专利名称：一种具有抗急性髓性白血病作用的复方药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域，公开了一种含甘草次酸、冬凌草甲素的复方药物组合 物及其医药用途。
背景技术：
白血病是一种严重危及生命的恶性肿瘤疾病，目前公认化疗是急性白血病的主要 治疗手段。从上世纪40年代发现氮芥抗肿瘤作用以来，化疗药物的发展已有60多年历史。 目前，急性白血病的传统化疗药物包括烷化剂、抗代谢药、抗生素类以及从植物中提取的生 物碱类。但这些化疗药物在杀伤白血病细胞的同时，常常对正常细胞、组织也有毒性损伤。 绝大部分急性白血病患者在化疗过程中，会产生不同程度的消化道黏膜损害，心脏毒性、肾 毒性等多系统毒副作用。抗癌药发展到今天，人们开始寻求高效低毒、安全性好、来源广泛 的新药。近年来，研究中草药中有效的抗癌成分及其有效组方成为新的热点之一。甘草次酸(glycyrrhetic acid，简称GA)为我国常用配伍中药甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)在体内的主要活性成分之一，为五环三萜类化合物。近年来对GA的 药理研究不断深入，发现GA除了传统的止咳平喘，抗炎，抗溃疡，抗过敏，抗病毒等作用外， 对鼠肝细胞癌、艾氏腹水癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、人乳腺癌细胞、人肝癌细胞等有显著 的抑制作用。毒理学研究表明，GA具有极低的毒作用，口服昆明种小白鼠的急性毒性LD5tl > 300mg/kg。最近有极少数文献报道GA可以通过下调Mcl-I诱导白血病U937细胞凋亡 [Cancer Biol Ther. 2010 ；9 (2) :109_10·]。冬凌草甲素(Oridonin，简称Ori)是从唇形科香茶菜属(Rabdosia rubescens Hemsl. Hara)植物中分离出的化学结构为对映贝壳杉烯二萜类有机化合物。自20世纪70 年代研究证实了 Ori的药用抗肿瘤特性，并得到广泛的关注。我国是该属植物资源最丰富 的国家。Ori味苦、甘、性微寒，具有清热解表、消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤等作用。有相关 研究报道Ori可以通过激活Fas/FasL-ERK信号途径诱导U937和L929肿瘤细胞凋亡，诱导 HeLa、MCF-7、L929、HT1080细胞的自噬、引起肿瘤细胞坏死、抑制肿瘤血管发生以及促进UV 诱导肿瘤细胞凋亡和自噬，其相关的抗肿瘤信号途径涉及NF-κ B，MAPKs, R0S，酪氨酸激酶 (PTKs)等[Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2005 ；30 (23) 1856-9. Biol Pharm Bull. 2006 ； 29(9) 1873-1879. J Pharmacol Sci. 2005 ；98 (4) :361_371· Biol Pharm Bull. 2005 ； 28(3) 461-467.]。
发明内容
本发明公开了一种甘草次酸和冬凌草甲素的复方药物组合物，药理试验证明该复 方药物组合物具有协同抗白血病作用。本发明同时也提供了一种治疗白血病的方法，即施用治疗有效量的甘草次酸和冬 凌草甲素组合物，该治疗方法可用于包括人在内的哺乳动物。发明人在对GA和Ori配伍药理活性的研究中发现，将甘草次酸和冬凌草甲素组合给药，特别是当两者摩尔比为1 1-4 1配伍时具有很好抗白血病细胞的协同作用。发明 人分别对人急性髓系白血病U937为模型进行体外MTT筛选，发现其具有很强的抗增殖活性 并呈良好的时效与量效关系，结合经典联合给药分析原理(Median-effect Principle)和 统计分析，结果表明其具有协同作用，尤其是在fa < 0. 5时可明显产生协同效应抑制U937 细胞增殖，这说明GA和Ori组合物可在低剂量配伍时产生GA或Ori单药高剂量的生物学 效应，从而可以大大降低药物的毒副作用产生，具有良好的临床用药开发前景。以下结合实施例对GA和Ori组合物的药理活性做进一步阐述。
图1为1 2摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲 线图2为1 1摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲 线图3为2 1摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲 线图4为4 1摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲 线
具体实施例方式实施例1U937细胞筛选优化GA和Ori组合物取对数生长期的细胞，分别接种3 X IO4个细胞/孔于96孔板上，待生长6小时后， 离心弃上清，然后按以下分组给药肿瘤细胞设不加药组和加药组，其中加药组发GA和Ori 单药组、GA与Ori联合用药不同摩尔比例组，每组设4-6个复孔，培养24小时，弃上清，加入 100μ 1含0. 5mg/ml的MTT (四氮唑盐)无血清培养液培养4小时，加入100 μ 1 DMSO(二甲 亚砜)，放置于微型振荡仪上振荡lOmin，再置于酶标仪上570nm处检测OD值。结果按照以 下抑制率公式计算每种情况下肿瘤细胞生长的抑制率，具体结果见表1-3。抑制率=(1-加药组OD值/对照组OD值)表1为GA和Ori单独给药作用细胞24小时后不同浓度的抑制率，发现随着浓度 的增加，抑制率呈浓度依赖性，其中GA的IC50约为37. 6 μ Μ, Ori的IC50约为16. 7 μ Μ。表2为GA和Ori按摩尔比1 2和1 1配伍组合时的抑制情况，其中当摩尔比 为1 2时，GA和Ori配伍的浓度分别为2. 5，5，7. 5，10 μ M和5，10，15，20 μ M ；当摩尔比为 1 1时，两者的浓度均取2.5，5，10和20μΜ。从其中我们可以获得随着配伍浓度的增加， 其抑制率呈浓度依赖性。表3为GA和Ori按摩尔比2 1和4 1配伍组合时的抑制情况，其中当摩尔比 为2 1时，6々和01^配伍的浓度分别为5，10，20，3(^]\1和2.5，5，10，15“]\1;当摩尔比为 4 1时，两者的浓度分别为10，20，40，6(^11和2.5，5，10，1511|1。其中我们发现随着配伍 浓度的增加，其抑制率呈浓度依赖性。表1 GA和Ori单药作用24小时IC50
权利要求
一种复方药物组合物，其特征是活性成分由甘草次酸和冬凌草甲素组成。
2.权利要求1的复方药物组合物，其中甘草次酸和冬凌草甲素的摩尔比为1 1 4 1。
3.权利要求2的复方药物组合物，其中甘草次酸和冬凌草甲素的摩尔比为1 1 2 I0
4.权利要求1的复方药物组合物，还含有药物上可接受的载体。
5.权利要求1的复方药物组合物用于制备治疗急性髓性白血病的药物的用途。
全文摘要
本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种具有抗急性髓性白血病作用的复方药物组合物，其特征是它的活性成分由甘草次酸和冬凌草甲素组成。药理试验证明两者联合用药具有较强的协同治疗白血病的用途。
文档编号A61P35/02GK101953839SQ20101051121
公开日2011年1月26日 申请日期2010年10月19日 优先权日2010年10月19日
发明者刘群, 刘鄂湖, 周萍, 张蕾, 彭咏波, 李萍, 胡蓉, 闻晓东, 陈君, 齐炼文 申请人:中国药科大学