专利名称：两种化学抗肿瘤药物的制作方法
技术领域：
本发明属于化学药物领域，特别涉及两种化学抗肿瘤药物5，7-二羟基-8-(1， l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮，以及5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3， 4' -二甲氧基黄酮。
背景技术：
3-甲氧基黄酮属于从柑桔属植物中分离出来的多甲氧基黄酮化合物(PMFs)，由 于其具有包括抗炎、抗癌和抗动脉粥样硬化等广谱的生物学活性，一直受到特别的关注。人 们探索柑桔树水果中PMFs保健特性的兴趣在不断增高。因此，从甜桔皮中分离、鉴定PMFs
将使桔汁加工的副产品得到新的应用，以及柑桔在其他保健品和药品中被消耗。 PMFs通过不同的潜在机制实现其抗癌作用。从葡萄柚(GFJ)的乙酸乙酯提取物中
分离得3， 3' ， 4' ， 5， 6， 7， 8-七甲氧基黄酮( 一种3-甲氧基黄酮)，以浓度依赖性方式显著
增强阿霉素抵抗的人髓细胞性白血病细胞摄取[3H]长春新碱。数据显示，3，3'，4'，5，6，7，
8-七甲氧基黄酮抑制P-糖蛋白介导的[3H]长春新碱的输出，导致化疗药物在细胞内积聚。
这一化合物有望成为肿瘤化疗中一个候选的多药耐药性逆转剂。 除了其他的黄酮类化合物，从药用植物中分离的多聚甲基化黄酮和C-糖基化衍 生物，它们对大鼠肝微体中FeSO"半胱氨酸引起的脂类氧化的影响都已得到研究，其中栀 子素D是非酶促脂类过氧化的抑制剂。已建立结构_活性关系，并且观察到活性多聚羟基 化合物的结构特征不同于多甲氧基黄酮，抗过氧化黄酮类具有高度的亲油性。
从白鼠麹植物地上部分分离、鉴别得到七种3-甲氧基黄酮，研究了它们的基团清 除活性、抗氧化活性和猪胰腺a-淀粉酶抑制活性。在3_甲氧基黄酮中，5，7，4'-三羟 基-3，6-二甲氧基黄酮，5，7，4'-三羟基-3，3' -二甲基黄酮和5，4' -二羟基-3，7， 3' _三甲基黄酮显示了显著的基团清除活性。5，7，4'-三羟基_3，6-二甲氧基黄酮，5，7， 4'-三羟基-3，3' _二甲氧基黄酮和5，4' -二羟基_3，6，7-三甲氧基黄酮具有亚油酸体 系中的抗氧化活性。5，7，4' -二羟基_3，6-二甲氧基黄酮，5，7，4'-三羟基-3，3' -二 甲氧基黄酮和5，4' -二羟基_3，6，7-三甲氧基黄酮，5，7，4' _三羟基_3_甲氧基黄酮和 5，4' -二羟基_3，7-二甲氧基黄酮则表现出很高的猪胰腺a-淀粉酶抑制活性。
Sergeev的研究显示，来源于甜桔的5_羟基_3， 6， 7， 8， 3'， 4'-六甲氧基黄酮 (5-0H-HxMF)和3，-羟基-5，6，7，4' _四甲氧基黄酮(3' -OH-TtMF)通过钙离子依赖性细 胞凋亡机制抑制人乳腺癌细胞(MCF-7)生长。这些结果强烈提示，PMFs的细胞Ca2+调节活 性是其细胞凋亡机制的基础，PMFs的羟基化对于它们能诱导Ca"增加，进而活化钙离子依 赖的细胞凋亡蛋白酶至关重要。
发明内容
本发明的目的在于研究两种新的3-甲氧基黄酮衍生物-化合物(A)5，7_ 二羟 基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮(compound A)和化合物(B)5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黄酮(compound B)，这两种化合物是有效 的脂肪酸合成酶(FAS)抑制剂，能广泛抑制多种类型的人肿瘤细胞系生长，并进一步诱导 肿瘤细胞凋亡。在人肿瘤异种移植模型研究中，5，7- 二羟基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮被证明是一种有效的抗肿瘤剂，能强烈抑制人肺癌和结肠癌细胞在体 内生长。 为了实现上述目的，本发明采用以下方案来合成化合物5，7_ 二羟 基-S-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮，其化学结构式为
0Me
OH 合成原料及合成步骤 第一步10g(55mmol)3，4-二甲氧基苯甲酸和2.2ml甲磺酰氯(28. 4mmo1)室温下 时间产出8. 47g 3，4-二甲氧基苯甲酸酐(24. 5mmo1 ;产出率89% ); 第二步1.6g 2'，4'，6'-三羟基-2-甲氧基苯乙酮(8. lmmol)禾P8.4g 3，4_二 甲氧基苯甲酸酐(21.0mmol)40。C反应产出2. 2g5， 7-二羟基-3， 3'，4'-三甲氧基黄酮 (5.9mmo1 ;产出率74% )，在己烷丙酮(50 : 50)中结晶，得0. 85g纯的5， 7-二羟基-3， 3'，4'-三甲氧基黄酮； 第三步O. 34g 5，7-二羟基-3，3'，4'-三甲氧基黄酮(0. 98mmo1)，0. 25ml异戊二 烯溴化物(1. 97mmo1)和含0. 4g无水碳酸钾(2. Ommol)的50ml丙酮溶液室温回流5小时。 滤液经过滤蒸发，残渣在甲醇中结晶得0. 3g 5-羟基-7-异戊烯氧基-3， 3' ， 4'-三甲氧基 黄酮(0. 73mmo1 ;产率74% ); 第四步O. 3g 5-羟基-7-异戊烯氧基-3，3'，4'-三甲氧基黄酮(0. 73mmo1)和 0. 12g脱水醋酸钠的乙酸酐溶液20ml回流48小时。氯仿稀释萃取后，残渣在室温下70ml含 5X甲醇K0H溶液中搅拌4小时。然后溶液经乙酸乙酯酸化萃取，在己烷丙酮(50 : 50) 中结晶，得O. 183g纯物质5，7-二羟基_8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮 (0. 44mmo1 ;产率60% )。 通过核磁共振技术阐明其分子结构，并通过质谱计算其分子量H NMR(300MHz， CDC13) : S 1. 68 (s， 6H， H4"+H5") ， 3. 82 (s， 3H， 30Me) ， 3. 94 (s， 3H，
3， OMe) ，3. 97(s，3H，4， OMe) ， 5. 39(d， 1H， J = 10. 7Hz，H3") ，5. 46(d， 1H， J = 17. 7Hz，H3")，
6. 29(s， 1H， H6) ，6. 46(dd， 1H， J = 17. 7和10. 7Hz， H2") ，7. OO(d， 1H， J = 8. 7Hz， H5，)，
7. 25 (s， 1H， 70H) ， 7. 53 (d， 1H， J = 2. 1Hz， H2， ) ， 7. 63 (dd， 1H， J = 8. 7禾P 2. 1Hz， H6，)，
413. 03(s， 1H，50H) ;13C NMR(75MHz， CDC13) : S 28. 06 (C4"+C") ， 40. 64 (Cl") ， 55. 97 (3， OMe)， 55. 98(4' OMe) ，60. 29 (3_0Me) ， 101. 17(C6) ， 106. 95(C10) ， 109. 70 (C8) ， 110. 84(C5')， 111. 54(C2， ) ， 113. 68(C3") ， 122. 53 (C6， ) ， 122. 74(C1， ) ， 138. 65 (C3) ， 148. 69(C3，)， 148. 96 (C2，，) ， 151. 08(C4' ) ， 155. 27 (C9) ， 156. 54 (C2) ， 160. 54(C5) ， 161. 48 (C7)， 179.07(C4);化学电离质谱和高分辨质谱确认(C23H2407)的分子量是412。
本发明采用以下方案来合成化合物5， 7- 二羟基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4' -二甲氧基黄酮，其化学结构式为
_ 训e
飾 合成原料及合成步骤 第一步10g(65. 7mmo1)对甲氧基苯甲酸和2. 6ml甲磺酰氯(33. 6mmo1)室温反应 得6. 13g对甲氧基苯甲酸酐(24. 5mmo1 ;产率89% );第二步0.6g 2'，4'，6'-三羟基-2-甲氧基苯乙酮(3mmo1)和2. 6g对甲氧基苯 甲酸酐(9mmo1)室温反应得0.763g麦角新碱(2. 43mmo1 ;产率81% );
第三步含0. 30g麦角新碱(0. 95,1) ，0. 2ml异戊二烯基溴化物(1. 73,1)和 0. 4g无水k2C03(2. Ommol)的50ml丙酮溶液室温回流5小时。经过滤蒸发，残渣在甲醇中 结晶，得0.33g 5-羟基-7-异戊烯氧基-3，4'-二甲氧基黄酮(0.86mmo1 ;产率91%);
第四步O. 3g 5-羟基-7-异戊烯氧基-3，4'-二甲氧基黄酮(0. 78mmo1)和O. 12g 无水醋酸钠的20ml醋酸酐回流48小时。氯仿稀释萃取后，残渣在室温下70ml含5%甲醇 KOH溶液中搅拌4小时。溶液经乙酸乙酯酸化萃取，得0. 21g纯品5， 7- 二羟基8- (1， 1- 二 甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黄酮(0. 55mmo1 ;产率71% )。
通过核磁共振技术解析其结构，并且通过质谱技术计算分子量
力画R(200MHz， DMS0_d6) : S 1. 55 (s， 6H， 1，， Me) ， 3. 75 (s， 3H， 30Me) ， 3. 84 (s， 3H，4' OMe) ，4. 77(dd， 1H， J = 10. 5and 1. 1Hz， H3") ， 4. 80 (dd， 1H， J = 17. 5and 1. 1Hz， H3") ，6. 27(dd， 1H， J = 17. 5and 10. 5Hz， H2") ，6. 30 (s 1H， H6) ， 7. 10(d，2H， J = 9. OHz， H3， +H5， ) ，7. 91 (d，2H， J = 9. OHz， H2， +H6， ) ， 10. 52(brs， 1H， 70H) ， 13. OO(s， 1H， 50H); 13C NMR(50MHz， DMS0_d6) : S 29. 54(1"Me) ，40. 34(Cl") ，55. 25(4， OMe) ， 59. 66 (3—OMe)， 99. 60(C6) ， 105. 02(C10) ， 108. 36 C3") ， 110. 75 (C8) ，113. 80(C' +C5， ) ， 121. 95(C1，)， 130. 33 (C2， +C6" ) ， 137. 42 (C3) ， 149. 66 (C2" ) ， 154. 75 (C2) ， 156. 07 (C9) ， 158. 98 (C5)， 161. 03 (C4') ， 162. 89 (C7) ， 178. 13 (C4);化学电离质谱和高分辨质谱确认(C22H2206)的分子 量是382。 本发明合成的两种新的3-甲氧基黄酮衍生物，化合物5， 7- 二羟基-8- (1， 1_ 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮和化合物5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3， 4' -二甲氧基黄酮是有效的脂肪酸合成酶(FAS)抑制剂，能广泛抑制多种类型的人肿 瘤细胞系生长，并进一步诱导肿瘤细胞凋亡。在人肿瘤异种移植模型研究中，5，7-二羟 基-8-(1， 1-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮被证明是一种有效的抗肿瘤剂，能 强烈抑制人肺癌和结肠癌细胞在体内生长。5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3'， 4'-三甲氧基黄酮和5，7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，4'- 二甲氧基黄酮具有被开 发成为新的广谱抗肿瘤药物的巨大潜能。
图1是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮抑 制人前列腺癌细胞LnCAP脂肪生成_浓度曲线图； 图2是化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黄酮抑制人 前列腺癌细胞LnCAP脂肪生成-浓度曲线图； 图3是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黄酮抑 制人前列腺癌细胞LnCAP脂肪酸合成酶活性_浓度曲线图； 图4是化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黄酮抑制人 前列腺癌细胞LnCAP脂肪酸合成酶活性_浓度曲线图； 图5是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮和 化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮体外抑制人肿瘤细胞生 长的数据表； 图6是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ，4' _三甲氧基黄酮治
疗小鼠皮下接种人前列腺癌细胞LnCAP肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图7是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黄酮治
疗小鼠皮下接种人乳腺癌细胞ZR-75-l肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图8是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黄酮治
疗小鼠皮下接种人肺癌细胞NCI-H23肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图9是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黄酮治
疗小鼠皮下接种人结肠癌细胞HCT-116肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图10是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黄酮治疗
小鼠皮下接种人前列腺癌细胞LnCAP肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图11是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黄酮治疗
小鼠皮下接种人乳腺癌细胞ZR-75-l肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图12是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4' _ 二甲氧基黄酮治疗
小鼠皮下接种人肺癌细胞NCI-H23肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图； 图13是化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4' _ 二甲氧基黄酮治疗 小鼠皮下接种人结肠癌细胞HCT-116肿瘤的肿瘤体积治疗天数曲线图。
具体实施例方式
为证明本发明原料化合物的药用效果，可以用以下方法来验证
实验方法 1. [2_14C]醋酸盐掺入法 用不同浓度的化合物5， 7- 二羟基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4' _三甲氧基 黄酮或化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮处理1小时或20 小时，在LnCAP细胞培养液中加入2-14C-标记的醋酸盐，孵育4小时，收集培养液和细胞，离 心，0.8ml PBS重悬。应用Bligh Dyer法抽提脂质；应用闪烁计数法定量掺入细胞脂质的 [2-14C]醋酸盐。所得结果以样本蛋白含量校正。
2.脂肪酸合成酶活性测定(体外试验) 按文献报道的方法测定LnCAP细胞提取物脂肪酸合成酶活性。收集LnCAP细胞，离 心，低渗缓冲液(1毫摩尔EDTA，20毫摩尔Tris-盐酸，pH 7. 5)重悬；随后应用BCA法测定 样品蛋白质含量。预先在含不同浓度的化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'， 4'-三甲氧基黄酮(0. 01-10 iiM)或化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二 甲氧基黄酮(0. 3-30uM)的2. 5ml磷酸钾盐缓冲液(100mM，pH 7. 0)中37。C孵育相同量的蛋 白质(50ii g)30分钟。然后加入20ii l反应混和液(2. 5mM NADPH， 1. 25mM乙酰-CoA， 1. 25mM 丙二酸单酰-CoA和0. 02mM[2-14C]丙二酸单酰_CoA(60毫居里/毫摩尔；PerkinElmer生 命科学公司)，样品在37t:中孵育15分钟。加入3ml预冷的1M HC1/甲醇(6 : 4，V/V)终 止反应，石油醚萃取脂肪酸，闪烁计数法分析掺入的[2-14C]丙二酸单酰-CoA。
3.细胞毒性分析 应用人肿瘤细胞株分析化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'， 4'-三甲氧基黄酮和化合物5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)_3，4' -二甲氧基黄酮 (溶解于DMSO)的细胞毒性。人肿瘤细胞株购自ATCC和NCI，在10% FBS的DMEM培养液 中，置于5% C02的37t:孵箱中培养。细胞生长汇合后作毒性分析，胰蛋白酶消化细胞后用 培养液洗涤，然后计数。96孔板每孔传3000-6000个细胞孵育16-24小时，再加入不同浓度 的化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮或化合物5，7-二 羟基_8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黄酮。培养72小时后，应用MTT分析药物 处理后的细胞和对照细胞。
4.人体肿瘤转移模型 T细胞缺陷裸小鼠(皿/皿)，6周龄，购自Charles River实验室，按照大学动物 饲养和使用委员会条例，在无菌环境中饲养、处理。48只鼠肋腹部分别皮下接种5Xl(f个 悬浮于O. 2ml HBSS/基质胶(50 : 50， V/V)中的乳腺癌ZR-75-l、前列腺癌细胞LnCAP、 人肺癌细胞NCI-H23和人结肠癌细胞HCT-116，当肿瘤平均直径长至7-8mm，肿瘤体积约在 100-200mm3大小时，24只鼠被分成治疗组(2组，每组8只，共16只)，按50mk/kg和100mg/ kg化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮或50mk/kg和 100mg/kg化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黄酮(溶解在15% C即tisol)给药，对照组( 一组，共8只)只接受赋形剂(15% C即tisol)。
为保证化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮或 化合物5， 7-二羟基-8-(1 ， 1-二甲基烯丙基)-3， 4' - 二甲氧基黄酮治疗组和对照组在处 理开始时肿瘤大小的分布基本相同，小鼠被分成三类小体积肿瘤(<4咖)、中等体积肿瘤 (4-8mm)和大体积肿瘤(> 8mm)。将每一类中相同数目的小鼠分别分在对照组和化合物5，7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮治疗组中。
肿瘤移植裸鼠的化合物5， 7- 二羟基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧 基黄酮或化合物5， 7- 二羟基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黄酮给药方案口 服给药，将化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮或化合物 5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黄酮溶解在15% C即tisol 。每日给 予200iU含1.25mg或2. 5mg化合物5， 7-二羟基-8-(1， 1-二甲基烯丙基)-3， 3'， 4'-三 甲氧基黄酮或化合物5， 7- 二羟基-8- (1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4' - 二甲氧基黄酮(15 % C即tisol)的药液，每周5天，连续3周，或200iil安慰剂(15% c即tisol)3周(对照组)。 两组动物分开饲养，自由进食。 抗肿瘤效果的评价每3或4天测量肿瘤大小，采用下面的公式计算肿瘤体积
V = (aXb)/2 其中a代表宽(较短的直径)，b代表长(较长的直径)。每个瘤体的相对肿瘤体 积(RTV)指给定时间的体积与治疗开始时的体积的比率。每个治疗组计算平均RTV和标准 误(SE)。应用下面的公式计算肿瘤生长抑制值确定抗肿瘤活性。
TGI(% ) = T/CX100 其中T代表实验结束点(4周)处理组肿瘤的平均RTV， C代表对照组的平均RTV。 采用国立癌症研究所制定的抗肿瘤活性最低水平(T/C《42% )标准。实验结束后切除瘤 体，甲醇固定。
实验结果 1.比较分析化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4'-三甲氧基黄 酮和化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮对肿瘤细胞脂肪生 成的抑制活性 为了研究化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮 和化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黄酮抑制脂肪生成的能 力，用不同浓度的化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮or 化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黄酮处理LnCAP前列腺癌细 胞5小时，定量检测细胞脂质中2-14C标记醋酸盐的掺入量。如图1所示，化合物5， 7- 二羟 基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮在0. 3 ii M浓度时抑制脂肪合成率超 过50% 。如图2所示，化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黄酮 在1 P M浓度时抑制脂肪合成率超过50% 。更高浓度则进一步减少脂肪合成，并呈现浓度依 赖方式。处理24小时后则进一步降低。 2.化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮以及化 合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，4'- 二甲氧基黄酮通过抑制FAS活性降低前 列腺癌细胞和乳腺癌细胞中脂肪合成 为证实化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4' _三甲氧基黄酮或 化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4' - 二甲氧基黄酮是一个FAS抑制剂，用 不同浓度的化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4' _三甲氧基黄酮或化合 物5， 7- 二羟基-8- (1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4' - 二甲氧基黄酮处理LnCAP细胞蛋白提取 物，定量检测脂肪酸中2-14C标记丙二酸单酰-CoA的掺入量。如图3所示，化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4' _三甲氧基黄酮在0. 1 M浓度时降低体外脂肪酸合成酶活性50%以下。如图4所示，化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黄酮在O. 3微摩尔浓度时降低体外脂肪酸合成酶活性50X以下。Western Blot分析显示，化合物5，7-二羟基_8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3'，4' _三甲氧基黄酮或化合物5，7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，4'- 二甲氧基黄酮不影响LnCAP细胞中FAS蛋白水平。由此可知，抑制脂类合成是抑制FAS酶活性的直接结果，而不是FAS表达减少的结果。
3.化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮和化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮广泛抑制人体肿瘤细胞株生长，但不抑制正常细胞株生长 26株肿瘤细胞株在含化合物5， 7- 二羟基_8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮和化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮的普通培养基中培养。3天后应用MTT测定细胞生存力。结果如图5所示，大多数人肿瘤细胞对化合物5， 7- 二羟基-8- (1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黄酮和化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮敏感。并且发现，大多数人肿瘤细胞对化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮和化合物5，7-二羟基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黄酮都较敏感，而化合物5， 7- 二羟基-8- (1 ，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮比化合物5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黄酮的作用更强。但是，正常人乳腺上皮细胞(MCF10A)和小鼠胚胎成纤维细胞对这两个化合物不敏感。两种化合物浓度为50 ii M时这些细胞仍能正常成长。
应用人肿瘤移植裸鼠模型研究化合物5，7_ 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，3'，4' _三甲氧基黄酮和化合物5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黄酮的有效性 在化合物5， 7- 二羟基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ，4' _三甲氧基黄酮和化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' - 二甲氧基黄酮对肿瘤细胞株的体外抗增殖作用的基础上，应用人前列腺癌细胞(LnCAP)、人乳腺癌细胞(ZR-75-l)、人肺癌细胞(NCI-H23)和人结肠癌细胞(HCT-116)的皮下移植裸鼠模型评价化合物5， 7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮以及化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黄酮(剂量为100mg/kg)的抗肿瘤效果。结果见图6-9，化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮在T/C值为14. 2% ，0%，31 %和20%时分别强烈抑制LnCAP，ZR-75-l，NCI-H23和HCT-116肿瘤细胞生长；化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黄酮在T/C值为17. 5%，60%，50%和30%时分别强烈抑制LnCAP， ZR-75-l， NCI-H23和HCT-116月中瘤细胞生长(见图10-13所示)。同时未发现化合物5， 7- 二羟基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3' ，4'-三甲氧基黄酮和化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黄酮给药的动物产生任何明显的副作用，包括体重减轻等。这些数据强烈显示，化合物5，7-二羟基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黄酮和化合物5，7-二羟基_8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黄酮是可被开发为新的抗癌药物的很好的候选者。
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权利要求
两种化学抗肿瘤药物，其特征在于该两种抗肿瘤药物是以甲氧基黄酮衍生物5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3′，4′-三甲氧基黄酮或5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4′-二甲氧基黄酮作为有效成分。
2. 如权利要求1所述的两种化学抗肿瘤药物，其特征在于该两种化学抗肿瘤药物中 分别含有抗肿瘤有效量的甲氧基黄酮衍生物5， 7-二羟基-8- (1 ， 1-二甲基烯丙基)-3， 3'， 4' _三甲氧基黄酮或5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黄酮及可药 用载体和/或赋形剂。
3. 如权利要求l所述的两种化学抗肿瘤药物，其特征在于抗肿瘤包括有抗前列腺癌、 肺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、恶性胶质瘤、胃癌、食管癌、鼻咽癌、淋巴瘤和血癌。
全文摘要
一种以二个甲氧基黄酮衍生物5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3′，4′-三甲氧基黄酮或5，7-二羟基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4′-二甲氧基黄酮为有效成分的抗肿瘤药物，药理试验效果证明二个甲氧基黄酮衍生物对31种肿瘤细胞株的细胞毒性试验结果显示有广谱的抗肿瘤作用；应用人肿瘤移植裸鼠模型试验，对人前列腺癌细胞、人肺癌细胞、人结肠癌细胞、和人乳腺癌细胞有强烈的抑制肿瘤生长的作用。药代动力学试验也显示该二个甲氧基黄酮衍生物在小鼠体内能保持一定的药物浓度，有助于抗肿瘤效果。对小鼠的急性毒性试验显示无毒性。因此该二个甲氧基黄酮衍生物是一种具有很大开发前景的广谱抗肿瘤新药。
文档编号A61P35/00GK101703499SQ200910174808
公开日2010年5月12日 申请日期2008年1月4日 优先权日2008年1月4日
发明者张南 申请人:张南