^99mTc标记RGD多肽肿瘤诊断药物及其制备方法

专利名称：^99mTc标记RGD多肽肿瘤诊断药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及用于肿瘤诊断的放射性药物，特别涉及用于intergrinavi33受体阳性肿瘤诊断的三种RGD多肽放射性药物及其制备方法。
背景技术：
据世界卫生组织(WHO)统计，全世界恶性肿瘤每年发病1100多万人，病死800多万人。恶性肿瘤发病率在我国也呈明显上升趋势，据国家卫生资料统计，近两年来我国城市居民恶性肿瘤占死亡原因的第1位，每年新增患者约220万人。近年来恶性肿瘤的治疗手段在不断发展，不仅传统的化疗和放疗技术更加规范化和科学化，新的治疗方法，如分子靶向治疗、免疫治疗和基因治疗等，正在逐步应用于临床。与之相适应，要求恶性肿瘤诊断技术不仅要能够进行准确的诊断，更迫切需要进一步反映恶性肿瘤的生物学行为和病理特点，为治疗方案的科学化决策提供的确切的依据。恶性肿瘤的转移潜力直接关系到患者的预后，同时对于临床医师选择治疗方案具有至关重要的意义。但目前临床上还缺乏准确判定恶性肿瘤转移能力的检测方法，而主要依靠经验判断。新生血管和淋巴管形成在肿瘤发生、发展和转移中发挥着重要的作用，肿瘤新生血管形成促进肿瘤生长和转移，淋巴道形成与肿瘤转移直接相关。整合素(integrin)是一组跨膜糖蛋白，由一个α亚单位和β亚单位通过非共价键组成的异二聚体，也是细胞外基质蛋白的受体，与细胞外基质蛋白(如纤维结合蛋白、玻璃结合蛋白、层粘蛋白和胶原等) 的受体识别序列RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)特异结合。整合素调控新生血管和淋巴道的形成。诸多研究表明，整合素调控金属基质蛋白酶等蛋白水解酶，直接参与细胞外基质的降解，促使肿瘤转移；整合素的丰富表达是促使肿瘤细胞和血管内皮细胞迁移和侵袭的重要分子，它直接介导肿瘤细胞与基质蛋白的粘附和结合；参与调控胞内细胞骨架构成， 细胞增殖。α νβ3是目前研究最多的整合素分子，在骨肉瘤、成神经细胞瘤、肺癌、乳腺癌、 前列腺癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤及浸润性黑色素瘤等多种实体肿瘤细胞表面和肿瘤新生血管均有丰富的表达，在成熟血管内皮细胞和绝大多数正常组织表达缺乏或几乎不表达。 ανβ3受体介导肿瘤细胞粘附和移行，在肿瘤新生血管生成和淋巴道转移发挥重要作用。 α νβ 3的表达水平与恶性肿瘤的浸润转移能刀等恶性表型有关，也可以作为评价某些恶性肿瘤预后的的指标。放射性核素标记的RGD序列配体已经被用于肿瘤的放射性核素显像研究，用于检测转移潜力较高的integrin α νβ 3表达阳性的肿瘤。已有的研究结果认为R⑶多肽二聚体显像剂与恶性肿瘤表面integrinavi33的亲和力更好，要优于RGD多肽四聚体。但目前已有的RGD多肽二聚体显像剂在非靶器官代谢方面还有一定的不足，有必要发明新型的RGD 多肽二聚体显像剂，通过改变配体的结构，进一步加快显像剂在肺、肝和肾等非靶器官的代谢速度，从而降低放射性本底，提高肿瘤显像的图像质量。

发明内容
为克服已有技术的缺点，本发明的目的在于提供三种生物代谢动力学更为理想的放射性核素标记RGD多肽肿瘤诊断药物。为达到上述目的，本发明的主要技术方案如下通过合成中间体化合物 Boc-K (NIC) -Osu,将 K(NIC)结构与三种多肽 RGD2 (RGD2，X-RGD2 和 3P-RGD2)相连接，再进一步连接螯合剂HYNIC，实现99mTc标记，制成RGD多肽二聚体显像药物 99mTc-HYNIC-K (NIC) -RGD2、、99mTc-HYNIC-K (NIC) _3G_RGD2 和 99mTc-HYNIC-K (NIC) _3P_RGD2。 K(NIC)配体结构使上述三种显像药物在肺、肝和肾等非靶器有更为理想的代谢速度，放射性本底较低，提高了肿瘤显像的图像质量。


图1制备中间体化合物Boc-K(NIC) -OSu的化学反应示意图；图2制备中间体化合物K(NIC)-RGD2的化学反应示意图；图3制备标记前体化合物HYNIC-K (NIC)-RGD2的化学反应示意图；图4制备中间体化合物K(NIC)-3G_RGD2的化学反应示意图；图5制备标记前体化合物HYNIC-K (NIC)-3G_RGD2的化学反应示意图；图6制备中间体化合物K(NIC) -3P-RGD2的化学反应示意图；图7制备标记前体化合物HYNIC-K (NIC)-3P_RGD2的化学反应示意图；图 899mTc 标记制备显像剂 99mTc-HYNIC-K (NIC) -RGD2、、99mTc-HYNIC-K (NIC) -3G-RGD2 和 99miTc-HYNIC-K (NIC)-3P-RGD2 的示意图；图 9"mTc-HYNIC-K (NIC) _3P_RGD2 用于 U87MG 胶质瘤、MDA-MB_4;35 乳腺癌、A549 肺癌、PC3前列腺癌等四种荷瘤鼠动物模型的γ显像图。
具体实施例方式一 . RGD多肽放射性药物的制备方法1.材料和设备所需化学物品由美国Sigma/Aldrich公司购入，不需进一步纯化即可使 用° Boc-Lys (nicotinoyl) -OH 禾口 Lys(Boc)2-OSu 由美国 Bachem Biosciences 公司购入。RGD 环肽，E [c (RGDfK)]2 (RO)2)，G3-E K3-C (RGDfK) ]2(3G-RGD2)和 PEG4-E [PEG4-C (RGDfK) ]2 (3P-RGD2)由美国 P印tides hternational 公司(Louisville，KY) 按照常规工艺制造。NMR (核磁共振)频谱数据由300MHz的Bruzker ARX FT核磁共振光谱仪记录所得，显示的频谱数据是以TMS(三甲基硅烷基)为参照的化学位移值(ppm)。ESI (电喷射离子化)质谱数据由Firmigan LCQ传统质谱仪上采集获得。99mTcCV从原子高科股份有限公司购得。2. HPLC (高效液相色谱)方法HPLC方法1 使用的是LabAillance色谱系统，该色谱系统包括紫外_可见光检测仪(波长为254nm)和以hrbax C18为固定相的半制备柱(柱宽X柱长为9. 4nmX250mm, 固定相的孔径大小为IOOA，美国Agilent Technologies公司提供)，流动速度为2.5ml/min,首先用含70 % A (用溶解在水中的0. 1 %的三氯乙酸配置)和30 % B (用溶解在乙醇中的0. 的三氯乙酸配置)的流动相平衡色谱柱0 5分钟，然后依次用含有30% B的流动相和含70% B的流动相分别冲洗5分钟和20分钟。HPLC方法2 使用的是LabAillance色谱系统，该色谱系统包括β -ram IN-超声检测仪(Tampa，FL)和以hrbax C18为固定相的色谱柱(柱宽X柱长4. 6mmX 250mm，固定相的孔径大小为300A，美国Agilent Technologies公司提供)，流动速度为lml/min。流动相的组成以及冲洗的时间依次为90% A(25mM NH4Oac, pH = 6. 8)、10% B(乙腈)到85% AU5% B冲洗5分钟，15% B冲洗5分钟，20% B冲洗20分钟，60% B冲洗25分钟。HPLC方法流动相的组成以及冲洗时间依次为第一次用90% A(25mM NH4Oac,pH =6. 8)、10 % B (乙腈)到85 % A、15 % B的流动相冲洗5分钟，然后依次为15 % B冲洗5m 分钟，15% B冲洗5分钟，20% B冲洗20分钟，60% B冲洗25分钟。3.中间体化合物Boc-K(NIC)-Osu的制备方法将300μπιο1Ν、Ν' -二环己基碳酰亚胺(DCC，质量61. 9mg)添加到3ml含有 290 μ mol BOC-Lys (烟酰氯盐酸盐，质量IOlmg)和300 μ mol羟基琥珀酼亚胺(NHS，34. 5mg) 的DMF(二甲基亚酰胺)溶液中。反应混合物需要在室温下搅动5小时。反应混合物中的白色沉淀需通过过滤除去。剩下的过滤液在低压下使其蒸发干。然后将蒸发干的残留物溶解在3ml 二氯甲烷中。再过滤此溶解液并将滤过液浓缩至Iml。接着向浓缩液中逐滴添加20ml 二乙醚，反应会生成白色沉淀。过滤得沉淀，并用二乙醚洗涤(洗三次，每次5ml)。真空下干燥即可得B0c-K(NIC)-OSu粗产品。所得产品质量为75. 8mg (产率约为60%)。粗合成的B0c-K(NlC)-OSu不经过进一步纯化即可用于多肽的连接。Hl标记的核磁共振(⑶Cl3) 1. 60 (s，9H，(CH3) 3C0)，1. 75 (m, 2H, CH2)，1. 88 (m, 2H, CH2)，2. 12 (m, 2H, CH2)，3. 01 (s,4H, COCH2CH2CO)，3. 66 (t, 2H, CH2CH2NH)，5. 10 (dd, H, NHCHC0)，7. 54 (t, H, aromatic)，8. 36 (d, H, aromatic), 8. 88 (d, H, aromatic)禾口 9. 15 (s, H, aromatic)。(图 1)4.中间体化合物K(NIC)-RGD2的制备方法将20 μ mol Boc-K (NIC) -OSu (质量 8. 9mg)和 4 μ mol E [c (RGDfK) ] 2 (质量 4. 8mg) 溶解在2ml无水DMF中。然后加入3滴DIEA，并在室温搅拌过夜。加入2ml水，反应混合物的Wi值为6. 0到7. 0。参照高效液相色谱(方法1)分离反应产物。收集20. 7分钟时的样品并真空冷冻干燥即可获得BOC-K(NIC)-RGD2产物质量为3. Img(产率47% )。ESI-MS质谱分析的数据为:m/z (质荷比)=1651. 5 (计算的分子量为1650. 8d，分子式[C76H110N22O20]+)。 将Boc-K(NIC)-RGD2溶解在2. Oml干净的TFA中，室温搅拌15min可以使TFA除去。剩余的反应物溶解在2ml的0. IM的醋酸铵缓冲液中。然后按照高效液相色谱(方法2)分离反应产物，收集16. 5min时的样品并真空冷冻干燥即可获得反应产物K(NIC)-RGD2，产物的质量为2. 5mg，产率86%。ESI-MS质谱分析的质荷比m/z为1552，计算的分子量为1550. 8d， 分子式[C71Hlt^22O18]+。(图 2)5.标记前体化合物HYNIC-K (NIC) -RGD2的制备方法将8 μ mol HYNIC-Osu (质量为 3. 5mg)和 1. 6 μ mol K (NIC) -RGD2 (质量为 2. 5mg) 溶解在aiilDMF中。向混合物中添加3滴DIEA。室温搅拌反应混合物M小时。然后加入 2ml醋酸铵缓冲液(100mM，pH = 7. 0)再利用高效液相色谱(方法1)分离反应产物。收集 18. 7min时的样品，并真空冷却干燥即可得HYNIC-K(NIC)-RGD2。产物的质量为1. Img(产率为38%。ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为1邪4. 3 (计算的分子量为1553. 8d，分子式+)。(图 3)6.中间体化合物K(NIC)-3G_RGD2的制备方法14 μ mol Boc-K (NIC) -Osu (质量为 6. 3mg)禾口 2·8μπιο1 Gly3-E[Gly3-C (RGDfK) ]2(质量为5. Img)溶解在2mlDMF中。向混合物中添加3滴DIEA0 室温搅拌反应混合物过夜。然后加入2ml水，调整反应体系的PH值约为6. O 7. O。再利用高效液相色谱(方法1)分离反应产物。收集19. 3min时的样品，并真空冷却干燥即可得 Boc-K(NIC)-3G3-RGD2。产物的质量为3. Omg，产率为50%。ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为 2163. 9 (计算的分子量为 2164d，分子式[C76H110N22O20]+)。将 Boc-K(NIC) -RGD2 溶解在2. Oml无水TFA中，室温搅拌15分钟可以使多余的TFA除去。剩余的反应物溶解在2ml 的0. IM的醋酸铵缓冲液中(100mM，pH = 7. 0)。然后按照高效液相色谱(方法1)分离反应产物，收集16.5分钟时的样品并真空冷冻干燥即可获得反应产物1((肌0-36-1 02，产物的质量为2. 9mg(产率约90% )。ESI-MS质谱分析的质荷比m/z为2064. 4，计算的分子量为 2063. 9，分子式[C89H129N31O27]+。(图 4)7.标记前体化合物HYNIC-K (NIC)-3G_RGD2的制备方法将7 μ mol HYNIC-Osu (质量为 3. Img)和 1. 4 μ mol K (NIC) _3G_RGD2 (质量为
2.9mg)溶解在aiilDMF中。向混合物中添加3滴DIEA。室温搅拌反应混合物2天。然后加入2ml醋酸铵缓冲液(100mM，pH = 7. 0)，再利用高效液相色谱(方法1)分离反应产物。 收集15. 5分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得HYNIC-K(NIC)-3G-RGD2。产物的质量为 0. 5mg，产率为15%。ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2366. 9 (计算的分子量为2367d， 分子式[Cltl2H138R34O31S]+)。(图 5)8.中间体化合物K(NIC)-3P_RGD2的制备方法1 2 μ mo 1 Boc-K (NIC) -Osu (质量为 5. 4mg)禾口 2·4μπιο1 PEG4-E[PEG4-C (RGDfK) ]2(质量为5. Omg)溶解在aiilDMF中。向混合物中添加3滴DIEA。 于室温过夜搅拌反应混合物。然后加入2ml水，调整反应体系的PH值约为6. O 7. O。再利用高效液相色谱(方法1)分离反应产物。收集21. 5分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得反应中间物Boc-K(NIC)-3P-RGD2。产物的质量为3. %ig，产率为60%。ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2392.4(计算的分子量为2392. 2，分子式[Cltl9H173N25O35]+)。将所得 BOC-K (NIC) -3P-RGD2溶解在aiilDMF中，于室温搅拌15分钟，使得TFA除去。剩余物质溶解在aiil 0. IM的醋酸铵缓冲液(100mM，PH = 7. 0)中。再利用高效液相色谱(方法1)分离反应产物。收集14.2分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得反应产物K(NIC)-3P-RGD2。产物的质量为3. Omg，产率为90%。ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2294(计算的分子量为 2292. 2，分子式[C104H165N25O33]+)。(图 6)。9.标记前体化合物HYNIC-K (NIC)-3P_RGD2的制备方法将6·5μπιο1 HYNIC-OSu (质量为 2. 9mg)和 1. 3 μ mol K (NIC) _3P_RGD2 (质量为
3.Omg)溶解在aiilDMF中。向混合物中添加3滴DIEA。于室温搅拌反应混合物3天。再利用高效液相色谱(方法1)分离反应混合物。收集18分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得反应产物HYNIC-K(NIC)-3P-RGD2。产物的质量为1. Omg，产率为30%。ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2595. 3 (计算的分子量为2595. 2，分子式[C117H174N28O37S]+)。(图7)。
10. 99mTc-HYNIC-K (NIC) -RGD2、,"mTc-HYNIC-K (NIC) -3G-RGD2 禾口 99mTc-HYNIC-K (NIC) _3P_RGD2 的标记方法向一个5cc的玻璃瓶中加入25 μ g HYNIC连接剂，0. 4mL 0. 25M琥珀酸缓冲液(pH =4. 8)以及0. 4mL tricine溶液Q5mg/mL，溶解在0. 25M琥珀酸缓冲液中)。再向玻璃瓶中加入 0. 5mL99mTc(V(约含 10 20mCi)和 25L SnCl2 (1. Omg/mL 溶解在 0. IN HCl 中)。然后将玻璃瓶至于100°C热水浴中加热20分钟。加热完成后，将玻璃瓶置于室温放置5分钟。 接着采用放射性-高效液相色谱(方法幻对反应产物进行分析。确定LogP值。对于生物组织分布的研究，先利用高效液相色谱对放射性99mTc标记药物进行纯化。流动相中的挥发性物质可以在真空中除去。将剩下的放射性示踪物溶解在盐溶液中至放射性比活浓度约为 30Ci/mL即可得到用于组织分布研究的显像药物。对于显像的研究，药物可以按照以下方法准备将放射性示踪物溶解在盐溶液中至放射性比活浓度约为lmCi/mL。在封闭实验中， 将RGD2多肽溶解在药剂中至终浓度3. 5mg/mL。在将配置成的显像剂溶液注射到动物体内之前，需要使用0. 20 μ m的Millex-LG过滤器过滤。每只实验动物注射0. Iml的显像药物溶液。(图8)三种99mTc标记RGD多肽药物均有高的放射性化学纯度(RCP >90%)以及高的特异性( 5Ci/ymol)。在等体积的辛醇和25mM磷酸缓冲液的混合液中可以确定这三种复合物的分离系数。表1总结了这三种99mTc标记RGD多肽药物的理论计算的LogP值以及它们在高效液相色谱中的阻滞时间。表1.99mTc标记RGD多肽药物的理论计算的LogP值以及它们在高效液相色谱中的阻滞时间
权利要求
1.三种99mTc标记的RGD多肽放射性药物，这三种RGD多肽放射性药物在结构上均为RGD环状二聚体，通过双功能螯合剂进行放射性核素99mTc标记，其主要特征是利用尼克酸[K(NIC)]结构与R⑶相连接，以替代以往99mTc标记使用的协同配体三苯基膦三磺酸钠(TPPTS)，从而降低了药物结构的分子量，改善了放射性药物在非靶器官的代谢动力学，所述三种放射性药物为"mTc-HYNIC-K(NIC)-RGD2,99mTc-HYNIC-K(NIC)-X-RGD2 和 99mTc-HYNIC-K (NIC) _3P_RGD2，均为无色透明液体针剂。
2.权利要求1中所述的99mTc标记RGD多肽放射性药物的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤a.中间体化合物Boc-K(NIC) -Osu的制备方法将300μπιο1 N, N' -二环己基碳酰亚胺(DCC，61.9mg)添加到3ml含有290ymol BOC-Lys (烟酰氯盐酸盐，IOlmg)和300 μ mol羟基琥珀酼亚胺(NHS，；34. 5mg)的DMF(二甲基亚酰胺)溶液中，反应混合物需要在室温下搅动5小时，反应混合物中的白色沉淀需通过过滤除去，剩下的过滤液在低压下使其蒸发干；将蒸发干的残留物溶解在3ml 二氯甲烷中，再过滤此溶解液并将滤过液浓缩至Iml ；向浓缩液中逐滴添加20ml 二乙醚，反应会生成白色沉淀，过滤得沉淀，并用二乙醚洗涤(洗三次，每次5ml)；真空下干燥即可得 Boc-K (NIC) -OSu粗产品，所得产量为75. 8mg (产率约为60 % )，粗合成的Boc-K (NIC) -OSu 不经过进一步纯化即可用于多肽的连接；Hl标记的核磁共振(⑶Cl3) :1.60(s,9H, (CH3)3CO)，1. 75 (m，2H，CH2)，1. 88 (m，2H，CH2)，2. 12(m，2H，CH2)，3. 01 (s，4H，COCH2CH2CO), 3. 66 (t, 2H, CH2CH2NH)，5. 10 (dd, H, NHCHC0)，7. 54 (t, H, aromatic)，8. 36 (d, H, aromatic)， 8. 88 (d, H, aromatic)禾口 9. 15 (s, H, aromatic)；b.中间体化合物K(NIC) -RGD2的制备方法将 20 μ mol Boc-K (NIC) -OSu (8. 9mg)和 4 μ mol E [c (RGDfK) ] 2 (4. 8mg)溶解在 2ml 无水DMF中，加入3滴DIEA，并在室温搅拌过夜；反应后，加入2ml水，反应混合物的pH值为 6. O到7. O ；参照高效液相色谱分离反应产物，收集20. 7分钟时的样品并真空冷冻干燥即可获得BOC-K(NIC)-RGd2产量为3. Img (产率47% )，ESI-MS质谱分析的数据为m/z (质荷比)=1651.5(计算的分子量为 1650. 8，分子式[C76H110N22O20]+)；将 Boc-K (NIC)-RGD2 溶解在2. Oml干净的TFA中，室温搅拌15min ；去除TFA，剩余的反应物溶解在^iil的0. IM的醋酸铵缓冲液中；按照高效液相色谱分离反应产物，收集16. 5min时的样品并真空冷冻干燥即可获得反应产物K (NIC) -RGD2,产量为2. 5mg,产率86% ；ESI-MS质谱分析的质荷比m/z为 1552，计算的分子量为1550. 8，分子式[C71H102N22O18]+ ；c.标记前体化合物HYNIC-K(NIC)-RGD2的制备方法将 8 μ mol HYNIC-Osu (3. 5mg)和 1. 6 μ mol K (NIC) -RGD2 (2. 5mg)溶解在 2mlDMF 中， 向混合物中添加3滴DIEA，室温搅拌反应混合物M小时；反应后，加入2ml醋酸铵缓冲液 (IOOmM, pH = 7. 0)再利用高效液相色谱分离反应产物；收集18. 7min时的样品，并真空冷却干燥即可得HYNIC-K (NIC)-RGD2,产量为1. lmg，产率为38% ;ESI_MS质谱分析的m/z (质荷比)为1854. 3 (计算的分子量为1553. 8，分子式[C84H111N25O22S]+)；d.中间体化合物K(NIC) -3G-RGD2的制备方法将 1 4 μ mo 1 Boc-K (NIC) -Osu (质量 为 6. 3mg)禾口 2·8μπιο1 Gly3-E[Gly3-c (RGDfK)J2 (5. lmg)溶解在2ml DMF中，向混合物中添加3滴DIEA,室温搅拌反应混合物过夜；反应完成后，加入2ml水，调整反应体系的PH值约为6. 0 7. 0， 再利用高效液相色谱分离反应产物；收集19. 3分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得 Boc-K(NIC)-3G3-RGD2。产物的质量为3. Omg，产率为50% ；ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2163. 9 (计算的分子量为2164，分子式[C76H110N22O20]+)；将Boc-K(NIC)-RGD2溶解在2.Oml无水TFA中，室温搅拌15分钟；去除TFA，剩余的反应物溶解在2ml的0. IM的醋酸铵缓冲液中(100mM，pH = 7. 0)，按照高效液相色谱分离反应产物，收集16. 5分钟时的样品并真空冷冻干燥即可获得反应产物K(NIC)-3G-RGD2，产量为2. 9mg(产率约90% ) ；ESI-MS质谱分析的质荷比m/z为2064. 4，计算的分子量为2063. 9，分子式[C89H129N31O27]+ ；e.标记前体化合物HYNIC-K(NIC)-3G-RGD2的制备方法将 7 μ mol HYNIC-Osu (3. Img)和 1. 4 μ mol K (NIC) -3G-RGD2 (2. 9mg)溶解在 2ml DMF 中，在向混合物中添加3滴DIEA。室温搅拌反应混合物2天；反应完成后，加入2ml醋酸铵缓冲液(100mM，pH = 7. 0)，再利用高效液相色谱分离反应产物；收集15. 5分钟时的样品， 并真空冷却干燥即可得HYNIC-K (NIC)-3G-RGD2 ；产量为0. 5mg，产率为15%;ESI_MS质谱分析的m/z (质荷比)为2366. 9 (计算的分子量为2367，分子式[Cltl2H13J34O31S]+)；f.中间体化合物K(NIC) -3P-RGD2的制备方法将 12 μ mol Boc-K(NIC) -Osu (5. 4mg)禾口 2. 4 μ mol PEG4-E [PEG4-c (RGDfK) ] 2 (5. Omg) 溶解在aiilDMF中，向混合物中添加3滴DIEA，于室温过夜搅拌反应混合物；反应完成后， 加入2ml水，调整反应体系的PH值约为6. O 7. O ；利用高效液相色谱分离反应产物，收集21. 5分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得反应中间物Boc-K(OTC)-3P-RGD2，产量为3.4mg，产率为60%;ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2392. 4 (计算的分子量为2392. 2， 分子式[Cltl9H173N25O35]+)；将所得BOC-K (NIC)-3P-RGD2溶解在anlDMF中，于室温搅拌15分钟，使得TFA除去，剩余物质溶解在aiil 0. IM的醋酸铵缓冲液(lOOmM，pH = 7. 0)中；再利用高效液相色谱分离反应产物，收集14. 2分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得反应产物 K (NIC) -3P-RGD2，产量为3. Omg,产率为90 % ；ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2294 (计算的分子量为2四2· 2，分子式[C104H165N25O33]+)；g.标记前体化合物HYNIC-K(NIC)-3P-RGD2的制备方法将 6. 5 μ mol HYNIC-OSu (2. 9mg)和 1· 3 μ mol K (NIC) _3P_RGD2 (3. Omg)溶解在 2ml DMF 中，向混合物中添加3滴DIEA，于室温搅拌反应混合物3天；再利用高效液相色谱分离反应混合物，收集18分钟时的样品，并真空冷却干燥即可得反应产物HYNIC-K(NIC)-3P-RGD2， 产量为1. Omg,产率为30% ；ESI-MS质谱分析的m/z (质荷比)为2595. 3 (计算的分子量为 2595. 2，分子式[C117H174N28O37S]+)；f . 99mTc-HYNIC-K (NIC)- RGD2、、99mTc-HYNIC-K (NIC) -3G-RGD2 禾口 99mTc-HYNIC-K (NIC) _3P_RGD2 的标记方法加入 25 μ g HYNIC 连接剂，0. 4mL 0. 25M琥珀酸缓冲液(pH = 4. 8)以及 0.4mL tricine 溶液(25mg/mL，溶解在0. 25M琥珀酸缓冲液中)；再加入0. 5mL 99mTcO4^ (约含10 20mCi) 和25 μ L SnC^ (1. Omg/mL溶解在0. IN HCl中)，然后置于100°C热水浴中加热20分钟，加热完成后，于室温放置5分钟。
全文摘要
本发明涉及三种用于intergrinαvβ3受体阳性肿瘤诊断的RGD多肽放射性药物及其制备方法。这三种RGD多肽放射性药物在结构上均为RGD环状二聚体，通过双功能螯合剂进行放射性核素99mTc标记。其主要特征是以与RGD相连接的尼克酸[K(NIC)]结构替代以往使用的99mTc标记协同配体三苯基膦三磺酸钠(TPPTS)，从而降低了药物结构的分子量，加快了放射性药物在非靶器官的代谢速度。所述三种放射性药物为99mTc-HYNIC-K(NIC)-RGD2、99mTc-HYNIC-K(NIC)-3G-RGD2和99mTc-HYNIC-K(NIC)-3P-RGD2，均为无色透明液体针剂。
文档编号A61K103/10GK102552949SQ201210038368
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月21日 优先权日2012年2月21日
发明者高伟 申请人:安徽筑梦生物科技有限公司