制备多抗原糖肽碳水化合物缀合物的方法
【专利摘要】本发明涉及用于制备式(I)的碳水化合物T细胞表位缀合物的方法：M(T-B)n?(I)，其中M、T、B和n如权利要求1中定义。
【专利说明】制备多抗原糖肽碳水化合物缀合物的方法
[0001]本发明涉及制备式(I)的碳水化合物T细胞表位缀合物的方法和根据所述方法可以使用的式(II)的碳水化合物T细胞表位中间体。
[0002]在过去的十年间，已开发了 MAG-Tn3，一种新类型的合成免疫原，其展示肿瘤相关的Tn抗原。MAG-Tn3是全合成糖肽(MW = 10’897Da)，其在四价骨架上将碳水化合物Tn抗原(作为三-Tn簇)结合到肽CD4+ T细胞表位[5，9]。
[0003]MAG_Tn3对应下列结构
【权利要求】
1.用于制备式(I)的碳水化合物T细胞表位缀合物的方法:
M(T-B)n (I) 其中: -M是树枝状聚赖氨酸核心； -T是T细胞表位； -B是包含至少一个碳水化合物残基(b)的碳水化合物B细胞表位； -η是整数并表示共价键合到M的-T-B基团的数目； 所述方法包含步骤: i )将保护的碳水化合物B细胞表位(Bft)与化合物M (T) η偶联，从而形成碳水化合物T细胞表位缀合物M (Τ- Bft) η，所述保护的碳水化合物B细胞表位(Bft)的碳水化合物残基(b)的羟基用保护基团(Pr)保护，所述保护基团(Pr)选自烯丙基、对甲氧基苄基(PMB)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、苄氧基甲基(BOM)、乙酰丙酰基(Lev)、苯甲酰基(Bz)、2，5-二氟苯甲酰基、氯乙酰基、苄基(Bn)或乙酰基(Ac)，或所述保护基团(Pr)和与其结合的两个羟基形成C5-C6异亚丙基缩酮或C5-C6环烷基碳酸酯； 和 ?)从所获得的缀合物M(T-Bft)n上去除所述保护基团Pr，从而获得所述碳水化合物T细胞表位缀合物M (T-B) n。
2.权利要求1的方法，其中1(1'3)11选自下式(Ia)或(Ib):
3.权利要求1或2中任一项的方法，其中M是下式的(K)2K-PAla-OH:
4.前述权利要求中任一项的方法，其中T是包含肽的T细胞表位。
5.权利要求4的方法，其中T是⑶8+或⑶4+T细胞表位或包含⑶8+或⑶4+T细胞表位。
6.权利要求5的方法，其中T是⑶4+T细胞表位或包含⑶4+T细胞表位。
7.权利要求6的方法，其中T是脊髓灰质炎病毒(PV)片段蛋白、破伤风毒素片段或PADRE肽或包含脊髓灰质炎病毒(PV)片段蛋白、破伤风毒素片段或PADRE肽。
8.权利要求7的方法，其中T是由QYIKANSKFIGITEL(SEQ ID No I)组成的肽。
9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述碳水化合物残基(b)结合到氨基酸、肽或脂质残基。
10.前述权利要求中任一项的方法，其中B是选自下列的碳水化合物残基或包含选自下列的碳水化合物残基:
11.权利要求10的方法，其中B是残基(a-GalNAc-Ser/Thr)3或包含残基(a -GalNAc-Ser/Thr)3。
12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述保护基团Pr是苄基(Bn)或乙酰基(Ac)。
13.前述权利要求中任一项的方法，其中步骤i)包含步骤: a)将第一个保护的碳水化合物残基(bft)与化合物M(T)n偶联，从而形成碳水化合物T细胞表位缀合物M(T- BPr)n，所述第一个保护的碳水化合物残基(bft)的羟基用如前述权利要求中任一项所定义的保护基团(Pr)保护；并且 b)用进一步保护的碳水化合物残基Ov)重复步骤a)，直到获得式(II)M(T-Bft)n的保护的碳水化合物缀合物。
14.前述权利要求中任一项的方法，其中Pr是苄基。
15.权利要求14的方法，其中苄基在存在TfOH或H2的情况下去除。
16.权利要求1到13中任一项的方法，其中Pr是乙酰基。
17.权利要求16的方法，其中乙酰基在存在肼或MeONa的情况下去除。
18.式(II)的碳水化合物T细胞表位缀合物:
M(T-Bpr)n (II) 其中 -M是树枝状聚赖氨酸核心； -T是T细胞表位； -是包含至少一个碳水化合物残基(b)的保护的碳水化合物B细胞表位，所述保护的碳水化合物B细胞表位的羟基被如权利要求1所定义的Pr基团保护；并且 -η是整数并表示共价键合到M的-T-B基团的数目。
19.权利要求18的碳水化合物T细胞表位缀合物，其中T是肽或包含肽。
20.权利要求18或19中任一项的碳水化合物T细胞表位缀合物，其中Pr是苄基(Bn)或乙酰基(Ac)。
21.权利要求18到20中任一项的碳水化合物T细胞表位缀合物，其中是保护的(a -GalNAc-Ser/Thr)3。
22.权利要求18到21中任一项的碳水化合物T细胞表位缀合物，其中M是HO-PAla-K (K)2。
23.权利要求18到22中任一项的碳水化合物T细胞表位缀合物，其中T是QYIKANSKFIGITEL (SEQ ID N。I)。
24.权利要求18到23中任一项的碳水化合物T细胞表位缀合物M(T-Bft)n用于制备如权利要求1-17中任一项所定义的碳水化合物肽缀合物M(T-B)n的用途。
【文档编号】A61K47/48GK103732246SQ201280011373
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2012年3月16日 优先权日:2011年3月17日
【发明者】S.贝, C.勒克莱尔, R.洛-曼 申请人:巴斯德研究所, 法国国家科学研究中心