专利名称：：3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物及其制备和用途的制作方法
技术领域：
：本发明属有机化合物制备，主要涉及3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物及制备方法和在抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：Combretastatins是由南非植物Cow&e似wca#ram的根皮或茎中提取分离的具抗肿瘤活性的二苯乙烯类化合物。自1982年始相关的化合物相继被发现，CombretastatinA-4(CA-4)是其中最有效的抗肿瘤成分之一。机制研究表明，其具有良好的抑制微管蛋白聚集和选择性抑制肿瘤血管增生的活性，因此引起了人们的极大关注。但该化合物由于水溶性差的原因，体内抗肿瘤活性较弱，故将CA-4B环的3-位羟基进行磷酸化后制得其水溶性前药CA-4磷酸二钠盐(CA-4P)，其体内抗肿瘤活性大大提高，2006年被FDA批准为罕见病的治疗药物，用于治疗卵巢癌。目前，CA-4P作为肿瘤血管生成抑制剂正在美国等国家进行II期临床试验。在以CA-4为先导物进行结构修饰的过程中，发现用构象限制的五元环(咪唑啉-2-酮)替代原结构中的乙烯连接链，所得到的丛芳基-3-芳基-4-芳基-咪唑-2-酮-1-甲酰胺类化合物(见中国专利ZL200410052976.X中公开的内容)显示了较强的抑制肿瘤细胞增殖的活性，这为我们后续的研究提供了新的方向。
发明内容本发明的目的是提供一类结构新颖的未见文献报道的含有3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物，本发明是将5-胺基异噁唑环替代CA-4结构中乙烯连接链，作为构像限制性基团，合成了一系列的3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物，本发明提供的3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物结构通式为其中(1)Ar!为无取代、单取代、二取代或三取代的苯环:单取代苯环上的取代基为氟、氯、溴、硝基、含1至3个碳原子的直链或支链的垸氧基中的一种，二取代苯环上的取代基为3-羟基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羟基、3，4-二甲氧基、3-苄基-4-甲氧基、3-硝基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一种，三取代苯环上的取代基为4-羟基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一种；(2)Ar2为无取代、单取代、二取代或三取代的苯环或芳杂环单取代苯环上的取代基为氟、氯、溴、含1至3个碳原子的直链或支链的烷氧基中的一种，二取代苯环上的取代基为3-羟基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羟基、3，4-二甲氧基、3-节基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一种，三取代苯环上的取代基为4-羟基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一种，芳杂环为噻吩、吡啶、呋喃或吡咯中的一种；(3)&和112相同或不同，选用氢、甲基、乙基或含l-4个碳原子的酰基。本发明的另一个目的是提供3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物的制备方法，通过以下步骤实现本发明的合成路线根据上述反应式可制得目标产物V和VI。化合物I(取代的芳香乙腈)可按文献方法(Zhong，R.Q.etal，中国医药工业杂志2005，36，328;Sundaresan，A.K.etal，OrganicLetters,2007，9，3575)制得，化合物II(取代的芳香羧酸酯衍生物)可按文献方法(Elsinghorst，P.W.etal，JMed.Chem.2006，49，7540)制得。具体制备步骤为(1)在极性溶剂中，碱性条件下，化合物i和化合物n反应生成化合物ni，反应温度为20—9(TC，所得产物经重结晶可得纯品。极性溶剂选用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、四氢呋喃或二氯甲垸中的一种，碱性物质选用碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、叔丁醇钠、氢化钠、三乙胺或吡啶中的一种；(2)化合物ni在极性溶剂中与盐酸羟胺縮合得到化合物iv，反应温度为20—12(TC，所得产物经重结晶可得纯品。极性溶剂选用N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇或异丙醇中的一种；(3)化合物IV与冰醋酸反应10—24小时，经柱层析分离可得到化合物V和化合物VI的纯品。本发明的又一个目的是提供3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。初步的药理实验发现它们对多种肿瘤细胞株，包括K562，ECA-109，A549，SMMC-7721，PC-3等均有较好的体外抑制增殖作用，其中IVa、IVi和VIa作用尤为突出，IVa对上述细胞的IC5o值在0.02-4.28吗/ml之间，IVi对上述细胞的IC5。值在0.14-9.39pg/ml之间，VIa对上述细胞的ICs。值在0.03-0.60[xg/ml之间。流式结果显示IVa可使SMMC-7721细胞终止在G2/M期，且阻滞活性较高；VIa可使SMMC-7721细胞终止在G2/M期，且阻滞活性比CA-4更高，并具有诱导细胞凋亡的作用。本发明的特点是以天然产物CA-4为先导化合物，将5-胺基异噁唑环替代CA-4结构中乙烯连接链得到的3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物。这是一类结构全新的化合物，初步的药理活性筛选试验表明这些化合物均具有较好的抗肿瘤活性，有些化合物具有诱导细胞凋亡的作用。本发明设计合理，制备简单，适于实用。具体实施例方式本发明结合实施例作进一步的说明。以下的实施例是说明本发明的，而不是以任何方式限制本发明。实施例l、2-(4-甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(IIIa)将0.15g(1mmol)4-甲氧基苯乙腈和10mL无水四氢呋喃投入二颈瓶中，搅拌溶解，加入0.058g(2.4mmo1)氢化钠，滴加0.27g(1.2mmol)3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯和20mL无水四氢呋喃混合液，滴毕，加热回流反应5小时(TLC监测)。加水停止反应，用二氯甲烷提取，弃去有机层。水层加3M盐酸酸化至沉淀不再产生，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥。粗品用乙醇重结晶，得到类白色固体0.27g，收率78%;熔点90-92°C。JHNMR(400MHz，CDC13)S3.78(s,3H，OCH3)，3.85(s，6H，OCH3x2),3.90(s，3H，OCH3),5.56(s,1H,//C-CN),6.91(d,2H,/=8.8Hz,Ar-H),7.18(s，2H,Ar邻，7.35(d,2H,/=8.8Hz，Ar-H)。实施例2、2-(3，4-二甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(mb)操作过程与实施例l相同，只是用3，4-二甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率71%;熔点159-160°C。!HNMR(400MHz,CDC13)53.88(s,6H,OCH3x2)，3.89(s,6H，OCH3x2)，3.92(s，3H,OCH3),5.48(s，1H,//C-CN),6.88(d，1H,/=8,4Hz，Ar画H)，6.92(s,1H,Ar誦H)，6.99(d，1H，《/=8.4Hz,Ar-H),7.21(s,2H，Ar-H)。实施例3、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4,5-三甲氧基苯基)-丙腈(1仏)操作过程与实施例l相同，只是用3，4，5-二甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率68%;熔点174-176。C。'HNMR(400MHz,CDC13)53.82(s，6H,OCH3x2),3.83(s,6H，OCH3x2),3.90(s,3H，OCH3)，5.44(s，1H，T/C画CN)，6.62(s,2H,Ar-H),7.19(s,2H,Ar隱H)。实施例4、2-(4画氯苯基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(IIId)操作过程与实施例l相同，只是用4-氯苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率80%;熔点148-150°C。!HNMR(400MHz,CDC13)S3.65(s,6H，OCH3x2),3.83(s，3H,OCH3),5.29(s，1H,i/C-CN)，6.52(s，2H，Ar画H),7.23(d,2H，《/=8.4Hz,Ar-H),7.33(d，2H，《/=8.4Hz,Ar-H)。实施例5、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3-苄氧基-4-甲氧基苯基)-丙腈(IIIe)操作过程与实施例l相同，只是用3-苄氧基-4-甲氧基苯甲酸甲酯替代3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯，3，4，5-三甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率54%;熔点135-136°C。&NMR(400MHz,CDC13)S3.83(s，9H，OCH3x3)，3.93(s，3H,OCH3)，5.15(s,2H，CH2)，5.48(s，1H，T/C-CN)，6.60(s,2H,Ar-H),6.89(d，1H,/=8.4Hz，Ar誦H),7.32-7.45(m,5H，Ar陽H)，7.56-7.61(m,2H，Ar-H)。实施例6、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-丙腈(IIIf)将化合物IIIe0.45g(lmmol)，10e/。钯碳0.1g以及25mL四氢呋喃依次投入到反应瓶中，氢气饱和，室温反应12小时(TLC监测)。抽滤，滤液减压浓縮，残余物以硅胶柱层析纯化，以石油醚乙酸乙酯(h2)为洗脱剂，得到灰白色固体0.18g，收率47%;熔点53-55°C。^NMR(400MHz，CDC13)53.82(s，3H，OCH3)，3.84(s，6H,OCH3x2)，3.94(s，3H，OCH3),5.49(s,1H,//C-CN),6.55(s,2H,Ar-H),6.88(d,1H,J=8.8Hz,Ar-H)，7.52(s,1H,Ar-H),7.56(d,1H，/=8.8Hz,Ar邻。实施例7、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙腈(IIIg)操作过程与实施例l相同，只是用3，4-二甲氧基苯甲酸甲酯替代3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯，3，4，5-三甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率72%;熔点123-124。C。JHNMR(400MHz,CDC13)53.78(s，3H，OCH3),3.80(s,6H,OCH3x2),3.86(s,3H,OCH3),3.90(s，3H,OCH3),5.53(s,1H，//C-CN),6.60(s,2H,Ar國H),6.84(d，1H,/=8.8Hz，Ar-H),7.47(s,1H,Ar-H),7.56(d,1H,J=8,8Hz,Ar-H)。实施例8、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(4-甲氧基苯基)-丙腈(IIIh)操作过程与实施例l相同，只是用4-甲氧基苯甲酸甲酯替代3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯，3，4，5-三甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率72%;熔点94-96°C。JHNMR(400MHz,CDC13)S3.83(s，3H,OCH3),3.85(s,6H，OCH3x2),3.87(s,3H，OCH3),5.48(s，1H，7/C-CN),6,62(s，2H,Ar-H),6,94(d，2H，/=8.8Hz,Ar-H),7.95(d，2H，《/=8.8Hz,Ar誦H)。实施例9、2-(3-噻吩基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(111》操作过程与实施例l相同，只是用3-乙腈噻吩替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固体，收率75%;熔点128誦130。C。JHNMR(400MHz,CDC13)S3.87(s，6H,OCH3x2)，3.93(s,3H,OCH3),5.59(s,1H，TfC-CN)，7.11(dd，1H,/=1.2，4.8Hz，ThiopheneH)，6.58(s,2H，Ar-H),7.20-7.22(m，2H,ThiopheneH)。实施例IO、4-(4-甲氧基苯基)-3-(3,4，5-三甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVa)将0.34g(1mmol)化合物IIIa和0.07g(1mmol)盐酸羟胺依次投入到反应瓶中，加入5mL乙醇，加热反应2小时(TLC监测)。反应完毕，减压浓縮，得黄色固体残留物，残留物用水/乙醇(60%)重结晶，得到白色固体0.23g，收率:65%;熔点:157-159。C。'HNMR(400MHz，CDC13)S3.68(s,6H,OCH3x2),3.83(s,3H,OCH3),3.86(s,3H,OCH3),4,51(brs，2H，NH2)，6.72(s,2H，Ar誦H),6.94(d，2H,8.8Hz，Ar-H)，7.19(d，2H，《/=8.8Hz,Ar陽H)。实施例ll、4-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVb)操作过程与实施例10相同，只是用化合物nib替代nia，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率59%;熔点:159-160。C。^NMR(400MHz,CDC13)S3.68(s，6H,OCH3x2),3.76(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H,OCH3)，3.90(s，3H，OCH3),4.57(brs,2H,NH2),6.73(d,1H,/=2.0Hz，Ar-H)，6.75(s，2H，Ar-H),6.84(dd，1H,/=2.0,8.0Hz,Ar-H)，6.91(d,1H，《/=8.0Hz赁Ar陽H)o实施例12、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVc)操作过程与实施例10相同，只是用化合物nie替代IIIa，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率47%;熔点:160-162。C。NMR(400MHz,CDC13)S3.70(s，6H，OCH3x2),3.78(s,6H，OCH3x2)，3.86(s,6H,OCH3x2)，4.60(brs,2H,NH2),6.47(s,2H，Ar國H),6.76(s,2H,Ar邻。实施例13、4-(4-氯苯基)-3画(3，4，5-三甲氧基苯基)-异噁唑-5誦胺(Wd)操作过程与实施例10相同，只是用化合物IIId替代IIIa，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率70%;熔点:170-172。C。&NMR(400MHz，CDC13)S2.84(brs，2H，NH2),3.68(s,6H,OCH3x2),3.84(s,3H,OCH3),6.64(s，2H，Ar-H),7.18(d，2H,J=8.8Hz，Ar-H)，7.34(d，2H,/=8.8Hz,Ar-H)。实施例14、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-苄氧基-4-甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVe)操作过程与实施例10相同，只是用化合物nie替代IIIa，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率48%;熔点:156-168T。!HNMR(400MHz,CDC13)S3.74(s,6H，OCH3x2),3.87(s,3H,OCH3),3.88(s,3H,OCH3),4.57(brs,2H，NH2)，4.98(s,2H，CH2),6.47(s，2H，Ar-H)，6.83(d，1H，J=8.4Hz，Ar-H),7.07(d，1H，《/=8.4Hz，Ar邻，7.11(s，1H，Ar-H),7.28-7.33(m,5H,Ar画H)。实施例15、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVf)操作过程与实施例10相同，只是用化合物ni潜代nia，残余物以硅胶柱层析纯化得灰白色固体，收率36%;熔点:131-133。C。!HNMR(400MHz,CDC13)S3.86(s，6H,OCH3x2),3.92(s,6H，OCH3x2),6.49(s,2H,Ar-H)，6.76-6.77(m，2H,Ar-H),7.39-7.40(m,1H,Ar誦H)。实施例16、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVg)操作过程与实施例io相同，只是用化合物iiig替代nia，残余物以硅胶柱层析纯化得亮黄色固体，收率58%;熔点:132-134。C。'HNMR(400MHz，CDC13)53.75(s，9H，OCH3x3),3.86(s，3H,OCH3)，3.88(s,3H,OCH3)，4.61(brs，2H，NH2),6.46(s,2H，Ar-H),6.80(d，1H，/=8.0Hz,Ar-H)，7.04(dd，1H，J=1.6,8.0Hz,Ar國H)，7.10(d，1H,/=1.6Hz,Ar-H)。实施例17、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IVh)操作过程与实施例io相同，只是用化合物nih替代nia，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率63%;熔点:146-148。C。!HNMR(400MHz，CDC13)S3.72(s,6H，OCH3x2)，3.82(s，3H,OCH3),3.88(s，3H，OCH3)，4.60(brs，2H，NH2)，6.41(s，2H,Ar-H)，6.87(d，2H，/=8.8Hz,Ar-H),7.44(d，2H，/=8.8Hz,Ar邻。实施例18、4-(3-噻吩基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-异噁唑-5-胺(IYj)操作过程与实施例io相同，只是用化合物nii替代ma，残余物以硅胶柱层析纯化得白色固体，收率68%;熔点:146-147。C。'HNMR(400MHz，CDC13)33.70(s，6H,OCH3x2),3.85(s,3H，OCH3)，4.60(brs,2H,NH2),6.73(s,2H，Ar-H)，6.95(dd,1H,/=1.2,4.8Hz,ThiopheneH)，7.18-7.19(m，1H,ThiopheneH),7.37-7.39(m,1H，ThiopheneH)。实施例19、N-(4-(4-甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Va)N-乙酰基-N-(4-(4-甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Via)将0.71g(2mmol)化合物IVa和3.3mL(30mmol)冰醋酸投入反应瓶中，搅拌溶解，然后加入0.03mL吡啶，室温反应24小时(TLC监测)。停止反应，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机层，有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压回收溶剂后，得到黄褐色固体残留物，残余物以硅胶柱层析纯化，以石油醚乙酸乙酯(2:l)为洗脱剂，分别得淡黄色固体Va0.49g，收率62%，熔点129-131°C;淡黄色固体VIa0.23g，收率27%，熔点119-121°C。Va:'HNMR(400MHz,CDC13)52.19(s，3H,OC國CT^),3.64(s，6H,OCH3x2)，3.80(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，6.68(s，2H，Ar邻，6.92(d,2H，/=8.4Hz,Ar画H),7.16(d，2H,/=8.4Hz,Ar-H)，7.49(brs，1H,OC-M/);VIa:&NMR(400MHz，CDC13)52.34(s,6H,0=C-CH3x2),3.68(s,6H，OCH3x2)，3.85(s,3H,OCH3),3.88(s,3H,OCH3),6.75(s,2H，Ar画H)，6.94(d，2H,/=8.8Hz,Ar-H)，7.12(d，2H，/=8.8Hz,Ar画H)。实施例20、N-(4-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vb)N-乙酰基-N-(4-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(VIb)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVb替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化分别得白色固体Vb，收率63%，熔点137-139°C;白色固体VIb，收率25%，熔点139-140°C。Vb:!HNMR(400MHz，CDC13)S2.20(s，3H，0=C-0/3),3.66(s，6H,OCH3x2),3.75(s，3H,OCH3),3.84(s,3H,OCH3),3.89(s,3H，OCH3),6.72(s,2H,Ar-H)，6.76(d，1H,/=2.0Hz，Ar-H),6.82(dd，1H，2.0，8.4Hz,Ar-H)，6.89(d,1H,/=8.4Hz,Ar-H),7.69(brs,1H,OC-MZ)。VIb:NMR(400MHz,CDC13)S2.21(s，6H,OC-CH3x2),3.67(s，6H，OCH3x2)，3.76(s,3H,OCH3),3.86(s,3H,OCH3)，3.90(s，3H,OCH3)，6.74(s，2H，Ar-H),6.78(d，1H，■/=2.0Hz，Ar-H),6.85(dd,1H，2.0，8.4Hz，Ar-H)，6.91(d，1H，/:8.4Hz，Ar-H)。实施例21、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vc)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVe替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率55%;熔点160-162。C。，HNMR(400MHz，CDC13)52.24(s,3H，OC國Ci^),3.67(s，6H，OCH3x2)，3.75(s,6H,OCH3x2)，3.85(s,6H,OCH3x2),6,48(s,2H，Ar-H),6.73(s,2H,Ar-H):7.81(brs,1H，OC-,。实施例22、N-(4-(4-氯苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vd)N-乙酰基-N-(4-(4-氯苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(VIC)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVd替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化分别得白色固体Vd，收率57%，熔点162-164°C;白色固体VIc，收率21%，熔点165-166°C。Vd:NMR(400MHz,CDC13)52.18(s,3H,0=C-OT3)，3.66(s,6H,OCH3x2),3.86(s,3H，OCH3)，6.63(s,2H，Ar画H)，7.20(d,2H，/=8.8Hz，Ar-H)，7.37(d，2H，/=8.8Hz，Ar邻，7.90(s,1H，0=C-,。VIC:&NMR(400MHz,CDC13)S2.21(s,6H,OC-C7/3x2),3.67(s,6H,OCH3x2)，3.86(s,3H,OCH3)，6.63(s，2H，Ar-H),7.20(d,2H,J=8.8Hz，Ar-H),7.39(d，2H，《/=8.8Hz，Ar-H)。实施例23、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-苄氧基-4-甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Ve)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVe替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化得白色固体，收率50%，熔点178-180°C。*HNMR(400顧z，CDC13)S2.21(s，3H，OCH3)，3.72(s,6H,OCH3x2),3.87(s,6H，OCH3x2)，4.96(s，2H，CH2),6.41(s，2H,Ar画H),6.82(d，1H,/=8.4Hz,Ar-H)，7.04(d，1H,/=8.4Hz,Ar画H)，7.08(s,1H，Ar隱H),7.26-7.32(m,5H,Ar-H),7.83(s,1H，0=C-M/)。实施例24、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vf)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IV潜代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化得亮黄色固体，收率46%,熔点238-240°C。NMR(400顧z，CDC13)S2.45(s,3H，OC-C7/3)，3.62(s，6H,OCH3x2)，3.77(s,6H,OCH3x2),6.20(s，2H,Ar-H)，6.51-6.53(m，2H,Ar-H)，6.69(s，1H,Ar-H),7.86(s,1H,OC-夠。实施例25、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vg)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVg替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化得白色固体，收率49%，熔点168-170°C。^NMR(400MHz,CDC13)S2.25(s,3H,0=C-C7/3),3.73(s,9H,OCH3x3),3.86(s,3H，OCH3)，3.87(s,3H,OCH3)，6.44(s,2H,Ar画H)，6.79(d,1H，《/=8.0Hz，Ar-H),7.01(dd，1H,/=1.6,8.0Hz,Ar-H),7.07(d，1H,/=1.6Hz，Ar-H)，7.45(brs,lH,0=C-M/)。实施例26、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vh)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVh替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化得黄色固体，收率65%;熔点175-177°C。&NMR(400MHz,CDC13)S2.21(s，3H，0=C-0/3),3.70(s,6H,OCH3x2)，3.80(s，3H,OCH3),3.86(s,3H,OCH3),6.41(s，2H，Ar-H)，6.85(d,2H，《/=8.4Hz,Ar-H)，7.39(d,2H，《/=8.4Hz，Ar-H)，7.88(brs,1H,OC-MZ)。实施例27、(N-(4-(3-噻吩基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(Vi)N-乙酰基-N-(4-(3-噻吩基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(VId)操作过程与实施例19相同，只是用化合物IVi替代IVa，残余物以硅胶柱层析纯化分别得黄色固体Vi，收率55%，熔点132-134°C;白色固体VId，收率36%，熔点193-195°C。Vi:NMR(400MHz,CDC13)S2.24(s，3H，0=C-C//3)，3.70(s，6H，OCH3x2)，3.83(s，3H,OCH3)，6.72(s，2H,Ar-H)，6.98(dd，1H，/=1.2,4.8Hz，ThiopheneH),7.29-7.30(m,1H，ThiopheneH)，7.39-7.41(m，1H,ThiopheneH),7.51(s,1H,0=C-M/)。VId:&丽R(400MHz,CDC13)S2.26(s,6H，0=C-C//3x2),3.71(s,6H,OCH3x2)，3.88(s，3H，OCH3)，6.74(s,2H，Ar-H),6.99(dd，1H,/=1.2,4.8Hz,ThiopheneH)，7.30-7.31(m，1H，ThiopheneH),7.42-7.46(m，1H,ThiopheneH)。实施例28、抗肿瘤生物活性测试方法肿瘤细胞离体培养选取肿瘤细胞K562，ECA-109,A549,SMMC-7721,PC-3于37。C、5%C02细胞培养箱中孵育，待细胞密度长到70-90%时传代(贴壁细胞用Puck'sEDTA消化后传代)，用于以后实验所需。MTT法测定3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物对不同瘤株的体外抑制作用将化合物用DMSO溶解，稀释;将处于对数生长期的上述肿瘤细胞，以2xl04个/mL接种于96孔培养板中，每孔加入化合物2pl，终浓度为12.0pM，6.0pM，3.0jiM，1.5pM，共同于37°(:、5%(:02细胞培养箱中孵育48小时，以DMSO(P/。)为空白对照。每孔加入浓度为2.5mg/mL的MTT溶液20^iL，继续培养4h，吸去上清液，每孔加入100^iL的DMSO，摇匀，用酶标仪于570nM波长下测定各孔的吸光度(OD值)，所得数据用于计算IQ。。所得结果见表l。从表l可以看出，(1)所有的22个二芳基异噁唑类化合物对所测试的肿瘤细胞株均显示了较强的抑制活性。同样，该类化合物对白血病细胞株K562具有更强的选择抑制作用(IC5Q最小值为0.01pg/mL);(2)其中化合物IVa、IVi和VIa的体外抗肿瘤作用尤为突出，IVa对上述细胞的IC5o值在0.02-4.28jig/ml之间，IVi对上述细胞的ICso值在0.14-9.39pg/ml之间，VIa对上述细胞的IC5o值在0.03-0.60吗/ml之间；(3)流式结果显示IVa可使SMMC-7721细胞终止在G2/M期，且阻滞活性较高；VIa可使SMMC-7721细胞终止在G2/M期，且阻滞活性比CA-4更高，并具有诱导细胞凋亡的作用。总之，该类化合物有较好的抗肿瘤应用前景，因而具进一步的开发价值。表1合成的22个化合物对不同肿瘤细胞株的IC5Q(ng/ml)值<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>"nd"表示未测定IC5o值。权利要求1.一种3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物，其特征是具有以下结构通式其中(1)Ar1为无取代、单取代、二取代或三取代的苯环单取代苯环上的取代基为氢原子、氟、氯、溴、硝基、含1至3个碳原子的直链或支链的烷氧基中的一种，二取代苯环上的取代基为3-羟基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羟基、3，4-二甲氧基、3-苄基-4-甲氧基、3-硝基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一种，三取代苯环上的取代基为4-羟基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一种，(2)Ar2为无取代、单取代、二取代或三取代的苯环或芳杂环单取代苯环上的取代基为氟、氯、溴、含1至3个碳原子的直链或支链的烷氧基中的一种，二取代苯环上的取代基为3-羟基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羟基、3，4-二甲氧基、3-苄基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一种，三取代苯环上的取代基为4-羟基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一种，芳杂环为噻吩、吡啶、呋喃或吡咯中的一种；(3)R1和R2相同或不同，选用氢、甲基、乙基或含1-4个碳原子的酰基。全文摘要本发明提供一种3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物，是以天然产物CA-4为先导化合物，将5-胺基异噁唑环替代CA-4结构中乙烯连接链，作为构像限制性基团，合成了一系列的3，4-二芳基异噁唑-5-胺基衍生物。药理实验证实对多种肿瘤细胞株均有较好的体外抑制增殖作用，有些化合物具有诱导细胞凋亡的作用，可在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明设计合理，制备简单，适于实用。本发明的结构通式为右式。文档编号A61P35/00GK101407500SQ20081016206公开日2009年4月15日申请日期2008年11月7日优先权日2008年11月7日发明者何俏军,滔刘,虹朱,波杨,胡永洲,娜薛申请人:浙江大学