剂的作用是众所周知的。
腺苷分解代谢的药理学抑制剂。考虑到其广泛的作用，对腺苷、它的模拟物的治疗用途以及干扰其代谢和生物利用度的物质的兴趣日益增加并不令人感到意外。由于腺苷的半衰期短(据估计在循环中小于1秒)和它不合需要的血液动力学效应，所以它本身作为治疗剂的用途受到限制。这些论证对于受体激动剂和拮抗剂也是有效的，如腺苷可具有不合需要的全身作用。然而，干扰腺苷局部代谢和生物利用度的方法是有希望的。在这种情况下，应该注意的是腺苷主要是由于脱磷酸5′＝AMP的胞内和胞外5’-核苷酸酶的作用，以及SAH-水解酶对S-腺苷基-高半胱氨酸(SAH)的作用而形成的[Headrick等人，Am JPhysiol Heart Circ Physiol 2003；285H1797]。另外，胞外腺苷通过特定的膜载体被细胞迅速吸收。在胞内环境中，腺苷通过腺苷脱氨酶脱氨基成为肌苷，或通过腺苷激酶再次-磷酸化成为5′-AMP。除了高的膜转运速度外，高的分解代谢决定了腺苷具有短的半衰期和高度定位化的生理学功能。这些机理对于局部腺苷生物利用度的重要性可通过腺苷膜载体抑制剂以及腺苷激酶或脱氨酶作用活性抑制剂引起的组织浓度的增加而证实[Headrick等人，Am J Physiol Heart Circ Physiol2003；285H1797，Kowaluk & Jarvis，Expert Opin Investig Drugs.2000；9551]。在酶抑制剂这种情况下，可利用的证据提示了对涉及局部缺血/再灌注、炎症和疼痛的损害作用的临床状况治疗的潜在效用。
腺苷激酶。腺苷激酶，也被称作腺苷5′-磷酸转移酶，是哺乳动物中最丰富的核苷激酶，并催化核苷类似物的呋喃核糖基(rhibofuranosyl)的5’-羟基的磷酸化，其使用ATP或GTP作为磷酸供体。已经测定了来源于不同物种(包括人类)、从胎盘中获得的腺苷激酶的结构。该酶是单体，它的结构由具有9个β-带和8个α-螺旋的较大α/β结构域(dominion)和具有5个β-带和2个α-螺旋的较小α/β结构域组成[Mathews等人，Biochemistry 1998；3715607]。活性位点位于较大的α/β结构域中的β-带边缘，并且这是腺苷自身连接的地方，而较小的α/β结构域阻断活性位点的上层端面，另一附近的位点接受ATP。镁结合位点位于腺苷和ATP的结合位点之间，并且它是腺苷激酶催化的必需离子。相对于该激酶活性所提出的模型提示，位于300位的氨基酸天门冬氨酸是磷酸转移过程中参与5’-羟基脱质子化的重要催化剩余部分。
已经用腺苷类似物(例如，氨基腺苷和碘杀结核菌素(iodinetubercidine))，以及吡啶嘧啶(pyridepyrimidinic)衍生物描述了腺苷激酶的药理学抑制[Kowart等人，Bioorg Med Chem Lett2001，1183；Lee等人，J Med Chem 2001，442133；Zheng等人，Bioorg Med Chem Lett.2001，112071；Gomitsian等人，J Med Chem.2002，453639；Gfesser等人，Eur J Med Chem 2003，38245；Zheng等人，Bioorg Med Chem Lett 2003，133041；Perner等人，JMed Chem.2003；465249]。对这些化合物的治疗应用的研究已经显示出腺苷激酶抑制在心肌局部缺血、疼痛和炎性过程状况中的有益作用[Jarvis等人，Pain 2002，96107；Suzuki等人，Br JPharmacol 2001，1321615；Boyle等人，J Pharmacol Exp Ther 2001，296495。Kowaluk等人，JPharmacol Exp Ther 2000，2951165。Jarvis等人，J Pharmacol ExpTher 2000，2951156。Smolenski等人，Circulation 2001，104(suppl I)I-246]。
局部缺血/再灌注。局部缺血，被定义为对组织和器官的不适当供血，是全世界人口死亡和病残的主要原因之一，它的主要决定因素是动脉的动脉粥样硬化疾病。它在心脏、脑或肾脏中的作用主要是由缺氧所引起的，其导致(取决于强度和持续时间)死亡或细胞变性，导致不同的临床状况如心肌梗塞、胸绞痛、心功能不全、脑血管意外和肾功能不全。另外，其它损害作用是在局部缺血区域中恢复血流之后引起的，一种常常自发出现或由治疗干预所引起的病症(例如，冠状血栓形成)。还不太了解引起再灌注损害作用的机理。然而，认为重要的致病因子是由于再灌注所致的大量氧自由基产生和胞内钙负荷过多。因此，由局部缺血引起的组织损害常常是局部缺血本身与再灌注的损害作用结合的结果。在本上下文中我们应当包括对移植中使用的器官(例如，心脏、肾脏和肝脏)的损害。
确实，对由多个器官中局部缺血的状况引起的致病-致死的明显解决方案是预防动脉粥样硬化疾病。然而，主要预防的可利用策略的影响仍然非常有限。因此，需要有效的预防途径并且，特别是，限制由局部缺血引起的组织损害的扩展的治疗途径，局部缺血组织活力的保存是目前最迫切的治疗目标之一。
在本上下文中，重要的是提到来源于多细胞生物的细胞对由亚致死局部缺血反复事件所激活(被称作局部缺血预-调节)的局部缺血/再灌注导致的损害具有自我保护机理[Yellon & Downey Physiol.Rev2003，831113]。该机理具有两种保护途径一种被称作“经典”途径，其在调节局部缺血之后持续约2小时，接着在约24小时后是第二个保护窗口，其持续3天，被称作“晚期保护”。用于解释预调节的现有模型说明调节局部缺血可引起不同自体有效物质的释放，该自体有效物质通过膜受体的活化而激发保护过程[Yellon & Downey Physiol.Rev 2003，831113]。这种活化激发复杂细胞信号途径的组合，其在致死局部缺血期间集中于一种或多种效应子以介导保护。对该反应的效应子仍然不太了解。然而，就治疗观点而言，重要的是在不同水平上激活信号途径的药理学物质可模拟调节刺激，导致如下预期可产生药理学物质，以便在治疗上探索由对局部缺血预-调节反应的内源性机理激活的强有力的组织保护。
因此，已知腺苷是参与经典或晚期预-调节的细胞途径的活化中的主要激发剂[Headrick等人，Am J Physiol Heart Circ Physiol 2003；285H1797]。临床研究的一致结果指出了腺苷用于预防心肌局部缺血用途的有益之处，但关于其在脑和肾脏局部缺血损害中的治疗作用仍然缺乏临床证据，然而这并不意味着它无效。例如，已经证实了，它的作用恢复内皮细胞和肌细胞中的ATP储存，抑制自由基的形成，抑制嗜中性白细胞的积聚和活性，并改善微循环[Mahaffey等人，J Am ColCardiol 1999，341711]。此外，因为腺苷是激活局部缺血预-调节的主要内源性物质，因此它的作用在急性冠状综合征中特别重要，因为它们通常由具有间歇血流期的动力冠状闭合引起，由于局部缺血/再灌注机理而具有潜在的损害作用。在实验动物的急性冠状综合征的模型中，腺苷一致地降低梗塞大小，改善心室功能并改善冠状流量[Yellon &Downey Physiol.Rev 2003，831113；Headrick等人，Am J PhysiolHeart Circ Physiol 2003；285H1797]。临床研究证实腺苷给药降低心肌梗塞的扩展，改善心肌流量的状况，降低经受初期血管成形术患者中的心功能不全和具有Q波的心肌梗塞的发生率，还减少经受选择性血管成形术患者中的S-T段变化、乳酸盐产生和局部缺血症状[Mahaffey等人，J Am Col Cardiol 1999，341711]。近来，来自计划用于检验腺苷降低经受血栓溶解患者中的心肌梗塞大小的假设的AMISTAD(腺苷的急性心肌梗塞研究)研究的结果，证实在用腺苷治疗的患者中减少了先前梗塞的大小[Mahaffey等人，J Am Col Cardiol1999，341711]。然而，没有观察到经治疗和未经治疗的患者的临床发展之间的差异。在该研究中缺乏使用腺苷的可测量的临床益处不但反映出在患者组的选择中存在偏差的问题，而且反映出腺苷的药物动力学和药效学问题，以及它的短半衰期和不合需要的血液动力学作用。
因此，改变局部腺苷生物利用度的药理学物质显示对于保护经历局部缺血/再灌注的心肌和其它组织有效是可能的。
炎症。慢性炎性疾病代表了以不同方式和蔓延攻击器官和组织的范围广泛的疾病。在该组中可包括其中尤其是哮喘、类风湿性关节炎、肠的炎性病、牛皮癣和动脉粥样硬化[Barnes & Karim，N Engl J Med1997；3361066；Ross，N Engl J Med 1999；340115]。尽管代表不同的生理病理状况，但所有炎性疾病均呈现负责炎性过程的放大和支持的免疫系统的激活和衰弱。这些疾病的原因仍然未知，但很少怀疑由遗传与环境因素之间的相互作用所致的病理学过程。基因，如特应性哮喘中的那些，类风湿性关节炎和肠炎性疾病中的HLA抗原，可决定患者对该疾病的敏感性，但常常未知的环境因素可决定临床表象和过程。一旦确立，慢性炎性过程本身单独发展。抗炎剂和免疫抑制剂可抑制恶性循环，但对于任何慢性炎性疾病仍然不存在治愈性治疗。
慢性炎性过程的损害作用通过多种机理而发生，但主要的决定因素是促炎细胞因子的局部产生和组织炎性细胞在自主谱系中的转化。这些转化和细胞因子产生是由涉及许多转导元件和转录因子的复杂信号途径调节的过程。然而，一种转录因子，NF-κB，对于组织炎性细胞的活化及转化而言似乎是一种重要的元件[Barnes & Karim，N EnglJMed 1997；3361066；Lawrence等人，Nat Med 2001，71291]。该因子涉及负责循环炎性细胞(例如，嗜中性白细胞、嗜曙红细胞和T淋巴细胞)在炎性部位中的粘附和募集，以及负责慢性炎性疾病中细胞因子和酶产生的基因的表达。这些基因中的一种是诱导型NOS，它在哮喘患者的气生方式细胞和巨噬细胞的上皮、溃疡性结肠炎患者的结肠上皮和炎性关节的滑膜细胞中的表达增加。环加氧酶-2(由NF-κB调节的另一种诱导型酶)由炎性疾病中前列腺素和血栓烷的产生增加而导致。另一方面，白介素-1β、TNF-α、白介素-6、粒细胞/巨噬细胞集落的刺激因子和许多趋化细胞因子在哮喘、类风湿性关节炎、牛皮癣和肠炎性疾病的患者中增加。所有这些细胞因子在这些炎性过程中都具有重要的作用。白介素-1β和TNF-α可影响这些疾病的严重程度，这可能是通过永久激活NF-κB而影响的。使用阻断TNF-α作用的药物治疗类风湿性关节炎患者可控制该病。
腺苷是一种具有抗炎和免疫抑制剂性质的内源性免疫调节剂，其通过仍然无法完全确立的多种机理发挥作用。某些证据指出腺苷可抑制由TNF诱导的NF-κB的激活，这可能有助于其在炎症抑制和免疫调节方面的作用[Kowaluk等人，J Pharmacol Exp Ther 2000，295；1165。Jarvis等人，J Pharmacol Exp Ther 2000，2951156]。因此，腺苷激酶抑制剂的使用可为各种临床状况直接或间接提供治疗益处，这取决于炎症和免疫学过程。可通过使用腺苷激酶获益的病症是慢性变性炎性疾病(例如，类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等)、哮喘、动脉粥样硬化、溃疡性结肠炎和克罗恩氏病。
疼痛。慢性或急性疼痛是最常见的临床病症。涉及其开始和持续的机理很多且包括从神经元变性到炎症。疼痛引发剂刺激物通过非-髓鞘形成(C纤维)和髓鞘形成(Aδ纤维)传入物(afferents)的激活而被传递到中枢神经系统。这些纤维的细胞体位于后根、三叉神经节和结节状神经节中。这些纤维确立了与脊髓或脑干，以及与前脑特定区域的多种联系，其中刺激被整合。组织损害或炎症发生之后，释放出大量内源性物质，并且这些物质可激活或使伤害感受器传入物致敏。这些物质包括H+、ATP、缓激肽、5-HT、组胺、前列腺素、物质P和腺苷[Bevan，1999.InWall，P.D.，Melzack，R.(Eds.)，Textbook of Pain，fourth ed.Churchill Livingstone，Edinburgh，pp.85-103]。这些介质中有一些通过与阳离子通道有关的粘合剂发挥作用(例如，H+、ATP、5-HT3)，而其它通过G-蛋白-偶合的受体(GPCRs)发挥作用(例如，前列腺素、缓激肽、5-HT)。伤害感受器传入物应激性的改变可因为由激酶蛋白介导的多种胞内信号途径的激活，以及随后感觉中枢神经元的特异钠通道的磷酸化而引起。控制疼痛有三种基本治疗方法(1)源的抑制，(2)中枢感受的改变，和(3)中枢神经系统的传递阻断。
腺苷及其类似物具有止痛作用。它们的作用是复杂且多样的，包括在中枢和外周机理中的作用。因此，腺苷或其类似物[例如，5′-N-乙基酰胺基腺苷(etylcarboxamydoadenosine)(NECA)]的脊柱给药可通过由A1受体介导的作用而产生止痛，它的激活产生伤害感受器传入物CGRP的释放抑制[Mauborgne等人，Eur.J.Pharmacol 2002，44147]。同样，已经证实了腺苷代谢抑制剂的相同作用[Sawynok，Curr.Opin.Cent.Periph.Nerv.Syst.Invest.Drugs 1999，127；Kowaluk等人，Exp.Opin.Invest.Drugs 2000，9551]。使用5’-氨基-5’-脱氧腺苷或碘杀结核菌素的腺苷激酶的抑制增加了脊髓中腺苷的生物利用度[Golembiowska等人，Brain Res 1995，699315]。
腺苷还通过阻碍伤害感受器激活的过程，通过复杂的机理而直接作用于外周神经。它的作用可经由A1和A2A受体，通过对伤害感受器传入物的作用，而导致疼痛的抑制或增加，并且它分别由cAMP的减少或增加而产生[Khasar等人，Neuroscience 1995，67189]。然而，它的中枢作用更有力且导致止痛作用。
苯胺喹唑啉类4-苯胺喹唑啉的衍生物已在文献中被广泛描述为EGF受体家族的酪氨酸激酶活性的强有力和选择性的抑制剂[Fry等人，Science 1994，265，1093；Fry等人，Pharmacol.Ther.1999，82，207和Levitzki等人，Pharmacol.Ther.1999，82，231]。此外，这些酶的抑制过程的认识似乎是许多疾病，如癌症、牛皮癣、糖尿病、心血管疾病等的治疗途径[Fry等人，Science 1994，265，1093]。基于该证据，对来源于该结构种类的许多衍生物的生物学功能进行了许多详细的研究[Rewcastle等人，J.Med.Chem.1995，38，3482和Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]。
对涉及许多系列喹唑啉衍生物的结构-活性相互关系(SAR)的许多研究导致这些抑制剂的能力、特异性和药物动力学的进展[Fry等人，Pharmacol.Ther.1999，82，207和Rewcastle等人，Curr.Org.Chem.2000，4，679]。3种化合物已在癌症患者中进行临床研究ZD1839(Iressa)[Rewcastle等人，Curr.Org.Chem.2000，4，679]、CP358774[Rewcastle等人，Curr.Org.Chem.2000，4，679 e Moyer等人，CancerRes.1997，57，4838]和CI1033[Tsou等人，J.Med.Chem.2001，44，2719]。临床前数据(pmol.L-1数量级的IC50)支持了在用潜在的抗-肿瘤剂的常规化疗中使用这些化合物的可能性[Ciardiello等人，Drugs 2000，60(supl.1)，25]。
所有系列的评价及合成化合物的抑制能力似乎与喹唑啉的6和/或7位的电子供体取代基(OMe，OEt e NH2)，以及与卤素(主要是Br和Cl)，如苯胺环间位的取代基有关。间位-取代的苯胺基团显示是喹唑啉系统4位的最佳取代基[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]。
用喹唑啉衍生物的研究并不仅限于对EGF受体家族的酪氨酸激酶活性进行研究[Rewcastle等人，Curr.Org.Chem.2000，4，679]。哌唑嗪是一种具有α-肾上腺素能受体拮抗性质的喹唑啉。该化合物具有血管舒张剂作用，并且用于抗-高血压治疗，及其某些结构衍生物，如ciclazosin，其与α1-肾上腺素能受体具有较强亲和性，并且可用于治疗良性前列腺增生[Melchiorre等人，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters 1998，8，1353-1358]。另一个较好的例子是PD153035，其由Sugen进入临床分类治疗阶段(如SU5271)，用于治疗皮肤病，如牛皮癣和皮肤癌[McMahon等人，WO9810767；Chem.Abstr.1998，128，261949]。生物学活性的喹唑啉的其它例子是作为5型磷酸二酯酶(PDE5)的强有力和特异性抑制剂呈现的那些[Ukita等人，J.Med.Chem.2001，44，2204]。该酶在环状核苷酸cGMP(鸟苷3′，5′-环状单磷酸)水解中的特异性水平较高，其控制血管功能[Corbin等人，J.Biol.Chem.1999，274，13729]。因此，增加细胞内cGMP水平的抑制剂被认为是用于治疗心血管疾病，如高血压、绞痛和心功能不全的潜在药物[Ukita等人，J.Med.Chem.2001，44，2204]。
本发明介绍了具有
图1所示分子式I的4-苯胺喹唑啉的新的衍生物，其中R1和R2代表取代基，如(H)、卤素(F、Cl、Br和I)、甲氧基(OCH3)、甲基(CH3)、乙酰基[C(O)CH3]、N，N-二甲胺[N(CH3)2]和硝基(NO2)。此外，各取代基可占据N-苯基的3’或4’位，产生间-和对-取代的喹唑啉化合物。
上述间-和对-取代的喹唑啉化合物表现为下列化合物6，7-二甲氧基-4-N-(苯基)胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-氟)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-氟)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-氯)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-氯)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-溴)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-溴)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-碘)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-碘)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-甲氧基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-甲氧基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-甲基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-甲基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-乙酰基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-乙酰基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(3′-N′，N′-二甲基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-N′，N′-二甲基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、
6，7-二甲氧基-4-N-(3′-硝基)苯胺喹唑啉的盐酸盐、6，7-二甲氧基-4-N-(4′-硝基)苯胺喹唑啉的盐酸盐。
接着，我们提及该描述性报告所伴的附图，以便更好地理解并举例说明它图1表示分子式I，涉及本发明中合成的4-苯胺喹唑啉衍生物，其中R1和R2相当于烷氧基(alcoxy)如甲氧基；R3相当于取代基如氢(H)、卤素(F、Cl、Br和I)、甲氧基(OCH3)、甲基(CH3)、乙酰基[C(O)CH3]、N，N-二甲胺[N(CH3)2]和硝基(NO2)。此外，各取代基可占据N-苯基的3’或4’位，产生间和对-取代的喹唑啉化合物。
图2表示总的合成方案，其中喹唑啉(1)是具有与在核酸中发现的嘧啶碱基(尿嘧啶、timine和胞嘧啶)相同结构的1，3-苯并二嗪。建议名称为喹唑啉(德语Chinazoline)，因为这些化合物是喹啉(2)和喹喔啉的异构体。
图3表示方案1，其表示制备4-苯胺喹唑啉(9)的步骤。
图4表示制备6，7-二甲氧基-4-喹唑啉(2a)的实验步骤，以及制备6，7-二甲氧基-4-氯-喹唑啉(3a)的实验步骤。
图5表示取代6，7-二甲氧基-4-氯-喹唑啉(3a)中氯的一般过程。
图6表示组织腺苷和AMP给药后，通过大鼠心肌提取物的HPLC实验获得的色谱图。
图7表示来源于喹唑啉化合物在分离的大鼠心脏中的浓度-响应实验的左心室收缩压记录(SPLV)的代表性实施例。
图8表示化合物4d(实施例7)、3a(实施例1)和4i(实施例17)对独分离的大鼠心脏中左心室收缩压的浓度-响应曲线(以分数值表示)。
图9表示4i(实施例17)、3a(实施例1)和4d(实施例7)对分离的大鼠心脏的心率的浓度-响应曲线(以绝对值表示)。
图10表示心室压与心率之间的相关性，指出在有剂量逐渐增加的化合物4i(实施例17)存在的条件下，心室压与心率之间存在反向关系。
图11表示在接受(快速推注)注射4i(实施例17)的分离的心脏中收缩压增加与心率降低之间相关性图，其中灌注了普萘洛尔、地尔硫且灌注缓冲液中的钙浓度降低。
图12表示4i(实施17)在经过电刺激的分离的心脏中的浓度-响应关系。
图13表示使用腺苷及其受体的特异性抑制剂(8-苯基茶碱-8-FT)进行的浓度-响应种类的实验。
图14表示灌注了纯HEPES缓冲液(对照)或HEPES缓冲液和1nM4d(实施例7)加1μM腺苷受体特异性抑制剂8-FT(4d+8-FT)的分离的大鼠心脏的代表性心率图。
因此，在本发明中，我们提出具有分子式I(图1)的新的并且也是已知的4-苯胺喹唑啉衍生物，其中R1和R2相当于烷氧基，如甲氧基；R3相当于取代基，如氢(H)、卤素(F、Cl、Br和I)、甲氧基(OCH3)、甲基(CH3)、乙酰基[C(O)CH3]、N，N-二甲胺[N(CH3)2]和硝基(NO2)。此外，各取代基可占据N-苯基的3’或4’位，产生间和对-取代的喹唑啉化合物。
选择4-苯胺喹唑啉取代基的方式是通过结构-活性研究确立的，试图使具有较高能力和特异性的化合物抑制腺苷激酶。因此，确定了式I的化合物包含4-苯胺喹唑啉中所有适当部分，其可能具有抑制该酶的高能力和/或功效。这类部分是喹唑啉6和7位的电子供体取代基，N-苯基间或对位(优选间位)中的一个较小或中等大小的亲脂取代基，4位的一个游离NH，和喹唑啉2、5和8位的一个游离CH。
对式I化合物取代基的下列考虑是重要的-术语“烷氧基”是指与氧原子连接的烷基。烷氧基的代表性例子包括甲氧基、乙氧基、叔-丁氧基、丙氧基和异-丁氧基；-术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘；-术语“烷基”是指直链或支链烃。烷基的代表性例子是甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、丁基、叔-丁基、仲-丁基、戊基和己基；-术语“乙酰基”是指与羰基碳原子连接的甲基；-术语“N，N-二甲胺”是指与氮原子连接的两个甲基。
本发明的化合物可以非-溶剂化、以及与药学可接受的溶剂，如水、DMSO、乙醇和类似物溶剂化的形式存在。就本发明目的而言，通常，溶剂化形式被认为与非-溶剂化形式等价。
在实验阶段，考虑了与所提出化合物的处理有关的情况，它们在实施例2-20中描述，用于获得它们的实验条件如下(i)通过过滤除去固体残余物如干燥剂后，在旋转蒸发器[Asten(250rpm)和Wheaton(200rpm)]中蒸发溶剂；(ii)熔点是在MQAPF-301设备中测定的且是未校正的；(iii)式I化合物及其中间体的结构特征在于它们的红外光谱、质谱和1H RMN和元素分析。红外光谱在Perkin-Elmer FTIR-1600或FTIR 1605设备中获得。质谱在VG Auto-Spec(Varian)分光计中获得。源于元素分析的数据在Perkin-Elmer(2400)分析仪中获得。1H RMN光谱在INOVA-500(Varian)分光计中获得，并在500MHz下操作。所有1H RMN光谱是在21℃下，在(CD3)2SO中获得的，并且参照Me4Si。1H RMN信号的值是以δ(δ)数值范围测定的，并且多重性表示如下d，双峰；dd，双双峰；ddd，双双双峰；t，三峰；dt，双三峰；tdd，三双双峰。
(iv)使用了下列缩写词(CD3)2SO-氘二甲基亚砜Me4Si-四甲基硅烷DMF-N，N-二甲基甲酰胺CH2Cl2-二氯甲烷Na2CO3-苏打NaOH-氢氧化钠对喹唑啉合成方法的概述可在教科书和最近的论文中找到。其它评论强调最常使用的原料是邻氨基苯甲酸(4)，按照图3中表示的、方案1中提供的一般方法进行。
在该过程中，第一步包括向邻氨基苯甲酸衍生物(4)中加入碳单位，其导致原位环化成喹唑啉(5)(方案1)。该转化可使用试剂，如甲酸、甲酰胺和脒类进行。该前体的合成在1895年，由Niementowski描述，他使邻氨基苯甲酸与甲酰胺反应。然而，优异结果常常使用试剂，如醋酸甲脒获得。衍生中的第二步包括中间体5向4-氯喹唑啉6的转化，其通过与磷酰氯(POCl3)或氯化tionil反应，其中含有催化量的DMF。可选择的过程(其对于溶解度较低的喹唑啉更好)包括转化成类似物硫酮(tione)7，接着是硫的烷基化，以便提供烷基硫(alkyltio)衍生物8。最后，衍生物4-氯(6)或4-烷基硫(8)与苯胺衍生物的反应提供终产物(9)(方案1，图3)。
以这种方式，用于式I化合物(图1)及其中间体制备而研究的合成阶段在实施例1中举例说明。该合成方法(其已在文献中详细描述)和物理-化学及光谱数据在实施例1-20中描述，如下在实施例1中，我们描述了用于制备6，7-二甲氧基-4-喹唑啉(2a)和6，7-二甲氧基-4-氯-喹唑啉(3a)的实验阶段，它们是式I的4-苯胺喹唑啉衍生物的前体。此外，提供了中间体(3a)的氯原子的一般取代过程，以便合成实施例2-20中描述的所有靶-化合物。
实施例16，7-二甲氧基-4-喹唑啉(2a)的获得将2-胺-4，5-二甲氧基苯甲酸(1.0g，5.08mmol)和醋酸甲脒(4.50g，43.3mmol)的混合物放在50mL球状物中。在硅氧烷浴中，140℃加热固体混合物8小时。加热过程中，发生固体的融合，和随后反应环境的再次固化。使该混合物冷却，然后向其中加入NaOH溶液(0.33mol.L-1)，直到pH调节至8。通过在瓷漏斗中过滤而收集略带灰色的粉色固体，用水(3×10mL)洗涤并真空干燥，提供所需化合物(0.79g，3.83mmol，76％)，其在没有纯化的情况下用于下一阶段p.f.296-298℃(Lit.[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]，p.f.295-298℃)。
1H RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ12.07(1H，s，H-3)，8.00(1H，s，H-2)，7.45(1H，s，H-5)，7.14(1H，s，H-8)，3.91(3H，s，H-6a)，3.87(3H，s，H-7a)。
6，7-二甲氧基-4-喹唑啉(3a)的获得搅拌含有10滴N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶于亚硫酰氯(7.0mL)的6，7-二甲氧基-4-喹唑啉混悬液(2a)(0.79g，3.83mmol)，并回流加热3小时，直到获得溶液。室温冷却该反应混合物。在二氯甲烷和水(160mL)中稀释反应环境并放在冰浴中。搅拌下，用30mL饱和Na2CO3溶液处理该物质。小心加入Na2CO3，直到pH调节至7-8的范围。然后，用CH2Cl2(2×30mL)萃取水相，并用盐溶液(2×10mL)洗涤有机相化合物，在硫酸镁上干燥，过滤，并在旋转蒸发器中蒸发溶剂，以便提供黄色固体的6，7-二甲氧基-4-氯喹唑啉(3a)(0.68g，3.03mmol，79％)，其在没有纯化的情况下用于下一阶段熔点185-187℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ8.90(1H，s，H-2)，7.39(1H，s，H-5)，7.34(1H，s，H-8)，4.08(6H，s，H-6a和H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v2975(C-H)，1619(芳香的C-N)，1511(芳香的C-C)，1233(C-O-C)，789(C-H)，872(C-Cl)。
6，7-二甲氧基-4-N-[3′-或4′-(R3)-苯基]胺喹唑啉(4a-4j和4b′-4j′)的获得，取代基R＝H(a)、F(b)、Cl(c)、Br(d)、I(e)、OCH3(f)、CH3(g)、C(O)CH3(h)、N(CH3)2(i)和NO2(j)。
一般氯取代过程机械搅拌6，7-二甲氧基-4-氯-喹唑啉(3a)(0.10g，0.445mmol)和相应苯胺(5.50mmol)溶于异丙醇(20mL)的混合物，并加热至回流温度2小时。我们观察到，当反应混合物的加热达到70-90℃范围时，固体完全溶解，然后所需化合物开始沉淀，表明亲核芳香取代反应发生。过滤黄色固体，用异丙醇(2×50mL)洗涤，真空干燥后，获得所需化合物。通过反应混合物的直接过滤，分离出产物的盐酸盐。
根据该实验过程，合成了下列式I(图1)的化合物。
实施例26，7-二甲氧基-4-N-(苯基)胺喹唑啉盐酸盐(4a)的获得产量0.110g(0.346mmol，77.0％)，熔点268-270℃(文献[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]熔点＞250℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.46(1H，s，NH)，8.80(1H，s，H-2)，8.35(1H，s，H-5)，7.70(2H，d，3J＝8.0Hz，H-2′eH-6′)，7.50(2H，t，3J＝8.0Hz，H-3′e H-5′)，7.38(1H，s，H-8)，7.32(1H，t，3J＝8，0Hz，H-4′)，4.04(3H，s，H-6a)，4.01(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3418(N-H)，3062(芳香的C-H)，1635-1459(芳香的C-N)，1459(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，867-748(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)281.1[M+.](84.25)，280.1[M-H]+(100)。
C16H15N3O2.HCl计算的元素分析值为C，60.48；H，5.07；N，13.22。测定值为C，60.48；H，4.92；N，13.16。
实施例36，7-二甲氧基-4-N-(3′-氟)苯胺喹唑啉盐酸盐(4b)的获得产量0.100g(0.298mmol，67％)，熔点219-221℃(文献[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]熔点253-254℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.51(1H，s，NH)，8.86(1H，s，H-2)，8.41(1H，s，H-5)，7.74(1H，dt，3JH-F＝11,0Hz和4JH-H＝2,2Hz，H-2′)，7.63(1H，ddd，3J＝8.3 Hz和4Jmeta＝2.2Hz，4Jmeta～1.0Hz，H-6′)，7.52(1H，dt，3JH-H＝8.3Hz和4JH-F＝6.7Hz，H-5′)，7.39(1H，s，H-8)，7.15(1H，tdd，3JH-H＝3JH-F＝8.3Hz，4JH-H＝2.2Hz和4JH-H～1.0Hz，H-4′)，4.04(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3412(N-H)，3062(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1490(芳香的C＝C)，1279(C-O-C)，985(C-F)，872-774(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)299.0[M+.](91.4)，298.0[M-H]+(100)。
C16H14N3O2F.HCl计算的元素分析值为C，57.24；H，4.50；N，12.51。测定值为C，57.14；H，4.38；N，12.34。
实施例46，7-二甲氧基4-N-(4′-氟)苯胺喹唑啉盐酸盐(4b′)的获得产量0.098g(0.292mmol，65％)，熔点269-272℃(文献[Barker，专利No.566226A1]熔点227-230℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.56(1H，s，NH)，8.79(1H，s，H-2)，8.40(1H，s，H-5)，7.75(2H，dd，3J＝9.0Hz和4JH-F＝5.0Hz，H-2′e H-6′)，7.38(1H，s，H-8)，7.32(2H，t，3J＝9.0Hz，H-3′e H-5′)，4.02(3H，s，H-6a)，3.98(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3418(N-H)，3031(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1511(芳香的C-N)，1284(C-O-C)，826(C-F)，774(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)299.1[M+.](92)，298.1[M-H]+(100)。
C16H14N3O2F.HCl计算的元素分析值为C，57.24；H，4.50；N，12.51。测定值为C，57.22；H，4.41；N，12.38。
实施例56，7-二甲氧基-4-N-(3′-氯)苯胺喹唑啉盐酸盐(4c)的获得产量0.113g(0.321mmol，72％)，熔点226-228℃(文献[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]，熔点261-262℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.60(1H，s，NH)，8.88(1H，s，H-2)，8.45(1H，s，H-5)，7.93(1H，t，3J＝2.0 Hz，H-2′)，7.77(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2.0Hz和4J～1.0Hz，H-4′)，7.51(1H，t，3J＝8.0Hz，H-5′)，7.40(1H，s，H-8)，7.37(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2.0Hz和4J～1.0Hz，H-6′)，4.04(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3428(N-H)，3041(芳香的C-H)，1640(芳香的C-N)，1521(芳香的C-C)，1284(C-O-C)，991(C-Cl)，877-774(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)315.0[M+.](71.3)，314.0[M-H]+(100)。
C16H14N3O2Cl.HCl计算的元素分析值为C，54.56；H，4.29；N，11.93。测定值为C，54.43；H，4.17；N，11.27。
实施例66，7-二甲氧基-4-N-(4′-氯)苯胺喹唑啉盐酸盐(4c′)的获得[Hennequin等人，J.Med.Chem.1999，42，5369]产量0.105g(0.298mmol，67％)，熔点282-284℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.16(1H，s，NH)；8.74(1H，s，H-2)；8.28(1H，s，H-5)，7.79(2H，d，3J＝8.5Hz，H-2′和H-6′)，7.50(2H，d，3J＝8.5Hz，H-3′和H-5′)，7.33(1H，s，H-8)，4.00(3H，s，H-6a)；3.97(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3397(N-H)，3041(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1243(C-O-C)，985(C-Cl)，857-774(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)315.0[M+.](82.8)，314.0[M-H]+(100)。
C16H14N3O2Cl.HCl计算的元素分析值为C，54.56；H，4.29；N，11.93。测定值为C，54.77；H，4.49；N，11.27。
实施例76，7-二甲氧基-4-N-(3′-溴)苯胺喹唑啉盐酸盐(4d)的获得产量0.165g(0.416mmol，93％)，熔点263-265℃(文献[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]，熔点264-266℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.70(1H，s，NH)，8.88(1H，s，H-2)，8.45(1H，s H-5)，8.04(1H，t，4J＝2.0Hz，H-2′)，7.80(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2,0Hz和4J～1.0Hz，H-4′)，7.49(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2.0Hz和4J～1.0Hz，H-6′)，7.43(1H，t，3J＝8.0Hz，H-5′)，7.39(1H，s，H-8)，4.03(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3418(N-H)，3031(芳香的C-H)，1640(芳香的C-N)，1521(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，872-779(C-H)，600(C-Br)。
MS(EI)，m/z(％)359.0 [M+.](77.5)，360.0[M-H]+(100)。
C16H14N3O2Br.HCl计算的元素分析值为C，48.45；H，3.81；N，10.59。测定值为C，48.85；H，3.54；N，10.64。
实施例86，7-二甲氧基-4-N-(4′-溴)苯胺喹唑啉盐酸盐(4d′)的获得产量0.126g(0.318mmol，71％)，熔点277-279℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.19(1H，s，NH)，8.88(1H，s，H-2)，8.22(1H，s，H-5)，7.70(4H，强单峰，H-2′，H-3′，H-5′和H-6′)，7.32(1H，s，H-8)，4.04(3H，s，H-6a)，4.02(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3449(N-H)，3144(芳香的C-H)，1629(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1284(C-O-C)，867-774(C-H)，501(C-Br)。
MS(EI)，m/z(％)358.9 [M+.](81.1)，358.9[M-H]+(100)。
C16H14N3O2Br.HCl计算的元素分析值为C，48.45；H，3.81；N，10.59。测定值为C，48.38；H，3.61；N，10.54。
实施例96，7-二甲氧基-4-N-(3′-碘)苯胺喹唑啉盐酸盐(4e)的获得产量0.119g(0.268mmol，60％)，熔点218-220℃(文献[Bridges等人，J.Med.Chem.1996，39，267]，熔点273℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.50(1H，s，NH)，8.85(1H，s，H-2)，8.39(1H，s H-5)，8.15(1H，t，4J＝1.5Hz，H-2′)，7.81(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝1.5Hz和4J～1.0Hz，H-4′)，7.70(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝1.5Hz和4J～1.0Hz，H-6′)，7.39(1H，s，H-8)，7.27(1H，t，3J＝8.0Hz，H-5′)，4.03(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3418(N-H)，3026(芳香的C-H)， 1629(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，877-779(C-H)，600(C-I)。
MS(EI)，m/z(％)406.9[M+.](95)，405.9[M-H]+(100)。
C16H14N3O2I.HCl计算的元素分析值为C，43.31；H，3.41；N，9.47。测定值为C，43.26；H，3.35；N，9.26。
实施例106，7-二甲氧基-4-N-(4′-碘)苯胺喹唑啉盐酸盐(4e′)的获得产量0.121g(0.273mmol，61％)，熔点266-269℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.50(1H，s，NH)，8.83(1H，s，H-2)，8.38(1H，s，H-5)，7.82(2H，d，3J＝8，5 Hz，H-3′和H-5′)，7.58(2H，d，3J＝8.5Hz，H-2′和H-6′)，7.37(1H，s，H-8)，4.02(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3397(N-H)，3031(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1290(C-O-C)，872-779(C-H)，501(C-I)。
MS(EI)，m/z(％)407.0[M+.](100)，406.0[M-H]+(93.2)。
C16H14N3O2I.HCl计算的元素分析值为C，43.31；H，3.41；N，9.47。测定值为C，43.44；H，3.42；N，9.28。
实施例116，7-二甲氧基-4-N-(3′-甲氧基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4f)的获得产量0.094g(0.270mmol，61％)，熔点216-218℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.39(1H，s，NH)，8.81(1H，s，H-2)，8.37(1H，s，H-5)，7.39(1H，s，H-8)，7.39(1H，t，3J＝8.0Hz；H-5′)，7.35(1H，t，4J＝2.0Hz，H-2′)，7.31(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2.0Hz e4J～1.0Hz，H-6′)，6.90(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2.5Hz和4J～1.0Hz，H-4′)，4.03(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)，3.80(3H，s，H-7′)。
IV(KBr/cm-1)v3438(N-H)，3005(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1496(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，872-774(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)311.0[M+.](79.3)，310.0[M-H]+(100)。
C17H17N3O3.HCl计算的元素分析值为C，58.71；H，5.22；N，12.08。测定值为C，58.52；H，5.00；N，12.17。
实施例126，7-二甲氧基-4-N-(4′-甲氧基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4f′)的获得产量0.101g(0.291mmol，65％)，熔点205-207℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.52(1H，s，NH)，8.76(1H，s，H-2)，8.38(1H，s，H-5)，7.59(2H，d，3J＝9.0Hz；H-2′和H-6′)，7.38(1H，s，H-8)，7.02(2H，d，3J＝9.0Hz，H-3′和H-5′)，4.01(3H，s，H-6a)，3.97(3H，s，H-7a)，3.80(3H，s，H-7′)。
IV(KBr/cm-1)v3403(N-H)，2949(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1243(C-O-C)，862-774(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)311.1[M+.](100)，310.1[M-H]+(64.9)。
C17H17N3O3.HCl计算的元素分析值为C，58.71；H，5.22；N，12.08。测定值为C，58.68；H，5.03；N，12.10。
实施例136，7-二甲氧基-4-N-(3′-甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4g)的获得[Fry等人，Annu.Rep.Med.Chem.1996，31，151]产量0.075g(0.226mmol，51％)，熔点221-223℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.24(1H，s，NH)，8.78(1H，s，H-2)，8.29(1H，s，H-5)，7.50(2H，信号重叠，H-2′和H-5′)，7.36(2H，信号重叠，H-8和H-6′)，7.14(1H，d，3J＝8.0Hz，H-4′)，4.02(3H，s，H-6a)，3.99(3H，s，H-7a)，2.37(3H，s，H-7′)。
IV(KBr/cm-1)v3418(N-H)，3008(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1511(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，775(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)295.0[M+.](87.4)，294.0[M-H]+(100)。
C17H17N3O2.HCl计算的元素分析值为C，61.54；H，5.47；N，12.66。测定值为C，61.96；H，5.55；N，12.96。
实施例146，7-二甲氧基-4-N-(4′-甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4g′)的获得产量0.096g(0.290mmol，65％)，熔点227-229℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.26(1H，s，NH)，8.75(1H，s，H-2)，8.30(1H，s，H-5)，7.57(2H，d，3J＝8.3Hz，H-2′和H-6′)，7.36(1H，s，H-8)，7.28(2H，d，3J＝8.3Hz，H-3′和H-5′)，4.01(3H，s，H-6a)，3.98(3H，s，H-7a)，2.35(3H，s，H-7′)。
IV(KBr/cm-1)v3419(N-H)，2949(C-H)，1635(芳香的C-N)，1506(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，867-779(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)295.1[M+.](85.1)，294.1[M-H]+.(100)。
C17H17N3O2.HCl计算的元素分析值为C，61.54；H，5.47；N，12.66。测定值为C，61.27；H，5.53；N，12.42。
实施例156，7-二甲氧基-4-N-(3′-乙酰基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4h)的获得产量0.097g(0.270mmol，61％)，熔点219-221℃(文献[Barker，专利No.566226Al]熔点＞240℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.49(1H，s，NH)，8.79(1Hs，H-2)，8.45(1H，s，H-5)，8.34(1H，t，4J＝2.0Hz，H-2′)，8.10(1H，ddd，3J＝8.1Hz，4J＝2.1Hz，4J＝1.1Hz，H-6′)，7.87(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝1.7Hz，4J＝1.1Hz，H-4′)，7.62(1H，t，3J＝8.0Hz，H-5′)，7.42(1H，s，H-8)，4.05(3H，s，H-6a)，3.99(3H，s，H-7a)，2.63(3H，s，H-8′)。
IV(KBr/cm-1)v3428(N-H)，3036(芳香的C-H)，1681(C＝O)，1635(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，882-779(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)323.0[M+.](83.9)，322.0[M-H]+(100)。
C18H17N3O3.HCl计算的元素分析值为C，60.09；H，5.04；N，11.68。测定值为C，59.07；H，4.69；N，11.72。
实施例166，7-二甲氧基-4-N-(4′-乙酰基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4h′)的获得产量0.110g(0.306mmol，69％)，熔点218-220℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.33(1H，s，NH)，8.84(1H，s，H-2)，8.35(1H，s，H-5)，8.03(2H，d，3J＝9.0 Hz，H-3′和H-5′)，7.98(2H，d，3J＝9.0Hz，H-2′和H-6′)，7.36(1H，s，H-8)，4.03(3H，s，H-6a)，3.98(3H，s，H-7a)，2.60(3H，s，H-8′)。
IV(KBr/cm-1)v3412(N-H)，2995(芳香的C-H)，1671(C＝O)，1635(芳香的C-N)，1516(芳香的C-C)，1279(C-O-C)，872-779(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)323.1[M+.](73)，322.1[M-H]+(100)。
C18H17N3O3.HCl计算的元素分析值为C，60.09；H，5.04；N，11.68。测定值为C，59.07；H，4.67；N，11.73。
实施例176，7-二甲氧基-4-N-(3′-N′，N′-二甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4i)的获得产量0.128g(0.355mmol；80％)，熔点198-200℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ10.39(1H，s，NH)，8.60(1H，s，H-2)，8.11(1H，s，H-5)，7.27(1H，s，H-8)，7.22(1H，t，3J＝8.0Hz，H-5′)，7.10(2H，H-2′和H-6′的重叠)，6.59(1H，ddd，3J＝8.2Hz，4J＝2.4Hz和4J～1.0Hz，H-4′)，3.99(3H，s，H-6a)，3.95(3H，s，H-7a)，2.93(6H，s，H-7′和H-8′)。
IV(KBr/cm-1)v3418(N-H)，3119(芳香的C-H)，1624(芳香的C-N)，1511(芳香的C-C)，1228(C-O-C)，846-764(δ＝C-H)。
MS(EI)，m/z(％)324.1[M+.](100)，323.1[M-H]+(75.5)。
C18H20N4O2.HCl计算的元素分析值为C，59.91；H，5.87；N，15.53。测定值为C，60.01；H，5.66；N，15.62。
实施例186，7-二甲氧基-4-N-(4′-N′，N′-二甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4i′)的获得产量0.110g(0.305mmol，69％)，熔点204-206℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.83(1H，s，NH)，8.80(1H，s，H-2)，8.51(1H，s，H-5)，7.80(2H，d，3J＝8.50Hz，H-2′和H-6′)，7.59(2H，d，3J＝8.50Hz，H-3′和H-5′)，7.42(1H，s，H-8)，4.03(3H，s，H-6a)，3.98(3H，s，H-7a)，3.11(6H，s，H-7′)。
MS(EI)，m/z(％)324.1[M+.](100)，323.1[M-H]+(23.2)。
C18H20N4O2.HCl计算的元素分析值为C，59.91；H，5.87；N，15.53。测定值为C，59.34；H，5.60；N，15.29。
实施例196，7-二甲氧基-4-N-(3′-硝基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4j)的获得产量0.093g(0.256mmol，58％)，熔点279-281℃(文献[Barker，专利No.566226A1]熔点＞240℃)。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ11.10(1H，s，NH)，8.82(1H，sH-2)，8.76(1H，t，4J＝2.0Hz，H-2′)，8.34(1H，s，H-5)，8.33(1H，ddd，3J＝8.0Hz，4J＝2.2Hz，4J～1.0Hz，H-4′)，8.07(1H，ddd，3J＝8.2Hz，4J＝2.2Hz和4J～1.0Hz，H-6′)，7.74(1H，t，3J＝8.5Hz，H-5′)，7.31(1H，s，H-8)，4.04(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3443(N-H)，3026(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1511(芳香的C-C)，1532(NO2)，1284(C-O-C)，872-733(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)326.0[M+.](100)，325.0[M-H]+(83.5)。
C16H14N4O4.HCl计算的元素分析值为C，52.97；H，4.17；N，15.44。测定值为C，52.68；H，4.04；N，15.04。
实施例206，7-二甲氧基-4-N-(4′-硝基)苯胺喹唑啉盐酸盐(4j′)的获得产量0.121g(0.334mmol，75％)，熔点228-230℃。
1H的RMN[500MHz，(CD3)2SO，ppm]δ10.70(1H，s，NH)，8.78(1H，s，H-2)，8.32(2H，d，3J＝9.0Hz，H-3′和H-5′)，8.18(2H，d，3J＝9.0Hz，H-2′和H-6′)，8.11(1H，s，H-5)，7.31(1H，s，H-8)，4.02(3H，s，H-6a)，4.00(3H，s，H-7a)。
IV(KBr/cm-1)v3428(N-H)，3119(芳香的C-H)，1635(芳香的C-N)，1511(芳香的C-C)，1573(NO2)，1279(C-O-C)，867-779(C-H)。
MS(EI)，m/z(％)326.1[M+.](86.9)，325.1[M-H]+(100)。
C16H14N4O4.HCl计算的元素分析值为C，52.97；H，4.17；N，15.44。测定值为C，52.76；H，4.10；N，14.98。
使用上面给出的方案1(图3)和实施例2-20得到下列化合物6，7-二甲氧基-4-N-(苯基)胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-氟)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-氟)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-氯)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-氯)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-溴)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-溴)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-碘)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-碘)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-甲氧基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-甲氧基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-乙酰基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-乙酰基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-N′，N′-二甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-N′，N′-二甲基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(3′-硝基)苯胺喹唑啉盐酸盐6，7-二甲氧基-4-N-(4′-硝基)苯胺喹唑啉盐酸盐生物学方法药理作用机理我们给出支持本权利要求的实验结果。
I.对腺苷生物利用度和心脏腺苷激酶活性的作用使用喹唑啉化合物进行的实验的生理学和药理学数据指出，它们的心血管作用是由腺苷或其受体的激活所介导的。我们在分离的大鼠心脏的心肌中，使用化合物4d(实施例7)和4i(实施例17)进行了腺苷给药。通过在大鼠心肌提取物中进行HPLC实验所获得的组织腺苷和AMP剂量的色谱在图6中给出。正如色谱图(1st峰＝腺苷；2nd峰＝AMP)中所指出的那样，使用PD153035治疗实质增加了心肌腺苷的量。平均结果指出基础腺苷值为0.48nmol/mg蛋白，并且在使用PD-153035治疗的心脏中，值为0.95nmol/mg蛋白。
使用氯乙醛衍生的腺苷(该化合物可通过荧光光谱测定法检测)，并用作心肌提取物中的底物用HPLC进行实验，证实了我们的假设，即化合物4d(实施例7)和4i(实施例17)是腺苷激酶抑制剂。
II.喹唑啉化合物对分离的大鼠心脏的左心室收缩压和心率的作用接下来，给出血压记录的典型实施例，进行该实施例以评价注射浓度逐渐增加的喹唑啉化合物，以及载体(DMSO)对分离的大鼠心脏功能的作用。我们评价了三种不同的喹唑啉化合物[4d(实施例7)、3a(实施1)和4i(实施例17)]的作用。所有化合物均引起左心室收缩压(PSVE)增加，这取决于所注射的浓度，当单独给予载体DMSO时没有观察到该作用。正如在下列实施例中所证实的那样，所试验的化合物在分离的心脏中呈现出不同的它们增压作用效能。当以30pM-2μM的浓度输注时，4i(实施例17)是产生较高增压反应的化合物(最大增压响应值＝27±3mmHg)，而4d(实施例7)(PD 153035)呈现出最低反应(最大增压响应值＝8±4mmHg)。图7给出了在分离的大鼠心脏中使用喹唑啉化合物进行的浓度-反应实验的左心室收缩压记录(PSVE)的代表性例子。
接下来，我们分别给出前面提到的三种喹唑啉化合物的动脉压与心率之间的浓度-反应关系。左心室的收缩压响应值以分数值表示，而心率响应值以绝对值表示。在表1中，我们给出在分离的大鼠心脏中对输注浓度逐渐增加的化合物，如4d(实施例7)、3a(实施例1)和4i(实施例17)的分级增压反应的Emax、EC50(nM)和LogEC50的值(平均值±E.P.M.)。在图8中，我们给出化合物4d(实施例7)、3a(实施例1)和4i(实施例17)对分离的大鼠心脏左心室收缩压的浓度-反应曲线(以分数值表示)。数据以平均值±E.P.M表示。*p＜0.05，与对4i(实施例17)的响应值进行比较。EC50产生最大作用的一半的药物浓度。
表1
根据收缩压的基础绝对值，4i(实施例17)、3a(实施例1)和4d(实施例7)的收缩压分别增加约35％、30％和14％。以分数值表示(表1)，计算各曲线的Emax值为0.9±0.2(4i，实施例17)；0.6±0.2(3a，实施例1)；0.3±0.1(4d，实施例7，PD153035)，但统计学检验没有证实组之间的显著性差异。4i(实施例17)和3a(实施例1)压力曲线的EC50值统计学上高于4d(实施例7)的那些。然而，4i(实施例17)和3a(实施例1)的EC50之间没有差异。对所述这三种化合物的反应存在浓度依赖性的心率降低。对4i(实施例17)、3a(实施例1)和4d(实施例7)而言，彼此的心动过缓反应存在差异，并且如果与基础值比较，分别为约24％、29％和25％。在表2中，我们给出在分离的大鼠心脏中对输注浓度逐渐增加的4i(实施例17)、3a(实施例1)和4d(实施例7)反应的最初和最后的心率值(bpm)(平均值±E.P.M.)。
表2
图9中，我们给出4i(实施例17)、3a(实施例1)和4d(实施例7)对分离的大鼠心的心率的浓度-反应曲线(以绝对值表示)。数据以平均值±E.P.M.表示。
在分离的心脏中进行的化合物4i(实施例17)、3a(实施例1)和4d(实施例7)的所有浓度-反应实验中，我们观察到左心室收缩压增加，同时心率降低，两者均依赖于灌注缓冲液中的化合物浓度。在用晶样溶液灌注和分离的心脏中，心率变化可改变流入心肌的氧以及因此改变它的功能，可能心率降低本身引起收缩压增加。以这种方式，观察到对喹唑啉化合物反应的增压作用可接着成为其心动过缓作用的结果，而不是直接影响收缩力的刺激。为了检验该假设，我们开始研究在增加4i(实施例17)剂量观察到的血压水平与心率之间是否存在关联。在图10中，我们给出心室压与心率之间的相关性，表明在化合物4i(实施例17)剂量逐渐增加的条件下，心室压与心率之间存在反向相关。
在有阻断剂，如普萘洛尔和地尔硫存在的条件下，用剂量逐渐增加的化合物4i(实施例17)处理的分离的心脏中，存在心室压水平与心率之间的负相关联并且灌注缓冲液中的钙浓度降低。在图11中，我们给出了接受(快速推注)注射灌注有普萘洛尔、地尔硫且灌注缓冲液中的钙浓度降低的4i(实施例17)的分离的心脏中，收缩压增加与心率降低之间的相关性的图。数据以平均值±E.P.M表示。
为了证实我们的假设，即化合物4i的增压反应取决于心动过缓，而不取决于4i对分离的大鼠心脏的肌收缩力变化的直接作用，我们进行了实验，其中在输注逐渐增加4i(实施例17)浓度的过程中，通过电刺激的作用保持心率恒定。在图12中，我们给出了4i(实施例17)在经过电刺激的分离的心脏中的浓度-反应关系。心率的控制几乎使4i(实施例17)的增压反应无效。
使用4i(实施例17)和其它喹唑啉化合物获得的结果指出，这些化合物对分离的大鼠心脏的主要功能性作用是心动过缓，并且增压作用取决于心动过缓，并且因此是所用标本(即，独立心脏)特殊性的结果而不是直接的作用。因为心动过缓反应不能被普萘洛尔或地尔硫阻断而改变，甚至不被灌注缓冲液中钙浓度降低而改变，因此我们的假设是喹唑啉化合物的这种作用取决于它们对起搏细胞的直接作用，甚至取决于通过自分泌或旁分泌化合物的分泌的间接作用。产生这些作用的可能原因之一是腺苷，一种由心肌细胞内源性产生的化合物，其在分离的心脏中产生与使用喹唑啉化合物观察到的那些相似的作用(即，心动过缓和左心室收缩压增加)。为了证实我们的假设，我们使用腺苷及其受体的非特异性抑制剂(8-苯基茶碱-8-FT)进行了浓度-作用实验，如图13所示其证实了，与绝对基础值比较，腺苷使分离的心脏的室压增加了16±2mmHg，心率降低了约19％，其中腺苷浓度为1μM(最大反应)。
腺苷增压反应的EC50值为7,0±1,4nM，心动过缓响应值为1.8±1,4nM。在表3中，我们给出了在灌注纯HEPES缓冲液，或HEPES缓冲液加8-FT的分离的心脏中，对输注浓度逐渐增加的腺苷的分级增压反应中的Emax、EC50(nM)和LogEC50的值(平均值±E.P.M.)。
两种作用均可被加入到灌注缓冲液中的非特异性腺苷受体抑制剂，8-FT(1μM)的作用改变。根据图13中提供的结果，在对照心脏和用非特异性腺苷抑制剂处理的心脏中，对输注浓度逐渐增加腺苷反应的收缩压的增加几乎相同。然而，当存在抑制剂时，EC50值位移至左边，表现出新值30±19nM(表3)。关于心率，当存在抑制剂时，腺苷的心动过缓作用降低，显示如果与表4的基础值相比，降低了约15％，其中我们给出了在灌注纯HEPES缓冲液和HEPES缓冲液加8-FT的分离的心脏中，对输注浓度逐渐增加的腺苷反应的最初和最后的心率值(平均值±E.P.M.)。
表3
表4
在图14中，我们给出了表示灌注纯HEPES缓冲液(对照)、或HEPES缓冲液加1nM 4d(实施例7)、或HEPES缓冲液加1nM 4d(实施例7)加1μM腺苷受体非特异性抑制剂8-FT(4d+8-FT)的分离的大鼠心脏的心率的图。数据以4个实验的平均值±E.P.M.表示。与对照相比*p＜0.05，证实用4d(实施例7)灌注心脏可使心率降低约17％，如果与对照心脏的心率值相比。然而，使用4d(实施例7)和8-FT灌注心脏时，注销了4d(实施例7)引起的心动过缓，这证实了我们的假设，即喹唑啉化合物可以直接或间接方式作用于腺苷受体。在表5中，我们给出灌注纯HEPES缓冲液(对照)、HEPES缓冲液加1nM 4d(实施例7)、或HEPES缓冲液加1nM 4d(实施例7)加1μM 8-FT的分离的心脏个体实验的心率值(bpm)(平均值±E.P.M.)。
表权利要求
1.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，其特征在于根据图1的分子式I，其中R1和R2相当于烷氧基，如甲氧基；R3相当于取代基，如氢(H)、卤素(F、Cl、Br和I)、甲氧基(OCH3)、甲基(CH3)、乙酰基[C(O)CH3]、N，N-二甲胺[N(CH3)2]和硝基(NO2)，其中各取代基可占据N-苯基的3’或4’位，产生间-和对-取代的喹唑啉化合物。
2.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，根据权利要求1所述的化合物，其中R3是N，N-二甲胺[N(CH3)2]，并且位于N-苯基的3’位。
3.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，根据权利要求1所述的化合物，其中R3是N，N-二甲胺[N(CH3)2]，并且位于N-苯基的4’位。
4.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，根据权利要求1所述的化合物，其中R3可以是甲基、氯、溴、碘、乙酰基、硝基和甲氧基，取代基位于N-苯环的4’位。
5.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，根据权利要求1、2、3和4所述的化合物，其特征在于具有药理学上可接受的化学式(位于3’或4’位的取代基)，用于权利要求8至19中所述的用途。
6.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，包括药理学上可接受的组合物，该组合物含有权利要求1所述的化合物。
7.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”，包括先前被认为是酪氨酸-激酶可逆抑制剂的喹唑啉-衍生的化合物的腺苷-激酶抑制剂作用，并且产生对心肌、脑、肾脏和肝脏的局部缺血/再灌注效应的保护作用。
8.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和抑制腺苷-激酶的方法，两者的特征均在于包括给需要腺苷-激酶抑制的患者给予一定量的权利要求1至7所述化合物的方法。
9.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由心肌局部缺血引起的损害的方法，其特征在于包括给患有急性冠状综合征(心肌梗塞和不稳定的绞痛)的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
10.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由心肌局部缺血引起的损害的方法，其特征在于包括给捐赠心脏的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述的化合物，以便在移植到受体中之前的期间内保存该组织的方法。
11.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由肝脏局部缺血引起的损害的方法，其特征在于包括给捐赠肝脏的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述的化合物，以便在移植到受体中之前的期间内保存该组织的方法。
12.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由肾脏局部缺血引起的损害的方法，其特征在于包括给捐赠肾脏的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述的化合物，以便在移植到受体中之前的期间内保存该组织的方法。
13.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由脑局部缺血引起的损害的方法，其特征在于包括给具有发生脑局部缺血危险的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
14.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由慢性炎性疾病引起的损害的方法，其特征在于包括给类风湿性关节炎患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
15.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由炎性疾病引起的损害的方法，其特征在于包括给系统性红斑狼疮患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
16.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗由慢性炎性疾病引起的损害的方法，其特征在于包括给慢性肠炎性疾病患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
17.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗疼痛的方法，其特征在于包括给患有由癌症、变性和慢性炎性疾病引起的疼痛的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
18.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗或预防冠状动脉、肾动脉和髂动脉再狭窄的方法，其特征在于包括给予再狭窄患者或有在血管成形术后发生再狭窄危险的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物的方法。
19.“具有腺苷-激酶抑制剂性质的衍生自4-苯胺喹唑啉的新化合物”和治疗或预防动脉粥样硬化的方法，其特征在于包括给已经确定患有动脉粥样硬化的患者给予治疗有效量的权利要求1、2、3、7所述化合物，或预防其在具有危险因素的患者中发生的方法。
全文摘要
本发明介绍了腺苷－激酶抑制剂化合物。我们提供了一种保护受到局部缺血影响的组织和器官，如心脏、脑和肾脏的方法，以及治疗心功能不全、心肌梗塞、心律不齐、高动脉压、动脉粥样硬化、血管成形术后的冠状动脉再－狭窄、慢性肾功能不全、脑血管意外和慢性炎性疾病(例如，类风湿性关节炎)的方法。我们还提供了衍生自喹唑啉的化合物的腺苷－激酶抑制剂作用，其先前被认为是来自表皮生长因子受体(EGFR)家族的酪氨酸－激酶的可逆抑制剂。
文档编号A61K31/517GK1938285SQ200480042739
公开日2007年3月28日 申请日期2004年10月7日 优先权日2004年3月2日
发明者K·戈梅斯弗朗奇尼, M·J·阿布达拉萨德, R·李特尼尔尼托, R·M·玛林, S·罗科阿帕勒茨达 申请人:坎皮纳斯国立大学