专利名称：虫草多糖在制备抗皮肤光老化的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及虫草多糖新的医药用途。
背景技术：
虫草多糖(CP)具有抗肝纤维化、化学和免疫性的肝损伤的治疗、抗肿 瘤、免疫调节、降血糖、抗衰老等药理作用。近年对于虫草多糖的应用也主 要是集中在这些方面
冬虫夏草多糖能提高机体的免疫功能。它对机体网状内皮系统及腹腔巨 噬细胞的吞噬功能具有明显的激活作用，能促进淋巴细胞的转化，可促进特 异性抗体的产生，增强机体体液免疫能力。
虫草多糖对于化学性和免疫性的肝损伤均具有保护作用。应用序贯注射 卡介苗和脂多糖诱导小鼠免疫性肝损伤模型，虫草多糖有抗肝脏脂质过氧化 作用，使肝匀浆丙二醛含量下降，超氧化物歧化酶活力升高。具有较好的抗 小鼠免疫性肝损伤作用。CPL能显著降低D—半乳糖所致肝损伤的小鼠血清中 谷丙和谷草转氨酶活性，对小鼠肝损伤有保护作用。虫草多糖还通过抑制肝
星状细胞的活化和TGFP的表达，明显减少肝脏的胶原沉积，并能抑制I、 II 型原胶原基因的表达，起到良好的抗肝纤维化的作用；虫草多糖还可以增强 患者细胞免疫功能，改善肝功能。
虫草多糖对正常小鼠与四氧嘧啶糖尿病和链尿佐菌素糖尿病的模型小鼠 均有显著的降血糖作用，且有一定量效关系。
虫草多糖可以治疗家犬夹闭肾动脉引起的急性肾衰具有治疗作用，对于 腺嘌呤引发的大鼠慢性肾衰也具有治疗作用。
另外虫草多糖抗肿瘤、抗辐射、诱生干扰素等作用也有报道。关于抗衰老方面有人采用从虫草深层发酵产物中提取的多糖进行果蝇抗衰老试验，结 果表明，不同来源的虫草多糖对果蝇寿命均有不同程度的延长作用，从而证
明虫草多糖有延缓衰老的作用；并且延寿的效果随纯度的增大而提高。 文献中尚未见虫草多糖抗皮肤光老化及作用机理的报道。 皮肤老化包括两个过程，内在老化和光老化。前者主要受遗传和代谢等 因素的影响，可通过改善全身营养代谢平衡等措施加以防护；后者则主要由 长期紫外线照射所致，只能通过避免阳光照射和使用防晒药物来预防，而在 实际生活中后者是很难避免的。皮肤老化是机体衰老的重要组成部分，与许 多皮肤病如基底细胞癌、鳞状细胞癌等的发生也有着病因学的关系，而且有 损于美容。同时伴随着物质生活的日益提高，人们对延缓皮肤衰老、保持青 春亮丽的容颜的要求越来越高，中医是中国文化的瑰宝，中草药是天然药物， 副作用少，容易被人们接受，将传统的中医与现代生命科学的理论与技术相 结合，是开发中草药的一条有效途径。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于开发虫草多糖的新用途，提供虫草多糖 在制备抗皮肤光老化的药物中的应用。
本发明中的虫草多糖(CP)是天然药物冬虫夏草的主要活性成分之一， 也是最高的药理活性成分，是一类高分子复合物。
本发明中的虫草多糖亦可通过人工合成，如中国专利CN1560085A于2005 年Ol月05日公开了一种利用虫草人工培养中产生的培养基下脚料提取虫草 多糖的工艺；中国专利CN1560085A于2005年01月05日公开了一种用大米 生产虫草多糖方法。
本发明在制备小鼠光老化模型过程中，通过皮肤表面预先涂抹虫草多糖 溶液，通过肉眼观察，并对皮肤组织做切片，HE染色光镜观察和醋酸铀和拧 檬酸铅双重电子染色透射电镜观察发现，用虫草多糖保护的小鼠皮肤较为保护的小鼠皮肤有明显改善，实验结果说明，虫草多糖对皮肤的光老化过程具 有保护作用。
用虫草多糖溶液来保护皮肤光老化，直接用外部皮肤涂抹，简便快捷。 本发明提出的虫草多糖新的医药用途，有进一步在人体皮肤使用的可能， 具有开发潜能，可用于大规模生产，可通过添加到日常护肤品中使用。
图1是HE染色光镜观察结果图(正常对照组，放大100倍)。 图2是HE染色光镜观察结果图(光老化组，放大100倍)。 图3是HE染色光镜观察结果图(低浓度虫草多糖保护组5mg/ml，放大 100倍)。
图4是HE染色光镜观察结果图(中浓度虫草多糖保护组10mg/ml，放大 100倍)。
图5是HE染色光镜观察结果图(高浓度虫草多糖保护组20mg/ml，放大 100倍)。
图6是透射电镜观察结果图(正常对照组，放大6000倍)。 图7是透射电镜观察结果图(光老化组，放大6000倍)。 图8是透射电镜观察结果图(低浓度虫草多糖保护组5mg/ml，放大6000倍)。
图9是透射电镜观察结果图(中浓度虫草多糖保护组10mg/ml，放大6000倍)。
图10是透射电镜观察结果图(高浓度虫草多糖保护组20mg/ml，放大6000倍)。
具体实施例方式
有关本发明前述及其它技术内容、特点与功效，在以下较佳实施例的详 细说明中，将可清楚的呈现。一、小鼠光老化模型的建立和实验方法。
1、 实验动物
昆明种小白鼠，雌鼠，体重20—25 g， 7 — 8周龄，由上海中医药大学实 验动物中心提供。小鼠清洁级常规饲养。
2、 小鼠光老化模型的建立
用电动理发器将小鼠背部皮肤剃净，约2cn^2cm，裸露皮肤，随机分5组 第一组为正常对照组，皮肤每天涂抹一次双蒸水，其他无任何处理； 第二组为光老化模型组，皮肤每天涂抹1% 8-M0P (8甲氧补骨脂素)1 次，1. 5_2小时后，给予190 u w的UVA照射，累积照射138小时(累积强度 95J/cm2)，照射结束后24小时内取皮肤；
第三、四、五组为虫草多糖保护组，皮肤每天分别涂抹低、中、高浓度 的虫草多糖溶液，浓度分别为5mg/ml、 10mg/ml、 20mg/ml，涂抹至所暴露皮 肤湿润，稍干后再涂抹1%8—M0P， 1.5 — 2小时后，给予190uw的UVA照射， 累积照射138小时(累积强度95J/cm2)，照射结束后24小时内取皮肤。
进行HE染色光镜观察和醋酸铀和透射电镜观察实验时，正常对照组、光
老化模型组和虫草多糖保护组五组同时取皮肤。
3、 HE染色光镜观察
将取下的皮肤块浸人10%甲醛固定。12h后，取出固定好的皮肤块进行 蜡块包埋。蜡块切片后，将切片分别HE常规染色，光镜观察。
4、 透射电镜观察
颈椎脱臼法处死小鼠，迅速取皮肤，约3 mmX3 mm，固定于4%戊二醛
磷酸缓冲溶液中，4°C ，保存l h; PBS冲洗；1%锇酸，4°C，后固定l h;
PBS冲洗；50% ， 70% ， 80% ， 90% ， 100%乙醇梯度脱水；100%丙酮 浸透15—30 min;包埋剂包埋；分别在37。C， 45°C， 60°C ，各24 h聚合； 用超薄切片机切成50 nm的超薄切片；经醋酸铀和柠檬酸铅双重电子染色；透射电镜观察照相。 二、实验结果。
1、 肉眼观察。
正常对照组皮肤色泽红润有弹性。
光老化组皮肤颜色灰暗，弹性差，局部变硬，毛发脱落。 虫草多糖保护组随浓度增加，皮肤逐渐改善，高浓度组肉眼看与正常 对照无差异。
2、 HE染色光镜观察结果。
如图1和2所示，光老化组较正常对照组相比，出现典型的光老化病理 变化表皮厚度不均一，常有脱落，真皮层变厚明显，炎性细胞浸润多见， 微血管扩展，毛囊减少，皮脂腺不规则增生。
如图3、 4、 5所示，虫草多糖保护组较光老化组，病理变化有明显改善， 真皮层较光老化组薄，炎性细胞浸润较少。并且随浓度的增加，改善效果逐 渐明显。
3、 透射电镜观察结果。
在透射电镜下观察真皮层的纤维分布和成纤维细胞的形态。
如图5所示，正常对照组纤维分布整齐，规则、紧密，无断裂现象， 成纤维细胞外形清晰，内质网扩展明显，说明成纤维细胞的蛋白质合成功能 旺盛。
如图6所示，光老化组纤维分布疏松，局部出现不规则分布，有断裂 现象，成纤维细胞形态变形，外形不规则，细胞质较少，内质网较少，并且 有变异的细胞器，说明细胞的蛋白质合成不活跃。
如图7、 8、 9所示，虫草多糖保护组明显改善，纤维排列和成纤维细 胞形态及细胞器更接近于对照组，并且随浓度的增加，效果逐渐明显，低浓 度时还可见炎细胞，中浓度时也观察到变异细胞器，高浓度组未见到。
权利要求
1、虫草多糖在制备抗皮肤光老化的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了虫草多糖在制备抗皮肤光老化的药物中的应用。用虫草多糖溶液来保护皮肤光老化，直接用外部皮肤涂抹，简便快捷。本发明提出的虫草多糖新的医药用途，具有开发潜能，可用于大规模生产，可通过添加到日常护肤品中使用。
文档编号A61P17/00GK101564404SQ200810043308
公开日2009年10月28日 申请日期2008年4月25日 优先权日2008年4月25日
发明者雯 刘, 华 李 申请人:上海中医药大学