专利名称：重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗创伤、手术伤、烧伤、烫伤及溃疡等创面损伤的凝胶剂，具体地说是将重组人碱性成纤维细胞生长因子(以下简称rh-bFGF)与适当基质混合制成外用凝胶剂，本发明还涉及该凝胶剂的制备方法。
背景技术：
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种与组织创伤的愈合过程密切相关的内源性活性因子，对组织创伤愈合、神经损伤修复及血管再生有显著的促进作用。bFGF是由146个氨基酸组成的单链多肽，分子量为17KD。本公司直接从中国人外周血白细胞中克隆出人bFGF的cDNA，并实现了bFGF的基因克隆与表达，成功研制出重组人bFGF表达产物，于1996年申报rh-bFGF产品作为组织创伤愈合药物。2000年3月我公司获国家药品监督管理局颁发的重组人碱性成纤维细胞生长因子rh-bFGF(冻干粉剂，商品名扶济复)新药证书。批准文号国药准字S20020023。经过多年的临床应用，证明rh-bFGF(扶济复)对人体烧伤、创伤、手术伤等具有显著的促进愈合作用，无局部及全身毒副作用，不仅愈合速度快，而且减少疤痕的形成，在促进烧伤、创伤和褥疮等组织损伤的再生和修复方面展示了其非凡和独到的功效。
但扶济复是外用冻干粉剂，临床使用不太方便，为增强药品使用的方便性，减少病人痛苦，在外用冻干粉剂的基础上，为增强药品使用的方便性和药品的疗效，在不改变给药途径，不改变原液生产工艺的前提下，我们对制剂进行了深入的研究，改变制剂剂型制成了“重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶”。经试验证明本品质量稳定，效果良好，安全方便。
目前rh-bFGF用于创伤、烧伤的治疗的剂型是冻干粉剂、喷雾剂。而现有的冻干粉剂、喷雾剂在使用过程中，需先把溶解液加入冻干粉剂溶解后使用，使用方法非常麻烦，而且涂抹患处后，药物活性保持时间短，在临床应用方面受到限制。
“重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂”与现有市场上的rh-bFGF外用冻干粉剂、喷雾剂等相比较，在使用过程中，使用方便，更容易被医生、患者接受。而且涂抹患处后，药物活性保持时间较长，达到更好的治疗效果。
因此，发明一种既保证rh-bFGF的有效成分，又在临床上方便使用且效果更好的rh-bFGF新剂型是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以直接涂抹在因创伤(如手术伤、烧伤、烫伤、溃疡)的损伤创面上，能促进创面组织愈合，缩短愈合时间，且对皮肤无刺激性，使用方便，易于清洗的rh-bFGF凝胶剂。
本发明的另一目的是提供该rh-bFGF凝胶剂的制备方法。
本发明的关键在于如何保持rh-bFGF的生物活性，这是至关重要的，各组分混合比例不同就会影响rh-bFGF的生物活性，从而影响其药效，所以本发明各组分的筛选以生物活性检定为判断依据，同时还对制剂进行了各项检定，以保证其临床用药安全性，有效性。
本发明制备方法的关键在于
1.制剂中使用的基质不能对皮肤有任何刺激作用和毒副作用，各成分之间不应该对人体和对rh-bFGF活性有影响。
2.增强主要活性成分rh-bFGF的稳定性。也就是说通过研究选择制剂中使用的辅料成分，调整基质中各种辅料组分的比例，保证制剂在制备、贮存、运输和病人使用中的药物有效性。
3.rh-bFGF是分子量较大的蛋白质分子，并且有一定的空间结构，容易受到空间位阻效应的影响，所以要调整制剂中各个组分的比例，使rh-bFGF能持续有效释放。
本发明rh-bFGF凝胶剂是由主药和凝胶基质组成主药为重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)0.1微克～300微克/克基质。
凝胶基质(重量百分比％)包括增稠剂0.1-10、保湿剂0.1-～20、防腐剂0.1～5、稳定剂0.1～10、pH调节剂0.1～5、水50～99.4。但不仅限于上述几种基质成分，也不限于上述的比例限度。
增稠剂是羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙二醇、卡波姆、甲壳胺，浓度分别为0.1％～10％。保湿剂是甘油、丙二醇，浓度分别为0.1％～20％。防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、山梨酸、苯甲酸钠，浓度分别为0.1％～5％。稳定剂是甘露醇、十二烷基硫酸钠、苷氨酸、吐温、右旋糖苷、透明质酸、硫酸软骨素，浓度分别为0.1％-10％。pH调节剂是三乙醇胺、氢氧化钠、碳酸氢钠，浓度分别为0.1％-5％。但不仅限于上述几种基质成分。
rh-bFGF凝胶剂的制备方法是先将增稠剂、保湿剂、防腐剂、稳定剂、pH调节剂和水按上述比例混合并搅拌均匀，制成水溶性凝胶基质，然后在0.08～0.15MPa压力，100～126℃条件下，将制成的水溶性凝胶基质，高压灭菌15-30分钟，自然冷却到室温，再加入上述配比的重组人碱性成纤维细胞生长因子，缓慢搅拌混合均匀，制成凝胶，然后分装到铝管(或其他凝胶剂包材)中制成药用凝胶剂成品。
本发明具有以下优点和效果1、本发明选用的凝胶剂基质合理，对皮肤无毒、无刺激作用，不沾染衣物，易于清洗。
2、本发明采用的凝胶剂基质为网状结构，药物溶解在其中，这样可以使蛋白质类药物rh-bFGF更加稳定，药物缓慢释放，同时能吸收创面渗液，形成高度亲水的凝胶剂，从而控制创面的分泌和细菌的感染，同时加快药物的溶出，在一定程度上起到缓释作用，使其作用更加持久，促进创面组织愈合，加快愈合速度，使rh-bFGF的作用更加直接有效。
3、本发明凝胶剂可以直接涂抹在创伤、烧伤、烫伤、溃疡带来的损伤创面上，使用方便，减轻了患者的用药痛苦，便于患者接受及使用。
具体实施例方式
实施例1取卡波姆1g，甘油2g，对羟基苯甲酸乙酯1g，甘氨酸1g，上述原料混合后成酸性，为保证蛋白不变性，加入氢氧化钠0.1g，调ph值，加入溶解水至100g，混合均匀，然后在0.1MPa，121℃条件下，高压灭茵25分钟，冷却到室温，制成基质部分，在基质中加入rh-bFGF 300μg，同时缓慢搅拌均匀，制成凝胶，然后分装到铝管中制成药用rh-bFGF凝胶剂成品。
本发明实施例1所涉及到的检定实验和相关实验包括1、稳定性实验活性采用BalB/c 3T3细胞，MTT法测定，本品对热较敏感，不宜在高温下存放；在室温下约可存放3个月，可满足使用要求。在4～8℃条件下，放置两年后仍保持原有活性。外观、pH值、黏度、无菌、活性各项试验均未发现明显变化，故说明在4～8℃条件下，发明的制剂具有良好的稳定性。
2、无菌检查按2000年版“生物制品无菌试验规程”A项进行检查，符合要求。
3、皮肤过敏实验重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂分别以每克含量20μg、40μg、80μg、100μg(相当于人临床用量的1倍、2倍、4倍、5倍)涂于豚鼠正常及破损皮肤受试区，面积均为2cm2，结果表明，一次给约和多次给药，对照组与给药组比较观察，皮肤刺激反应强度均＜0.5分，说明重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂一次给药和多次给药对豚鼠完整和破损皮肤均无剌激性。
4、体外释放实验参照DiBaseMD等(PbarmActa Helv，1991，66(5-6)165)的方法进行，体外释放符合零级动力学模式。
本发明临床应用情况如下临床应用本发明生产的rh-bFGF凝胶剂，直接涂抹在因创伤(如手术伤、烧伤、烫伤、溃疡)的损伤创面上，能促进创面组织愈合，缩短愈合时间，疗效较好，且对皮肤无刺激性，使用方便，易于清洗便于操作，适用于临床。
用法与用量取本品适量，后直接涂抹于清创后的伤患处，适当包扎即可，rh-bFGF的最适用量约为60IU/cm2∽90IU/cm2创面面积。每日1～2次。
效价评价临床应用效果由医师按自觉症状和查体所见综合评定，分为痊愈、显效、有效、无效四类，痊愈、显效、有效合计为有效，rh-bFGF凝胶剂治疗组与对照组(磺胺嘧啶锌)比较，结果表明rh-bFGF凝胶剂临床验证，治疗烧伤、烫伤及溃疡，有效率分别在95％以上，证明rh-bFGF凝胶剂是可行的，较合理。而对照组有率在74％以上。
实施例2取羧甲基纤维素钠2g，丙三醇5g，对羟基苯甲酸甲酯3g，吐温-800.1g，加入溶解水至100g，混合均匀，然后在0.1MPa，121℃条件下，高压灭菌25分钟，冷却到室温，制成基质部分。在基质中加入rh-bFGF 300μg，同时缓慢搅拌均匀，制成凝胶，然后分装到铝管中制成药用rh-bFGF凝胶剂成品。制成rh-bFGF凝胶剂。
实施例3取聚乙二醇5g，丙二醇5g，山梨酸3g，吐温3g，加入溶解水至100g，混合均匀，然后在0.1MPa，121℃条件下，高压灭菌25分钟，冷却到室温，制成基质部分。在基质中加入rh-bFGF 300μg同时缓慢搅拌均匀，制成凝胶，然后分装到铝管中制成药用rh-bFGF凝胶剂成品。
实施例4取甲基纤维素2g，甘油5g，对羟基苯甲酸甲酯1g，甘氨酸1g，加入溶解水至100g，混合均匀，然后在0.1MPa，121℃条件下，高压灭菌25分钟，冷却到室温，制成基质部分。在基质中加入rh-bFGF 400μg同时缓慢搅拌均匀，制成凝胶，然后分装到铝管中制成药用rh-bFGF凝胶剂成品。
实施例5取甲壳胺2g，丙二醇5g，苯甲酸钠0.5g，吐温1g，加入溶解水至100g，混合均匀，然后在0.1MPa，121℃条件下，高压灭菌25分钟，冷却到室温，制成基质部分。在基质中加入rh-bFGF 300μg同时缓慢搅拌均匀，制成凝胶，然后分装到铝管中制成药用rh-bFGF凝胶剂成品。
权利要求
1.一种重组人碱性成纤维细胞生长因子(简称rh-bFGF)凝胶剂，其特征在于它是由主药和凝胶基质组成主药为重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，优选剂量0.1微克-300微克/克基质。凝胶基质包括(优选剂量，重量百分比％)增稠剂0.1～10、保湿剂0.1～20、防腐剂0.1～5、稳定剂0.1～10、pH调节剂0.1～5、水50～99.4。
2.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂，其特征在于增稠剂优选原料是羧甲基纤维素钠、甲基纤维索、聚乙二醇、卡波姆、甲壳胺，浓度分别为0.1％～10％。
3.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂，其特征在于保湿剂优选原料是甘油、丙二醇，浓度分别为0.1％～20％。
4.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂，其特征在于防腐剂优选原料是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、山梨酸、苯甲酸钠，浓度分别为0.1％～5％。
5.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂，其特征在于稳定剂优选原料是甘露醇、十二烷基硫酸钠、苷氨酸、吐温、右旋糖苷、透明质酸、硫酸软骨素，浓度分别为0.1％-10％。
6.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂，其特征在于pH调节剂优选原料是三乙醇胺、氢氧化钠、碳酸氢钠，浓度分别为0.1％-5％。
7.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶剂的优选制备方法，其特征在于先将增稠剂、保湿剂、防腐剂、稳定剂、pH调节剂和水按上述比例混合并搅拌均匀，制成水溶性凝胶基质，然后在0.08～0.15MPa压力，100～126℃条件下，将制成的水溶性凝胶基质高压灭菌15～30分钟，自然冷却到室温，再加入上述配比的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)0.1微克-300微克/克基质，缓慢搅拌混合均匀，制成凝胶，然后分装到铝管(或其他凝胶剂包材)中制成药用凝胶剂成品。
全文摘要
本发明涉及一种重组人碱性成纤维细胞生长因子(简称rh－bFGF)凝胶剂及其制备方法，rh－bFGF凝胶剂是一种外用治疗创伤、溃疡、烫伤、烧伤等疾病的药品。rh－bFGF是由146个氨基酸组成的单链多肽，是一种现代生物技术产品，本发明rh－bFGF凝胶剂是由主药和凝胶基质组成主药为rh－bFGF；凝胶基质包括增稠剂、保湿剂、防腐剂、稳定剂、pH调节剂、水。其制备方法是先将增稠剂、保湿剂、防腐剂、稳定剂、pH调节剂和水按比例混合并搅拌均匀制成水溶性凝胶基质，高压灭菌后再加入rh－bFGF，混合均匀，制成凝胶，然后分装到铝塑管中制成药用rh－bFGF凝胶剂成品。
文档编号A61K9/00GK1814279SQ200510009218
公开日2006年8月9日 申请日期2005年1月31日 优先权日2005年1月31日
发明者徐明波, 王勇波, 陈献华, 陈遥, 郝艳君, 李学海 申请人:北京双鹭立生医药科技有限公司