糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物、其制备方法及用途的制作方法

专利名称：：糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物、其制备方法及用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药物领域，具体涉及一类糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物(I)，还公开了它们的制备方法、含有这些化合物或其药学上可接受的盐或酯的药用组合物，以及在制备抗肿瘤药物中的用途。I
背景技术：
肿瘤是一种常见的重大疾病，严重威胁人类的身体健康和生命安全。临床上虽有多种抗肿瘤药物，但由于肿瘤病理因素的复杂性、肿瘤的耐药性及抗肿瘤药物的毒副作用等原因，现有的药物仍然不能满足临床需要。因此，寻找疗效突出、作用持久和毒副作用低的新型抗肿瘤药物具有重要意义。一氧化氮(简称NO，下同)作为体内重要的信使物质或效应分子，参与多种生理和病理反应。大量实验证明，NO在肿瘤发生、肿瘤血管生成、血管功能、肿瘤发展以及转移过程中具有双向调节作用。这种促瘤和抗瘤双重作用取决于一氧化氮合酶(简称NOS，下同)亚型的表达、活性和分布，NO释放的浓度和持续时间，细胞对NO的敏感性等。通常认为，体内持续低浓度的NO(无论是内源性的还是外源性的)可抑制细胞凋亡，对细胞具有保护和促其生长的作用；体内高浓度的NO可产生细胞毒性，诱导肿瘤细胞凋亡，阻止肿瘤细胞的扩散和转移。NO供体是一类可在体内经酶或非酶作用释放出一定量NO的化合物。文献报道，一些NO供体可特异性地于肿瘤细胞内释放出高浓度的NO，靶向性地杀灭肿瘤细胞(参见张奕华，田季德，彭司勋.靶向作用的一氧化氮供体及其相关药物.药学学报，2006，41(6):481-486)。齐墩果酸(简称OA，下同)广泛存在于植物界，它对四氯化碳及其它毒物诱导的啮齿动物肝中毒和慢性肝硬化具有肝保护作用。研究发现，OA全身给药后主要在肝脏分布和代谢。我国临床上将OA作为中药保肝药，主要用于治疗肝炎、肝硬化等慢性肝脏疾病。近年来研究发现，OA还能抑制肿瘤新生血管生成，阻止肿瘤细胞的侵袭和转移等作用(参见OvesnaZ，VachalkovaA，HorvathovaK,dPentacyclictriterpenoicacids:newchemo-protectivecompounds.iVeop/a训a，2004，51(5):327-333)。然而，OA存在生物利用度低、疗效不理想等缺点。具有下列结构式的3-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1，2,5-口恶挫-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}齐墩果酸(CAS:875753-25-6，简称ZCVI4，下同)，ZCVI4及其它一氧化氮供体型OA衍生物已在2005年3月16日公告的中国专利CN1594354A中提及，该专利是关于使用ZCVI4及其它一系列一氧化氮供体型OA衍生物治疗肝炎、肝硬化和肝肿瘤。该专利在此将全面引作参考。
发明内容本发明以ZCVI4为先导化合物，利用ZCVI-4结构中的OA片段28位羧基与不同的糖基或取代的糖基偶联，设计、合成一系列结构新颖的糖基化一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物，用于治疗哺乳动物特别是人的肿瘤，包括给予上述哺乳动物以抗癌活性剂量的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐或酯。本发明还公开了一种新型抗肿瘤药物的可工业化生产的制备方法。本发明涉及下面式(I)所示的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物或其药学上可接受的盐或酯I其中，R代表糖基或取代糖基。上面式(I)所示化合物中，所述的R代表葡萄糖基，半乳糖基，葡萄糖醛酸基，氨基葡萄糖基，2-脱氧葡萄糖基，2-脱氧半乳糖基，木糖基，阿拉伯糖基，果糖基，鼠李糖基，核糖基，甘露糖基，山梨糖基，蔗糖基，麦芽糖基，纤维二糖基，乳糖基，棉子糖基，葡聚糖三糖基，以及如下式(n)或式(m)所表示的基团其中所述r的各种糖基为糖类化合物脱掉任何位置上的羟基以后形成的基团。本发明的一种优选的实施方案是在上述的化合物中，其r代表的各种糖基为糖类化合物脱掉i位上的羟基以后形成的基团。本发明的一种优选的实施方案是在上述的化合物中，其r为葡萄糖基，半乳糖基，葡萄糖醛酸基，2-脱氧半乳糖基，2-脱氧葡萄糖基，乳糖基，麦芽糖基。本发明的进一步优选方案是在上述方案使用的化合物中，其r为半乳糖基。.本发明的更进一步优选方案是在上述方案使用的化合物中，其r为半乳糖脱掉1位羟基后形成的基团。本发明涉及的另外一个方面是式(I)表示的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的应用。如上所述的肿瘤疾病为人肿瘤。如上所述的如式(I)表示的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤疾病为肝肿瘤、肝硬化、肺癌、食管癌、胃癌、大肠癌、结肠癌、乳腺肿瘤、鼻咽癌、宫颈癌、淋巴瘤、前列腺肿瘤和白血病。本发明还涉及一种治疗肿瘤疾病的药物组合物，其特征在于包含式(I)所示的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯的一种或多种作为有效成分。另外还可以含有药学上可接受的载体，如硬脂酸镁、亚硫酸氫钠、十二甲基纤维素钠、微粉化硅胶等。本发明中，在给予哺乳动物式(I)化合物及其药学上可接受的盐或酯，以及这些化合物的溶剂化物(这里统称为"治疗药物")时，可以单独使用，或者最好是按照规范的制药方法将其与适于药用的载体或稀释剂配合后使用。给药方式可以经各种途径，包括口服，非胃肠道给药或局部给药。这里所指的非胃肠道给药包括但并不限于静脉注射，肌肉注射，腹腔注射，皮下注射和透皮给药。.本发明部分优选的式〔I)所示的化合物具体结构及代号如下广SPhS02v_^O.-o'VN乂ZCVI4-1HOOC28HO一O-^ZCVWH〇O〇280"^ZCVI4HOZCVI4-5oZCVI4-6ZCVI4-90O^ZCVW丌HOOHOZCV14-10280丫ZCVI4OHOZCVW-11O0上ZCVI428ZCVI4-12HO,OHHOZCVI4ZCVI4-13本发朋的式.(I)所示的化合物的合成方法如下在吡卩定乙酸酐的作用下将糖分子中的羟基进行乙酰化保护，接着在红磷/溴水作用下进行l位的溴代，然后与ZCVI4縮合，缩合产物在甲醇钠/甲醇/二氯甲烷体系中脱乙酰基制得式(I)所示化合物。具体合成路线<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>当通式(I)所示的化合物的R为2-脱氧半乳糖基时制备方法半乳糖在吡啶乙酸酐的作用下乙酰化，接着在红磷/溴水作用下进行l位溴代，再在锌粉、硫酸铜和乙酸钠的作用下将糖的1、2位还原为烯糖，再用HBr的饱和苯溶液进行加成反应，制得3,4,5-O-乙酰基a-D-2-脱氧半乳糖溴代物，再与ZCVI4縮合，最后在甲醇钠/甲醇/二氯甲垸体系屮脱乙酰基制得目标化合物(TM)。具体合成路线-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>当通式(I)所示的化合物的R为式(II)或式(III)所述的基团时制备方法在三乙胺的作用下，将1,3,4，6-四-0-乙酰基-2-氨基a-D-葡萄糖与溴乙酰溴反应，所得的中间体再在碳酸钾的作用下与ZCVI4縮合，最后脱乙酰基制得目标化合物(TM)。具体合成路线<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>图1是化合物ZCVI4-2对人肝癌细胞SMMC7721裸小鼠移植瘤的生长抑制作用(具休实施方式以下为本发明化合物的实施例，这些实施例并不意味着对本发明的限制。实施例13-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-l,2,5-n恶唑-3-]氧i丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-B-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸(ZCVI4-1)的制备2,3，4，6-四-0-乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖溴化物参照文献[云南民族大学学报(自然科学版)，2004,13(2):83-85]制备。ZCVI4参照文献(J.Med.Chem.2008,51,4834-4838)制备。ZCVI4852mg、2,3,4，6-四-0-乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖溴化物414mg、K2CO3200mg以及十六垸基三甲基溴化铵200mg溶于10mL水和15mLCH2C12的混合溶液中，室温下剧烈搅拌48h，分出有机层，水层CH2Cl2萃取，合并的有机层，浓縮，快速柱层析得浆状中间体3-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2,5-ta恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-[2，3，4,6-四-0-乙酰基]-B-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸，产率52%。将上述产物溶于5mLCH2CI2，n5mLCH3OH的混合溶液中，0'C下滴加1mol/L的甲醇钠的甲醇溶液，控制pH不超过i0，搅拌至原料斑点消失，滴加乙酸的二氯甲烷溶液调pH值为7，浓縮，快速柱层析得白色粉末ZCVI4-1，产率21%，m.p.101-103°C。ESI-MS1032[M+NH4]+,1049[M+Cl]-;&NMR(500MHz,DMSO),d(ppm):0.75(s，3H,CH3),0.82(s，6H,2xCH3),0.85(s,3H，CH3),0.89(s,6H,2xCH3)，1.23(s，3H,CH3),2.67(s，4H,2xCOCH2),2.77~2.88(m,1H，C18-H),3.65(m,1H,H3),3.78(m，1H，H5)，4.09(m，1H,H4),4.18(brs，1H，3a-H),4.21(t,2H，OCH2,J=6Hz)，4.43(m,1H,H2),4.76(d,1H,J=4.5Hz，H6')，4.83(d，1H，J=6.0Hz，H6),4.99—5.13(m,1H,OCH)，5.26(brs，1H,C12-H),5.49(d,1H,J=8Hz,H!),7.61—7.64(m,2H,ArH)，7.73—7.76(m，1H，ArH)，8.06(d,2H，ArH，J=8.2Hz)。实施例23-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1，2,5-口恶唑-3-]氧}內氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0各0-吡喃半乳糖基-齐墩果酸(ZCVI4-2)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以2，3,4，6-四-0-乙酰基-a-D-吡喃,乳糖溴化物[云南民族大学学报(自然科学版)，2004,13(2):83-85]为原料，制得白色粉末化合物ZCVI4-2，产率28%，m.p.121-124。C。ESI-MS1032[M+NH4]+，1049[M+C1]—;HNMR(500MHz，DMSO)，d(ppm):0.67(s,3H，CH3),0,74(s，6H，2xCH3)，0.83(s，3H,CH3)，0.87(s，6H,2xCH3)，1.1(s，3H'CH3)，2.53(s，4H,2xCOCH2)，2.77~2.83(m,IH,C18-H)，3.51(m，1H，H3),3.68(m，1H,H5),4.28(m，1H，H4)，4.41(brs,1H,3a-H)，4.45(t,2H，OCH2，J=6Hz),4.51(m,1H，H2),4.71(d,IH,J=4.5Hz，H6')，4.93(d，1H，J=6.0Hz，H6)，4.99~5.03(m'1H，OCH)'5.16(brs,1H，C12-H)，5.21(d，1H，J=8Hz，H0，7.72~7.75(m,2H'AiH),7.88-7.91(m，1H，ArH)，8.01(d，2H,ArH,J=8Hz)。实施例33-{[4-(l-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1，2,5-口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-B-D-葡萄糖醛酸基齐墩果酸(ZCVI4-3)的制备2，3,4-三-0-乙酰基-a-D-葡萄糖醛酸甲酯溴化物参照文献[有机化学，1992,12,269-272〗制备。2,3，4-三-0-乙酰基-a-D-葡萄糖酸酸甲酯溴化物200mg、无水K2C03100mg以及414mgZCVI4溶于5mL无水DMF中，N2保护下室温搅拌48h。将反应液倒入50mL水中，CH2C12萃取(20mLx3)，有机层再用1N的稀盐酸洗涤，干燥，快速柱层析得蜡状中间体3-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2,5-口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-[2,3，4-三-0-乙酰基-B-D-]葡萄糖醛酸甲酯-齐墩果酸，产率41%。将此中间体溶于4mL无水THF，加入LiOH20mg，室温搅拌过夜。再加入无水甲醇4mL，(TC下滴加1mol/L的甲醇钠的甲醇溶液，控制pH不超过10。TLC显示反应完全后，向反应液中滴加乙酸的CH2Cl2的溶液调pH值为7。浓缩反应液，快速柱层析得蜡状ZCVI4-3，产率15%。ESI-MS1027[M-H]-;&NMR(300MHz，DMSO)，d(ppm):0.68(s,3H，CH3),0.73(s，6H,2xCH3)，0.83(s,3H,CH3)，0.90(s,6H,2xCH3)，1.11(s,3H,CH3)，2.54(s，4H，2xCOCH2)，2.67~2.93O，1H，C18-H)，3.06-3.10(m,2H，H3，H4)，4.28(m，1H，3a-H),4.39-4.43(m,2H，OCH2),4.91-5.12(m，2H,OCH,H2),5.12(d,2H,d=5.7Hz),5.16(brs,1H,C12-H)，5.22(d,1H,J=8Hz，H!)，7.71-7.77(m，2H,ArH),7.87~7.92(m,1H:AtH)，8.01(d,2H，ArH,J=8Hz)。实施例43-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2，5-口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-6-0-2-乙酰氨基葡萄糖基齐墩果酸(ZCVI4-4)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以3,4,6-三-0-乙酰基-2-N-乙酰基-a-D-氨基葡萄糖溴化物[J.Org.Chem.2006,71,3619-3622]为原料，制得白色粉末ZCVI4-4，产率36%，m.p.142-146°C。ESI-MS1078[M+Na]+;^NMR(500MHz,DMSO),d(ppm):0.73(s，3H,CH3)，0.77(s,6H,2xCH3),0,89(s,3H,CH3)，0.91(s,6H，2xCH3),1.21(s，3H，CH3)，2.59(s，4H，2xCOCH2)，2.73~2.99(m，1H，C18-H)，3.17(m，3H，COCH3)，3.40~3.51(brs，1H,NH),3.64~3.67(m,2H，H3，H5)，4.32—4.36(brs，1H，3a-H)，4.40~4.47(m,4H，OCH2,H2，H4)，4.99(d,1H,J=5.5Hz，H6),5.03-5.05(m,2H，OCH,H6')，5.20(brs'1H,C12-H)，5.26(d，1H，J=8.9Hz，&)，7.75~7.78(m，2H，ArH)，7.91~7.94(m,1H,ArH),8.02—8.04(m,2H,ArH)。实施例53-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2，5-口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0备0-2-脱氧葡萄糖基齐墩果酸(ZCVI4-5)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-2-脱氧葡萄糖溴化物[CarbohydrateResearch,2005,340:2670-2674]为原料，制得浆状化合物ZCVI4-5，产率27%。ESI-MS997[M陽H]-;工HNMR(500MHz,DMSO)，d(ppm):0.57(s,3H,CH3),0.69(s，6H,2xCH3),0.77(s,3H，CH3),0.81(s，6H,2xCH3)，0.98(s,3H,CH3)，2.57(s,4H,2xCOCH2),2.87~2.93(m,1H,C18-H),4.43-3.51(m,1H，H4)，3.62-3.79(3m,3H,H5，H6，H6),3.86—4.01(m，1H,H3)，4.42(brs,1H,3a-H)，4.43(t,2H,OCH2，J=6Hz)，4.68—4.98(m,1H，OCH)，5.18(brs,1H，Ci2-H)，5.24(dd，1H，H0,7.73~7.74(m，2H,ArH),7.88~7.95(m,1H，ArH)，7.99~8.07(m，2H,ArH)。实施例63-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2,5-口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0各0-2-脱氧半乳糖基齐墩果酸(ZCVI4-6)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以3,4,6-三-0-乙酰基-a-D-2-脱氧半乳糖溴化物[Journalofcarbohydratechemistry,19%,15(8):955-964]为原料，制得浆状化合物ZCVI4-6，产率21%。ESI-MS1016[M+NH4]+;&顧R(500MHz，DMSO)，d(ppm):0.61(s，3H,CH3)，0.71(s，6H，2xCH3),0.82(s，3H,CH3)，0.85(s,6H，2xCH3),1.2(s,3H,CH3),2.58(s'4H,2xCOCH2),2.67~2.81(m,1H,C18-H)，4.53-3.61(m,1H,H4),3.65~3.82(m，3H,H5,H6,H6')，3.90—4.0(m,1H,H3)，4.41(brs,1H,3a-H),4.45(t,2H,OCH2,J=6Hz),4.78~5.00(m，1H,OCH),5.14(brs，1H，C12-H),5.21(dd，1H,Hi)，7.72—7.74(m，2H，ArH),7.88—7.91(m,1H，ArH),7.99—8.01(m,2H,ArH)。实施例73-U4-(l-甲基-3-([5-氧-4-(苯磺酰基)-l,2，5-u恶唑-3-]氧》丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧h28-0-B-D-木糖基-齐墩果酸(ZCVI4-7)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以2，3,5-三-0-乙酰基-a-D-木糖溴化物[CarbohydrateResearch,2005,340:2670-2674]为原料，制得白色粉末化合物ZCVI4-7，产率20%，m.p.103-106°C。ESI陽MS1007[M+Na]+,1019[M+Cl〗-;丄HNMR(500MHz,画SO)，d(ppm):0.65(s，3H，CH3),0.74(s，6H,2xCH3)，0.85(s，3H，CH3)，0,91(s，6H,2xCH3),1.18(s,3H,CH3)，2.54(s，4H，2xCOCH2),2.62-2.73(m，1H，C18-H)，3.68~3.78(ra,2H，H3，H4)，4.28~4.34(m'1H,3a-H)，4.48~4.55(m,2H,OCH2)，4.67~4.81(m，2H,H5，H5')，4.91~5.00(m,1H，OCH),5.12-5.22(m,1H,H2)，5.28(brs,1H，C12-H),5.32(d，1H，J=5Hz,H丄),7.71-7.76(m，2H，ArH)，7.89~7.90(m,1H,ArH),7.99—8.02(m,2H，ArH)。实施例83-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1，2，5-0恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-6-0-阿拉伯糖基齐墩果酸(ZCVI4-8)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以2，3，5-三-0-乙酰基-a-D-阿拉伯糖溴化物[CarbohydrateResearch,2005,340:2670-2674]为原料，制得白色粉末化合物ZCVI4-8，产率25%，m.p.117画120。C。ESI-MS983[M-H],1019[M+C1];&NMR(500MHz，DMSO)，d(ppm):0.68(s,3H,CH3),0.79(s,6H,2xCH3)，0.81(s，3H，CH3)，0.89(s,6H,2xCH3)，1.08(s，3H,CH3)，2.52(s,4H,2xCOCH2)，2.67~2.73(m,1H，C18-H)，3.68~3.70(m,2H，H3，H4)，4,29~4.30(m,1H,3a-H)，4.41~4.44(m,2H,OCH2)，4.57~4.71(m,2H,H5，H5')，4.98~5.02(m,1H，H2),4.99-5.08(m，1H，OCH)，5.21(brs，1H,C12-H)，5.33(d，1H，J=5Hz，P^)，7.72~7.76(m,2H,ArH),7.88~7.89(m,1H，ArH),7.99~8.01(m，2H,ArH)。实施例93-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2,5，口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0各0-麦芽糖基齐墩果酸(ZCVI4-9)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以2,3,6,2'，3'，4',6'-七-O-乙酰基-a-D-麦芽糖溴化物[CarbohydrateResearch,2005,340:2670-2674]为原料，制得蜡状化合物ZCVI4-9，产率29%。ESI-MS1194[M+NH4+]+,1199[M+Na]+;工HNMR(500MHz,DMSO),d(ppm):0.69(s,3H，CH3)，0.71(s，6H,2xCH3)，0.81(s，3H，CH3)，0.85(s，6H，2xCH3)，1.1(s，3H，CH3),2.53(s，4H，2xCOCH2),2.71~2.83(m,1H,C18-H),3.41~3.43(m,1H,H4),3.61~3.67(m,2H，H5，，H2')，3.71~3.78(m,1H,H2),4.13~4.32(m,2H，H5,H4，)，4.38-4.46(m，2H,H3，H3')，4.54-4.61(m,lH，H6b')，4.67—4.83(m,1H,H6b)，5.00~5.03(m，2H,H6a,H6a，)，5.09~5.21(m，4H，OCH，3a-H，OCH2),5.23—5.31(m,2H,C12-H，Hr)，5.62(d，1H,J=8Hz，H!)，7.72~7.75(m，2H，ArH)，7.88~7.91(m，1H,ArH),7.98-8.00(m，2H，ArH)。实施例103-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1，2,5-。恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-fi-D-纤维二糖基齐墩果酸(ZCVI4-10)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以2，3,6，2'，3，，4，，6'-七-0-乙酰基-a-D-纤维二糖溴化物[CarbohydrateResearch,2005，340:2670-2674]为原料，制得白色粉末化合物ZCVI4-10'产率23%,m.p.126-129。C。ESI-MS1175[M-H]—NMR(500MHz,DMSO),d(ppm):0.65(s，3H,CH3),0.78(s,6H，2xCH3),0.89(s，3H，CH3)，0.95(s,6H,2xCH3)，1.13(s,3H,CH3)，2.53(s,4H,2xCOCH2)，2.76~2.83(m，1H,C18-H),3.42~3.43(m,1H，H4),3.62~3.67(m,2H，H5'，H2),3.74~3.78(m，1H,H2),4.23~4.33(m,2H，H5,H4')，4.38~4.46(m，2H，H3，H3')，4.50—4.61(m,lH,H6b')，4.67~4.77(m，1H，H6b),5.00—5.03(m，2H，H6a,H6a')，5.09~5.18(m，4H，OCH，3a-H,OCH2):5.27~5.31(m，2H,C12-H，Hr),5.61(d,1H，J=8Hz，H丄)，7.72-7.75(m,2H，AiH)，7.88~7.91(m,1H,ArH)，7.98~8.00(m，2H,ArH)。实施例113-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1，2,5-「」恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-13-0-乳糖基齐墩果酸(ZCVI4-11)的制备参照ZCVI4-1的制备方法，以2，3，6，2',3',4',6'-7-0-乙酰基-a-D-乳糖溴化物[CarbohydrateResearch,2005,340:2670-2674]为原料，制得白色粉末化合物ZCVI4-11，产率23%，m.p.150-153°C。ESI-MS1175[M-H]-;工HNMR(500MHz,DMSO),d(ppm):0.65(s,3H,CH3)，0.78(s,6H，2xCH3)，0.89(s，3H,CH3)，0.95s，6H，2xCH3),1.13(s，3H,CH3),2.53(s,4H,2xCOCH2)，2,76-2.83(m,1H，C18-H),3.39-3.43(m'1H'H4),3.59-3.67(m,2H,H5',H2'),3.74~3.80(m,1H,H2)，4.13~4.33(m,2H,H5,H4')，4.36~4.46(m,2H，H3，H3，)，4.50—4.67(m,1H,H6b.)，4.67~4.77(m,1H，H6b),4.89—5.02(m,2H，H6a,H6a),5.09—5.16(m,4H,OCH,3a-H，OCH2),5.27~5.32(m，2H,C12-H,Hr)，5.54(d,1H，J=8Hz,恥7.72-7.76(m,2H,ArH)，7.88-7.91(m，1H,ArH),7.98~8.01(m,2H，AtH)。实施例123-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2，5-u恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-乙酰-(2-脱氧葡萄糖)氨基齐墩果酸(ZCVI4-12)的制备参照ZCVI4-3的制备方法，以N-溴乙酰基-l,3，4，6-四-0-乙酰基氨基葡萄糖[J.Med.Chem.1978,21(12):1222-1225]为原料，制得蜡状化合物ZCVI4-12，产率19%。ESI-MS1071[M-H]-;&NMR(500MHz,画SO),d(ppm):0.67(s,3H，CH3)，0.77(s,6H，2xCH3),0.83(s，3H，CH3)，0.89(s,6H,2xCH3),1.2(s，3H，CH3)，2.58(s，4H,2xCOCH2),2.79~2.83(m,1H,C1S-H),3.52~3.59(m,2H,H5,H3),3.72~3.74(m,1H，H4)，3.81(m,1H，H2)，4.28(m，1H，H4),4.44—4.45(m，4H，3a-H,OCH2，H6，H6),4.93~4.94(m,1H，OCH),5.00(brs，1H，C12-H),5.21(m,1H,H丄)，7.72~7.76(m,2H,ArH)，7.88~7.91(m，1H，ArH)，8.00(d,2H，ArH,J=7.8Hz)。实施例133-{[4-(1-甲基-3-{[5-氧-4-(苯磺酰基)-1,2，5-口恶唑-3-]氧}丙氧基)-4-氧丁二酰基]氧}-28-0-乙酰《2-脱氧半乳糖)氨基齐墩果酸(ZCVI4-13)的制备参照ZCVI4-3的制备方法，以N-溴乙酰基-l,3，4,6-四-0-乙酰基-2-氨基半乳糖[J.Med.Chem.1978,21(12):1222-1225]为原料，制得蜡状化合物ZCVI4-13，产率30%。ESI-MS1071[M-H]-;^NMR(500MHz,DMSO)，d(ppm):0.68(s,3H，CH3)，0.78(s，6H,2xCH3),0.84(s,3H,CH3)，0.89(s，6H,2xCH3),1.1(s，3H，CH3),2.58(s,4H，2xCOCH2),2.57-2,83(m,1H,C1S-H)，3.53-3.59(m，2H，H5，H3)，3.72-3.74(m,1H，H4),3.92(m,1H，H2)，4.34(m,1H，4.34~4.45(m,4H,3a-H,OCH2,H6,H6),4.80~4.94(m,1H，OCH)，5.10(brs,1H，C12-H),5.21(d，1H，H1;J=1.5Hz),7.72~7.76(m,2H，ArH)，7.88-7.91(m,1H，ArH)，8.00(d,2H,ArH,J=7.8Hz)。实施例14ZCVI4-2的体外药效学研究目的选择4种肝肿瘤细胞株对ZCVI4-2进行体外抗肿瘤作用筛选。样品和试剂ZCVI4-2注射液试验时临时配制；羟喜树碱注射液(湖北华源世纪药业)；细胞培养基RPMI-1640、F12、MEM、DMEM(高糖)购自GIBCO公司；胎牛血清(杭州四季清有限公司)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)和DMSO均购自Sigma公司；其它常用试剂为市售分析纯。细胞株人肝癌细胞株SMMC-7721、人肝癌细胞株HepG2、人肝癌细胞株IM3、人肝癌细胞株BEL-7402均购自中国医学科学院细胞库和中科院上海细胞所。细胞株的培养各实验细胞株(中国科学院上海细胞生物学研究所提供)由本实验室传代冻存。细胞在37"、5XC02饱和湿度的培养箱中常规培养。培养液为含10%热灭活胎牛血清，青霉素100u/ml和链霉素100u/ml的RPMI1640细胞培养基。48h更换培养液，细胞汇合时，用0.25%胰蛋白酶消化传代。实验用细胞均处于对数生长期，台盼蓝拒染法表明细胞活力>95%。实验方法取处于对数生长期状态良好的细胞一瓶，加入消化液(0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA)消化，计数24xl0"个/ml，制成细胞悬液接种于96孔板上，18QaL/L，置恒温C02培养箱中培养24小时。换液，加入受试药物，20wlV孔，培养72小时。将MTT加入96孔板中，20wL/孔，培养箱中孵育4小时。吸去上清液，加DMSO，150//L/孔，平板摇床上振摇IO分钟。受试物考察3个浓度(0.1、1.0、K)^M)，用酶联免疫监测仪在波长为570nm处测定每孔的吸光度，分别计算各浓度下的细胞抑制率。抑制率计算方法阴性对照孔相对OD值-药敏孔相对OD值细胞抑制率=_X100%阴性对照孔相对OD值阴性対照孔相对OD值=阴性对照孔绝对OD值一空白对照孔绝对OD值药敏孔相对OD值=药敏孔绝对OD值一空白对照孔绝对OD值实验结果从表1可知，ZCVI4-2具有显著的体外抗肝肿瘤作用，明显强于阳性对照药羟喜树碱(HCPT)。表1.ZCVI4-2对4种人肝肿瘤细胞抑制作用结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实施例15ZCVI4-2的体内药效学研究1、ZCVI4-2腹腔给药对小鼠H22肝癌的实验治疗作用目的测试ZH-2对小鼠H22肝癌的生长抑制作用。动物ICR小鼠，18-22g，由中国药科大学动物室提供，合格证号苏动质SCX(苏)2002—0011。瘤种小鼠H22瘤种由中科院上海药物研究所提供。测试物ZCVI4-2注射液由中国药科大学药剂教研室张建军提供。给药方法及疗程选用18-22克雌性ICR小鼠及生长良好的7-11天的H22瘤种，接种于小鼠右侧腋部皮F，约4.5-5><1()6细胞/只，接种24小时后随机分笼，腹腔注射给药。按不同剂量连续给药7天。第10天处死动物，称体重、瘤重，计算各组平均瘤重，按下公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。空白对照组平均瘤重一治疗组平均瘤重肿瘤生K抑制率_xl00%空白对照组平均瘤重结果与结论如表2所示，ZCVI4-2对小鼠H22肝癌有一定的生长抑制作用。表2.ZCVI4-2对小鼠H22肝癌的生长抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>2、ZCVI4-2静脉给药对小鼠S180肉瘤的实验治疗作用实验方法选用18-22克雌性ICR小鼠及生长良好的7-11天的S180瘤种，接种于小鼠右侧腋部皮下，约4.5-5x106细胞/只，接种24小时后随机分笼，尾静脉给药。按同一剂量连续给药7天。第8天处死动物，称体重、瘤重，计算各组平均瘤重，按下公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。空白对照组平均瘤重一治疗组平均瘤重肿瘤生长抑制率_xlOO%空白对照组平均瘤重实验结果如表3数据显示，与空白组及对照组相比，ZCVI4-2对小鼠S180肉瘤的生长具有抑制作用。表3.ZCVI4-2对小鼠S180肉瘤的生长抑制作用组别剂量-体重(克)瘤重抑制率(％)DlD8;土SD(克)生理盐水0.4ml/只22.4±1.632.1±8.41.54±0.445-Fu25mg/kg22.3±2.427.5±5.20.77±0.4650.0溶剂对照50mg/kg21.5±1.830.2±5.51.36±0.3811.6ZCVI4-225mg/kg22.0±2.426,8±3.60.87±0.3743.5ZCVI4陽212.5mg/kg21.3±2.226.1±3.30.98±0.5036.3ZCVI4-26.25rag/kg21.6±1.9.27.3±4.]0.79±0.3548.7注D1、D8:接种后第l、8天3、ZCVI4-2静脉给药对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的实验治疗作用由于动物瘤与人体肿瘤不完全一致，动物瘤试验结果存在着与临床效果之间的差异。为此，我们在上述两种动物瘤试验的基础上，选择了人肝癌SMMC7721裸小鼠移植瘤进行了ZCVI4-2体内抗肿瘤作用研究。^i式吻ZCVI4-2注射液由中国药科大学制剂教研室张建军提供，批号070327。空白溶剂对照由中国药科大学制剂教研室张建军提供，批号070327-0。阳性对照药为5-氟尿嘧啶(5-Fu)，天津金耀氨基酸有限公司生产，批号0505241,使用前用生理盐水稀释至给药浓度。移植瘤选用人肝细胞性肝癌SMMC-7721裸小鼠移植廇，由人肝细胞性肝癌SMMC-7721细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为2x106,接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。动物雌性BALB/cA裸小鼠，日龄35-40天，体重18-22g，由中国科学院上海实验动物中心提供。合格证编号沪动合证字122号。每组动物数为阴性对照组12只，给药组6只。实验方法取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mi^左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100300mn^后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次,每次测量同时还需称鼠重。给药组每周静脉给药3次，给药体积0.4ml/只。阳性对照组每周静脉给药3次，阴性对照组同时给等量生理盐水。检测指标及计算方法(1)肿瘤体积(tumorvolume,TV)，计算公式为TV=1/2xaxb2其中a、b分别表示长宽。(2)相对肿瘤体积(relativetumorvolume,RTV)，计算公式为RTV=TVt/TV0。其中TVo为分笼给药时(即do)肿瘤体积，TVt为每一次测量时的肿瘤体积。(3)相对肿瘤增殖率T/C(%)，计算公式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>Trtv:治疗组RTV;CRTV:阴性对照组RTV。试验结果以相对肿瘤增殖率T/C(%)作为抗肿瘤活性的评价指标。实驗果如表4和图1所示，ZCVI4-2注射液对人肝细胞性肝癌SMMC-7721裸小鼠移jiifiW—定的生1怖用。ZCVI4-2注射液25mg/kg和12.5mg/kg剂量组对SMMC-7721的T/C分别为44.1%和50.0%。表4.ZCVI4-2注射液对人肝癌SMMC-7721裸小鼠禾對臃的实验治疗作用<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>DO:分笼给药时间权利要求1、如下面通式I所示的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯其中式I中，R代表葡萄糖基、半乳糖基、葡萄糖醛酸基、氨基葡萄糖基、2-脱氧葡萄糖基、2-脱氧半乳糖基、木糖基、阿拉伯糖基、果糖基、鼠李糖基、核糖基、甘露糖基、山梨糖基、蔗糖基、麦芽糖基、纤维二糖基、乳糖基、棉子糖基、葡聚糖三糖基或下面式II及式III的基团2、如权利要求1所述的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于所述的R为葡萄糖基、半乳糖基、葡萄糖醛酸基、2-脱氧半乳糖基、2-脱氧葡萄糖基、乳糖基、麦芽糖基。3、如权利要求2所述的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于所述的R为半乳糖基。4、如权利要求1所述的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于所述的R代表的糖基为糖类化合物脱掉任何位置上的羟基以后形成的基团。5、如权利要求4所述的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于所述的羟基为糖类化合物的l位上的羟基。6、如权利要求3所述的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯，其特征在于所述的半乳糖基为半乳糖脱掉l位羟基后形成的基团。7、如通式I表示的糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物及其药学上可接受的盐或酯在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的应用。8、如权利要求7的应用，其特征在于所述的肿瘤疾病包括但不限于肝肿瘤、肝硬化、肺癌、食管癌、胃癌、大肠癌、结肠癌、乳腺肿瘤、鼻咽癌、宫颈癌、淋巴瘤、前列腺肿瘤或白血病。9、如照权利要求8的应用，其特征在于所述的肿瘤疾病为肝肿瘤。10、一种通式i所不的化合物的合成方法，包括以下步骤在吡啶乙酸酐的作用下将糖分子中的羟基进行乙酰化保护，接着在红磷/溴水的作用下进行l位的溴代，然后与ZCVI4縮合，缩合产物在甲醇钠/甲醇/二氯甲烷中脱乙酰基制得通式I化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>全文摘要本发明涉及药物领域，具体涉及一类糖基化修饰的一氧化氮供体型齐墩果酸类化合物(I)，还公开了它们的制备方法、含有这些化合物或其药学上可接受的盐或酯的药用组合物，以及在制备抗肿瘤药物中的用途。其中R的定义见说明书。文档编号A61P35/00GK101402667SQ20081019604公开日2009年4月8日申请日期2008年9月11日优先权日2008年9月11日发明者张奕华,张陆勇,彭司勋,田季德,袁胜涛,赖宜生,莉陈,静永旺,黄张建申请人:中国药科大学