黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的作用，黄连素衍生物通过降低小鼠的血脂，抑制MMP9等炎症因子的表达，减少VCAM-1分泌从而减少小鼠血管斑块的形成，说明黄连素衍生物在抗动脉粥样硬化治疗中的显著作用。本发明提供了治疗动脉粥样硬化的新药物，黄连素是传统中药的重要组成部分，动物研究发现，黄连素对抗动脉粥样硬化几乎没有作用，而黄连素衍生物因其结构的修饰作用，在抗动脉粥样硬化中显示了更好的药效，本发明通过动物实验证实了黄连素衍生物在抗动脉粥样硬化中的作用。
【专利说明】黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及治疗动脉粥样硬化疾病的药物领域，尤其涉及中国传统中药的提取成分黄连素和黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的作用。
【背景技术】
[0002]动脉粥样硬化及其所致冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是心血管最常见疾病，是人类致死的主要原因之一。慢性非特异性炎症是动脉粥样硬化发生发展的关键因素[1-3]。国内外研究表明，参与动脉粥样硬化病理过程的炎症因素很多，其中关键性步骤是单核细胞迁入内膜下，受局部ox-LDL的刺激被激活分化为巨噬细胞，吞噬了过量ox-LDL的巨噬细胞分化成泡沫细胞，后者不仅是动脉粥样硬化脂质核心的主要成分，也是动脉粥样硬化斑块局部炎症反应的主要细胞，并产生和释放基质金属蛋白酶(MMPs)以及基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)，二者均可通过降解细胞外基质促使斑块趋向不稳定[4]，造成急性冠脉综合征(包括不稳定性心绞痛、急性心肌梗死、猝死)。另一方面，oxLDL刺激可增加血管内皮细胞多种粘附分子如ICAM-1、VCAM-1等表达分泌[5，6]，后者又促进单核细胞向内膜下迁移[7-10]，使更多的单核源巨噬细胞/泡沫细胞在斑块局部积聚浸润，泡沫细胞形成增多，炎症反应向纵深发展，最终协同促使动脉粥样硬化斑块的形成。
[0003]因此，寻求一种有效安全的措施或药物以抑制EMMPRIN、MMPs蛋白表达、减少单核/巨噬细胞向病变局部迁移和减少泡沫细胞形成，必将对动脉粥样硬化防治具有重大的理论和实际意义。1998年S.Bellosta[ll]和N.Abe[12]等在研究中发现氟伐他丁和辛伐他丁能有效抑制MMP-9、EMMPRIN表达，降低MMP-9活性，提示他汀类药物稳定动脉粥样硬化斑块作用部分通过调节MMP-9、EMMPRIN表达而实现的。然而，这些药物不是专门针对动脉粥样硬化炎症反应的药物，且有些药物副作用使患者不能耐受。
[0004]黄连素，又名小蘗碱，是一种异喹啉衍生化的生物碱，其化学结构明确。它可从多种中草药如白毛茛、黄柏、黄连等中分离，是这些中草药的主要成分。迄今为止，黄连素在临床上一直作为非处方药治疗如痢疾杆菌、大肠杆菌引起的肠道感染、腹泻；然而，国内外许多药理学研究发现黄连素具有调节免疫系统[13-14]、治疗心力衰竭[15]等多种功效；近年来，Tang等[16]在动物实验中发现黄连素具有调节血糖作用，Yin等在2型糖尿病患者中也验证了黄连素降血糖的作用与二甲双胍相当[17];更有学者研究表明黄连素具有显著的降胆固醇作用[18-19]和控制体重等效应，且黄连素和辛伐他丁联合使用，与单独用辛伐他丁者相比，能更好的降低血脂[20];这些结果不仅提示黄连素作为一种天然中草药拥有多种药理效应，同时也提示了黄连素可以减少多种致动脉粥样硬化的危险因素(如高血脂、糖尿病和肥胖等)。我们的临床试验证实黄连素可以减少ACS患者PCI术后MMP9、IACM和VCAM的表达，抑制炎症的发生[21]。
[0005]我们在细胞水平研究已表明，黄连素能抑制单核细胞向巨噬细胞分化时MMP-9和EMMPRIN的表达；并且黄连素能减少巨噬细胞p65核转位，抑制NF-K B通路激活，下调oxLDL刺激下MMP-9和EMMPRIN两种蛋白的表达，有效降低巨噬细胞吞噬oxLDL，减少泡沫细胞形成[22-23]。细胞水平研究证实黄连素对炎症反应和动脉粥样硬化过程中关键进程有抑制作用，提示其可能对动脉粥样硬化防治有作用。进一步体外研究发现，黄连素衍生物(二氢二甲基黄连素、二氢黄连素)对降低EMMPRIN表达有更好的作用，提示黄连素衍生物的抗动脉粥样硬化作用可能优于普通黄连素，国内外还未见黄连素衍生物用于治疗动脉粥样硬化的研究，因此我们的研究具有首创性。
[0006]本研究以C57BL/6品系ApoE-/-小鼠作为动脉粥样硬化动物模型，体内探讨黄连素及黄连素衍生物(二氢二甲基黄连素、二氢黄连素)对动脉粥样硬化斑块发生发展的影响(病理结构、细胞组成、局部炎症因子的表达、纤维帽的厚度等)。我们基于黄连素细胞水平的研究，通过给小鼠喂食一段时间的黄连素和黄连素衍生物，检测相关指标，观察其对动脉粥样硬化的治疗作用。其中，黄连素衍生物对动物动脉粥样硬化的研究国际上未见报道，研究首次发现黄连素衍生物通过降低小鼠的血脂，抑制MMP9等炎症因子的表达，减少VCAM-1分泌从而减少小鼠血管斑块的形成，本研究首次提出了黄连素衍生物在抗动脉粥样硬化治疗中的作用，提供了一种潜在有效、价廉的新型药物。
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【发明内容】
[0030]本发明所要解决的技术问题是，提供二氢二甲基黄连素或者二氢黄连素中的一种或两种为基础的各种剂型的抗动脉粥样硬化药物，即黄连素衍生物及其在制备治疗抗动脉粥样硬化药物中的应用。
[0031]为了解决上述问题，本发明提供了一种黄连素衍生物，其特征在于，所述黄连素衍生物是指二氢二甲基黄连素或者二氢黄连素中的一种。
[0032]本发明提供了黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述黄连素衍生物是指二氢二甲基黄连素或者二氢黄连素中的一种或两种。
[0033]作为一个优选方案，二氢二甲基黄连素所使用的剂量为15_25mg/kg,优选20 mg/
kg ο
[0034]作为又一个优选方案，二氢黄连素所使用的剂量为3-10mg/kg,优选5mg/kg。
[0035]黄连素是传统中药的重要组成部分，我们前期人体研究证实黄连素可以减少ACS患者PCI术后MMP9、IACM和VCAM的表达，抑制炎症的发生；而动物研究没有发现黄连素有抗动脉粥样硬化作用，可能与人体和动物的肠上皮细胞对黄连素的吸收率不同有关^而黄连素衍生物因其结构的修饰作用，使其在体内的生物吸收率明显增高U2，在抗动脉粥样硬化中显示了更好的药效。本发明通过动物实验证实了黄连素衍生物在抗动脉粥样硬化中的作用。
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[0038]本发明采用的技术方案的技术步骤如下所述:
(I)黄连素衍生物的筛选:分别给予巨噬细胞和单核细胞不同浓度黄连素和黄连素衍生物(二氢黄连素、四氢黄连素、二氢二甲基黄连素)，后予oxLDL (100yg/ml)刺激5小时，流式检测抗体EMMPRIN (⑶146)的表达变化，比较其抑制⑶146表达的能力。
[0039]黄连素衍生物由中科院上海药物研究所胡立宏教授设计并合成。(L1-Hong Hu,PhD, Shanghai Institute of Materia Medica, 199 Guo Shou Jing Rd., ZhangjiangH1-Tech Park, Shanghai 201203, simmhullimail.shcnc.ac.cn)。
【权利要求】
1.一种黄连素衍生物，其特征在于，所述黄连素衍生物是指二氢二甲基黄连素或者二氢黄连素中的一种。
2.黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述黄连素衍生物是指二氢二甲基黄连素或者二氢黄连素中的一种或两种。
3.根据权利要求2所述的黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述二氢二甲基黄连素的剂量是15-25mg/kg。
4.根据权利要求3所述的黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述二氢二甲基黄连素的剂量是20mg/kg。
5.根据权利要求2所述的黄连素衍生 物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述二氢黄连素的剂量是3-10mg/kg。
6.根据权利要求5所述的黄连素衍生物在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述二氢黄连素的剂量是5mg/kg。
【文档编号】A61K31/4375GK103804374SQ201210453170
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年11月13日 优先权日:2012年11月13日
【发明者】王长谦, 孟舒, 曹嘉添 申请人:上海交通大学医学院附属新华医院