专利名称：代谢综合征的预防和改善用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及大豆胚芽蛋白质带来的代谢综合征的预防和改善、即血中脂质的状态的改善、血糖值的改善、抑制肝脏重量的增加和瘦身用组合物。
背景技术：
自古以来，在日本，有通过进行各种烹调来食用大豆的习惯，近年人们关注各种生 理功能成分，豆腐、豆浆、油炸豆腐、煮的豆、纳豆、黄豆面、酱、酱油等作为有益于维持健康的食品，受到关注。从大豆中除去油分后的大豆蛋白(脱脂大豆)含有40 50%左右的蛋白质，其作为植物蛋白从氨基酸相对平衡性优异的方面考虑也被称作田地中的肉，广泛用于食品、饲料用途。并且，大豆中所含有的异黄酮、卵磷脂、维生素E这样的功能性成分受到人们关注，这些有用成分作为添加剂被用于预防各种疾病等。但是，大豆也含有抑制蛋白质分解酶的活性的胰蛋白酶抑制剂、作为引起过敏的过敏原的抗原性蛋白质、阻碍矿物质的吸收的植酸等。作为营养功能食品的大豆的有效利用可以说建立于有用成分的高度利用和营养阻碍成分的降低这两个方面。另一方面，近年来，特别是中老年的代谢综合征成为较大的问题，正在寻求用于改善该问题的食品和医药品。人们已熟知大豆具有降低血中胆固醇的效果，认为其是由于，大豆蛋白质与成为胆固醇的原因的胆汁酸等特异性结合，直接作为粪便排泄。为了探索以所述降低胆固醇的能力为代表的生理功能，进行了有关大豆蛋白质分解后的肽成分的功能性级分的确定的研究。例如，对于大豆蛋白质酶解得到的非消化性级分，确认其具有降胆固醇作用(专利文献1、非专利文献1、2)。除此以外，作为改善血中的中性脂质、胆固醇、血糖值的大豆成分，称为大豆球蛋白的IlS球蛋白(专利文献2)、称为β -伴大豆球蛋白的7S球蛋白、异黄酮等虽然可以说具有效果，但没有得出明确的结论。并且，有关大豆胚芽的蛋白质几乎没有进行研究。对于来源于大豆胚芽的物质，报道了生物活性促进作用，其中，对大豆胚芽经曲菌处理而得到的物质进行水解处理，用溶剂进行提取浓缩，浓缩物中含有的异黄酮苷元为有效成分，发挥生物活性促进作用(专利文献3)，但有关异黄酮的功效，包括其代谢产物在内，目前研究者的见解不同，尚未得出明确结论。另一方面，大豆胚芽与大豆的蛋白质组成大大不同，几乎不含有伴大豆球蛋白、β_伴大豆球蛋白等储藏蛋白质，总蛋白质含量低，所以营养价值低，并且富含皂苷、过敏原等营养阻碍物质，导致在过多摄入时引发过敏、生育障碍等，味道也差，不能面向在食品、饮料和医药中的应用。对于解决了该问题的大豆胚芽蛋白质组合物，本发明人早先提出了申请(日本特愿2005-36942号)。对于该组合物，经溶剂处理从大豆胚芽中除去营养阻断成分，进而组合了实施热处理的工序，从而提高了大豆胚芽蛋白质的含量，而且降低了由此导致的过敏原的含量，并且改善了味道。但是，对于大豆胚芽蛋白质的功能性、即加工特性、摄入大豆胚芽蛋白质而产生的生理作用，到完成本发明时完全是未知的。专利文献1:日本特公平07-025796号公报专利文献2 日本特开2003-88334号公报专利文献3 :公报W02003/077904号公报非专利文献I !Atherosclerosis, 72、115、1988非专利文献2 J. Nutr.，120,977,1990
发明内容
发明所解决的课题本发明特定于作为大豆的功能性成分至今尚不明确的具有血中脂质 血糖值改善作用的部分，其课题涉及利用该部分的食品、饮料、医药品以及作为原料在食品、饮料、医药品中的应用。用于解决课题的手段本发明涉及一种血中脂质·血糖值改善用的组合物，其以含有大豆胚芽蛋白质的部分为有效成分，所述含有大豆胚芽蛋白质的部分是通过分离得到的，该部分含有20%以上(优选40%以上)仅微量存在于大豆中的胚芽部分所含有的蛋白质。并且，通过溶剂处理、化学处理、物理加工处理等从在此得到的大豆胚芽部分中除去营养阻断成分，进而组合进实施热处理的工序，从而能够得到提高了蛋白质的含量和由此引起的使过敏原的含量降低且改善了味道的大豆胚芽蛋白质。S卩，本发明涉及以大豆胚芽蛋白质为有效成分的血中HDL/LDL胆固醇比改善用组合物、血中甘油三酯降低用组合物、血糖值降低用组合物以及瘦身用组合物。发明效果本发明的组合物具有改善血中胆固醇值、甘油三酯、血糖值的作用，从而发挥出有益于增进健康的效果。
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图的曲线图。
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图1是表示各蛋白质的电泳图像的图。
2是表示各脱脂蛋白质的电泳图像的图。
3是表示浓缩大豆胚芽蛋白质的电泳图像的图。
4是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血中总胆固醇浓度的变化的曲线图。
5是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血中LDL胆固醇浓度的变化的曲线图。
6是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血中HDL胆固醇浓度的变化的曲线图。
7是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血中HDL胆固醇/血中LDL胆固醇比的变化
8是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血中三甘油浓度的变化的曲线图。
9是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血糖值的变化的曲线图。
10是表示投与胚芽蛋白和SPC时的单位体重的肝脏重量的变化的曲线图。
11是表示投与胚芽蛋白和SPC时的血中总胆固醇浓度的变化的曲线图。
具体实施例方式虽然因品种不同而存在差异，但一般的大豆含有O. 8%左右大豆胚芽蛋白质。从大豆中分离大豆胚芽蛋白质时可以采用任何方法。例如有如下方法将大豆破碎，制成竖劈成两半的状态，用筛子筛分，由此得到大豆胚芽。由该方法，大豆胚芽蛋白质被浓缩到约50倍。并且，通过进一步将其脱脂，从而除去脂质成分，能够提高大豆胚芽蛋白质成分的浓度。此外，作为蛋白质的提取方法，可以使用水和所有的有机溶剂，但优选以0°C 100°C使用含水醇。并且，对提取后的大豆胚芽蛋白质施加I 180分钟的50 300°C的热，由此能够得到味道也好的营养价值高的大豆胚芽蛋白质。以不足50°C和/或不足I分钟来进行热处理时，蛋白质的变性不充分，而超过300°C和/或超过180分钟时，发焦，使得氨基酸减少。另外，为了除去大豆胚芽的营养阻碍成分，用水性溶剂进行提取，用酸或碱改变PH，通过等电点沉淀，仅回收特定的蛋白质，该方法具有能够用简易的设备进行提取回收的优点。另外，使用超临界二氧化碳提取除去低极性的物质的方法中，在返回到常温常压后的状态，二氧化碳气化，所以也具有无需其后的干燥处理的优点。对于本发明中的溶剂处理和热处理的组合，可以先进行任意一种处理，或同时进行两种处理，也可以不进行这些处理。可以包括粉碎、分离、色谱层析等其他处理工序。另外，本发明的大豆胚芽蛋白质也可以通过从作为一般的大豆蛋白质的脱脂大豆、浓缩大豆蛋白、分离大豆蛋白、豆浆等中除去以高含量特异性地存在于大豆的子叶部分的储藏蛋白质、以高含量存在于种皮中的纤维质而制得。进而，大豆的胚芽部分含有较高浓度的异黄酮、皂苷，过多的摄取时需要注意，但通过组合以上的方法，异黄酮和皂苷的含量小，可以获得能放心食用的大豆胚芽蛋白质。例如，用己烷和/或含水醇对大豆胚芽进行溶剂处理，以50 300°C加热处理I 80分钟，由此能够使异黄酮含量为O. 5%以下、使皂苷含量为1%以下。更具体地说，用70%乙醇以70°C对大豆胚芽进行30分钟的溶剂处理，以100°C加热处理40分钟，由此可以使异
黄酮含量为O. 1%左右、使皂苷含量为O. 2%左右。得到的大豆胚芽蛋白质由于与通常的大豆的蛋白质组成有较大差异，所以能够通过SDS-PAGE分析容易地进行确认。由本发明得到的大豆胚芽蛋白质具有如下效果。第1，与酪蛋白、大豆蛋白相比，本发明的大豆胚芽蛋白质具有血中LDL胆固醇降低效果、血中HDL增进效果，具有优异的改善血中HDL/LDL胆固醇比的效果。并且，防止脂肪在脏器内堆积，具有预防代谢综合征的效果。其是浓缩大豆蛋白所不具有的大豆胚芽蛋白质固有的效果。第2，本发明的大豆胚芽蛋白质具有降低血中甘油三酯的效果。第3，本发明的大豆胚芽蛋白质具有降低血糖值的效果。第4，本发明的大豆胚芽蛋白质能抑制内脏脂肪等体脂肪的堆积，具有瘦身效果。以以往的方式摄取大豆制品时，胚芽蛋白质是微量的，不能获得本发明所示的上述各效果，但如本发明那样将胚芽蛋白质提高到高浓度，由此能够获得生理作用。更具体地说，通过每日摄取O. 05g 50g左右的胚芽蛋白质，可以获得效果，因此可以添加到各种饮食品中。
对于本发明的大豆胚芽蛋白质，除可以单独使用有效成分外，也可以制成根据最终制品(医药品、功能性食品、营养辅助食品、饮食品)的需要组合了淀粉等谷物类粉体、油脂、乳化剂、香料、增稠剂等的固体、液体、溶胶、凝胶、增塑性组合物等的构成。作为淀粉，可举出玉米淀粉、蜡状玉米淀粉、高直链玉米淀粉、马铃薯淀粉、小麦淀粉、木薯淀粉、绿豆淀粉、西米淀粉、米淀粉、豌豆淀粉和对这些淀粉实施了单独的酯化处理、醚化处理、交联处理、酸处理、氧化处理、湿热处理、α化等物理或化学处理或组合实施这些处理得到的加工淀粉。作为油脂，可举出从大豆油、大豆胚芽油、菜籽油、高油酸菜籽油、玉米油、芝麻油、芝麻沙拉油、紫苏子油、亚麻仁油、花生油、红花油、高油酸红花油、葵花籽油、高油酸葵花籽油、高亚油酸葵花籽油、中油酸葵花籽油、棉籽油、葡萄籽油、澳洲坚果油、榛子油、胡桃油、南瓜籽油、椿油、茶油、荏油、橄榄油、米糠油、小麦胚芽油、棕榈油、〃一 A ^ >、棕榈仁油、椰子油、可可脂、藻类油和这些油脂的氢化油、酯交换油、分馏油等中选出的一种或两种以上的组合。作为乳化剂，通常，可以是用于食品中的乳化剂，可以使用甘油脂肪酸酯、甘油有机酸酯、山梨聚糖脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚甘油缩合蓖麻油酸酯、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酰乳酸钙、烷基糖苷类、赤藓醇脂肪酸酯类、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯类、卵磷脂、酶分解卵磷脂、酶处理卵磷脂等的单独一种或者两种以上的组合。作为香料，通常食品中使用的天然系、合成系香料均可使用。作为增稠剂，可举出制成水溶液时使粘度升高的多糖类，即阿拉伯胶、阿拉伯半乳聚糖、瓜尔豆胶、黄原胶、亚麻籽胶、结冷胶、塔拉胶、刺槐豆胶、罗望子胶、大豆水溶性多糖类(半纤维素)、藻酸钠、支链淀粉、果胶、刺梧桐胶、印度树胶、黄蓍胶、可得然胶、魔芋葡甘露聚糖(glucomannan)、甲壳素、壳聚糖、微小纤维状纤维素、微晶纤维素等。作为其他的配合的物质，可以使用胶原质肽、乳蛋白肽、酪蛋白肽、低聚肽、乳清蛋白浓缩物、豌豆蛋白、明胶等来源于蛋白质的物质、大豆纤维、豌豆纤维等纤维质、高度支链化环糊精等糊精。进而，可以在大豆胚芽蛋白质中配合pH调节剂、糖类。作为pH调节剂，可举出乳酸、葡萄糖酸、琥珀酸、富马酸、柠檬酸、L苹果酸、DL苹果酸、冰醋酸、D-葡萄糖酸δ-内酯、L酒石酸、DL酒石酸等。作为糖类，可举出右旋糖(葡萄糖)、麦芽糖、左旋糖(果糖)、半乳糖、海藻糖、寡糖、蔗糖、山梨糖醇等。另外，使小甜饼等烘烤的点心中含有I 50%的本发明的大豆胚芽蛋白质时，可以得到通常的大豆蛋白等未能得到的松脆感，并且成为香、味道好的点心。本发明的大豆胚芽蛋白质与大麦、小麦、米、稗、谷子、糙米、黑豆、红米、绿米、小豆、黑豆、大粒红小豆、鹰嘴豆、白花豆等稻谷类及其胚芽部分、或者花生、胡桃、芝麻、松子、栗等种子类等混合使用时，具有提升食品味道的效果，此外由于具有上述生理功能性所以在禾谷、烘烤的点心、工彳、^ < 一 〃'一等的应用方面优异。实施例以下举出实施例，具体说明本发明，但本发明的主旨当然不限于此。〔试验例I大豆胚芽蛋白质的制造I〕
将大豆机械破碎，筛分，进行分离使大豆胚芽的含量为70%以上，得到大豆胚芽蛋白质浓缩级分。对由该方法得到的浓缩级分进行全氮分析，其结果，总蛋白质含量为40%。其中70%以上是来源于大豆胚芽的蛋白质，所以以大豆胚芽蛋白质的含量计，本品中含有28%以上大豆胚芽蛋白质，其浓缩率为35倍以上。通过SDS-PAGE分析来确认该样品的蛋白质组成。SDS-PAGE分析中，将Ig所得到的样品悬浮在5ml的IOmM磷酸缓冲液(PBS ；8. 2mMNa2HPO4U. 8mM KH2P04、137mM NaCl、3mM KC I)中，实施30分钟超声波处理，由此进行提取。将50 μ L该提取液溶解在250 μ I含有35mM十二烷基硫酸钠、1%β -巯基乙醇的50mMTris-HCl中，用MILLEX-HV0. 22 μ m—次性过滤器过滤，制成可溶性蛋白质试样。向其中混合20 μ L含有1%的溴苯酚蓝的10%甘油溶液，在沸腾水浴中进行5分钟的煮沸处理，制成电泳用样品。以上的处理中加入β_巯基乙醇的情况下和不加的情况下电泳图像存在较大差异，所以加入β_巯基乙醇是重要的工序。电泳中使用全自动多功能快速水平电泳系统(PhastSystem, Pharmacia LKBBiotechnology)。电泳凝胶使用Phas tGel、GradientlO_15,通过CBB进行染色。电泳后，对于经SDS-PAGE分离的多肽染色带的560nm的吸收，使用色谱扫描仪CS9300(岛津制作 所)进行分析。通常的大豆在约33kD附近可见较深的条带，但与此相比，大豆胚芽蛋白质具有在约30kD附近的条带较深的特征。同样，通常的大豆在约48kD附近可见较深的条带，但与此相比，大豆胚芽蛋白质具有在约52kD附近的条带较深的特征。此外，大豆胚芽蛋白质在21kD附近、35kD附近也能确认到条带等，这与通常的大豆蛋白质是不同的。通过色谱扫描仪，将该图像曲线图化，由图谱的峰面积确认出大豆胚芽蛋白质比通常的大豆蛋白质浓度大。各蛋白质的电泳图像见图1。〔试验例2大豆胚芽蛋白质的制造2〕将大豆机械破碎，筛分，进行分离使大豆胚芽的含量为70%以上。作为榨油工序中用通常方法进行的己烷提取，通过低温提取法和高温提取法对分离出的大豆进行脱脂，得到大豆胚芽蛋白质级分。对由该方法得到的大豆胚芽蛋白质进行全氮分析，其结果，总蛋白质含量为43%，以大豆胚芽蛋白质的含量计，含有30%大豆胚芽蛋白质，浓缩率为37倍以上。通过SDS-PAGE分析来确认该样品的蛋白质组成。SDS-PAGE分析中，将Img所得到的样品悬浮在 5ml 的 IOmM 磷酸缓冲液(PBS ；8. 2mM Na2HPO4U. 8mM KH2PO4'137mM NaCl、3mM KCl)中，实施30分钟超声波处理，由此进行提取。将50 μ L该提取液溶解在250 μ I含有35mM十二烷基硫酸钠、1% β -巯基乙醇的50mM Tris-HCl中，用MI LLEX-HV0. 22 μ m 一次性过滤器过滤，制成可溶性蛋白质试样。向其中混合20 μ L含有1%的溴苯酚蓝的10%甘油溶液，在沸腾水浴中进行5分钟的煮沸处理，制成电泳用样品。 电泳中使用全自动多功能快速水平电泳系统(PhastSystem, Pharmacia LKBBiotechnology)。电泳凝胶使用Phas tGel、GradientlO_15,通过CBB进行染色。电泳后，对于经SDS-PAGE分离的多肽染色带的560nm的吸收，使用色谱扫描仪CS9300(岛津制作所)进行分析。通常的大豆在约33kD附近可见较深的条带，但与此相比，大豆胚芽蛋白质具有在约30kD附近的条带较深的特征。同样，通常的大豆在约48kD附近可见较深的条带，但与此相比，大豆胚芽蛋白质具有在约52kD附近的条带较深的特征。此外，大豆胚芽蛋白质在21kD附近、35kD附近也能确认到条带等，这与通常的大豆蛋白质是不同的。通过色谱扫描仪，将该图像曲线图化，由图谱的峰面积确认出大豆胚芽蛋白质比通常的大豆蛋白质浓度大。各脱脂蛋白质的电泳图像见图2。〔试验例3大豆胚芽蛋白质的制造3〕将大豆机械破碎，筛分，进行分离使大豆胚芽的含量为90%以上，得到大豆胚芽。对其进行榨油工序中以通常方法进行的己烷提取后，进而加入70%含水乙醇，于70°C搅拌30分钟后，过滤，回收其残渣。将该残渣在减压下于100°C热处理40分钟，得到大豆胚芽蛋白质级分。对由该方法得到的大豆胚芽蛋白质进行全氮分析，其结果，总蛋白质含量为62%，以大豆胚芽蛋白质的含量计，含有56%以上大豆胚芽蛋白质，浓缩率为70倍以上。利用与试验例I同样的方法对该样品进行SDS-PAGE分析，其结果，确认了大豆胚芽蛋白质的特征组成，其中与约33kD附近相比，约30kD附近的条带深，与约48kD附近相比，约52kD附近的条带深，进而在21kD附近、35kD附近也确认到条带。并且，确认了，对以大豆蛋白质为抗原得到的牛抗血清的抗原性用ELI SA分析法进行测定，结果为40U/10mg以下。异黄酮含量、皂苷含量都为O. 5%以下，为通常的大豆胚芽的五分之一以下，与大豆相比，为低含量，即使多食也没有苦味，除此以外能够防止过量摄入这些微量成分。浓缩大豆胚芽蛋白质的电泳图像见图3。〔异黄酮和阜苷含量的分析〕对于试验例I 3中得到的大豆胚芽蛋白质的异黄酮含量和皂苷含量进行测定。异黄酮含量基于日本健康·营养食品协会的大豆异黄酮食品标准的方法进行分析，进行作为非配糖(aglycone)体的异黄酮的含量的定量。皂苷含量用以下的方法分析。称量样品使其中含有的大豆皂苷的量为约10mg，在5mll0%氯化氢-甲醇试液中于80°C进行2小时回流。通过离心分离、过滤器处理除去该溶液中的不溶物，然后进行HPLC分析。定量用的标准物质是将小城制药制造的茶皂醇· A和茶皂醇·Β各IOmg分别溶解在IOOml的乙醇中进行使用。HPLC中使用ODS柱，在流动相为乙腈/水/甲醇(6:3:1)、流速为O. 7ml/min、温度为45°C的条件下检测UV210nm的吸光，通过与标准物质的积分值的比较，进行作为苷元的皂苷的含量的定量。结果示于下表。[表I]大豆胚芽蛋白质的异黄酮含量和皂苷含量
权利要求
1.组合物在制造代谢综合征改善剂中的用途，所述组合物以大豆胚芽蛋白质为有效成分，所述大豆胚芽蛋白质的异黄酮和皂苷的含量都在O. 5%以下，其中，代谢综合征的改善作用由于脂质代谢改善效果，所述脂质代谢改善效果为HDL/LDL胆固醇比的改善和/或血中甘油三酯的降低。
2.组合物在制造代谢综合征改善剂中的用途，所述组合物以大豆胚芽蛋白质为有效成分，所述大豆胚芽蛋白质的异黄酮和皂苷的含量都在O. 5%以下，其中，代谢综合征的改善作用源自于血糖值降低作用和/或肝脏重量的增加抑制。
3.组合物在制造代谢综合征改善剂中的用途，所述组合物以大豆胚芽蛋白质为有效成分，所述大豆胚芽蛋白质的异黄酮和皂苷的含量都在O. 5%以下，所述代谢综合征的改善为瘦身效果。
全文摘要
本发明的课题是提供一种能够安全且有效地摄取的用于预防或改善代谢综合征的组合物。本发明还提供以大豆胚芽蛋白质为有效成分的血中胆固醇降低用组合物、HDL/LDL比改善用组合物、血中甘油三酯降低用组合物、血糖值降低用组合物、抑制肝脏重量增加用组合物和瘦身用组合物。本发明的组合物具有改善血中胆固醇值、甘油三酯、血糖值的作用，从而发挥出有益于增进健康的效果。
文档编号A61P3/06GK103005462SQ20121050426
公开日2013年4月3日 申请日期2007年6月19日 优先权日2006年7月31日
发明者斋藤三四郎, 佐藤俊郎, 加茂修一, 矶部洋佑 申请人:J-制油株式会社