一种CaCO₃纳米管/鬼臼复合材料的制备方法

专利名称：一种CaCO₃纳米管/鬼臼复合材料的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种新型CaCO3纳米管/鬼臼复合材料的制备方法。
背景技术：
材料科学一个日益受到人们关注的目标就是构建具有对称复杂结构、性能优良的纳米材料，而微米/纳米空心球、管则是这一类空腔材料的代表性物质，它们在生物技术、 光催化、光致装置、高能量电极材料，气敏等领域有重要的应用价值，尽管已经有很多报道关于利用最初的晶体单元组装形成一维、二维或三维的空心结构，例如层状静电吸引，自组装技术，模板去除法等。然而常规制备空心纳米材料的技术，如模板法和Ostwald熟化生长等需要相对复杂的操作工艺，通用性不好，有一定的局限性。而受到大量关注的模板法在处理过程中受制于要保持产物(最终晶体)的完整性，尽管已经有很多方法被尝试，但是如何简便且具有一定通用性的方法还是一个难题。“晶体构建”也仍然是一个挑战，并一直吸引人们的关注，发展便利的、温和的制备空心结构的方法仍然是非常值得期待的。将空心材料用于载药等生物医药用途，是纳米技术领域一个大胆的创新。最近几年，基于新型的药物载体，如微囊、纳米管、空心纳米粒子的研究比较热门，被搭载对象可以被材料保护从而抵御外界物理、化学和生物环境造成的损伤，又易于穿透毛细血管和毛细淋巴管，易于被体内细胞摄取。到目前为止，能用于载药的纳米体系从载药机理上可以分为两大类第一大类是以表面吸附(通过物理或化学作用)进行药物输送，第二大类是利用空腔体系进行货运式负载。后者研究比较多的是高分子材料、生物陶瓷类、生物衍生物类、 生物活性物质与无生命材料结合而成的杂化材料等，如聚乳酸、原酸酯、聚氨基酸和氨基酸的共聚物、聚己内酯等都是极有潜力的生物材料，但是有机合成的复杂性大大限制了它们的临床使用，而且高分子材料一般的酶降解特点也会限制它们的使用部位和方法。而无机物相对有机质来说，性质稳定，制备过程重复性好。目前无机质空腔材料研究的比较成熟的是碳、氧化锌、二氧化硅等纳米管，但这一类物质在体内又存在不同程度的生物相容性问题。还有一个比较普遍存在的问题，就是受体在搭载过程中的泄露，导致药物副作用和疗效降低。总体而言，现有纳米材料在生物利用率、不良反应、体内半衰期、药物稳定性、溶解度、 吸收、酶降解和细胞屏障等方面，或多或少都还不尽如人意。所以人们期待新材料的开发， 甚至对传统材料重新认识，将它们纳米结构化以后可能会带来一些突破。纳米管(nanotubes. NTs)材料具有特殊的中空及多孔结构，其轴向尺寸为微米数苗级、径向尺寸为纳米数量级、管子的一端封口。纳米管的内部空腔可以作为药物储存的容器，管的开放端则可作为药物释放的通道。与单一材料的纳米粒子相比，纳米管的内外表面可以分别进行不同的改性，这为纳米管材料的多功能化提供了平台，并成为药物载体材料的理想选择。近年来，各种材料的纳米管，如碳纳米管(CNTs)、SiO2纳米管(SNTs)、TiO2纳米管 (TNTs)和磁性纳米管(MNTs)等都有被报道用作药物的缓控释。其中，以CNTs的研究及其应用最为广泛。Bianco 等(Wu W，Benincasa M，Bianco A，et al. Targeted Deliveryof Amphotericin B to Cells byUsing Functionalized Carbon Nanotubes[J]. Angew. Chem. Int.份.，2005，44 (39) :6358_6362.)以两性霉素B(AmB)为模型药物，荧光素为示踪剂，将AmB连接在CNTs的侧壁上，荧光素连接在CNTs的顶端。AmB是一种很有效的抗生素，但过低的溶解度使其对哺乳动物的细胞产生很大的毒性。研究发现，采用将药物结台到载体CNTs上的方式使Amb的毒性显著降低。碳酸钙(Calcium Carbonate, CaCO3)是一种用于人体能够代谢的物质，同时钙本身是人体所需的一种必需元素，因此，CaCO3粒子可以作为一种药物传送系统应用于医药领域。纳米CaCO3以其粒径小、比表面积大的特点，有着普通CaC03粒子所不具备的特殊性能， 正越来越广泛地用作载药。无机质晶体CaCO3存在三种晶型方解石、球霰石、文石，每一种晶型都有常见结晶形态，方解石总是长成菱面体形态，因为晶面是方解石最稳定的晶面。而球霰石总是长成球形，文石型总是长成针状晶体。但是如果有外来因素干扰了结晶过程，一些次稳定的晶面也会出现在晶体最后形貌中。实验室制备CaCO3，根据相转变定律，产物多为热力学稳定的方解石，其他二种形态并不容易制备。而自然界、特别是生物界，则恰恰相反，所以有一段时间模拟生物矿化制备CaCO3受到集中关注，这类方法首先要进行模板构建，这个模板可以是分子筛，也可以是一类化合物(如双亲水嵌段共聚物)，其次是必须有纳米尺寸的小单元提供给模板进行导向团聚，尽管第一个要求很容易做到，如微乳液小液滴作模板等，但是往往第二个要求很难做到，因为它要求胶体保持一定的稳定性，在水环境中保持纳米粒子为基元的胶体的暂时稳定并不是一件容易的事情。相比较传统的材料制备，空腔状纳米碳酸钙(Cavity-shaped Nano Calcium Carbonate, CNCC)的研究无疑大大拓展了这种传统材料的使用可能性，目前已成为CaCO3 领域的研究热点。Yu Q 等(Yu Q. , Ou H. D. , Song R. Q. , Xu A. W. , J. Cryst. Growth 2006，286 178)在CaCO3的结晶过程中加入聚丙烯酰胺得到空心的球霰石，Tremel Wolfgang 等人(Loges N. , Graf K. , Nasdala L. , Tremel W. , Langmuir, 2006, 22: 3073)利用仿生诱导方法得到微米尺寸的CaCO3空心球。S. Mann等(Walsh D.，Mann S.， Nature 1995，377: 320.)报道了利用方向胶束制备CaCO3空心壳结构。这些研究为CaCO3 的进一步发展做出了贡献，但是，从生物医药应用的角度上来看，这些产物在晶体尺寸、形貌控制均一性、产率等方面离生物材料的要求都有一定距离。从目前已有的文献报道来看，Ma G.H.等人(Wei W. , Ma G. H.，Hu G.，Yu D.， McleishT.，Su Z. G.，Shen Z. Y. ,J. Am. Chem. Soc. 2008，130: 15808)曾制备过中空的CaCO3纳米粒子用于抗癌药物载体，Mizushima Y.等人(Ueno Y.，Futagama H.，Takagi Y·, Ueno A.，. Mizushima Y, Journal of Controlled Release, 2005， 103: 93)禾 Ij 用多孔 CaCO3 表面吸附活性蛋白，Cao C. Y.等人(Zhao Q, Zhang S. , Tong W. J. , Gao C. Y., Shen J. C. , European Polymer Journal, 2006，42: 3341)利用 CaCO3 修饰材料携带和释放抗肿瘤药物，还有一些研究利用实心纳米材料的表面效应通过物理吸附或弱的化学键和进行一些蛋白和DNA的覆载。这些研究为CaCO3的生物医药应用奠定了一定的基础，但是，还没有文献报道系统性地研究不同晶型、不同形貌的CNCC在生物医药应用方面的共性与差异，在生物医药应用方面更是缺乏进一步的突破。分析其原因，一是受化学制备以及晶体控制的制约，二是受生物医药应用的复杂性以及跨学科研究的特殊要求的限制。考虑到CaCO3本身具有的优良性质，如果在其性能、尺寸上加以改进，完全可以使其成为一种高兼容性的、多用途的生物载体。这种材料既能作为高效药物载体，也能进一步在基因转染、搭载疫苗等多方面进行科学尝试。搭载的对象不仅可以是一些毒副作用大的药物，还可以是不同尺寸大小的蛋白分子、脱氧核糖核酸、病毒、多肽等。通过控制材料的形貌能够对其物理性质加以改善，比如表面积、晶体尺寸、稳定性能等，特别是纳米级颗粒更是性能优异。采用我们这种有序分子通透膜(Transparent Film of Ordered Molecular, TFOM)制备材料纳米管的新方法，能够便利地制备出分散性好，尺寸均一的管形态CNCC，在生物材料领域有着重要应用价值。因为作为载药材料，CNCC由于结构上具有中空特点，可以携载大于普通材料携载量的药物，此外，它粒径小而均一，能够良好分散，具有更好的生物相容性，有望在生物载药领域得到大量利用。鬼臼毒素(Podophyllotoxin，PPT)是鬼臼类植物的主要有效成分.1942年， Kaplan局部应用PPT治疗尖锐湿疣，获得了满意的效果.1947年，科学家证实了 PPT 对动物癌细胞的破坏作用，引起了人们对此进行广泛的研究，但由于PPT的毒性太大， 使其作为抗肿瘤药物在应用上受到了很大的限制.现在，人们正在努力探索，期望找到治疗效果更好，毒副作用更小的鬼白毒素类抗癌药物或新的鬼白毒素给药剂型。鬼臼毒素(Podophyllotoxin 1)又叫鬼臼素、鬼臼毒、鬼臼脂素是从鬼臼类植物中分离得到的天然抗肿瘤活性成分nj，鬼白类植物在我国主要分布在甘肃、青海、西藏、 陕西、四川等地121。鬼臼毒素的应用可以追溯到1820年，当时美洲鬼臼和喜马拉雅山区鬼臼的干燥根茎被当地人用作利胆剂和泻药，1820—1942年鬼臼类植物的根茎的水不溶性提取物鬼白树脂被列入美国药典.1861年Bentley发现了鬼白毒素的抗肿瘤活性.1880 年Podwyssotzki首次分离出了鬼臼毒素。Borsche和Niemann以及Spath分别独立地提出了鬼臼毒素的结构。1942年Kaplanti证实了鬼臼树脂对肿瘤细胞生长有抑制作用。1946 .1947年King和Sullivan阐明了鬼臼毒素是通过阻止细胞有丝分裂中期微管束的形成来抑制肿瘤的生长，与秋水仙碱有类似的抗肿瘤作用机理。引起了人们的广泛注意，并进一步证实其具有抗癌活性。但是由于其严重的毒副作用，限制了其在临床上的应用。1951年 Hartwell和Schrecker给出了鬼臼毒素的结构。1卯4年Von Wartburg和他的合作者发现了鬼臼毒素的糖配体。70年代，瑞士山道士公司先后合成了依托泊苷(etoposide，VP-16) 和替尼泊苷(teniposide，VMC6)，90年代中期推出的VP. 16的前药Kopophos.并证明是高活性的抗肿瘤药物.1983年依托泊苷通过美国FDA认证.VP*16作为拓扑异构酶. IKtopoisomerase. II，Τ0Ρ-ΙΙ)抑制剂，现在已成为临床上最常用的抗肿瘤药物之一，对小细胞肺癌，非何杰氏病，急性单核细胞白血病，髓性单核细胞白血病，乳腺癌，膀胱癌，睾丸癌等众多肿瘤有较好的治疗效果，同时对Kaposi肉瘤和获得性免疫缺陷症亦有一定的疗效。

发明内容
本发明的目的在于提供一种新型CaCO3纳米管/鬼臼复合材料的制备方法。本发明利用有序分子通透膜(TransparentFilm of Ordered Molecular, TFOM) 反应体系作跨膜传输介质，通过在TFOM的另一侧加入适量的修饰剂，产生协同作用，来模拟细胞膜和生物矿化形成过程中的有机介质干预过程。其中，加入的修饰剂在TFOM反应体系的成核界面形成一种弱的作用，使得产物在这样一种由软模板控制结晶成核的条件下形成一种管状的纳米颗粒，解决了普通化学反应难以产生管状的独特晶体结果和多级有序晶体的难题，并且，这是一种温和、高效且绿色的化学反应。这样反应发生在一种气体反应发生器(Gas Reaction Generator, GRC)在我们设计的反应体系中，反应物之一的有机羧酸根在碰到反应物之一 Na2CO3会发生反应，产生(X)2气体，由于反应体系是个封闭体系，这些 CO2气体在溶液中又会有一个生成HC03_的可逆反应(化学反应方程式如下)， 2RC00H + CO广 2RC0CT + H2O + CO2 个 CO2 + H2O Iiiiiiiiiiife HCO3 + H
由于有机羧酸根对CaCO3的晶体生成会有一个晶面吸附效应，通过分子识别选择性地与晶体某一方向面网相结合以后，会抑制这一面网的发育，使晶体在垂直该面网方向上的生长速度相对与其它面网的生长速度会减弱或停止，从而是该面网相对稳定并最终表现在晶体最后形貌中。所以总体来说，我们的实验方法有突出的三大特点一是控制离子传输速度，从而控制晶体成核速度；二是晶体形成过程中会有相对刚性的气体分子作为诱导模板； 三是晶体熟化过程中还会有一个软性的有机羧酸根模板影响它的晶体发育。本发明提供的一种新型CaCO3纳米管/鬼白复合材料的制备方法，具体步骤如下
(1)将邻菲罗啉载体溶于有机溶剂中，高速搅拌后，放入表面处理干净的有序分子通透膜(Transparent Film of Ordered Molecular, TF0M)，浸泡 20-25 小时，然后将TFOM取出， 用滤纸将TFOM表面擦吸处理干净，装入并固定在气体反应器中间，形成中间为TF0M，左、右为设有搅拌装置的相隔体系即GRC体系；
(2)配制2.13-2. 17 % CaCl2溶液、0.53-0. 57 % Na2CO3溶液，分别置于步骤(1)的气体反应发生器(Gas Reaction Generator, GRC)左、右相隔体系中，在Na2CO3溶液一侧加入修饰剂M，搅拌下反应M-48小时后，取出妝20)3溶液一侧内的沉淀离心、依次用水、丙酮、无水乙醇各清洗两次，所得产物保存在无水乙醇中，分别用FITR、XRD和SEM对产物的结构和形进行表征，产物纯净，形貌为中空管状，粒径在微米级以下；修饰剂M的加入量为Na2CO3 质量的 0. 75-0. 85% ；
(3)将步骤( 所得产物经紫外检测，确定纳米碳酸钙可以载进鬼白毒素后，反应前，在离心管内相Na2CO3溶液一侧加入相当于CaCO3理论产量的10_15%的鬼臼毒素，使材料在形成过程中慢慢将鬼白毒素包裹其中，反应完成后，用丙酮和无水乙醇将剩余鬼臼毒素洗脱出来，参照鬼臼毒素的标准曲线，分别用紫外可见分光光度计及HPLC两种方法对纳米CaCO3负载的鬼白毒素进行定量分析。纳米CaCO3载药量=(纳米CaCO3中药物的质量/复合材料的总质量)X 100% 纳米CaCO3包封率=(纳米CaCO3中药物的质量/所秤取药物总质量)X 100% 本发明中，所述修饰剂M为柠檬酸。本发明中，所述有机溶剂为氯仿。本发明所得的CaCO3纳米管/鬼臼复合材料的正常细胞毒性和肿瘤生长抑制率可以采用MTT法检测，具体步骤如下
选用HEK 细胞为正常细胞模型，Hela细胞为肿瘤细胞模型。含10%小牛血清的 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)培养液，以 2. OX IO4 个 / 孔的浓度接种于 96 孔板中，每孔体积100 μ L·所用MTT (溴化-3-(4，5 二甲基噻唑-2)-2，5 二苯基四唑)为Sigma公司产品。预培养M h使细胞贴壁生长至对数期后，每组3孔分别加入不同浓度的纳米CaCO3溶液、鬼臼溶液及鬼臼/纳米CaCO3悬混液(浓度分别为5，10，20，40 μ g/ml)及空白培养基对照，培养一定时间后，每孔加入MTT溶液20 μ 1，孵育4 h后弃去上清液，每孔加入150 μ 1 DMSO终止反应。将培养板水平振荡15 min，用酶联检测仪在490 nm处测定吸收度，按下式计算细胞存活率
细胞存活率 ％ =A49tl (样品)/A49。(m) XlOO %
(A490 (#pn)加入样品组吸光度值；A49ciwm):对照组空白培养基细胞的吸光度值) 本发明具有以下优点
一、本方法首次提出了一种能够控制形成一种均一形貌的CaCO3纳米管的新方法。产物量大，粒径小且分布均一，单分散性好，本发明填补了管型纳米CaCO3制备的空白。二、本发明技术操作简易，反应体系温和、稳定、干扰少，产物处理易于处理，便于材料大规模合成。三、本方法制备的CaCO3纳米管具有载药量高、载药稳定且能被生物本体吸收降解的特点，是一类有效的药物载体，能够作为一种有效药物载体应用于医药领域。四、TFOM法制备CaTO3纳米管过程不但反应温和，还可避免对环境造成残留物污染，资源浪费，且生产成本低廉，是一种理想、环保的纳米材料制备新型方法。


图1为本发明实施例1的新型CaCO3纳米管/鬼臼复合材料的透射电镜观测图、
空心管状结构。图2为本发明实施例2的复合材料对正常细胞HEK 293T的毒性实验。图3为本发明实施例2的复合材料对肿瘤细胞的抑制率实验。图4为气体反应发生器的结构图示。图中标号1为恒速搅拌控制器，2为铁架台，3为磁力搅拌子，4电动搅拌机，5为第一玻璃容器，6为有序分子通透膜，7为恒温磁力搅拌器，8为碳酸钠溶液，9为氯化钙溶液。
具体实施例方式下面通过实施例进一步描述本发明。实施例1
所述自制气体反应发生器的结构如图4所示，由恒速搅拌控制器1、铁架台2、磁力搅拌子3、电动搅拌机4、第一玻璃容器5、有序分子通透膜6和恒温磁力搅拌器7组成，其中 第一玻璃容器5放置于恒温磁力搅拌器7上方，第二玻璃容器一端放入第一玻璃容器5内， 且第二玻璃容器底部开口，该开口部位设有有序分子通透膜6，第二玻璃容器底部与第一玻璃容器5底部之间有一定距离，第二玻璃容器通过铁架台2固定，电动搅拌机4的搅拌杆插入第二玻璃容器内，电动搅拌机4连接恒速搅拌控制器1，第二玻璃容器内放置有碳酸钠溶液，第一玻璃容器5内放置有氯化钙溶液。先将4. 0 g邻菲罗啉载体溶解于IOOml氯仿中，以3000 rpm的转速剧烈搅拌15-20min，制成含载体的有序分子通透膜(Transparent Film of Ordered Molecular, TFOM)；然后将清洗处理过的TFOM干燥后放入上述液膜中浸泡20-25小时后取出，用滤纸将TFOM表面擦吸处理干净，装入并固定在反应容器中间，形成中间为TF0M，左、右为设有搅拌装置的溶液相隔离体系即气体反应发生器(Gas Reaction Generator, GRC)0第一步，将4. 0 g邻菲罗啉溶解于100 ml纯氯仿中，以3000 rpm的转速下剧烈搅拌约15 min,制成含载体的TF0M，将清洗处理过的TFOM干燥后放入上述TFOM体系反应浸泡M小时后取出，用滤纸将TFOM表面处理干净，装入自制气体反应发生器(Gas Reaction Generator, GRC)装置，形成中间为TF0M，左右为溶液相的隔离体系。膜两侧各有一磁力搅拌仪。第二步，将2. 17%CaCl2溶液、0. 53% Na2CO3溶液各80ml分别加入到TFOM左右两侧，低速搅拌反应5分钟后，将Na2CO3溶液一侧的产物CaCO3离心分离后，先后用水、丙酮、 无水乙醇各清洗两次，最后将产物保存在无水乙醇中。产物为白色粉末，细腻，均勻。(上述所有试剂均为分析纯)。实施例2:
第一步最大吸收波长称取0. 003g鬼臼毒素，将其置于IOmL容量瓶中用双蒸水溶解并进行定容。20(T800 nm范围内通过紫外可见分光光度计进行扫描，285 nm为鬼臼毒素的最大吸收波长，所以实验选择在此波长下测试溶液中鬼白毒素的浓度。使用同样的方法紫外检测鬼白/纳米CaCO3纳米材料的紫外全谱，观察其紫外光谱吸收情况，判定此材料在鬼白敏感吸收波长处是否存在干扰。鬼臼工作曲线的绘制分别配制1、2、3、4、5、6、8、10μβ/πι1鬼臼标准溶液，在处测其吸光度。拟合工作曲线。鬼臼/纳米CaCO3复合纳米材料载药量的测定制备样品，将0. 003 g的鬼臼/纳米CaCO3干燥粉末置于10 ml容量瓶中，滴加6 M盐酸溶液100 μ L，0. 02 M、pH 7. 45的磷酸缓冲液进行定容至10 ml，超声30分钟后，再置于37 °C水浴锅过夜。次日在四5 nm处测其紫外吸光度值，对比之前绘制的鬼臼工作曲线，即可得出样品中鬼臼的浓度。采用下式计算
纳米CaCO3载药量=(纳米CaCO3中药物的质量/复合材料的总质量)X 100% 纳米CaCO3包封率=(纳米CaCO3中药物的质量/所秤取药物总质量)X 100% 由图2可以看出，CaCO3悬浊液浓度越低细胞存活率越高，以阴性对照组的OD值作为 100%细胞增殖率，计算细胞的平均存活率在80%以上，细胞毒性为1级，可认为TFOM法制备的CaCO3具有良好的细胞相容性。当CaCO3与PPT复合后可以降低单纯PPT的毒性。虽然比较纯CaCO3，载药后的细胞毒性略大，但还属于细胞毒性为1级范围。结果一方面可以证明CaCO3是一个毒性很小，生物相容性好的安全载体，另一方面可以证明CaCO3-PPT纳米复合体对正常细胞是一个安全的药物传递体系。鬼臼/纳米CaCO3复合纳米材料平均载药量为38. 5 %，包封率为64. 4 %。从图3实验结果表明，随着PPT，CaCO3-PPT和CaCO3加入浓度的增加三者对Hela 细胞的抑制效果都有明显的提高，同时CaCO3-PPT复合体系与单纯的PPT相比对肿瘤细胞的抑制程度有了一定的的提高，明显大于药物分子PPT本身的肿瘤细胞活性抑制率，而且 CaCO3本身对Hela细胞也有一定的毒性。这表明CaCO3是一个良好的药物载体，而且由于 CaCO3与PPT的协同作用，使得药物能更好地抑制肿瘤细胞。
实施例3
第一步使用正常细胞株HEK 对其细胞毒性进行检测，对肿瘤细胞的抑制性选用 Hela肿瘤细胞。第二步预培养M h细胞贴壁生长后，以细胞培养液为阴性对照组，每组3孔分别加入不同浓度的PPT溶液、CaCO3-PPT悬浊液及CaCO3悬浊液(浓度分别为5，10，20，40 μ g/ml)ο第三步培养M h后，每孔加入MTT溶液20 μ 1，孵育4 h后弃去上清液，每孔加入DMSO 150 μ 1终止反应。第四步将培养板水平振荡30 min，用酶联检测仪在490 nm处测定吸收度，按下式计算细胞存活率
细胞存活率％ = A490(样品)/ A490(对照)X 100 %
权利要求
1.一种CaCO3纳米管/鬼白复合材料的制备方法，其特征在于具体步骤如下(1)将邻菲罗啉载体溶于有机溶剂中，高速搅拌后，放入表面处理干净的有序分子通透膜，浸泡20-25小时，然后将有序分子通透膜取出，用滤纸将有序分子通透膜表面擦吸处理干净，装入并固定在气体反应发生器中间，形成中间为有序分子通透膜，左、右为设有搅拌装置的相隔体系；(2)配制2.13-2. 17 % CaCl2溶液、0.53-0. 57 % Na2CO3溶液，分别置于步骤(1)的气体反应发生器左、右相隔体系中，在Na2CO3溶液一侧加入修饰剂M，搅拌下反应M-48小时后，取出Na2CO3溶液一侧内的沉淀离心、依次用水、丙酮、无水乙醇各清洗两次，所得产物保存在无水乙醇中，分别用FITR、XRD和SEM对产物的结构和形进行表征，产物纯净，形貌为中空管状，粒径在微米级以下；修饰剂M的加入量为Na2CO3质量的0. 75-0. 85% ；(3)将步骤( 所得产物经紫外检测，确定纳米碳酸钙可以载进鬼白毒素后，反应前，在离心管内相Na2CO3溶液一侧加入相当于CaCO3理论产量的10_15%的鬼臼毒素，使材料在形成过程中慢慢将鬼白毒素包裹其中，反应完成后，用丙酮和无水乙醇将剩余鬼臼毒素洗脱出来，参照鬼臼毒素的标准曲线，分别用紫外可见分光光度计及HPLC两种方法对纳米CaCO3负载的鬼白毒素进行定量分析。
2.根据权利要求1所述的一种CaCO3纳米管/鬼白复合材料的制备方法，其特征在于所述修饰剂M为柠檬酸。
3.根据权利要求1所述的一种CaCO3纳米管/鬼白复合材料的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为氯仿。
全文摘要
本发明涉及一种CaCO3纳米管/鬼臼复合材料的制备方法，具体为先将4.0g邻菲罗啉载体溶解于100ml氯仿中，剧烈搅拌，再将TFOM清洁干燥后放入溶液体系中浸泡一定时间后，拿出，用滤纸处理干净，装入GRC容器中间，形成中间为TFOM，左、右为溶液相隔离体系。配制0.53%-0.57%碳酸钠溶液和2.13%-2.17%氯化钙溶液，分别置于上述TFOM左右两侧，视不同情况加入晶体生长修饰剂M，调pH值至8，低速搅拌后，取出碳酸钠溶液一侧内的溶液，离心得沉淀产物，用水、丙酮、无水乙醇各清洗两次，最后将产物保存在无水乙醇中。本发明反应稳定，操作简单易控制，成本低廉无污染，形貌，结构易控制，产物分布均匀，不易团聚，纯度高，易于工业化。
文档编号A61K31/365GK102240403SQ20111013944
公开日2011年11月16日 申请日期2011年5月27日 优先权日2011年5月27日
发明者唐静, 孙冬梅, 汪世龙, 钱文宇 申请人:同济大学