一种植物乳杆菌M1-UVs29及其应用的制作方法

专利名称：：一种植物乳杆菌M1-UVs29及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及微生物
技术领域：
，特别涉及的是诱变筛选的植物乳杆菌的新的菌株以及该菌株的应用。二、
背景技术：
心脑血管疾病(cerebrovasculardisease;cerebrovasculardisorder;CVD)的主要病理基础是冠心病(coronaryheartdisease,CHD)、动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、高脂血症(hyperlipoidemia，)等，控制血脂水平是防止和降低CHD、AS和HL以及预防心脑血管疾病的重要环节，而高血清胆固醇是诱发这些疾病的重要因素，人类膳食中的胆固醇与血液中的胆固醇也呈正相关。心脑血管疾病发病特点为复杂的、多环境、多因素相互作用，受遗传、饮食、生活习惯以及外界环境等因素的影响。对它的研究很多，本病可发生于任何年龄，男女发病率无明显差别，就高血压而言，仅在我国618岁的中小学生中，高血压的发病率就已达到8%。目前，CVD的防治多以饮食为主药物为辅，内科介入综合治疗，控制急性发作，减少复发，防止并发症。现阶段多数降血脂治疗的理想药物，如他汀类降脂药，仅有短时疗效，长期用则出现明显副作用，因此期待能开发出更为安全的替代治疗方案。最新研究表明，微生物菌群以其安全性优越、毒副作用小的特点被日益重视，益生菌中的乳酸菌、双歧杆菌以及肠球菌等经微生物生态学专家研究表明，与胆固醇的降解有一定的关系，但目前所报道的益生菌治疗CVD的疗效尚无法达到理想状态，筛选最佳的菌株成为益生菌治疗CVD的关键。三、
发明内容本发明的目的是针对上述问题，提供一种植物乳杆菌(Z^"o^"7/mp/朋torwn)Ml-UVs29,以下称为植物乳杆菌Ml-UVs29;本发明的另一目的是将其应用到防治心血管疾病或饮料、保健品和食品添加剂的生产中，有效的降解人体自身蓄积和食品本身的胆固醇。为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案本发明公开了一种植物乳杆菌Ml-UVs29，其保藏号为CGMCCNo.2591。植物乳杆菌Ml-UVs29可从发酵肉制品，如腊肉、腊肠、风干肠、宣威火腿等中分离，诱变优化后得到，是一种诱变分离的全新菌株。植物乳杆菌Ml-UVs29用于防治心血管疾病；所述心血管疾病为由胆固醇蓄积所引发的冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症等。植物乳杆菌Ml-UVs29用于生产饮料，所生产的饮料产品中含有上述的植物乳杆菌Ml-UYs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物。植物乳杆菌Ml-UVs29用于生产保健品，所生产的保健品产品中含有上述的植物乳杆菌Ml-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物。植物乳杆菌Ml-UVs29用于生产食品添加剂，所生产的食品添加剂产品中含有上述的植物乳杆菌Ml-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物。本发明具有的积极效果1、本发明植物乳杆菌Ml-UVs29，可从各种来源的发酵肉制品，如腊肉、腊肠、风干肠、宣威火腿等中分离，诱变优化后得到，是一种诱变分离的全新菌株，安全性优越、毒副作用小。2、本发明植物乳杆菌Ml-UVs29，能减轻冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症等典型临床症状，能够安全、有效地治疗由高血脂所引发的各种冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症等心血管疾病。3、利用本发明的植物乳杆菌Ml-UVs29可以制备成饮料、保健品或食品添加剂；或制成含有植物乳杆菌Ml-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物的饮料、保健品，如乳制品、发酵乳、酸豆奶等；或食品添加剂，用于降低机体内的胆固醇含量。四图1为本发明植物乳杆菌Ml-UVs29菌液涂片镜下形态(Gram's染色，x1000)。图2为本发明植物乳杆菌Ml-UVs29电镜扫描结果图(25KV2,50KX10nmKYKY-2800BSEMSN:1341)。图3为实施例2中对大鼠血清TC、TG和HDL-C含量的影响结果图。图4为实施例2中中大鼠肝体比值的影响结果图。图5为实施例2中正常对照组大鼠肝组织切片图。图6为实施例2中高剂量组大鼠肝组织切片图。图7为实施例2中高脂模型组大鼠肝组织切片图。图8为实施例2中中剂量组大鼠肝组织切片图。图9为实施例2中低剂量组大鼠肝组织切片图。保藏信息菌株名称植物乳杆菌aacto6acz7/wsp/a"ton/w)Ml-UVs29保藏编号CGMCCNo.2591保藏日期2008年7年14日保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏单位地址北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所五具体实施方式菌株名称植物乳杆菌(丄acto^"7/船；/awton/m)Ml-UVs29，已经于2008年7年14日在位于中国北京市的中国典型培养物保藏中心(CGMCC)进行了保藏，保藏号为CGMCCNo.2591。下面通过具体的实施例对本发明作进一步详细的描述。实施例1:植物乳杆菌Ml-UVs29的分离鉴定及其生物学特性1、材料1.1样品各种来源的发酵肉制品1.2试剂乳酸标准品色谱纯结晶紫分析纯番红分析纯碘分析纯碘化钾分析纯吐温80分析纯半胱氨酸分析纯醋酸铅分析纯胆固醇色谱纯胆盐分析纯蔗糖酯生化试剂Tris分析纯EDTA分析纯SDS分析纯蛋白酶K生化试剂平衡酚分析纯CTAB分析纯La酶生化试剂LoadingBuffer分析纯琼脂糖分析纯EB替代物分析纯生化鉴定管常用其它试剂均为分析纯1.3实验仪器XSP-2CA型光学显微镜T6新世纪型紫外分光光度仪JBT/C-YCL400/3P(D)可调式超声波药品处理机JY92-2D超声波细胞粉碎机YXQ-SG46-280A手提式压力蒸气消毒器DH4000型电热恒温培养箱HZQ-F160振荡培养箱JD100-3B电子分析天平微量移液器(10、20、200、lOOOpL)BCN-136000超净工作台如腊肉、腊肠、风干肠、宣威火腿等。美国Sigma公司天津兴华化学试剂厂天津兴华化学试剂厂天津兴华化学试剂厂天津兴华化学试剂厂天津市博迪化工有限公司广东宝泰克生物有限公司天津兴华化学试剂厂美国Sigma公司美国Sigma公司郑州元丰食品添加剂有限公司广东宝泰克生物有限公司广东宝泰克生物有限公司广东'i泰克生物有限公司广东宝泰克生物有限公司广东宝泰克生物有限公司大连宝生物工程有限公司大连宝生物工程有限公司大连宝生物工程有限公司oxoid大连宝生物工程有限公司杭州天和微生物试剂有限公司上海精密科学仪器有限公司北京普析通用仪器有限公司济宁金百特电子有限责任公司宁波新芝生物科技股份公司上海生银医疗仪器仪表公司天津市泰斯特仪器有限公司哈尔滨东联电子技术开发公司沈阳龙腾电子有限公司芬兰雷伯公司哈尔滨东联电子技术开发公司pHS-2型酸度计LGR10-4.2高速冷冻离心机上海雷磁仪器厂北京医用离心机厂北京六一仪器厂DDY-ni型电泳仪TC-25/H基因扩增仪凝胶图像分析系统SZ-1型快速混匀器杭州博日科技有限公司北京君意东方电泳设备公司江苏金坛市金城国盛仪器厂2.培养基的配制2.1MRS培养基蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5g,K2HP042g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温80lmL，MgS04.7H200.5g，MnS040.25g，蒸馏水1000mL，pH值6.26.4，121。C灭菌20min。固体培养基在液体培养基的基础上添加1.8%的琼脂。2.2耐盐性试验培养基MRS液体培养基分别添加2%、4%和6%的NaCl。2.3耐硝酸盐性试验培养基:MRS液体培养基分别添加50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg的NaN02。2.4产粘液培养基MRS同体培养基，以5%的蔗糖代替葡萄糖。2.5产H2S培养基(醋酸铅纸条法)蛋白胨10g，NaCl5g，牛肉膏10g，半胱氨酸O.5g，蒸馏水1000mL，pH7.07.4，112。C灭菌2030min。另外将普通滤纸剪成0.5lcm宽的纸条，长度根据试管与培养基高度而定。用510%的醋酸铅将纸条浸透，然后用烘箱烘干，放于培养皿中灭菌备用。2.6H202产生检测培养基基础培养基牛肉膏O.5g，酵母膏O.5g，吐温800.05mL，MnS04-4H20O.Olg，琼脂1.5g，pH6.5，121'C15min。单独灭菌的无菌糖1%，倾倒平板。上层倾倒一薄层(12mL)同样培养基，加入4WMn02。2.7抑菌试验培养基LB培养基胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaC15g，蒸馏水1000mL，pH值7.0。2.8蛋白质降解活性试验培养基:在MRS固体培养基中添加15%脱脂乳粉。2.9脂肪分解活性试验培养基在MRS固体培养基中添加15%的猪油和中性红指示剂。2.10高胆固醇MRSO-CHOL培养基以1000mL的液体培养基计，含1.0mg/mL胆固醇胶束溶液制备准确称量胆固醇0.1g放入小烧杯中，加入0.2g胆盐、O.lg蔗糖酯、lmL吐温80搅拌均匀，再移取5mL的冰乙酸加热溶解，把溶解液用超声波处理15min后，快速加入到配制好的液体培养基中，边加入边搅拌，使其形成均匀稳定的胶体溶液。2.11配制X-gal溶液(20m/mL)以直径0.22|im—次性滤器过滤除菌，取50pL铺于MRS固体培养基上涂布均匀备用。2.12乳酸纸层析试剂2.12.1展开剂水、苯甲醇、正丁醇以1:5:5的量混合，然后加1%的甲酸。2.12.2显色剂0.04。/。的溴酚蓝酒精溶液，用0.1NNaOH调节pH到6.70。3、植物乳杆菌Ml-UVs29的分离、纯化3.1菌株分离各种来源的发酵肉制品如腊肉、腊肠、风干肠、宣威火腿，分别取20g样品于180mL无菌蛋白胨水(蛋白胨lg/L，Nacl0.85g/L,吐温80lmL)震荡(震荡摇床200r/min，震荡60min)混匀，系列稀释，取上清液以MRS+3%CaC03作培养基倾倒平板，挑取产生溶钙圈的单菌落，划线分离纯化，纯菌进行革兰氏染色，选取革兰氏阳性和触酶阴性菌，进行斜面保存。3.2初筛对出筛出的乳酸菌进行发酵特性试验(产粘性实验、耐盐性实验、耐亚硝酸盐性实验、产生^02、产氨实验、葡萄糖产气实验、产H2S实验、石蕊牛乳实验、硝酸盐还原能力实验、氨基酸脱叛酶实验、抑菌实验、产酸能力实验、乳酸纸层析试剂)在发酵肉制品中，优势菌株应具有耐6%Nad和150mg/kgNaNO2、产酸速度快、发酵葡萄糖不产气、不产H2S、水解精氨酸不产氨、不具有氨基酸脱梭酶活性、不产粘液、不产H202、能抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌、发酵碳水化合物产物主要为乳酸，从分离的乳酸菌中筛选优良菌株。3.3复筛进行胆固醇降解率的测定和食品基质中胆固醇降解率的测定。3.3.1乳酸菌生长曲线和pH值的测定乳酸菌接种于MRS液体培养基，30'C培养24h，以MRS为空白对照，每2h用紫外分光光度计于650nm测定OD值，用酸度计测定pH值。3.3.2不同菌种的胆固醇降解筛选试验方法将同种属的供试菌活化扩大培养后，各转入5支液体试管培养基中，适宜温度培养48h后，采用平板计数法测各管的菌体细胞数—取相同的细胞数量级的液体管中菌种—按3%接种量接入到同时制备的含相同胆固醇胶束浓度的选择培养基中—在适宜的温度下培养一定的时间后—再定性和定量地测定胆固醇含量，并与不接种空白组对照，比较各菌种的胆固醇降解率，进而选育出胆固醇降解能力强的菌株。3.3.3不同培养时间的胆固醇降解实验方法将选育菌株按3%的接种量(菌体浓度均为10sCFU/mL)接种于含1mg/mL胆固醇胶束的培养基中，适宜温度下培养，定时取培养液，测定胆固醇的含量、pH值和菌数，计算胆固醇降解率，并分析讨论处理间的差异显著性，pH值和胆固醇降解率的相关性及菌数的变化。3.3.4不同接种量的胆固醇降解实验方法将被试菌株用无菌生理盐水稀释至108CFU/mL，分别以不同的接种量1%，2%，3%，4%，5%，6%，接种于含lmg/mL胆固醇胶束的培养基中，适宜温度下培养3d后，分别测定并计算胆固醇降解率、pH值和菌数的变化。3.3.5不同胆固醇胶束浓度的降解实验方法将选育菌株按相同接种量(菌体细胞浓度都为K)SCFU/mL)接种于含0.5mg/mL，1.0mg/mL，1.5mg/mL，2.0mg/mL不同浓度胆固醇胶束的培养基中，采用被试菌株最适生长温度分别培养，培养时间均为3d后，测定并计算胆固醇降解率、pH值和菌数的变化。3.4菌株初步鉴定3.4.1表型特征固体培养特征；液体培养特征。3.4.2生理生化特征3.4.3PCR鉴定16SrDNA的扩增，采用PCR方法对分离株的16SrDNA基因进行扩增。PCR采用特异型引物。4、菌落特征(耐氧试验)植物乳杆菌Ml-UVs29在MRS固体培养基平皿厌氧培养48h后，呈现圆形、白色、凸起、直径约2-4mm、边缘整齐的湿润菌落。5、显微镜和扫描电镜下的形态图1是植物乳杆菌Ml-UVs29菌液涂片，图片中提供的是革兰氏染色阳性杆菌，以短杆状杆菌居多，单个或成对。图2是植物乳杆菌Ml-UVs29经固定，并经梯度脱水、梯度置换、喷铂金镀膜后的菌液扫描电镜图，图片中提供的细菌，菌落表面光滑、完整，形态均一，呈短棒状，两头钝圆，无芽孢。(25KV2.50KX10nmKYKY-2800BSEMSN:1341)6、乳酸菌主要发酵特性鉴定6.1产粘性试验采用产粘性培养基接种，37"C培养24h，用接种针挑取菌落直接观察。6.2耐盐性试验将分离的菌种接种到耐盐性试验培养基中，37'C培养24h，用分光光度计650nm测定OD值，以MRS培养基作空白对照，比较其生长情况。6.3耐硝酸盐性试验将分离的菌种接种到耐硝性试验培养基，37"C培养24h，650nm测定OD值，比较其生长情况，以MRS培养基作空白对照。6.4^02产生新鲜培养物于H202产生检测培养基划线，培养5d，观察菌落周围，变澄清者1^202为阳性。6.5产H2S:参照东秀珠(2001)的方法。6.6抑菌试验20mL不加乙酸钠的MRS固体培养基融化后冷却到45。C左右，与指示菌(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)新鲜培养物100pL混匀后倒平板，凝固后用直径为7mm的无菌打孔器在平板上打孔，准确量取40pL的乳酸菌培养液加入小孔中，平板置于4r冰箱扩散，然后放置37t:恒温培养24h,观察小孔周围抑菌圈。6.7蛋白质降解活性试验把蛋白质降解活性试验培养基制成无菌平板，取等量(0.1mL，108CFU/mL)被分离菌株的菌悬液均匀涂布于平板表面，37°C培养48h观察培养结果，若乳粉中酪蛋白被分解时，菌落周围会出现透明圈，即为阳性，否则为阴性。6.8脂肪分解活性试验脂肪分解活性试验培养基制成无菌平板，(O.lmL，108CFU/mL)被分离菌株的菌悬液于平板表面涂布均匀，37"培养48h观察，若该菌株能分解脂肪产生脂肪酸，则在平板上出现红色透明斑点，即为阳性，否则为阴性。6.9菌株致死温度测定方法分别将MRS固体培养基和液体试管培养基在不同温度下(55°C、60°C、65。C等)，水浴预热30min，快速接种处于对数生长期的相应菌株后保温30min，立即放入冰水中使温度下降，37。C恒温培养24h，观察菌株的生长情况。在液体培养基中的情况通过溴甲酚紫的变色来判断。7.10乳酸纸层析试验取大小合适滤纸条，在距底边3cm处划一条线，用干净的毛细玻璃管蘸取少量样液，每隔22.5cm点一个样(其中包括2%乳酸标准样、空白培养液和含菌培养液样)，每点一次样立即用电吹风吹干；将纸放入层析缸内，用展开剂使饱和一段时间，再添加展开剂并开始层析。上行25cm后，取出凉干，喷显色剂，观察样品上是否出现黄色斑点，并与2%乳酸样比较，并计算Rf值，以确定细菌培养液是否含有乳酸。具体结果见表1和表2。表1筛选的乳酸菌菌体形态和主要发酵特性菌株特性MlM2M3M4来源菌体形态产粘性耐盐性(6%)耐硝酸盐'(50mg/kg)产恥产恥2蛋白质降解脂肪分解致死温度rc)抑菌(金黄、大肠)性风干肠短杆，g十，成对出现++60+腊肉球，四联或成对排列g+++55+腊肠细短杆，g+++65+球，四联或成对排列g+++55+表2乳酸与发酵液纸层析的Rf值层析样Rf值7、MRS-X-gal培养基显色反应将分离纯化鉴定后的植物乳杆菌Ml-UVs29接种于MRS-X-gal培养基上，厌氧培养48h，取出平皿放置于4'C中，几分钟后观察菌落显色情况。结果表明菌落在MRS-X-gal平皿上呈淡蓝色。8、质粒检测收集菌泥按常规方法抽提质粒，1.0%琼脂糖凝胶电泳检测植物乳杆菌Ml-UVs29是否存在质粒。检测结果未见质粒。9、遗传特点收集植物乳杆菌Ml-UVs29的菌泥并按常规方法抽提DNA，用乳酸杆菌的特异性引物进行乳酸菌16srDNA的PCR扩增，1.0X琼脂糖凝胶电泳检测PCR0.6380.6360.6360.6360.640陵酉1234乳MMMM产物，可见400bp处有一亮带与目标片段大小相同。实施例2植物乳杆菌Ml-UVs29灌胃对高血脂小鼠的疗效观察。动物模型分为正常对照组(NC)，诱导的高脂对照组(HFC)，低剂量组(LD)，中剂量组(MD)和高剂量组(HD)分别给予植物乳杆菌Ml-UVs29灌胃饲养，观察各组小鼠的体重、病理改变等。结果表明植物乳杆菌Ml-UVs29能够降低实验动物的血脂水平，减轻临床症状，能有效防治由高血脂所引发的各种冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症等心血管疾病。一、实验材料和方法1、实验动物分组和饲养选用雌雄各半的Wistar大鼠60只，6.8周龄，体重180220g，购于长春生物制品公司，词养于清洁级动物房。适应性饲养1周后，按体重分为4组正常对照组(NC)，高脂对照组(HFC),低、中和高剂量组(LD，MD和HD，生理盐水稀释菌液为lxl04CFU/mL、lxl07CFU/mL、lxl01QCFU/mL后备用。实验基础饲料为玉米面30%，豆饼粉20°/。，麦麸25%，面粉16%，鱼粉5%，骨粉2%，酵母粉1%，食盐1%;实验高脂饲料为基础饲料93%，胆固醇1.5%，胆酸钠0.5%，猪油5%。正常对照组(NC)饲喂基础饲料，其余四组均喂高脂饲料。1.2主要试剂植物乳杆菌Ml-UVs29菌悬液，胆固醇，猪胆盐，甘油三酯，TC、TG、HDL-C试剂盒(北京中生生物试剂公司提供)，牛肉粉(北京奥博星生物技术责任有限公司、20040607)、吐温.80(西安富力化学厂、批号021125)、磷酸二氢钾(河南省焦作市化工三厂、批号20010404)、琼脂(北京奥博星生物技术责任有1.3主要仪器生化全自动分析仪，日立7020;高速台式离心机(TGL.16G)上海安宁离心机厂；721分光光度计，上海第三分析仪器厂；组织均漿器；电热恒温水浴锅，上海医疗器械厂；液体快速混合器；JEM-1200EX电子显微镜。2、实验方法2.l实验细菌植物乳杆菌Ml-UVs29如前述方法分离、鉴定所得。菌在MRS培养基中厌氧培养24小时后收集菌落，用分光光度计计数后备用。2.2动物模型人为喂词高胆固醇饲料以制造动物高脂模型。益生菌(植物乳杆菌Ml-UVs29菌液灌胃均从饮用菌悬液开始前2天先开始进行，每只小鼠每天灌胃一次，每次0.3ml/20g。2.3实验分组实验Wistar大鼠，随机分成5组，各组均为12只分组情况如下。A、正常对照组基础饲料，正常饮食无特殊处理。B、阳性高脂对照组用高脂饲料喂养。C、高剂量组用高脂饲料喂养lxl(TCFU/mL菌液灌胃。D、中剂量组用高脂饲料喂养，lxl()7CFU/mL菌液灌胃。E、低剂量组用高脂饲料喂养，lxlOtFU/mL菌液灌胃。2.4测定指标及方法2.4.1血脂测定实验第8周末，空腹10h，采眼框血，测定TC、TG和HDC-C含量，TC、TG、HDL-C均采用北京中生生物试剂公司试剂盒测定。2.4.2肝脂质及肝体比值测定..实验第8周末，经股静脉放血处死动物，立即摘取肝脏，称重。取新鲜肝组织5g制备成肝均浆，用氯仿、甲醇溶液浸泡72h，过滤，65。C蒸干，石油醚溶解定容，测定TC及TG，TC、TG均采用北京中生生物试剂公司试剂盒测定。2.4.3肝组织病理学检查肝脏离体肉眼外观检查后，用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，HE染色。2.4.4血清和组织中LPO测定实验第8周末，空腹10h，取血和心、脑、肝组织应用Riely法测LPO含量。2.4.5全血SOD和GSH-Px测定实验第8周末，空腹10h，取全血测SOD、GSH-Px活力，SOD用亚硝酸盐生成抑制法，GSH-Px用夏奕明等方法。2.5数据统计分析各项数据均采用生物统计SAS(6.12版)软件在计算机上进行方差分析，两组间比较用T检验。3、结果3.1体重改变的影响实验前各组小鼠体重差异无显着性，实验后模型组、高脂阳性对照组、治疗组体重均明显下降，体重差(实验后与实验前的差值)与正常对照组的体重差比较有显着性差异(P<0.05)，治疗六组体重稍有下降，与正常对照组的体重差比较无显着性差异(P>0.05)，对小鼠体重的影响如表3所示。表3对小鼠体重的影响^is)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>a:P<0.05与正常对照组比较；b:P<0.05与低剂量组比较由表3可见，添加菌悬液的的LD组和HD组小鼠体重增长量都比未添加麦胚的NC组高，且都具有明显差异(PO.05);HD组的体重增长量明显比LD组高(P<0.05)。可见随添加菌悬液浓度的增加，体重增加更明显。3.2小鼠死亡情况实验过程中共有15只小鼠死亡，其中不明死亡原因为4只，死于血栓的共11只，分别为模型组1只、阴性对照组1只、阳性对照组1只、治疗二组3只、治疗三组2只、治疗四组3只。3.3对大鼠血脂的影响对大鼠血脂的影响如图3、表4。图3是喂饲不同浓度的植物乳杆菌Ml-UVs29菌液后，大鼠血清TC、TG和HDL-C含量的影响图，图片中提供的为实验前后各实验组鼠血清的指标变化结果图。结合表4、图3所示，HFC组的TC、TG显著高于NC组(P<0.05)，HDL-C显著低于NC组(P<0.05)，表明词喂高脂饲料可导致大鼠高脂血症；LD、MD和HD组TC、TG极显著低于HFC组(PO.Ol)，HDL-C极显著高于HFC组(PO.Ol)。提示菌悬液具有降血脂作用，而且MD组降血脂效果优于LD和HD组。表4对大鼠血清TC、TG和HDL-C含量的影响(〗±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>a:PO.01与正常对照组比较,b:P<0.01与高脂对照组比较.3.4对大鼠肝脂质及肝体比值的影响对大鼠肝脂质及肝体比值的影响如图4、表5所示。图4是喂饲不同浓度的植物乳杆菌Ml-UVs29菌液后大鼠肝体比重影响图，图片中提供的为六个各实验组鼠肝体比重的相差结果图。由于高脂膳食，大鼠肝脏脂质积累，高脂模型组大鼠肝组织中的TC和TG都极显著地高于正常对照组(PO.01),而三组灌胃的大鼠肝组织的TC、TG和正常对照组相比也有显著性差异(P<0.05)，而MD组降低大鼠肝组织中TC、TG含量的效果优于LD和HD组。肝体比值的结果也显示了同一效应的存在，表明能够明显地减少肝脏脂质积累，具有良好的抗脂肪肝的效果。表5对大鼠肝脏中TC、TG含量及肝体比值的影响(〗±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>a:PO.01与正常对照组比乾b:PO.05与高脂对照组比较.3.5肝组织病理学检査肉眼检查高脂模型大鼠肝脏体积大，包膜紧张，色泽黄腻，呈典型肝脂变；饲喂的大鼠肝脂变有不同程度的减轻，其中HD组最轻，且部分肝脏外观接近正常。镜检附图5是正常对照组大鼠肝组织切片图，图片中提供的是正常对照组鼠肝脏的解剖切片图(HEx200)，无异常现象；附图7是高脂模型组大鼠肝组织切片图，图片中提供的是正常对照组鼠肝脏的解剖切片图(HEx200)，高脂模型组大鼠肝脏呈弥漫性肝脂肪变性，以肝小叶周边带病变最为严重，肝细胞明显胀大，胞浆内有大量脂滴，并出现点状和病灶性坏死区。附图6、附图8、附图9分别是高剂量组，中剂量组和低剂量组的鼠肝组织切片图，图片中提供的是三个剂量对照组鼠肝脏的解剖切片图(HE"OO)。比较可以看出，饲喂菌液的大鼠肝脏病变较轻，尤其HD组，肝细胞排列、形态几乎与正常组无明显差异。这一结果与肝脏脂质测定结果相吻合。3.6对大鼠血清和组织中LPO含量的影响对大鼠血清和组织中LPO含量的影响如表6所示，高脂血症大鼠在血脂升高的同时，血清和组织中LPO的含量也显著升高(P<0.05)。能显著降低实验性高脂血症大鼠血清和组织中LPO含量(PO.Ol)，且组织中LPO含量在LD和MD组间有显著差异(P<0.05)。表6对大鼠血清和组织中LPO含量的影响(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>a:PO.01与正常对照组比较,b:PO.05与高脂对照组比较，c:PO.01与高脂对照组比较,d:P<0.05与低剂量对照组比较.3.7对大鼠全血SOD和GSH-Px活性的影响对大鼠全血SOD和GSH-Px活性的影响如表7所示，高脂饲料可显著降低大鼠全血SOD和GSH-Px的活性(PO.05),LD组、MD组和HD组SOD活性显著高于HFC组(PO.05,PO.Ol)，使SOD活性分别提高了20.1%、50.7%和51.1%，LD组、MD组和HD组GSH-Px活性显著高于HFC组(P<0.05)，使GSH-Px活性分别提高了13.9%、18.5%和23.9%。表明能够提高大鼠全血中SOD和GSH-Px的活性，具有显著增强大鼠抗氧化能力，就SOD来说，HD组效果明显优于LD组。表7对大鼠全血SOD和GSH-Px活性的影响G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>a:P〈0.05与正常对照组比较，b:P<0.05与高脂对照组比较,c:PO.01与高脂对照组比较.以上结果说明，作为高脂血症重要指标的血清TC、TG含量其变化直接反应着该菌悬液能能显著提高实验性高脂血症大鼠血清HDL-C含量，同时，显著降低血清TC和TG含量，一般情况及肠粘膜病理检查与正常对照组没有差异。权利要求1、一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)M1-UVs29，其保藏号为CGMCCNo.2591。2、根据权利要求1所述的发酵植物乳杆菌a""ok^7/wp/朋ton^〉Ml-UVs29，其特征在于所述的发酵植物乳杆菌acto6ac/〃M//a"ton^)M卜UVs29用于治疗心血管疾病。3、根据权利要求2所述的发酵植物乳杆菌(aa"o6ad//^p/a"ton/An)Ml-UVs29，其特征在于所述的发酵植物乳杆菌Ml-UVs29用于治疗由胆固醇蓄积所引发的冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症。4、根据权利要求1所述的发酵植物乳杆菌(丄a"o6a"'〃W5p/""ton/m)Ml-UVs29，其特征在于所述发酵植物乳杆菌Ml-UVs29用于生产饮料，所生产的饮料产品中含有发酵植物乳杆菌a""oto"7/usp/a"/"n/w)Ml-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物。5、根据权利要求1所述的发酵植物乳杆菌(Z^cto6aa'〃wspfo"ton/m)Ml-UVs29，其特征在于所述发酵植物乳杆菌a""o办ac/W船户/朋to^T7)Ml-UVs29用于生产保健品，所生产的保健品产品中含有发酵植物乳杆菌aacto&c〃/船；/a对an/w)Ml-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物。6、根据权利要求1所述的发酵植物乳杆菌a"ctoZ^"/wp/""tow)Ml-UVs29，其特征在于所述发酵植物乳杆菌a"cto^cf//^jD/a"torwm)Ml-UVs29用于生产食品添加剂，所生产的食品添加剂产品中含有发酵植物乳杆菌a"cto6acz'〃附//a"fanwOMl-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物。全文摘要本发明公开了一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)M1-UVs29，其保藏号为CGMCCNo.2591。植物乳杆菌M1-UVs29可从各种来源的发酵肉制品，如腊肉、腊肠、风干肠、宣威火腿等中分离，诱变优化后得到，是一种诱变分离的全新菌株，安全性优越、毒副作用小，能减轻冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症等典型临床症状，能够安全、有效地治疗由高血脂所引发的各种冠心病、动脉粥样硬化、高脂血症等心血管疾病。将植物乳杆菌M1-UVs29用于饮料、保健品如乳制品、发酵乳、酸豆奶等和食品添加剂的生产，所得饮料、保健品、食品添加剂的产品中含有发酵植物乳杆菌M1-UVs29，或其代谢产物、细胞碎片或分泌物，可有效的降解人体自身蓄积和食品本身的胆固醇。文档编号A61P3/06GK101402923SQ200810137119公开日2009年4月8日申请日期2008年9月11日优先权日2008年9月11日发明者于长青,笛姚,张丽娜,颖王,王长远申请人:于长青