专利名称：法呢基二苯并二氮杂酮的晶体形式的制作方法
技术领域：
〔0001 〕本发明涉及法呢基二苯并二氮杂萆酮的晶体形式 (crystalline form)。本发明也涉及所述晶体形式的制备方法、包含所 述晶体形式的药物组合物以及在药物中应用该晶体形式的方法，所述药 物用于施用于需要此类药物的哺乳动物。
背景技术：
〔0002〕新型法呢基二苯并二氮杂萆酮(在本文中称为如下的化合 物1 )分离自》文线菌小单孢菌(actinomycetes, Micromonospora sp.)的新 菌抹，如在2004年1月21日提交的美国申请序列号10/762，107中所公 开，该申请在2004年8月以WO 2004/065591公开，该申请通过参考以 其全部引入本文。该结构也公开在Charan等，(2004), J. Nat. Prod., vol 67, 1431-1433 (以diazepinomidn),以及公开在Igarashi等，(2005), J. Antibiot.: 350-352中。发现该化合物具有包括抗脂加氧酶活性、抗细菌活性以及 抗癌活性在内的有效活性。此外，美国申请序列号(于2004年9月27 日提交)和11/130,295 (于2005年5月16日提交)公开了法呢基二苯并 二氮杂犟酮在动物模型中的体内抗癌效力。这些申请无一公开化合物1 的晶体形式或其制备方法。
〔0003〕为制备用于施用于哺乳动物的含有化合物1的药物组合物， 按照保健注册权威机构的保健注册要求(例如，FDA的良好操作规范 (Good Manufacturing Practices, GMP)),化合物应当用以尽可能纯的形 式使用，并且具有恒定的物理性质，包括纯度、溶解度和稳定性。药物 单独地或者在赋形剂存在时的固态性质能对包括其稳定性、溶解度和生 物利用度在内的药物性能具有非常显著的影响。
〔0004〕相比非晶形，晶体形式通常具有较低的杂质浓度以及更稳 定且一致的产品质量，例如，更稳定的物理特征如颜色、溶解率和易处 理性，以及更长期的稳定性。因此，在药物、药物组合物或药剂的制造 中，无论任何可能的情况下，重要的是提供基本晶体形式的活性化合物。 因为是更可靠的，因此就物理性质如熔点值而言，晶体形式确保批次之间的质量控制结果的再现性。
〔0005〕多晶的已知实例的药物利托那韦，其为一种销售用于治疗 HIV/AIDS的蛋白酶抑制剂，来自Abbott Laboratories,商品名为利托那 韦(Norvir)。该产品于1996年以其唯一 已知的固体形式首次面世。晶 体形式后来被发现，其证明相比其最初的形式是热力学更稳定的，且溶 解度减小50%,并且发现其是在贮存期间形成的。该形态不满足常规的 溶解规范，并且该药物从市场撤出。具有第二种晶体形式的软凝胶制剂 再次面世，但是对公众不是没有效果，对于HIV/AIDS患者而言失去了 治疗选择。
〔0006 〕使用玻璃化转变(Tg)在50 °C以下的非晶形的药物可能是开 发固体口服剂量的关注所在(例如参见，Bechard and Down (1992), Pharmaceutical Research, vol 9, no 4, 521-528)。理想地，所使用的形态不 应当具有低于IO(TC的Tg。这些被认为是行业标准，因为具有低Tg的非 晶形易于转变成热力学更稳定的形式，这例如可发生在生产和配制步骤 (例如，加热、压缩等)过程中、贮存过程中，或者一旦施用后发生在胃 肠道内。
发明内容
〔0007〕本发明提供化合物1的晶体形式、其生产方法以及其作为 药物的应用。在一个实施方式中，化合物1具有下面的结构式
化合物1
〔0008〕在一方面，本发明提供晶体形式I。在一个实施方式中， 晶体形式I特征在于DSC (示差扫描量热法)扫描显示至少在约100 。C与约14(TC之间宽的一级转变相以及约183°C±5°C (通过DSC的开
10始)的熔解温度；基本如图l(c)所示的x射线衍射图(diffraction pattern); 以及如通过热解重量分析法(thermogravimetry analysis, TGA)所示在100 。C之下的重量损失。在一个实施方式中，形式I以在X射线粉末衍射图 中的下述角位置(26角±1% (two theta angles±l%))为特征5.14。、 10.34。、 15.20。、 20.78°、 22.80°、 26.02°和31.20°。在另一实施方式中， 形式I以在X射线粉末衍射图中的下述角位置(2 6角± 1%)为特征5.1。、 10.3。、 15.2。、 20.8。、 22.8。、 26.0。和31.2。。
〔0009〕在另一方面，本发明提供晶体形式II。在一个实施方式中， 晶体形式II特征在于DSC扫描显示在约IO(TC与约140。C之间宽的一 级转变相以及约183°C±5°C (通过DSC的开始)的熔解温度；基本如 图l(b)或图l(d)所示的x射线衍射图；以及如通过TGA所示在IO(TC之 下的重量损失。在一个实施方式中，形式II以在X射线粉末衍射图中的 下述角位置(2 6角± 1%)为特征4.16。、 8.320、 12.50。、 16.70。、 20.940、 25.20。、 29.48°和33.82°。在另一实施方式中，形式II以在X射线粉末 衍射图中的下述角位置(26角± 1%)为特征4.2。、 8.3°、 12.5°、 16.7。、 20.9。、 25.2。、 29.5°和33.8。。
〔0010〕在另一方面，本发明提供晶体形式III。在一个实施方式中， 晶体形式II特征在于DSC扫描显示约183°C ±5°C (通过DSC的开始 温度)的熔解温度以及在熔解之前显示无一级转变相(没有峰)；以及 基本如图l(a)所示的X射线粉末衍射图(XRPD)。在一个实施方式中，形 式m以在X射线粉末衍射图中的下述角位置(26角± 1%)为特征3.96。、 7.86°、 11.80°、 15.74。、 23.64。和27.62。在另一实施方式中，形式III以 在X射线粉末衍射图中的下述角位置(26角± 1%)为特征4.0。、 7.9。、 11.80、 15.70、 23.6。和27.6。。
〔0011〕在另一方面，本发明提供化合物1的晶体形式，其可通过 从包含至少一种低碳烷基醇的溶剂系统结晶获得。在一个实施方式中，
该低碳烷基醇是d—6烷基醇，优选d—4烷基醇。在另一实施方式中，所 述低碳烷基醇选自甲醇、乙醇和异丙醇。在另一实施方式中，所述溶剂 系统包含水和选自曱醇、乙醇和异丙醇的低碳烷基醇。在另一实施方式 中，晶体形式是形式I。在另一实施方式中，晶体形式是形式II。
〔0012〕在另一方面，晶体形式可通过热处理部分结晶或基本结晶 的形式获得。在一个实施方式中，热处理在约50。C至接近熔点的温度(例如约170。C)范围内的温度下进行，优选地约5(TC至约100°C,更优选约 6(TC至约80。C。在另一实施方式中，热处理进行30分钟至24小时的期 间，优选进行2至20小时的期间，更优选进行4至10小时的期间。在 另一实施方式中，热处理任选在减压或者惰性条件下完成。
〔0013〕在另一方面，本发明提供制备化合物1的晶体形式的方法， 其包括下述步骤(a)提供化合物l, (b)用溶剂系统处理化合物1,和(c) 收集晶体。在一个实施方式中，该方法的步骤(b)还包括脱色步骤。在另 一实施方式中，该方法还包括步骤(d):干燥在(c)中收集的晶体。在一个 实施方式中，溶剂系统包含一种或多种溶剂，其包括有机溶剂(例如， 低碳烷基醇、乙酸烷基酯、脂族烃、卣化烃、低碳二烷基酮、乙腈和二 烷基醚)和水性溶剂(例如水)。优选地，该溶剂系统包括低碳烷基醇，更 优选地，该溶剂系统包括低碳烷基醇和水。在进一步的实施方式中，步 骤(d)的热处理在约50。C至接近熔点的温度(例如约170。C)范围内的温度 下进行，优选地约5(TC至约100°C,更优选约6(TC至约8(TC。在另一 实施方式中，热处理进行约30分钟至约24小时的期间，优选进行约2 至约20小时的期间，更优选进行约4至约IO小时的期间。在另一实施 方式中，步骤(e)的热处理任选在减压或者惰性条件下完成。在一个实 施方式中，在步骤(c)得到的晶体具有晶体形式I。在另一实施方式中， 在步骤(c)中得到的晶体具体晶体形式II。在另一实施方式中，在步骤(d) 中得到的晶体具有晶体形式III。
〔0014〕在另一方面，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量 的化合物1的至少一种晶体形式和药学上可接受的载体。在一个实施方 式中，该药物组合物用于口服施用。在另一实施方式中，该药物组合物 是用于口服施用的固体组合物。在另一实施方式中，制剂是液体悬浮液。 在该实施方式的子类中，该液体悬浮剂用于鼻内、局部、经口或肠胃外 施用，或者用于通过吸入施用。在又一实施方式中，制剂是用于经口施 用或通过吸入施用的固体制剂。在另一实施方式中，药物组合物包括晶 体形式I。在另一实施方式中，药物组合物包括晶体形式II。在另一实
施方式中，药物组合物包括晶体形式m。
〔0015〕在另一实施方式中，本发明提供化合物1的至少一种晶体
形式在制备药物中的应用，所述药物用于治疗需要此种治疗的对象的肿 瘤。在该实施方式的子类中，所述药物是固体口服组合物或口服悬浮液。在另一实施方式中，本发明提供化合物1的至少一种晶体形式在治疗需
要此类治疗的对象的胂瘤症状(neoplastic condition)中的应用。在另一 实施方式中，本发明提供药物组合物作为抗肿瘤药物的应用，所述药物 组合物包括化合物1的至少一种晶体形式和药学上可接受的载体。在另 一实施方式中，本发明提供药物组合物在制备治疗需要此类治疗的对象 的肿瘤症状的药物中的应用，所述药物组合物包括化合物1的至少一种 晶体形式和药学上可接受的载体。本发明进步提供试剂盒或商业包，其 包括化合物1的至少一种晶体形式以及描述化合物1晶体治疗肿瘤症状 的使用说明的书面文件。
〔0016〕在进一步的实施方式中，本发明提供治疗胂瘤的方法，其 包括向需要此类治疗的对象施用治疗有效量的化合物l的至少一种晶体
形式的步骤。在进一步的实施方式中，化合物1的至少一种晶体形式以 进一步包含药学上可接受的载体的药物组合物施用。
〔0017〕在一个实施方式中，在任何上述方法或应用中治疗的肿瘤 选自肺癌、结肠直肠癌(包括结肠癌)、CNS癌(包括神经胶质瘤)、卵 巢癌、肾癌、前列腺癌、乳癌、造血癌(hematopoietic cancer)(包括白血 病)和黑色素瘤。
〔0018〕图l(a-d):显示各种化合物1晶体形式的特征X射线粉末 衍射(XRPD)图(在室温下)[垂直轴强度；水平轴2 6 (度)，从2度到 40度],关于峰值参见表1。图l(a)显示在60。C下进行6小时的退火 (annealing process )过程之后的晶体形式III的特征XRPD图。图1(b) 显示晶体形式II(从异丙醇/水中结晶)的特征XRPD图。图1(c)显示晶。体 形式I (从甲醇/水中结晶)的特征X射线粉末衍射图(在室温下)。图l(d) 显示晶体形式n (从乙醇/水中结晶)的特征XRPD。
〔0019〕图2:显示化合物1的部分非晶粉末形式的DSC (示差扫 描量热法)温i普图(thermogram ),其中温度杀+i皮(temperature ramp)为20 °C/min,从-60。C到210°C，包括-15。C的玻璃化转变。
〔0020〕图3至5:显示在图3至5中的所有DSC温谱图是在室温 (25。C)至210。C于氮下完成的，其中温度斜坡为5'C/min。
〔0021 〕图3(a,b):图3(a)显示晶体形式I的DSC温谱图，其显示
13在约183。C的熔点之下的宽一级转变。图3(b)显示在减压下于6(TC退火 形式I6小时之后晶体形式III的DSC温谱图，其显示在约183。C的熔点 之下没有一级转变。
〔0022〕图4(a,b):图4(a)显示晶体形式II (来自乙醇/水)的DSC 温谱图，其显示在约183。C的熔点之下的宽一级转变。图4(b)显示在减 压下于60°C退火形式II (来自乙醇/水)6小时之后晶体形式III的DSC温 谱图，其显示在约183。C的熔点之下没有一级转变。
〔0023〕图5(a到d):显示在不同温度下退火形式II (来自乙醇/水) 6小时之后晶体形式III的DSC温谱图。图5(a)显示来自ll(TC下退火的 形式II的形式III的DSC。图5(b)显示来自90。C下退火的形式II的形式 m的DSC。图5(c)显示来自7(TC下退火的形式n的形式III的DSC。图 5(d)显示来自6CTC下退火的形式II的形式III的DSC。
〔0024〕图6和7:显示TGA (热解重量分析法)温谱图，其中温度 斜坡为20°C/min,从室温(25。C)到675°C。在氮气流下从室温(25。C)到 55(TC。在55(TC,将氮气流变为空气流以促进最终转变(降解)。
〔0025〕图6:图6(a)显示形式I (来自曱醇/水)在减压下于6(TC 退火6小时之后形式III的TGA温谱图。图6(b)显示形式I (来自甲醇/ 水)的TGA温谱图，其在IO(TC之下显示重量损失。
〔0026〕图7:图7(a)显示形式I1 (来自乙醇/水)在减压下于60°C 退火6小时之后形式III的TGA温谱图。图7(b)显示形式I1 (来自乙醇/ 水)的TGA温谱图，其在IO(TC之下显示重量损失。
具体实施例方式
〔0027〕本发明的一方面提供具有如化合物1所定义的结构式的化 合物的晶体形式，其相比粉末形式表现出更具再现性的纯度和/或物理稳 定性，发现其表现出-15'C左右的玻璃化转变(Tg)。化合物l的晶体形式 (特别是形式I、 II和III)以及如在WO 2004/065591和美国序列号 10/951,436 (于2004年9月27日提交)及11/130,295 (于2005年5月16 曰提交)中所述的化合物1粉末具有相当的抗肿瘤活性光谱。
〔0028〕本发明的第二方面提供制备化合物1的晶体形式的方法。 在一个实施方式中，该方法提供收集结晶产物的步骤。在另一实施方式 中，该方法包括大规模进行的化合物的结晶，用于化合物1的商业生产。〔0029〕本发明的第三方面提供结晶化合物1的方法。在一个实施 方式中，相比结晶前化合物的粉末形式，该方法增加了该化合物的纯度 和/或物理稳定性。该方法包括在如下条件下结晶粉末的步骤在该条件 下，结晶的化合物比该化合物的非晶形制剂更纯。
〔0030〕在该实施方式的另一方面，化合物1结晶二产生形式I。
在该实施方式的另一方面，化合物i结晶二产生形式n。在该实施方式 进一步的方面，基本、主要或部分晶体形式——例如含有形式I或II或 者含有两者的晶体——的热处理产生另 一晶体形式，例如形式III。
I. M
〔0031 〕除非另外定义，在此所用的所有技术和科学术语具有如本
发明所属领域的技术人员通常所理解的含义。
〔0032 〕术语"法呢基二苯并二氮杂罩酮(famesyl dibenzodiazepinone)"、"化合物"、"药物"或"活性成分，，将表示化合 物l。术语"化合物1"，当在生产化合物1晶体的过程或方法的情况下 使用时，是指作为结晶原材料的化合物1,其可以上粗制的、粉末、基 本纯或本质纯的形式，其可以是非晶形的、部分结晶或结晶的，因为一 种晶形或晶形混合物可用于产生相同的晶形(例如，达到进一步的纯度) 或不同的晶形。
〔0033〕化合物1或其晶体形式的纯度是指其在药物组合物中配制 之前的化合物。该纯度以"百分比纯度"指代，并且是化合物1 (结晶 的或非结晶的)相对于非化合物1的组分存在的量的量度，而不是结晶 纯度的量度。纯度可以通过包括下述的方法测量核磁共振(NMR)波谱 法、气相色谱/质谱分析法(GC/MS)、液相色谱/质谱分析法(LC/MS)和液 相色谱/紫外波语法(LC/UV)。
〔0034〕术语"分离"是指已经从其最初环境(例如，反应混合物、 生产培养物或发酵)中转移的化合物或产物，其可以处于固体或粉末形 式、半固体形式或油状，并且是指为混合物中所存在的化合物的至少 5%、 10%、 20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%、 95% (按 重量计％)的化合物或产物。术语"粗制的"是指含有按重量计至少50 %化合物1的化合物1的混合物，其可以上半固体状或油状，或者固体 或粉末形式，并且可以包括晶体。术语"纯的"或"纯化的"是指基本纯的或本质纯的混合物1。术语"基本纯的(substantially pure)"是指 具有至少95Wwt化合物1的样品。术语"本质纯的(essentially pure)" 是指具有至少97。/。wt化合物1的样品。
〔0035〕术语化合物1的"粉末形式"是指非晶形或部分非晶形， 其可以是部分结晶的。化合物1的粉末形式在本文所述的条件下通常表 现出在大约-15 °C处的玻璃化转变(T g)。
〔0036〕术语"晶形"或"多晶型物，，通常是指具有相同化学组成 (例如化合物1 )但具有不同的3维排列的固体形式，其具有或者不具 有包括在该排列中的溶剂和/或水分子。术语"非晶形的"通常是指具有 很少或不具有3维排列的形式。
〔0037〕化合物1作为晶体的测定可以通过如下方法来确定，其包 括光学显微术、电子显微术、x射线粉末衍射、固态NMR波谱法或 偏振光显微镜术。光学和电子显微术一额可以用于确定晶体的尺寸和形 式。本文的发明包括化合物1的所有晶体。
〔0038〕术语"结晶化合物1"、"化合物1晶体"或"化合物1的 晶形(一种或多种)"是指化合物1的固体形式，其包括50%、60%、70%、 80%、 90%或95%以上的一种或多种的化合物1的晶形或多晶型物。术 语"基本结晶的(substantially crystalline )"是指包含至少95%的化合物 1晶体的化合物1的固体形式。术语"本质结晶的(essentially crystalline)" 是指基本上没有非晶形的晶体形式。
〔0039〕术语"处理化合物1"是指从本文所述的任意溶剂中结晶 或重结晶化合物1。结晶或重结晶的必要步骤描述在III部分。
C0040〕术语"溶质"是指溶解于另一种物质中而形成溶液的物质。 如本文所用，溶质是指非晶形粉末或晶体形式的化合物1。
〔0041〕术语"溶液，，是指两种或多种物质混合而形成单一均匀的 相。 一种物质是溶剂而其它(溶质)被认为是溶解在其中。如本文所用， 溶液包含如上所述的一种溶质和一种溶剂或组合的多种溶剂。
〔0042〕术语"低分子量醇"、"低碳烷基醇"或"d-6烷基醇"是 指含有至少一个醇官能团和1至3个碳原子的有机化合物。低分子量 醇的代表性实例包括而不限于曱醇、乙醇、丙醇(例如，异丙醇和正丙醇)、 丁醇(例如异丁醇、仲丁醇、^又丁醇和正丁醇)和二元醇(例如，乙二醇和 丙二醇。
16〔0043〕术语"一级转变温度(一级转变温度，first order transition temperature)"是指物理状态变为另 一种状态(无分子降解)时的温度。 该温度可以是分子重排(晶体类型改变)或者熔点。术语"熔点"是指固 体物质(晶状的或非晶形的)转变为液体状态时的温度。
〔0043〕术语"玻璃化转变温度"或"Tg"是指发生热值变化时的 温度，并且就分子流动性而言固体物质(非晶态)获得自由度。
〔0044〕术语"温度斜坡(temperature ramp)"是指进行扫描时的 力口热禾口;令^卩速度。
〔0046〕术语"重量损失，，是指利用恒定的温度斜坡在加热过程中 样品(或其内含物，如溶剂)的重量损失，并且通常以。/owt(o/。重量)表达。 该重量损失可与捕获在化合物中溶剂(一种或多种)的去除有关。重量 损失也与溶剂去除之后的分子降解有关。
〔0047〕术语"分解温度"是指化合物开始降解时的温度。其为通 常发生在熔点之后的转变。
〔0048〕术语"退火(annealing)"是指涉及物质的加热和受控冷 却以增加其晶体大小以及减少其缺陷的技术。热引起原子(分子)开始脱 离其初始位置(内部能量的局部最小化)并无规则地移动经过较高的能量 态；緩慢的冷却给它们提供了更多找到比其初始构型具有更低内部能量 的构型的机会。术语"退火过程(annealing process )"、"退火步骤"或 "热处理"是指等温步骤，在该步骤期间针对确定的阶段温度被设为恒 定，目的是得到更稳定的晶态，其有时通过去溶剂化完成。术语"去溶 剂化"是指这样的过程，通过该过程组合物分别去除了大部分的溶剂分 子。当溶剂分子是水分子时，去溶剂化过程也被称为"脱水"。在此，"退 火，，发生在等温下的样品干燥过程中，并且术语"退火过程"、"热处理" 和"干燥"在通篇说明书中被等同使用。
〔0049〕术语"产生化合物1的微生物"及其等同物是指携带产生 化合物1必需的遗传信息的微生物，无论该生物体是否天然产生该化合 物。该术语等价地适用于这样的生物体，其中当该生物体存在于其天然 环境中时，在该生物体中发现产生化合物1的遗传信息；适用于这样的 生物体(宿主细胞)，其中遗传信息通过已知的重组技术被引入。可以 弓1入宿主细胞中的遗传信息的实例提供在美国专利公开2005-0043297 以及于2006年1月12日提交的美国专利申请XX/XXX,XXX中，通过参考以其全部将它们引入本文。 II. 化合物1的晶体形式
〔0050〕本发明提供在本文中被称为化合物1的化合物的晶形:
HO
化合物1
〔0051〕化合物i的晶体形式i、 n和m以其任一种或多种物化性
质为特征，如熔解温度、X-射线粉末衍射(XRPD)图、示差扫描量热 法(DSC)温谱图和热解重量分析法(TGA)。所有晶体形式以约183。C土5 °C (通过DSC的开始)的熔解温度为特征。
〔0052〕晶形I进一步的特征在于基本如图l(c)所示以及如表1 所述的XRPD图；基本如图3(a)所示的DSC温谱图；至少在约100°C 到约140。C之间的宽一级转变；约183。C土5。C (通过DSC的开始)的熔 解温度；和基本如图6(b)所示的TGA温谱图。
〔0053〕晶形II进一步的特征在于基本如图l(b)或图l(d)所示以 及如表1所述的XRPD图；基本如图4(a)所示的DSC温镨图；约100 。C到约140。C之间的宽一级转变；约183。C土5。C (通过DSC的开始)的 熔解温度；和基本如图7(b)所示的TGA温i普图。
〔0054〕晶形III进一步的特征在于基本如图l(a)所示以及如表1 所述的XRPD图；基本如图3(b)、 4(b)和5(a-d)中任一所示的DSC温语 图；在熔点之下没有宽一级转变；约183。C土5。C (通过DSC的开始)的 熔解温度；和基本如图6(a)和7(a)中任一所示的TGA温谱图。
〔0055〕晶体形式I和II如本文所述通过用低碳烷基醇处理化合物 l产生，而形式m通过干燥形式I或II产生。所有形式可以通过用不同 的溶剂系统处理化合物1而产生。本发明的晶体形式不限于如本文所示例来生产它们的方法。形式m可以通过用非质子溶剂系统处理化合物i 而产生。形式m可以如下产生用非质子溶剂系统处理化合物i,以及 在减压下蒸发溶剂，伴随温和加热。
ni. 制备晶体的方法
〔0056〕药物的晶体形式通常通过下述方法获得，诸如熔融和緩 慢冷却、结晶(有时称为重结晶)、升华或热处理，有时包括脱水或去溶 剂化步骤。结晶通常通过不同的方法来完成，这取决于原材料的性质(例 如，结晶度、纯度、存在杂杂质、溶解度、稳定性等)，这些方法例如包 括利用单一溶剂(在低温下是不良溶剂，但加热时是良好溶剂)的传统 结晶；通过使用共溶剂(例如，至少一种良好溶剂与一种不良溶剂)得到 同样的结果；通过冷却溶液；通过接种化合物的晶体；或者通过緩慢蒸 发。
〔0057〕通常通过过饱和现象使结晶称为可能。过饱和是这样的状 况，在该状况下，溶解在溶剂中的溶质的量大于溶剂能够容纳的量。例 如，含有较多组分"溶质A"和较少杂质"溶质B" (A和B具有类似 的溶解度性质)的固体物质溶解在热溶剂中，使得溶液中溶质A是饱和 的，而溶质B是不々包和的。4吏溶液冷却时，其达到一点，在该点溶液中 的溶质A变成过饱和的，并且溶质A的晶体开始首先緩慢形成。起初的 晶体起着晶种的作用，其诱导溶质A从溶液中进一步结晶，而溶质B—一 其并非处于饱和点——保留在溶液中。溶质A的纯晶体然后可以;故回 收。
〔0058〕通过不同的方法实现过饱和。 一般而言，当饱和溶液一皮冷 却时，或者当来自溶液的溶剂緩慢蒸发时，溶液开始过饱和。其它方法， 例如加入抗溶剂(不良溶剂)，或者通过加入盐NaCl或盐酸三乙胺降低溶 解度，或者通过任意上述方法的组合。
〔0059〕用于结晶的纯溶剂的使用是有限的，因为溶剂必须在窄的 温度范围内表现出大的溶解度差异。使用溶剂系统是更灵活的。该溶剂 系统包含至少 一种良好溶剂(药物在其中具有优良溶解度的溶剂)和至少 一种不良溶剂(药物在其中溶解不佳的溶剂)，该不良溶剂可溶混于第一 种中。溶剂系统通常包括一种良好溶剂和一种不良溶剂(抗溶剂)，但是 也可以包才舌两种以上的溶剂。〔0060〕用于溶解化合物1的良好溶剂的实例包括而不限于低碳烷 基醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇)、乙腈、芳族溶剂 (例如甲苯)和含氧的有机溶剂如二烷基酮(例如，丙酮、2-丁酮)、四氢呋 喃、二聰烷、乙酸烷基酯(例如，乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯)和 二烷基醚(例如，叔丁基曱基醚)。化合物1在其中溶解不佳的溶剂的实 例包括而不限于水性溶剂(例如水)、脂族烃(例如，己烷、正庚烷、异辛 烷)和卣代烃(例如，二氯曱烷、氯仿)。
〔0061〕在该方法的任意步骤，在晶体形成之前，溶液可以用脱色 剂如NoritTM活性炭来处理，然后过滤该脱色剂。也可以通过使溶液经 过脱色剂的柱来进行脱色步骤，该脱色剂的柱具有或不具有过滤剂如 CeliteTM的帮助。在结晶过程之前，当药物在溶液中时完成在脱色步骤， 例如，在不良溶剂加入共溶剂系统中之前进行，或者如果溶液^皮加热， 在冷却过程之前进行。
〔0062〕当达到过饱和时，开始结晶。晶体可能自然形成，或者该 过程可以通过利用沉淀剂或者通过在溶液中接种化合物的晶体来引发。 溶剂的緩慢蒸发或者加入小量的不良溶剂也可以引发结晶。pH变化或 者加入盐也能够帮助该结晶过程。通过包括过滤、离心和滗析或它们的 组合收集晶体。
〔0063 〕晶体以溶剂化物形式(当溶剂是水时包括水合形式)或者以 基本非溶剂化物(ansolvate)形式(在晶体结构中没有或者具有非常少的 溶剂分子存在，当不存在的溶剂是水时也称为脱水(anhydrate))产生。 溶剂化物形式在存在溶剂的情况下制备(或者对于水合形式为水分子)。 脱水形式通过从溶剂系统中去除水来制备(例如，通过基本无水的有机溶 剂)，或者通过使水合晶体升温直到所残存的水分子被去除。因此，非溶 剂化物形式通过如下方式制备使用将不会在晶体结构内停留的溶剂； 使用基本排除了具有残存倾向的溶剂的溶剂系统；或者加热(干燥)溶剂 化晶体直到残存的溶剂分子被去除。
〔0064〕按照用于其制备的条件(例如，温度、溶剂和溶剂比例，以 及化合物的浓度)得到不同形式或多晶型物的晶体。形式的差别在于晶体 中分子的三维排列，以及通常在于晶体结构中水和/或溶剂分子的存在或 缺乏。这些差异通过以x射线粉末衍射或者以光学显微术、固态NMR 波镨法或偏振光显微术分析晶体来展示。不同的多晶型物具有不同的能量和稳定性。通过诸如干燥和热处理——也称为退火过程——的方法， 多晶型物有时能够以另 一种晶体形式转变(例如，低能或更稳定的形式)。
〔0065〕晶体形式可具有任何宏观结晶或类晶体形式，其包括而不 限于针状、条状、片状、片状或海胆状(urchin-like),而海胆状是指针 状晶体聚集在一起，类似于海胆(sea urchin )。 制备化合物1晶体的通用步骤
〔0066〕在一方面，本发明提供制备基本晶体形式的化合物1的方 法，该方法包括如下步骤其包括下述步骤(a)提供化合物l, (b)用包 含一种或多种溶剂的溶剂系统处理化合物1,和(c)从上清液分离晶体。 在一个实施方式中，步骤(b)包括脱色步骤。在另一实施方式中，步骤(b) 包括接种化合物1晶体。在另一实施方式中，该方法进一步任选包括步 骤(d)，退火或干燥在(c)中分离的晶体。
〔0067〕在结晶之前，化合物l以粗制形式、粉末形式、非晶形或 部分非晶形提供，并且也可以是部分结晶的或结晶的。化合物1可以是 化合物1的粉末或粗制形式，或者可以是基本纯的形式。晶体形式也可 以通过处理化合物l产生，其中化合物1是相同或不同的晶体形式，或 者是晶体形式的混合物。化合物1的粉末或粗制形式可以如下获得培 养"产生化合物1的微生物，，，之后通过分离和纯化技术，包括沉淀、 过滤、HPLC (高效液相色谱)、高速反电流色谱、尺寸排阻超滤和/或离 子交换色谱，以及利用包括DiaionTMHP-20柱在内的其它树脂的技术。 产生化合物1的示例性步骤提供在实施例1中。
〔0068〕在一方面，用包含至少一种良好溶剂和一种不良溶剂的溶 剂系统处理化合物l。在另一方面，溶剂系统包括低碳烷基醇，优选地， 低碳烷基醇选自甲醇、乙醇或异丙醇，利用水作为"抗溶剂"(不良溶剂)。 结晶的时间和温度取决于化合物l在溶液中的浓度和纯度，以及取决于 所用的溶剂系统。所得到的晶体的纯度可取决于原材料的纯度，即结晶
之前化合物1的纯度。晶体优选通过过滤分离，但是也人防其它方法入 离心和/或滗析收集。
〔0069〕在本发明的另一方面，产生晶体形式的方法包括步骤(d) 在约5(TC至约17(TC、优选约5(TC至约IO(TC之间、更优选约6(TC至约 8CTC之间的等温温度下干燥化合物1的至少一种晶体形式约30分钟至 约24小时，优选在约2小时至约20小时之间，更优选在约4小时至约IO小时之间。在一个实施方式中，干燥步骤任选在惰性条件如减压或惰
性气氛(例如，氮或氩气氛)下进行。在一个实施方式中，在干燥之前晶 体形式是形式I或形式II,或者它们的混合物。在另一实施方式中，干 燥之后得到的晶体形式是形式III。
〔0070〕在进一步的方面，该方法可以大规才莫、工艺或生产规才莫完 成，利用药物生产领域已知的任何药学上接受的设备或方法。
〔0071〕在另一方面，本发明提供用于制备化合物1的晶体形式的 方法，包括下述步骤(a)提供化合物l， (b)用包含水和至少一种低碳烷 基醇的溶剂系统处理化合物1，和(c)收集所形成的晶体。在一个实施方 式中，步骤(b)进一步包括脱色步骤。在另一实施方式中，该方法进一步 包括步骤(d)干燥在(c)中收集的晶体。在一个实施方式中，低碳烷基醇与 水的比例在20:80至80:20之间，优选为约30:70至60:40。在另一实施 方式中，醇/水溶剂系统中4分末的最终浓度上约0.1至100 mg/mL,优选 约15至100mg/L。
〔0072〕在另一方面，本发明提供制备化合物1的晶体形式的方法， 包括下述步骤(a)提供化合物l, (b)用水中含有约20%至约80%乙醇的 溶剂系统处理化合物1, (c)使溶液在约27。C至4(TC的温度下升温，直到 足够的乙醇已经蒸发，达到过饱和，和(d)收集所形成的晶体。在一个实 施方式中，该方法进一步包括步骤(e)干燥在(d)中收集的晶体。
〔0073〕因为本发明晶体形式的高纯度以及易于处理，因此其可以 被用于制备药物。它们可以被用作用于肠胃外或非肠胃外施用的药物制 备方法中的中间体。
IV 包含晶体形式的药物组合物
〔0074〕本发明提供药物组合物，其包括至少一种如本文所述的化 合物1的晶体形式连同药学上可接受的载体。包含晶形的药物组合物用 于治疗与不受控的细胞生长和增殖有关的疾病和病症，如肿瘤症状。包 含化合物1的晶形的药物组合物可以被封装到便利的商业包装中，以便 在合适的容器中提供必需的物质，如药物组合物和关于其在治疗肿瘤症 状中应用的书面i兌明书。
〔0075〕本发明的晶体可以在配制之前被进一步加工。例如，化合 物1的晶体形式在进行适当的配制之前可以祐^分石f或^展磨成更小的颗粒。
〔0076〕本发明的晶体可以被配制用于口服、舌下、鼻内、目艮内、 直肠、经皮、粘膜、局部或肠胃外施用，用于治疗性或预防性治疗肿瘤 和增殖疾病和病症。施用的肠胃外方式包括而不限于皮内、皮下(s.c., s.q., sub-Q, Hypo)、月几内(i.m.) 、 l争脉内(i.v.)、腹月莫内(i.p.)、动脉内、 intramedulary、、心内、关节内(关节)、滑液内(关节液区域)、脑内或颅 内、脊柱内、脑池内(intracisternal)和鞘内的(脊髓液)。所有已知的用 于药物制剂肠胃外注射或输注的器械可以用来实施此类施用。对于口服 和/或肠胃外施用，本发明的晶形可以与常规药物载体和赋形剂混合，并 以溶液、乳剂、片剂、胶嚢、软胶嚢、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸嚢 剂(wafers)及类似物的形式使用。制剂可以是例如以口服、舌下或直 肠施用所使用的固体制剂。包含本发明晶形的组合物将含有按重量计约 0.1%至约99.9%、约1%至约98%、约5%至约95%、约10%至约80% 或约15%至约60%的该晶形。
〔0077〕在此所公开的药物组合物按照标准步骤(USP， FDA)制备， 并且以选择用来降低、防止或消除癌症或初期癌的剂量施用。(关于施用 各种药物用于人类治疗的方法——包括化学疗法——的概括描述,参见 例如Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA;和Goodman and Gilman, Pharmaceutical Basis of Therapeutics: Pergamon Press, New York, NY,其内容通过参考引入本文)。
〔0078〕如本文所用，术语"单位剂量，，是指适合作为人类对象和 其它哺乳动物的单一剂量的物理上分离的单位，每单位含有经计算可产 生期望治疗效果的预定量的晶形(活性成分)以及合适的药学上可接受的 载体。在一个实施方式中，单位剂量含有10至3000 mg的活性成分。 在另一实施方式中，单位剂量含有20至1000 mg的活性成分。本发明 的组合物可以利用受控的(例如胶嚢)或持续释放输送系统(例如可生物 侵蚀的基质(bioerodable matrices))进行输送。适合本发明组合物施用 的药物递送的示例性緩释输送系统在美国专利号4,452,775 (授予Kent)、 5,039,660 (授予Leonard)和3，854,480 (授予Zaffaroni)中予以描述，这些 专利通过参考以其全部并入本文。
〔0079 〕本发明的药学上可接受的组合物包括一种或多种本发明的 晶形并结合在此被统称为"载体，，物质的一种或多种无毒的、药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂和/或赋形剂，并且如果需要包括其它
活性成分。药学上可接受的载体包括例如乳剂、媒介物(vehicle)或 介质，如盐水、緩冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇、丙二醇、聚山梨 醇酯80 (Tween-80TM)、聚乙二醇300和400 (PEG 300和400)、聚乙二 醇化(PEGylated)蓖麻油(例如Cremophor EL)、泊洛沙姆407和188、
疏水载体及其组合。疏水载体包括例如脂肪乳剂、脂质、聚乙二醇化 phopholids、聚合物母体、生物相容性聚合物、脂肪球(lipospheres)、 小泡(vesicles )、颗粒和脂质体。术语特定地不包括细J包培养基。
〔0080〕包括在制剂中的赋形剂或添加剂具有不同的目的，例如这 取决于药物的性质以及给药方式。通常使用的赋形剂的例子包括而不 限于稳定剂、增溶剂和表面活性剂、緩冲剂、抗氧化剂和防腐剂、张 度剂、填充剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂或粘度剂、惰性稀释剂、填料、 崩解剂、粘结剂、湿润剂、润滑剂、抗菌剂、螯合剂、甜料(sweetners)、 芳香剂、增香剂、着色剂、施用助剂以及它们的组合物。
〔0081〕组合物可以含有常见载体和赋形剂，如玉米淀粉或明胶、 乳糖、庶糖、微晶纤维素、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和藻酸。组合物 可以含有交联羟甲纤维素钠(crosarmellose sodium )、微晶纤维素、淀粉 羟乙酸钠和藻酸。
〔0082 〕用于肠胃外施用的制剂可以处于水或非水等渗无菌注射溶 液、悬浮液或脂肪乳剂的形式，其包括化合物1的至少一种晶形。注射 所用的肠胃外形式必须是流动的，达到存在容易的可注射能力的程度。 这些溶液或悬浮液可以从无菌浓缩液、粉末或颗粒制备。晶体可以溶解 在载体如溶剂或媒介物中，例如，聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、 千醇、glycofurol、 N,N-二甲基乙酰胺、N-甲剂吡咯烷酮、甘油、盐水、 葡萄糖、水、丙三醇、疏水载体和它们的组合。
〔0083〕晶体形式的制剂可以以悬浮液制备，用于肠胃外或非肠胃 外施用，例如，用于口服、鼻内或局部施用。当晶体形式的粒度减小是 必需的时候，其可以通过机械方法如磨碎或碾磨或者通过微粉化 (micromsation )来实现。结晶颗粒也可以利用本领域已知的设备和方 法来产生，例如利用连续流动池(continuous flow cells ),如在国际专利 申请WO/38811中所述。另外的赋形剂也可以用于悬浮液制备中，例如 悬浮剂、表面稳定剂、分散剂等。悬浮剂的实例包括但不限于羧曱基纤维素、硅酸镁铝、黄蓍胶、膨润土、曱基纤维素、微晶纤维素和聚乙二
醇。取决于施用方式，所需的最大颗粒平均大小可以变化，例如从约50 nm至约100iam。当用于非肠胃外施用时，颗粒平均大小可以高于用于 肠胃外施用。
〔0084 〕用在肠胃外制剂中的赋形剂也包括而不限于稳定剂(例如， 碳水化合物、氨基酸和聚山梨醇酯)、增溶剂(例如，西曲溴铵、多库酯 钠、甘油单油酸酯、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙二醇(PEG))和表面活 性剂(例如聚山梨醇酯、聚乙二醇维生素E琥珀酸酯(tocopherol PEG succinate)、泊洛沙姆和CremophorTM)、緩沖剂(例如，乙酸盐、柠檬酸 盐、磷酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、氨基酸及类似物)、抗氧化 剂和防腐剂(例如，BHA、 BHT、龙胆酸、维生素E、抗坏血酸以及含石危 物质，如亚辟L酸盐、亚石危酸氢盐、偏亚石危酸氢盐、石克代甘油、巯基乙酸 盐及类似物)、张度剂(用于调节生理相容性)、悬浮或粘度剂(suspending or viscosity agents )、抗菌剂(例如，thimersol、氯化千乙氧铵、氯千烷铵、 苯酚、甲酚和氯代丁醇)、螯合剂和给药助剂(例如，局部麻醉剂、抗炎 药、抗凝块药、用于延长的血管缩小药，以及增加组织渗透性的药物)， 以及它们的组合。
〔0085 〕利用疏水载体的肠胃外制剂包括例如脂肪乳剂和含有脂 质、脂肪球、媒介物、颗粒和脂质体的的制剂。除上述赋形剂之外，脂 肪乳剂包括脂质和水相以提添加剂，如乳化剂(例如，磷脂、泊洛沙姆、 聚山梨醇脂和聚氧乙烯蓖麻油)和渗透剂(例如氯化钠、甘油、山梨醇木 糖醇和葡萄糖)。脂质体包括天然的或衍生的磷脂以及任选变化稳定剂如 胆固醇。
〔0086 〕化合物的肠胃外单位剂量形式可以是在无菌密闭密封的安 剖或无菌的预载注射器中的合适载体中的易于使用的晶体溶液。合适的 载体任选地包括任意上述赋形剂。
〔0087〕可选地，本发明晶体的单位剂量可以处于浓缩液、粉末或 颗粒形式，用于在递送时在适当的药学上可接受的载体中当场重构。除 上述赋形剂之外，粉末形式任选包括填充剂(例如，甘露醇、甘氨酸、乳 糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、羟乙基淀粉、菲科尔和明胶)以及抗冻剂或 冻干斗呆护剂(cryo or lyoprotectants )。
〔0088〕例如，在静脉内(IV)应用中，化合物1的晶形以及包括稳定剂或表面活性剂在内的任选的 一 种或多种添加剂的无菌制剂，可以被 溶解或悬浮在任意常用的静脉内流体中并通过输注施用。静脉内流体包
括而不限于生理盐水、磷酸盐緩冲盐水、5%葡萄糖或Ringer， s溶液。
〔0089〕在另一实例中，在肌内制剂中，本发明晶体的无菌制剂可 以被溶解在药物稀释剂中并施用，所述药物稀释剂如注射用水(WFI)、 生理盐水或5%葡萄糖。化合物1晶体的合适的不溶形式可以作为水基 体或药学上可接受的油基体中的悬浮液进行制备和施用，所述药学上可 接受的油基体例如长链脂肪酸的酯，如油酸乙酯。
〔0090〕对于口服应用，固体剂型如片剂和胶嚢是特别有用的。也 可以设计持续释放或肠包衣的制剂。对于儿科和老年医学应用，悬浮剂、 糖浆和可咀嚼片剂是特别合适的。对于口服施用，药物组合物例如是片 剂、胶嚢、悬浮液或液体糖浆或酏剂、糯米纸嚢剂及类似物的形式。对 于普通的口服施用，赋形剂或添加剂包括但不限于惰性稀释剂、填料、 崩解剂、粘结剂、湿润剂、润滑剂、甜味剂、芳香剂、着色剂和防腐剂。
〔0091 〕 口服药物组合物优选以含有治疗有效量的活性成分的单位 剂量形式制造。此类剂型的实例是片剂和胶嚢。对于治疗目的，除活性 成分之外，片剂和胶嚢可以含有常规载体，如惰性稀释剂(例如，碳酸 钠和碳酸钓、磷酸钠和磷酸4丐，以及乳糖)、粘结剂(例如，阿拉伯树胶、 淀粉、明胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮(聚维碘酮(Providone))、山梨醇或 黄蓍胶曱基纤维素、羧曱基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素及乙基纤维素)、 填料(例如，磷酸钾、甘氨酸、乳糖、玉米淀粉、山梨醇或蔗糖)、润滑 材料或润滑剂(例如，硬脂酸镁或其它金属硬脂酸盐、硬脂酸、聚乙二 醇、蜡、油、二氧化硅和胶态二氧化硅、硅流体或滑石)、崩散剂或崩解 剂(例如，马铃薯淀粉、玉米淀粉和藻酸)、调味剂、着色剂或可接受的 湿润剂。载体也可以包括包衣赋形剂(coating excipients ),如单硬脂酸 甘油酯或二硬脂酸甘油酯，以延迟在胃肠道中的吸收。
〔0092〕 口服液体制剂， 一般为水或油溶液、悬浮液、乳剂、糖浆 或酏剂的形式，其可以含有常规添加剂，如悬浮剂、乳化剂、非水剂 (non-aqueous agents )、防腐剂、着色剂和芳香剂。用于液体制剂的添 加剂的实例包括阿拉伯树胶、杏仁油、乙醇、分镏的椰子油、明胶、葡 萄糖糖浆、甘油、氢化可食用店肪、卵磷脂、曱基纤维素、对羟基苯曱 酸曱酯或对羟基苯甲酸丙酯、丙二醇、山梨醇或山梨酸。〔0093 〕对于液体和固体口服制剂而言，也可以使用芳香剂如薄荷、 冬青油(oil of wintergreen )、樱桃、葡萄、水果调味剂及类似物。添加 着色剂以使剂型在外观上更美观或者有助于识别产品，也可能是期望 的。对于局部应用，本发明的晶体也可以以合适的形式制备，以便施用 于皮肤，或者鼻和咽喉的粘膜，并且本发明的晶体可以采用霜剂、药膏、 液体喷雾或吸入剂、锭剂或涂喉剂的形式。此类局部制剂进一步可以包 括化合物如二曱亚砜(DMSO)以促进活性成分的表面渗透。对于施用于 眼或耳，化合物1的晶体形式可以在疏水或亲水基体中以药膏、霜剂、 洗剂、涂剂或粉末的液体或半液体形式配制。对于直肠给药，本发明的 晶体可以以混合有常规载体如可可油、蜡或其它甘油酯的栓剂的形式施 用。
V 抑制肿瘤生长的方法
〔0094〕在一方面，本发明涉及抑制哺乳动物中癌细胞生长和/或增 殖的方法。在另一方面，本发明提供治疗哺乳动物中胂瘤的方法。哺乳 动物包括有蹄类动物(例如，绵羊、山羊、牛、马、猪)和非有蹄类动物， 包括啮齿动物、猫科、犬科和灵长类(即人和人类灵长类)。在优选的实 施方式中，哺乳动物是人。
〔0095〕如本文所用，术语"瘤"、"肿瘤疾病"、"瘤形成"、"癌"、 "肿瘤"和"增殖疾病"是指具有自发生长能力的细胞，即特征为迅速 增殖细胞生长的异常病况状态，该细胞生长通常形成显示部分或全部缺 乏正常组织的结构组织和功能调和的不同的胂块。这些术语意欲包括造 血肿瘤(例如，淋巴瘤或白血病)以及固体瘤(例如，肉瘤或癌)，包括所有 类型的初期癌和癌生长，或者致癌过程、转移性组织(metastatic tissues) 或恶性变异细胞、组织或器官，与组织病理类型或入侵阶段无关。造血 瘤是影响造血结构(与血细胞形成有关的结构)免疫系统组分的恶性肿 瘤，其包括源于骨髓、淋巴或红细胞系统的白血病(与血液和骨髓中的白 血球(白细胞)及它们的前体有关)，和淋巴瘤(与淋巴细胞有关)。固体瘤 包括肉瘤，其是发源于结締组织如肌肉、软骨、血管、纤维组织、脂肪 或骨的恶性瘤。固体瘤也包括癌，其为起源于上皮结构(包括外上皮细胞 (例如，胃肠道、肺和子宫颈的外皮和内层)和铺衬各种腺体(例如，乳房、 胰腺、曱状腺)的内上皮细胞)的恶性瘤。特别易受本发明方法治疗影响的瘤的实例包括白细胞和肝细胞癌、肉瘤、脉管内皮癌、乳癌、中枢神 经系统癌(例如，星形细胞瘤、神经胶质肉瘤、神经母细胞瘤、寡树突神 经胶质瘤和胶质母细胞瘤)、前列腺癌、肺及支气管癌、喉癌、食道癌、 结肠癌、结肠直肠癌、胃肠癌、黑色素瘤、卵巢及子宫内膜癌、肾及膀 胱癌、肝癌、内分泌癌(例如，曱状腺)和胰腺癌。
〔0096〕使化合物与癌细胞或组织接触，或将化合物引入癌细胞或 组织中。 一般而言，用于体内递送药物组合物(包括本发明的晶体形式) 的本发明方法利用本领域公知的递送治疗剂的方案，仅有的基本步骤修 改是用本发明的晶形代替本领域公知方案中的治疗剂。含晶体制剂被施 用的途径以及制剂、载体或媒介物将取决于位置以及瘤的类型。很多种 给药途径可以被采用。制剂可以通过静脉内或腹膜内输注或注射来施 用。例如，对于可到达的固体肿瘤或瘤，制剂可以通过直接注射到该肿 瘤或瘤中来施用。对于造血瘤，制剂可以进行静脉内或脉管内施用。对 于体内不易到达的瘤，如转移(metastases)或脑肿瘤，制剂可以以如下
肺瘤和远距离的转移，例如经口、鞘内、静脉内或肌内。含晶体的制剂 也可以经口、皮下、腹膜内、局部(例如，用于黑色素瘤)、阴道(例如， 用于宫颈或阴道瘤)、经鼻或通过吸入喷雾(例如，用于肺瘤)施用。
〔0097〕含结晶化合物1的制剂以足以抑制瘤细胞生长或增殖或者 治疗瘤疾病的量施用。术语"抑制"是指遏制、杀死、停滞或破坏癌细 胞。根据本方法的哺乳动物癌细胞生长的抑制可以几种方法监测。体外 生长的癌细胞可以用晶体形式处理，并监测相对于在无晶体形式的情况 下培养的相同细胞的生长或死亡。生长停止，或者生长率(即加倍率)例
如在100微摩尔下放慢50%或以上，表示癌细胞抑制(参见Anticancer Drug Development Guide: preclinical screening, clinical trials and approval; B.A. Teicher and P.A. Andrews, ed., 2004, Humana Press, Totowa, NJ)。 可 选地，癌细胞抑制可以通过向感兴趣癌症的动物;漢型施用药物制剂来监 测。试验非人类动物癌症模型的实例在本领域是已知的，并且在下面以 及本文中的实施例中予以描述。相对于未用制剂处理的对照动物的肿 瘤，在用制剂处理的动物中胂瘤生长停止(即大小无进一步的增加)或者 肺瘤大小降低(即至少58%的肿瘤体积)，表示显著的肿瘤生长抑制(参见 Anticancer Drug Development Guide: preclinical screening, clinical trialsand approval; B.A. Teicher and P,A. Andrews, ed, 2004， Humana Press, Totowa, NJ)。
〔0098〕术语"治疗"是指向哺乳动物施用或给予含结晶化合物1 的制剂，或者向来自哺乳动物的分离组织或细胞系施用或给予制剂，所 述哺乳动物患有瘤疾病、瘤疾病的症状或者具有易患瘤疾病的诱因 predisposition,目的是治愈、医治、减轻、緩解、改变、改善、改进或 控制该疾病、疾病的症状或易患该疾病的诱因。术语"治疗(treating)" 被定义为向哺乳动物施用的含结晶化合物1制剂的量足以导致哺乳动物 中瘤细胞的防止、减小或消除("治疗有效量")。治疗有效量和剂量的 时间安排将在个体基础上确定，并且可以至少部分基于年龄、体重、性 别、饮食和接受对象的综合健康等需要考虑的因素，疾病状况的性质和 严重度，以及先前的治疗和所存在的其它疾病。其它因素也包括给药途 径和频率，所施用药物的活性，化合物的代谢稳定性、作用时间和排泄， 药物组合、受体对象对化合物的耐受性，以及瘤或增殖疾病的类型。在 一个实施方式中，化合物的治疗有效量在哺乳动物体重的约0.01至约 750 mg/kg的范围内。在另一实施方式中，治疗有效量在约0.01 mg/kg 体重/天至约300 mg/kg体重/天的范围内。在又一实施方式中，治疗有效 量在10 mg/kg体重/天至约120 mg/kg体重/天的范围内。在人类患者的 情况下，上述实施方式的治疗有效剂量也可以以每立方米毫克表达 (mg/m2)。对于不同哺乳动物的转换系数可见于Freireich et al, Quantitative comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, dog, monkey and man, Cancer Chemoth. Report, 1966, 50(4): 219-244)。当可能 需要特殊要求时(例如，用于儿童患者)，上述治疗有效剂量也可以在上 述范围外。这些更高或较低的剂量在本发明的范围内。
〔0099〕为监测在人身上的肺瘤治疗的功效，在治疗开始之前和之 后测量肺瘤大小和/或肺瘤形态，如果肿瘤大小停止进一步生长或者如果 肿瘤的大小被减小例如至少10%或以上(例如，20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%或甚至100%,即不存在胂瘤)，则治疗^皮认为是 有效的。存活延长、时间-对-疾病进展、部分应答和客观应答率(objective response rate)是调查药物的临床活性的替代量度。肿瘤收缩(Tumor shrinkage)寻皮"^人为是治疗净争定的响应(treatment-specific response )。 该 系统受限于具有易进行精确测量的内脏团的患者的要求。确定体内肿瘤
29大小的方法随肺瘤的类型而变，并且包括例如医学成像或肺瘤学领域技
术人员熟知的各种成像技术(MRI、 CAT、 PET等)，以及组织学技术和 流式细胞术。对于某些类型的癌症，对血清胂瘤标记物的评价也用于评 价响应(例如，用于前列腺癌的前列腺特异性抗原(PSA)，以及用于直肠 癌的癌胚抗原(CEA))。监测癌生长的其它方法包括在血液中的细胞计数 (例如，在白血病中)或骨疼痛的减轻(例如，前列腺癌)。
〔0100〕含结晶化合物1的制剂也可以每天施用一次，或者可以全 天内在适当的间隔以两次、三次、四次或更多次亚剂量施用。在这种情 况下，包含在各亚剂量中的化合物1的量必须相应地更小，以便达到总 的日剂量。剂量单位也可以被混合用于在几天内输送，例如，利用常规 的持续释放的制剂，其在几天的期间内提供化合物的持续释放。持续释
放制剂在本领域是熟知的。在该实施方式中，剂量单位含有相应的多份 日剂量。有效剂量可以以单一给药事件(例如，弹丸注射)或者以30分 钟至约24小时内的緩慢注射或输注施用。制剂可以作为可达30天的治 疗来施用。此外，用治疗有效量的组合物治疗对象可包括单治疗或系列 治疗(例如，四周的治疗，重复3次，各治疗之间具有2个月的间隔)。 对本发明所包括的化合物的有效剂量、毒性和体内半衰期的估计利用常 规方法进行，或者在体内测试的基础上利用适当的动物模型进行。
〔0101 〕包括哺乳动物和人在内的对象中的肿瘤的治疗可以通过以 单一药物施用本发明的制剂进行，或者通过联合外科和/或已知的抗癌治 疗如放射疗法和化学疗法方案施用本发明的制剂进行。结晶化合物1可 以结合已知的抗癌化合物或化学治疗药物，或者除已知的抗癌化合物或 化学治疗药物之外来施用。化学疗法家族包括细胞的增殖抑制或细胞 毒素药物、抗生素型药物、烷基化剂、抗代谢物药物、激素药物、芳香 酶药物、免疫药物、干扰素型药物、环加氧酶抑制剂(例如，C0X-2抑 制剂)、基质金属蛋白酶抑制剂(matrix metalloprotease inhibitors )、端粒 末端转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生长因子受体药物 (anti-growth factor receptor agents )、 抗HER药物、抗EGFR药物、抗 血管生成药物、法尼基转移酶抑制剂、ms-raf信号转导途径抑制剂、细 胞周期抑制剂、其它CDK抑制剂、微管单白结合药物、拓朴异构酶I 抑制剂、拓朴异构酶II抑制剂及类似物。化学治疗药物的实例包括但不 限于5-氟腺嘧啶、丝裂霉素C、氨曱蝶呤、羟基脲、亚硝基脲(例如，BCNU、CCNU)、环磷酰胺、丙卡巴肼、曱氮咪胺、三胺硫磷、atreptozocine、 替莫唑胺、enzastaurin、埃罗替尼、米托蒽醌、蒽环霉素(表阿霉素和 Doxurubicin)、 CPT-ll、喜树石咸及其衍生物、依托泊甙、诺维本、长春 花碱、长春新碱、pregnasone、铂化合物如卡铂和顺铂、紫杉烷类如紫 杉酚和泰索帝；激素疗法如他莫昔芬和抗雌激素；受体的抗体，如赫赛 汀和易瑞沙；芳香酶抑制剂、促孕剂和LHRH类似物；生物反应纟务饰剂 如IL2和干4尤素；多药逆转剂(multidrug reversing agents )如环孢菌素 类似物PSC 833。(关于更多实例,参见The Merck Index, 12th edition (1996), Therapeutic Category and Biological Activity Index, lists under "Antineoplastic" sections)。
〔0102〕化合物1晶体在细胞培养或试验动物中的毒性和治疗功效 可以通过标准药物步骤确定。如上述以及如在本文实施例中所述确定在 动物才莫型中的治疗功效。进行毒性研究，以确定10%测试动物的致死剂 量(LD10)。在最大耐受剂量(MTD)下处理动物不产生死亡率或者20% 以上体重损失的最高剂量。在特定的胂瘤模型中使有效剂量(ED)与MTD 发生关联，以确定化合物的治疗指数。发现接近1.0的治疗指数(MTD/ED) 对于一些化学治疗药物是可以接受的，传统治疗药物的优选治疗指数是 1.25或更高。
〔0103〕从细胞培养试验和动物研究得到的数据可以用于配制用于 人类的剂量范围。本发明组合物的剂量一般将在包括MTD的循环浓度 范围内。剂量可以在该范围内变化，这取决于所采用的剂型和所利用的 给药途径。对于在本发明方法中所用的任何化合物而言，治疗有效的剂 量可以从细胞培养试验中进行最初的估计。在动物才莫型中可以配制剂 量，以得到化合物的循环血浆浓度范围。此类信息可以用于更精确地确 定在人体中有用的剂量。血浆水平例如可以通过高效液相色谱测量。确 定化合物抗肿瘤功效的动物模型通常在小鼠上进行。鼠科肿瘤细胞从相 同的种类(同源模型)被皮下接种到小鼠的后肋，或者人肿瘤细胞被皮下 才妾种到严重耳关合免疫缺陷(severe combined immune deficient, SCID)小鼠 或其它免疫缺陷小鼠(棵鼠)(异种移植模型)的后肋中。
〔0104 〕小鼠遗传学的进展已经产生了大量用于研究包括癌在内的 各种人类疾病的小鼠模型。由National Cancer Institute赞助的MMHCC (Mouse models of Human Cancer Consortium)网页(emice.nci.nih.gov),才是供了已知癌症模型的疾病-位点-特异性概略，并且具有到可检索的
Cancer Models Database (cancermodels.nci.nih.gov )以及NCI-MMHCC小 鼠资料库的链接。小鼠资料库(Mouse repositories)也可发现于The Jackson Laboratory、 Charles River Laboratories 、 Taconic, Harlan, Mutant Mouse Regional Resource Centers (MMRRC) National Network以及the European Mouse Mutant Archive。这类才莫型可用于^1合物1晶体的体内 测试以及用于确定治疗有效量。
实施例
〔0105〕除非另外说明，在下面实施例中使用的试剂和溶剂由 Sigma-Aldrich和/或Fisher Scientific供应。除非另外说明，在说明书和 权利要求书中所用的所有表达成分数量，性质例如结晶条件、分子量、 熔点，X射线衍射图数据诸如相对强度和距离值等的数字应当被理解为 在所有情况下通过术语"大约(about)"来修正。因此，除非进行相反 的说明，在本说明书和所附权利要求中所列举的所有数值参数是近似 值。至少并且并不企图将关于等价物理论的本发明限于权利要求书的范 围，各数值参数应当至少根据主要特征的数量以及通过应用常规普及的 技术进行解释。尽管阐明本发明的宽范围的数值范围和参数是近似值， 但是在实施例、表和附图中所提出的数值尽可能精确地报告。任何数值 可能固有地含有由试验、试验测量统计分析等的偏差导致一些误差。
〔0106〕除非另外定义，在本文所用的所有技术和科学术语具有如 本发明所属技术领域的一个普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管 类似于本文所述的那些的方法和材料可以用在本发明的实践或试验中， 然而在下面描述了合适的方法和材料。另外，所述材料、方法和实施例 仅仅是示例性的并且并非意图进行限制。
实施例1:化合物1的制备和分离
〔0107〕用于本发明结晶中的化合物1产生和分离自"产生化合物 1的微生物"。在实施例1中提供的步骤仅仅被提供作为示例性步骤，并 非意图是限定性的。
〔0108〕根据于2004年1月21日提交的美国申请序列号10/762,107 的实施例1和2中的步骤——该申请还以WO 2004/065591于2004年8
32月公开，利用单孢丝菌属(Micromonospora )菌林[S01]046或046-ECO11 ， 其分别具有IDAC编号(IDAC accession number)为231203-01和 070303-01 (力口拿大国际保藏单位，(International Depository Authority of Canada (IDAC ) , Bureau of Microbiology, Health Canada, 1015 Arlington Street, Winnipeg, Manitoba, Canada, R3E 3R2),获得化合物1 。 〔0109〕另外，化合物l如下制备 l丄步骤1
A. 发酵
〔0110〕以1 x IOL批量在14.5 L发酵罐(BioFlo 110 Fe騰ntor, New Brunswick Scientific, Edison, NJ, USA)中，利用在美国专利申请 10/762,107中所述的改进步骤，完成发酵。
〔0111〕小单孢菌(Micromonospora sp.)(储藏编号IDAC 070303-01) 被保持在ISP2琼脂(Difco Laboratories, Detroit, MI)的琼脂平板上。通过 将小单孢菌的表面生长从琼脂平板转移到含有500 mL灭菌KH培养基 的2-L烧瓶中，制备生产相的接种物。每升KH培养基包含10 g葡萄糖、 20 g马铃薯糊精、5 g酵母提取物、5 g NZ-胺A和1 g CaC03,用水(pH 7.0) 补足1升。将培养物在设置在250 rpm下的旋转振荡器上于大约28。C温 育约70小时。温育后，将300 mL培养物转移到14.5 L含有10 L灭菌 生产培养基HI的发酵罐中。每升生产培养基HI由20 g马铃薯糊精、 30 g甘油、2.5 g Bacto-蛋白胨、8.34 g酵母提取物和3 g CaC03,(具有 0.3 mL硅酮消泡油(Chem Service)和0.05 ml Proflo oilTM (Traders protein) 作为消泡剂，仅在发酵罐中使用)组成，用蒸馏水制成1升，并调节至 pH 7.0。将培养物在28。C下温育，溶解的氧(d02)在级联回路(cascade loop)中控制在25%,其中搅拌在150-450 RPM之间变化，通气设定在 0.5 V/V/M的固定速率下。
B. 化合物1的分离
〔0112〕在收获时，培养肉汤(l x 10 L)的pH通过滴加20% H2S04 (硫酸)水溶液并伴随连续搅拌调节至3.0。所得混合物被冷却至4。C并在 该温度下保持12h。冷却的肉汤然后4皮离心(以3200 rpm进行20 min)， 以分离菌丝体。回收的菌丝体用曱醇提取(2 x300 mL的MeOH,用于每 100g菌丝体)。
〔0113〕提取之后，汇集甲醇提取物并在减压下利用旋转蒸发器蒸发至干燥。将该甲醇提取浓缩物在MeOH (每10 g浓缩物为100 mL)中 重构，并将所得溶液转移到分液漏斗中。向分液漏斗中的曱醇溶液中加 入蒸馏水(每10 g浓缩物为30 mL),接着加入己烷(每10 g浓缩物为50 mL)。通过旋涡使该混合物被温和搅拌，以允许优良的相接触，但是避 免乳液形成。然后使混合物静置，以便析相发生。弃去上面的己烷层。 将水甲醇层回收到分液漏斗中，并加入等体积的15% NaCl以及两倍体 积的EtOAc (乙酸乙酯)。使所得混合物成旋涡，以允许优良的相接触， 并使其静置，以便析相发生。回收上面的EtOAc层。向EtOAc层加入 DiaionTM HP-20树脂，减压下去除溶剂，以使溶质与树脂结合。
〔0114〕将溶质结合的树脂应用于DiaionTM HP-20柱并用水洗脱以 去除水溶性组分，之后用60Q/oMeOH(v/v)水溶液洗脱以去除弱结合的杂 质。然后用80%至90。/oMeOH水溶液的分步梯度洗脱目标化合物。汇集 该80-90% MeOH水溶液馏分并真空浓缩至干燥，得到粗化合物1。将 100 mg的该粗化合物1消化在5 mL以5:2:10:5体积比例的氯仿、环己 烷、曱醇和水制备的混合物的上层相中。利用高速反电流(HSCC)系统 (Kromaton Technologies, Angers, France), 其装酉己有 200 mL 药筒 (cartridge)并用该两相系统的上层相预填充，使该样品经历离心分裂 层析。HSCC以下层相作为流动相运行，化合物1在约二分之一柱体积 处被洗脱。收集馏分，并在商业Kieselgel60F254平板上通过等分试样馏 分的TLC检测化合物1。 通过在紫外线下观察干燥的平板，或者通过 用含有在乙醇中的香草醛(0.75%)和浓硫酸(1.5%, v/v)的喷雾喷洒该平板 并随后加热该板，化合物可以被显现。汇集含有化合物1的馏分并浓缩， 产生尽管是高度着色但是基本纯的化合物1 1.2.步骤2 A.发酵
〔0115〕小单孢菌[S01U02]046 (IDAC 070905-01)被保持在GYM琼 脂平板上。将表面生长转移至三个2L的带挡板的烧瓶中，每个烧瓶含 有500 mL灭菌KH培养基(参见实施例1.1A),并在定轨振荡器上于28 ± 1.0。C生长70到72小时。汇集种子烧瓶并无菌转移至28L容量接种物 发酵罐中。所转移的体积对应于接种物发酵罐中3%的KH培养基体积 (参见实施例1.1A,在发酵罐中，KH进一步包含消泡剂0.3mL硅酮消 泡油(Chem Service)和0.05 ml Proflo oil (Traders protein))。发酵在28± 1.0。C下进行48小时，其中连接到搅拌的溶解氧保持在25%。
〔0116〕将来自接种物发酵罐的全部体积转移到750 L容量的中试 发酵罐中。所转移的体积对应于中试发酵罐中3.3%的培养基HI体积(参 见实施例1.1A,包括消泡剂)。发酵在28土1.0。C下进行96小时，其中 连接到搅拌的溶解氧保持在25%。 B.化合物1的分离
〔0117〕在收获中试发酵罐之前，通过在连续搅拌下緩慢加入99% H2S04将肉汤的pH调节至pH 3。然后在发酵容器中将发酵培养物冷却 到4土2。C,随后将其转移至收集槽中并在4士2。C保持16到72小时。然 后通过超滤(0.2微米滤膜)收集菌丝体，产生稠浆。
〔0118〕对于在菌丝体分离步骤之后获得的每1 L菌丝体浆，利用 3 L甲醇。提取步骤包括通过超滤系统循环菌丝体-曱醇60 ± 10 min。 高循含速度使得菌丝体聚集物打散，并使温度增加到42±3°C,提供了有 效的提取。 一旦菌丝体于提取溶剂适当混合，超滤系统的阀被打开以允 许渗透物被收集(清澈的甲醇提取物)。将曱醇提取物送入阻留物容器 (retentate container),而剩余的菌丝体用第二等体积的甲醇再提取。该 步骤用第三等体积的曱醇重复一次。汇集该三次甲醇提取物，并在减压 下蒸发，以产生稠的粗制浓缩物。
〔0119〕在室温下，将盐(NaCl 10% w/v)加入^L制浓缩物中，并将 混合物搅拌30土 10min以使盐溶解。以3:1 (曱醇:浓缩物)的比例将甲醇 加入盐化的粗制浓缩物中，并将混合物搅拌60土 10min。将所得混合物 在真空下过滤(0.5微米的膜)，以去除微粒物质。将滤液转移到分液漏斗 中接着加入己烷(每100 mL甲醇50mL庚烷，用于再溶解粗制浓缩物)。 分液漏斗的内含物^皮充分搅拌20 ± 5 min,以确保水相和有才几相的完全 接触。搅拌之后，室温下静置混合物，以便析相发生。收集下面的水曱 醇层。将曱醇提取物用第二体积的庚烷(其量等于第一次提取中所用庚烷 体积的50%)再提取。汇集曱醇层。
〔0120〕从脱脂作用得到的曱醇层与HP2(^在旋转蒸发器中混合 物，并将甲醇在减压下蒸发，以使疏水组分与树脂结合。将所负载的树 脂加入到预填充的HP2(f柱上。用净化水(IO ± 2柱体积)充分洗涤该柱， 以去除任何溶剂、盐和未结合的水溶性有机组分。比化合物l较不疏水 的弱结合的杂质用近似10 ± 2柱体积的甲醇水溶液(60:40 v/v甲醇:水)从柱中洗脱，直到柱洗脱物的颜色变清澈或者非常浅的黄色。然后使用
70:30曱醇:水溶液(3 ± 1柱体积)洗该柱。化合物1用曱醇水溶液(90:10 v/v 曱醇:水)洗脱，收集馏分。提交各90Q/Q洗脱馏分的样品进行LC-UV分析 以确定化合物的含量。汇集含有大于1%的化合物1的估计总量的70% 和90%曱醇水溶液馏分并送入彻底清理的第二 HP2(^柱中，如前所述进 行。汇集所得到的含有大于1%的化合物1的估计总量的90:10v/v曱醇: 水馏分，并且在结晶之前浓缩至干燥。
实施例2:化合物1晶体的制备
〔0121〕结晶方法并不限于使用化合物1的分离、粗制或粉末形式， 晶体形式也可以用于结晶过程中，以产生相同或不同的形式。相同的晶 形也可以从其它溶剂系统或者在不同的条件下获得，本文所示例的步骤 仅仅用于阐述的目的。
〔0122〕根据实施例得到的化合物1的冻干粉末被用于制备形式I 的晶体和形式II的晶体(除2.1C使用粗制材料之外)。形式III的晶体从 形式I或II的晶体制备。
2丄晶形U曱醇/水V3步)
〔0123〕注意痕量的形式II晶体有时存在于从甲醇和水混合物中 产生的形式I的晶体中。当用PEG(乙二醇)和PG(丙二醇)——各自在水 中的浓度为3% w/v——的混合物处理约0.8 mg/mL的化合物1时，也观 察到形式I晶体产生
〔0124〕 A.来自实施例1.1B中HSCC纯化的冻干化合物1 (24 mg) 称重于20mL玻璃瓶中，并溶解在2mL甲醇中，产生浅褐色溶液。使 该溶液在巴斯德吸管中经过Norit (活性炭)的塞子以使溶液脱色。获得 浅黄色溶液，加入几滴曱醇，将提交调整到2mL。将脱色溶液用水滴定， 直到溶液刚好变混浊为止。在滴定过程中使用连续的旋涡。对于约72 %的最终曱醇含量而言，所加入的水的总体积是大约700 mL。在水浴 中将混浊的悬浮液加热至55°C,以产生清澈的饱和溶液。从水浴中移 走该清澈溶液并使其冷却至室温。随着溶液的冷却，过饱和溶液产生， 从中晶体开始形成。此刻溶液的温度是大约31-33°C。使溶液在黑暗中 于室温下静置72小时，以便发生完全结晶，之后在烧结的玻璃漏斗中 进行过滤和洗涤。将晶体过夜冻干，产生20.5mg结晶化合物1 (形式I)。〔0125〕 B.所使用的可选步骤如下称重来自HSCC纯化(实施 例1.1B)的冻干化合物1 (130mg),并溶解在30mL甲醇中，产生浅褐 色溶液。使该溶液经过NoritTM (由200 mg Norit和400 mg Celite作为助
滤剂制成)的短柱以使溶液脱色，使用真空压力以促进溶液穿过柱的流 动。获得浅黄色溶液。使用另外5 mL热曱醇来洗脱柱。从柱中收集的 体积是34.2 mL。使脱色溶液冷却至室温，并用水滴定，直到溶液开始 变混浊为止。在滴定过程中使用连续的旋渴。对于72%的最终曱醇含量 而言，所加入的水的总体积是大约13 mL。在水浴中将混浊的悬浮液加 热至50。C,以产生清澈的饱和溶液。从水浴中移走该清澈溶液，并在水 的烧杯(烧杯中的水具有5(TC的初始温度)中使其逐渐冷却至室温。在安 静地静置约30分钟之后(烧杯中的温度是35°C),在溶液中开始出现晶 体。使溶液在黑暗中于室温下静置过夜，然后放入水箱(4。C)中进行完全 结晶。在烧结的玻璃漏斗中通过过滤收集晶体，并用冷的(4匸)20%曱醇 水溶液洗涤。将晶体过夜冻干，产生116.3 mg结晶化合物1 (形式I)。
〔0126〕 C.可选步骤也用于制备形式I的晶体。所使用的材料得自 Diaion HP-20步骤(实施例1.1B,在HSCC之前)。将约1000 mg冻干的 粗制化合物1提取物(约70。/。纯度)溶解在曱醇(30mL)中，产生深褐色有 色溶液(几乎黑色)。使该溶液经过NoritTM(由2gNorit和2gCelite作为 助滤剂制成)的短柱，使用真空以促进溶液的流动。起初，溶液作为浅黄 色溶液/人柱中洗脱，^f旦是在洗脱结束时，颜色变为黄褐色。用20mL热 甲醇洗NoritTM柱。用曱醇将溶液的体积调整到50 mL,产生黄绿色溶液。 使溶液冷却至室温，并用水滴定至浊点，以逐滴的方式并伴随连续的旋 涡(对于约71%的甲醇浓度，需要20mL水)。在水浴中将混浊的悬浮液 加热至50。C,以产生清澈的饱和溶液。从水浴中移走所得的清澈溶液， 并在水的烧杯(烧杯的初始温度是5(TC)中使其逐渐冷却至室温。在安静 地静置过夜之后，针状晶体开始出现(15小时后出现晶体)。向溶液中加 入水滴以确定结晶过程是否完成(当加入水时，浊度意味着结晶未完 成)。没有观察到显著的浊度，因此将该溶液在水箱(4。C)中贮存5小时。 使用烧结的剥漏斗通过真空过滤收集晶体，并用水冷的20%甲醇水溶液 洗涤。将回收的晶体(形式I)冻干，产生350 mg晶体(通过NMR和HPLC, 纯度>98%)。
2.2.晶形IU乙醇/水)
37〔0127〕 A.来自HSCC纯化(实施例1.1B)的冻干化合物1(110 mg)称重于20 mL瓶中，并用10 mL乙醇溶解，产生褐色溶液。用水并 伴随连续漩涡将溶液滴定至浊点(使用14mL水，产生39%乙醇浓度)。 在水浴中将混浊的悬浮液加热至50°C，以产生清澈的过饱和溶液。从水 浴中移走该清澈溶液并使其冷却至室温。在安静地静置约2小时后，片 状的银色晶体斑点出现在溶液中。结晶过程完成之后，如前所述回收晶 体并称重。回收了 95mg的晶体(形式II)量。该晶体具有银灰色的颜色。
〔0128〕 B.可选地，在来自实施例1.2B的HP2(^-纯化的物质上进 行结晶。 将HP2(^-纯化的物质溶解在95%乙醇中，至浓度为大约24 ±3g/L。加入净化水，得到17.5±2.5 g/L于70%乙醇中的"储液"。将 该溶液加至在坛容器制备的、预热至大约30土2。C的33%乙醇溶液中。 利用设定在10mg/min/10L结晶体积下的溶剂输送系统，伴随连续搅拌， 实现"储液，，的添加。大约6土0.5h之后，用10mg化合物l晶体接种 结晶槽。 一旦储液已经完全输送到结晶溶液中，使系统熟化约12.0±0.5 h。在熟化期，以0.1 x结晶溶液的体积的速率向槽中加入净化水(0.15 x 结晶溶液总体积)。净化水加入之后，在晶体收获之前，将所得的结晶溶 液熟化另外16.0 ± 0.5h。利用中等规格的烧结玻璃漏斗通过过滤收集晶 体。
2.3 晶形II (异丙醇/水)
〔0129〕来自HSCC纯化(实施例1.1B)的冻干化合物1 (21 mg) -故称重于硼硅酸盐玻璃管(13 x 100 mm)中，并用800 pL异丙醇溶解。 通过加入水使溶液接近浊点(使用1500 iuL水，产生35%异丙醇浓度)。 溶液在4-8。C保持过夜，以使晶体形成。回收晶体并称重。回收率为大 约75%。
2.4 晶形III (退火过程)
〔0130〕晶形III是通过退火形式I或形式II的晶体产生的，其利 用多种温度并在多种条件如空气或惰性气氛下或者在减压下进行。结果 斗既括如下。
A.实施例步骤
C0131〕利用Edwards RV8泵(或者在真空炉中)，在减压(l-4托)下， 于等温60。C温度的烘箱中，使化合物1形式II的晶体样品(l mg至30 g) 干燥6小时。使样品冷却至室温，并且如在实施例3、 4、 5和6中所述分析得到的晶形III。
B.通用干燥(退火)步骤及结果
〔0132〕当在空气气氛下于60、 70、 80、 90或IO(TC的温度下加热 时，所有形式I和II的样品被转变为形式III,而没有可观察到的分解(通 过&NMR、 TGA、 XRPD和溶解度)。在溶剂消除温度之上进行退火过 程。当晶体在氮下或在减压下被脱火时，达160。C时未观察到降解。也 显示，在低达5(TC的温度下退火进展緩慢。
〔0133〕作为实施例，当使用60、 70和9(TC的温度时，随后的DSC 分析给出分别为185.5、 184.5和183.4。C的熔点以及分别为84.6、 66.8 和64.9 J/g的质量焓(mass enthalpy)。当在空气气氛下使用12(TC的温 度(熔点174。C,质量焓39.7 J/g)时，观察(NMR和溶解度)到轻微的降解 (小于4%)。
〔0134〕当使用下述步骤时(a)如实施例1.2中的发酵和分离；(b) 如实施例2.2B中的形式II晶体的产生；和(c)如实施例2.4A中的退火(干 燥)，产生形式m，总结果是每450L发酵为大于50g晶形III。
〔0135〕当将化合物1以大约8-10 g/L的浓度溶解在体积比为大约 5:10:2:5的氯仿/甲醇/环己烷/水的混合物的下层相(HSCC，下层流动相) 中，在rotavap (旋转蒸发器)上伴随温和升温浓缩至干燥时，也观察到 晶形III。
实施例3:晶形I、 II和III的概述特征
〔0136〕发现根据实施例2制备的化合物1的形式I、 II和III的晶 体具有如在该实施例和实施例4、 5和6中所述的性质。
〔0137〕在溶液中，没有晶体形式存在，因此物化溶液特征，即化 合物1的结晶多晶型物和基本纯的非晶形的& NMR光谱和紫外线光 谱应当是相同的。针对化合物1的所有晶体形式所得到的^NMR光谱 与化合物1的结构以及在于2204年1月21日提交的美国申请序列号 10/762,107——其于2004年8月以WO 2004/065591公开——中所述的 NMR光i普一致。
〔0138〕 一般而言，化合物1的基本纯的晶体显示为灰色至银灰色 晶体。晶体的外观取决于它们的纯度(而不是它们的结晶度)，这一般取 决于化合物1原材料的纯度。较不纯的晶形(例如，90-94%)表现出非常浅的褐色。
实施例4:晶形I、 II和III的XRPD图
4.1 通用步骤
〔0139〕在根据标准步骤制备的样品上进行X射线粉末衍射分析 (XRPD)。利用书t射计D5000-Siemens/Bruker AXS ，利用辐射源Co 1.79091埃和Si检测，进行X射线分析。利用l-2mg硅作为参比标准， 在室温下，样品不旋转的情况下，以27 2。/0.02mm的恒定往返，在硅 板上的2-4 mg晶体样品上收集数据。在3至70°的6角下收集X射线强 度，增量角为0.01°/秒。
4.2 结果
〔0140〕形式I、 II和III以如在例如图l(a)至(d)衍射图中所示的x 射线粉末衍射图(XRPD)为特征，该衍射图分别收集自形式III、形式II (i-PrOH/水)、形式I和形式II(EtOH/水)。在表l中所列的值是最主要的 值并且以 "2-6角，，的度数(土 1%)和相对强度"RI"表达(SH虽，M= 中等，W—弱，V—夂常，及其组合，例如VS-非常强)。
表1
晶形I、 II和III的X射线粉末衍射CXRPD)图(士 1%)
形式I形式II形式m
2-eRI2-eRI2-eRI
4.14S承4.16VS3.96VS
5.14vs8.32M7.86w
10.34M12.50M11.80s
15.20S16.70M15.74M
20.78M20.94M23.64M
22.80W25.20S27.62M
26.02M29.48W…——
31.20M33.82W——
*痕量的晶形II
〔0141〕从曱醇/水结晶得到的晶体分析(表1，图l(c))显示，形式i的晶体有时被发现含有痕量的形式n晶体。
〔0142〕在乙醇/水或异丙醇/水中结晶产生形式II的晶体(表1,分 别为图l(d)和图1(b))。从i-PrOH/水或EtOH/水中产生的形式H在XRPD 图案上没有显示出任何显著的差异，并且被认为是相同的。
〔0143〕同样，发现所有晶体形式(形式I和II)在干燥时转变为第
三种形式(形式m)，与结晶所使用的溶剂无关。对晶体退火后得到的
XRPD结果的分析在所有情况下显示出形式III的晶体(表1,图l(a))。
在退火步骤只回，形式i和n都转变为形式m的晶体。化合物i粉末，
尽管被认为是部分非晶形的(参见DSC试验，实施例5和图2),以一定
的结晶度为特征。其结晶部分主要是由形式I晶体组成，并且，在第一
次转变之后，部分粉末变成形式m晶体，如在所有其它情况中所观察到的。
实施例5:晶形I、 II和III的DSC 5.1 通用歩骤
〔0144〕利用具有DSC室(DSC cell)的TA Instruments Q1000-DSC (序列号1000-0024)扫描仪，进行示差扫描量热法分析。冷冻冷却系统连 接至DSC仪器，使得样品被冷却至-90。C。如25所建议，利用铟金属温 度标准(Indium Metal Temperature Standard),校准DSC仪器。高容量 不锈钢锅(带由盖和密封，TA Instrument Cat. No. 900825.902)被用作样 品容器。使用三种不同的条件设置(A, B, C),这取决于期望的测量参数 或结果。
〔0145〕A.在10-12 mg样品上完成Tg(玻璃化转变温度)测定(至少 部分非晶形粉末)，利用下面的条件冷却至A(TC (速率20°C/min); 加热直到160。C(速率20。C/min);等温步骤(160。C, 30分钟);冷却至-60 °C (速率20°C/min);以及加热至210°C (速率20°C/min)。利用该步 骤产生图2的温语图，但是仅显示第二加热上升，即在20。C/min的温度 斜i皮下从-60。C至210°C。
〔0146〕 B.通过从室温加热至210°C (速率5°C/min),在5-6 mg 样品上完成以一级转变测定(晶体和粉末形式)。利用相同的条件在1.5-2 样品上确定熔解温度和质量焓。
〔0147〕C.在5-6 mg样品上并利用下面的条件确定晶体类型变化(晶
41体和粉末形式的退火)加热直到160°C (速率5°C/min);等温步骤(160 。C，120分钟)；冷却至室温(速率5°C/min);以及加热至210°C (速率 5。C/min)。
5.2 结果
表2
非晶形粉末与晶形I、 II和III的性质
粉末形式I形式n形式III
外观褐色银灰色银灰色银灰色
熔点b181°C183。Ca183 °Ca183 °C
一级转变(S)120-145°C~ 80。C和 100-140°C100-140°CN/A
玻璃化转变(Tg)-15°CN/0N/ON/O
a. 形式I和II在熔点之下转化为形式m (在下面进行解释)
b. 由DSC确定的开始温度(土5。C)。 N/A:不适用
N/O:未观察
〔014 8 〕对包括非晶形粉末在内的所有形式进行示差扫描量热法温 谱图。与此提供了示例性DSC扫描(图2至5),所得到的结果总结在表 2中。非晶形粉末的DSC(步骤A,图2)显示约-15。C的玻璃化转变温度 (Tg)，该Tg发现与具有烃链的化合物的非晶形一致，例如，约-50'C至-60 °C的Tg是具有饱和烃链的化合物所期望的。所观察的值低于标准最小值 50°C，但是更优选IO(TC,以避免在口服固体药物制剂中存在物理转态 转变超时的风险(例如，参见Bechard and Down (1992), Pharmaceutical Research, vol 9, no 4, 521-528)。
〔0149〕在形式I的DSC温镨图中(步骤B，图3(a))， 一般而言， 在熔点以下观察到两次一级转变。在8(TC左右观察到第一次转变，而第 二次转变在约100至14(TC的范围内。在形式I中观察到的第一次转变 可能是由溶剂消除引起的。
〔0150〕在形式n的DSC温谱图中(步骤B,图4(a)),在熔点以下 观察到一级转变。该转变显示在约100至14(TC的范围内的温度下。〔0151〕在形式I和II中观察到的约100至14(TC的转变对应于产 生更稳定的形式III而不发生降解的3-维分子重排，如通过XRPD图和 NMR所示(无降解产物)。
〔0152〕形式III的DSC温谱图(步骤B，图3(b)和4(b))显示在熔 点之下无一级转变。这进一步证实，关于形式I和II在熔点之下所观察 到一级转变与3-维分子重排有关。在通过不同温度下热处理形式I和II 得到的形式III晶体上进行DSC试验。图5(a到d)显示了形式II (来自乙 醇)在减压下分别在110、 90、 70和60。C退火之后得到的结果。
〔0153〕形式I、 n和III的熔解温度都给出了相同的结果，即通过 DSC的约183°C 土5。C的起始温度。因为它们在熔点之下转化为形式m, 所以所观察到的熔点实际上是形式III熔解时的温度。
〔0154〕在氮气下也进行了其它试验，如包括退火步骤的DSC扫 描(在160。C等温下，步骤C)，以进一步表征晶形I和II及粉末形式。 观察与上述结果一致。
〔0155〕形式III的熔解温度，当使用毛细管U.S.P装置(特别是根 据包含在美国药典(United States Pharmacopeia)中的要求所设计的)测 量时，给出了 184'C的平均结果，具有2。C的标准偏差。
实施例6:晶形I、 II和III的热解重量分析法 6.1 通用步骤
〔0156〕利用TA Instruments Q500-TGA (序列号0500-0006)进行 热解重量分析法(TGA)。如制造商所要求，就温度和重量校准该仪器。 利用Certified Weight (1级和E2级)进行重量校准。利用Nickel Wire Curie Point Temperature Standard (序列号CRM2-184)校准温度。钿100 ju L 锅(TA Instrument Catalog No. 952018.906)一皮用作样品容器。利用下面的 条件收集数据温度斜坡为20°C/min,从9到550。C;在550。C时氮气 流变为空气流，以促进氧化和最终降解；温度斜坡为20°C/min,从550 到700°C ,目的是达到~ 100%重量损失。
6.2 结果
〔0157〕从晶形I、 II (来自乙醇/水)和III的热解重量分析法(TGA) 得到的结果的实例示于图6和7中。形式I和II (例如，分别为图6(b) 和7(b))的TGA显示第一次转变之前约6%的重量损失而没有降解(如通过NMR和XRPD图所示)，这意味着存在溶剂消除(例如，水、曱醇、 乙醇或异丙醇)。对于晶形I和II而言，重量损失发生在IO(TC之下。
〔0158〕在溶剂消除之后，晶体开始其向另一晶体类型的转变(形式
m)。在溶剂消除之后与熔点之间未出现重量损失。形式i和n的第二重 量损失发生在熔点之后，这是由熔化的化合物的降解引起的。
〔0159〕分别由形式I或II退火得到的形式III的TGA示于图6(a) 和7(a)中，其显示在熔点之前无重量损失，这证实了溶剂消除导致形式 I和II中的第一次重量损失。关于形式I和II,在达到熔点之后观察到 重量损失，这表明发生了分解。
实施例7:水中的溶解度测定
通过溶解度测试确定热力学最稳定的形式。 一般而言，最稳定的 形式表现出较低的溶解度性质。利用HPLC-MS方法(与质谱仪连接的高 效液相色谱装置)，评价晶形I和晶形II的每个样品以及形式III的两个 样品(从形式I和形式II的干燥获得)在水中的药物溶解度。搅拌晶体的 饱和水溶液并且在环境温度下保持24小时。以3600 rpm离心溶液，通 过HPLC-MS分析等分试样的上清液。结果示于下面的表3中。
表3
在水中的溶解度(在24小时之后，未处于平衡)
晶形溶解度(jug/mL)
形式1(MeOH/水)6.59
形式II (EtOH/水)3.98
形式m (退火的形式i)0.65
形式ni(退火的形式n)<LOD*
承LOD:检测限度为10ng/mL〔0160〕示于表3中的结果表明，晶形III明显比晶形I和II更稳 定。来自两种不同来源的形式III呈现出溶解度差异，这可以通过下述 事实解释溶解度试验不是在平衡下进行，而是在经过24小时的固定 时期后进行的。〔0161〕在此所引用的所有专利、专利出版物和公开的参考文献以 其全部通过参考并入本文。在发生冲突的情况下，将遵循本说明书，包 括定义。尽管本发明已经参考其优选实施方式进行具有的说明和描述， 本领域技术人员应当理解，其中可以进行各种形式和细节的改变，而不 背离被所附权利要求书包括的本发明的范围。
权利要求
1.化合物1的晶体形式，所述化合物1具有结构式
2. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式产生基本如图 l(a)、 1 (b)、 1 (c)或1 (d)所示的X射线衍射图。
3. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式产生基本如图 3(a)或4(a)所示的示差扫描量热法(DSC)温谱图。
4. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式产生基本如图 3(b)、4(b)或图5(a)至5(d)中任一图所示的示差扫描量热法(DSC)温谱图。
5. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式产生基本如图 6(b)或7(b)所示的热解重量分析法(TGA)温谱图。
6. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式产生基本如图 6(a)或7(a)所示的热解重量分析法(TGA)温谱图。
7. 化合物1的晶体形式，所述化合物1具有结构式<formula>formula see original document page 2</formula>其中所述晶体形式产生基本如图1 (c)所示的X射线衍射图。
8.化合物1的晶体形式，所述化合物1具有结构式其中所述晶体形式产生基本如图l(b)或l(d)所示的x射线衍射图。
9.化合物1的晶体形式，所述化合物1具有结构式其中所述晶体形式产生基本如图1 (a)所示的X射线衍射图。
10. 如权利要求1所述的晶体形式，其特征在于X射线粉末衍射图 中的下述的角位置(2 6角± 1 %):a) 5.1°、 10.3°、 15.2°、 20.8。、 22.8°、 26.0。和31.2。(形式I);b) 4.2。、 8.3。、 12.5。、 16.7°、 20.9。、 25.2°、 29.50和33.8。(形式II);或c) 4.0。、 7.9。、 11.8。、 15.7。、 23.6。和27.6。(形式III)。
11. 如权利要求1所述的晶体形式，其特征在于X射线粉末衍射图 中的下述角位置(2 6角± 1 %) : 5.140、 10.34。、 15.20。、 20.78。、 22.80。、 26.02°和31.20。(形式I)。
12. 如权利要求1所述的晶体形式，其特征在于X射线粉末衍射图 中的下述角位置(2 6角± 1 %) : 4.16。、 8.32。、 12.50。、 16.70。、 20.94。、 25.20°、 29.48。和33.82° (形式11)。
13. 如权利要求1所述的晶体形式，其特征在于X射线粉末衍射图 中的下述角位置(26角士 1 %) : 3.960、 7.86。、 11.800、 15.740、 23.64。 和27.62。(形式III)。
14. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式是能够通过用包含至少一种低碳烷基醇的溶剂系统处理化合物1而得到。
15. 如权利要求14所述的晶体形式，其中所述溶剂系统包括水和选 自曱醇、乙醇和异丙醇的低碳烷基醇。
16. 如权利要求14或15所述的晶体形式，其中所述低碳烷基醇选 自甲醇、乙醇和异丙醇。
17. 如权利要求14至16中任一项所述的晶体形式，其中所述低碳 烷基醇是曱醇。
18. 如权利要求14至16中任一项所述的晶体形式，其中所述低碳 烷基醇是乙醇。
19. 如权利要求14至16中任一项所述的晶体形式，其中所述低碳 烷基醇是异丙醇。
20. 如权利要求1所述的晶体形式，其中所述晶体形式能够通过在 约50。C至约110。C的温度下干燥第一晶体形式而得到。
21. 如权利要求20所述的晶体形式，其中所述干燥在约30分钟至 约24小时的干燥期间完成。
22. 如权利要求21所述的晶体形式，其中所述干燥期间是约2小时 至约12小时。
23. 如权利要求20至22中任一项所述的晶体形式，其中所述第一 晶体形式是形式I。
24. 如权利要求20至22中任一项所述的晶体形式，其中所述第一 晶体形式是形式II。
25. 如权利要求1至24中任一项所述的晶体形式，其处于基本纯的 形式。
26. 如权利要求1至25中任一项所述的晶体形式，其处于本质纯的形式。
27. 如权利要求1至26中任一项所述的晶体形式，其中所述晶体形式是基本结晶的。
28. 如权利要求1至27中任一项所述的晶体形式，其中所述晶体形式是本质结晶的。
29. 如权利要求1至28中任一项所述的晶体形式，其中所述晶体形式具有灰色至银灰色晶体的外观。
30. 如权利要求4、 6、 9和13中任一项所述的晶体形式，其中所述晶体形式基本没有化合物1的其它晶形。
31. 制备如权利要求1所述的晶体形式的方法，其包括下述步骤a) 获得分离的化合物1;b) 用包含低碳烷基醇的溶剂系统处理化合物1;和c) 从上清液中分离化合物1晶体。
32. 如权利要求31所述的方法，其中所述步骤(a)包括i) 在导致化合物I产生的条件下培养产生化合物1的微生物；和ii) 从所述微生物中分离化合物1。
33. 如权利要求32所述的方法，其中所述产生化合物1的微生物是 细菌。
34. 如权利要求33所述的方法，其中所述细菌是放线菌。
35. 如权利要求34所述的方法，其中所述放线菌是单孢丝菌属或链 霉菌属种。
36. 如权利要求35所述的方法，其中所述放线菌是分别具有IDAC 编号070303-01、 231203-01和070905-01的单孢丝菌菌株046-ECO11 、 [S01]046或[S01U02]046。
37. 制备如权利要求l、 4、 6、 9和13中任一项所述的晶体形式的 方法，其包括如下的步骤a) 得到化合物1的第一基本晶体形式；b) 在约5(TC至约170。C的温度下干燥步骤(a)的所述第一晶体形式， 以产生晶体形式。
38. 如权利要求37所述的方法，其中步骤(a)包括下述步骤i) 得到化合物1;ii) 用包含低碳烷基醇的溶剂系统处理在(a)中得到的化合物l;和iii) 从上清液分离化合物1第一晶体形式。.
39. 如权利要求37或38所述的方法，其中干燥步骤(b)在惰性气氛 下进行。
40. 如权利要求39所述的方法，其中所述惰性气氛选自减压或氮气氛。
41. 如权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述干燥步骤 (b)在约5CTC至约ll(TC的温度下进行约30分钟至约24小时的期间。
42. 如权利要求41所述的方法，其中所述温度是在约4小时至12小时的期间内约55。C至IO(TC
43. 如权利要求31 、 32或38所述的方法，其中所述溶剂系统进 一步包括水。
44. 如权利要求43所述的方法，其中所述溶剂系统包括水和甲醇。
45. 如权利要求43所述的方法，其中所述溶剂系统包括水和乙醇。
46. 如权利要求43所述的方法，其中所述溶剂系统包括水和异丙西孚。
47. 如权利要求31-36中任一项所述的方法，其中所述晶体形式是 形式I。
48. 如权利要求31-36中任一项所述的方法，其中所述晶体形式是 形式II。
49. 如权利要求37-42中任一项所述的方法，其中所述第一晶体形 式是形式I。
50. 如权利要求37-42中任一项所述的方法，其中所述第一晶体形 式是形式II。
51. 如权利要求37-42、 49和50中任一项所述的方法，其中段落(b) 所述的晶体形式是形式III。
52. 药物组合物，其包括治疗有效量的如权利要求1至29中任一项 所述的晶体形式和药学上可接受的载体。
53. 药物组合物，其包括治疗有效量的如权利要求2至13中任一项 所述的晶体形式和药学上可接受的载体。
54. 药物组合物，其包括治疗有效量的如权利要求10所述的晶体形 式和药学上可接受的载体。
55. 药物组合物，其包括治疗有效量的如权利要求11所述的晶体形 式和药学上可接受的载体。
56. 药物组合物，其包括治疗有效量的如权利要求12所述的晶体形 式和药学上可接受的载体。
57. 药物组合物，其包括治疗有效量的如权利要求13所述的晶体形 式和药学上可接受的载体。
58. 权利要求52至57中任一项所述的药物组合物，其中所述药物 组合物为口服悬浮液或固体口服制剂的形式。
59. —种治疗肺瘤症状的方法，其包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的如权利要求1至29中任一项所述的晶体形式。
60. —种治疗肺瘤症状的方法，其包括向需要此类治疗的患者施用 治疗有效量的如权利要求2至13中任一项所述的晶体形式。
61. —种治疗肿瘤症状的方法，其包括向需要此类治疗的患者施用 治疗有效量的如权利要求10所述的晶体形式。
62. —种治疗肺瘤症状的方法，其包括向需要此类治疗的患者施用 治疗有效量的如权利要求11所述的晶体形式。
63. —种治疗胂瘤症状的方法，其包括向需要此类治疗的患者施用 治疗有效量的如权利要求12所述的晶体形式。
64. —种治疗肺瘤症状的方法，其包括向需要此类治疗的患者施用 治疗有效量的如权利要求13所述的晶体形式。
65. 如权利要求59-64中任一项所述的方法，其中所述肿瘤症状包 括肺癌、结肠直肠癌(包括结肠癌)、CNS癌(包括神经胶质瘤)、卵巢癌、 肾癌、前列腺癌、乳癌、造血癌(包括白血病)和黑色素瘤。
66. 如权利要求1至29中任一项所述的晶体形式在制备用于治疗肿 瘤症状的药物中的用途。
67. 如权利要求2至13中任一项所述的晶体形式在制备用于治疗肿 瘤症状的药物中的用途。
68. 如权利要求10所述的晶体形式在制备用于治疗肿瘤症状的药 物中的用途。
69. 如权利要求11所述的晶体形式在制备用于治疗肿瘤症状的药 物中的用途。
70. 如权利要求12所述的晶体形式在制备用于治疗肿瘤症状的药 物中的用途。
71. 如权利要求13所述的晶体形式在制备用于治疗肿瘤症状的药 物中的用途。
72. 商业包，其包含如权利要求1至29中任一项所述的晶体形式， 以及关于在肿瘤症状治疗中使用的说明。
73. 商业包，其包含如权利要求2至13中任一项所述的晶体形式， 以及关于在肿瘤症状治疗中使用的说明。
74. 商业包，其包含如权利要求10所述的晶体形式，以及描述关于 在肿瘤症状治疗中4吏用的说明的书面文件。
75. 商业包，其包含如权利要求11所述的晶体形式，以及描述关于 在胂瘤症状治疗中使用的说明的书面文件。
76. 商业包，其包含如权利要求12所述的晶体形式，以及描述关于 在胂瘤症状治疗中使用的说明的书面文件。
77. 商业包，其包含如权利要求13所述的晶体形式，以及描述关于 在胂瘤症状治疗中使用的说明的书面文件。
78. 如权利要求1至29中任一项所述的晶体形式，用于治疗肿瘤症状。
79. 如权利要求2至13中任一项所述的晶体形式，用于治疗肿瘤症状。
80. 如权利要求10所述的晶体形式，用于治疗肺瘤症状。
81. 如权利要求11所述的晶体形式，用于治疗肿瘤症状。
82. 如权利要求12所述的晶体形式，用于治疗肿瘤症状。
83. 如权利要求13所述的晶体形式，用于治疗肿瘤症状。
全文摘要
本发明涉及ECO-4601的晶体形式以及提供它们的方法。本发明进一步涉及包含所述晶体形式的药物组合物以及该晶体形式作为药物的应用方法。
文档编号A61K31/551GK101541327SQ200780003903
公开日2009年9月23日 申请日期2007年1月26日 优先权日2006年1月31日
发明者E·鲁, F·耶博亚, J·麦卡尔平, M·兰杰, M·哈维, P·莫里斯 申请人:塔利昂制药公司