专利名称：超支化聚合物纳米药物载体及其制备方法、抗癌药物纳米颗粒、抗癌药物制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及功能材料技术领域，特别是涉及一种超支化聚合物纳米药物载体及其制备方法、抗癌药物纳米颗粒、抗癌药物制剂及其制备方法。
背景技术：
20世纪30年代以来,超支化高分子(Hyperbranched polymer, HBP)代表了具有高的支化程度，较宽的平均分子质量分布，树枝状几何外观和多官能团的聚合物，这种独特的结构就赋予超支化聚合物独特的分子构型和物理化学性质，使其具有很多特殊应用前景。由于超支化聚合物具有超分子纳米类似于核交联胶束，不易受环境条件(稀释、剪切力、PH值的改变等)的影响，具有理想的稳定性，可以广泛应用于药物载体和医药领域。但是由于超支化聚合物的结构和合成的复杂性，其一般只能用于药物的包载，这样的话就不能定向释放和表达，且难以逃离网状内皮系统的内吞，在体内循环的时间短，从而影响药物的疗效。
发明内容
基于此，有必要提供一种使负载的药物在体内循环时间较长的超支化聚合物纳米药物载体及其制备方法。进一步，提供一种抗癌药物纳米颗粒、抗癌药物制剂及其制备方法。一种超支化聚合物 纳米药物载体，包括多个纳米胶束，每个纳米胶束包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核和连接于所述内核表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂；所述改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯。在其中一个实施例中,所述端轻基超支化聚酯为超支化聚酯Boltorn H40。在其中一个实施例中，所述聚乙二醇单甲醚的分子量为2000。在其中一个实施例中，所述纳米胶束的粒径为30纳米 50纳米。在其中一个实施例中，包括如下步骤: 将端羟基超支化聚酯和马来酸酐溶解于N，N- 二甲基甲酰胺中，加入4- 二甲氨基吡啶，反应24小时后，透析、过滤、冻干得到改性的端羟基超支化聚酯；将所述改性的端羟基超支化聚酯溶解于溶剂中，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇或甲氧基巯基封端的聚乙二醇，反应12小时 24小时，透析、过滤、冻干得到超支化聚合物纳米药物载体，所述超支化聚合物纳米药物载体包括多个纳米胶束，每个纳米胶束包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核和连接于所述内核表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂，所述改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯。一种抗癌纳米药物颗粒，包括上述超支化聚合物纳米药物载体及负载于所述超支化聚合物纳米药物载体上的具有抗癌疗效的药物。在其中一个实施例中，所述具有抗癌疗效的药物为阿霉素，所述阿霉素通过腙键负载于所述超支化聚合物纳米药物载体的支臂上。在其中一个实施例中，所述抗癌纳米药物颗粒载药量为7.91% 11.37%。。在其中一个实施例中，所述具有抗癌疗效的药物为顺钼，所述顺钼通过配位作用负载于所述超支化聚合物纳米药物载体的支臂上。在其中一个实施例中，所述抗癌纳米药物颗粒载药量为1.27 3.33%。在其中一个实施例中，所述抗癌纳米药物颗粒的粒径为30纳米 50纳米。一种抗癌药物纳米制剂，包括超纯水及分散于所述超纯水中的上述抗癌纳米药物颗粒。一种抗癌药物制剂的制备方法，包括如下步骤:将上述超支化聚合物纳米药物载体溶解于水中，加入具有抗癌疗效的药物，搅拌12小时 24小时,透析得到抗癌药物制剂,所述抗癌药物制剂包括所述超支化聚合物纳米药物载体及负载于所述超支化聚合物纳米药物载体上的具有抗癌疗效的药物。上述超支化聚合物纳米药物载体的每个纳米胶束包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核和连接于内核表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂。聚乙二醇单甲醚连接在改性的端羟基超支化聚酯表面，能够很好地修饰改性的端羟基超支化聚酯，使得该超支化聚合物纳米药物载体可以逃离网状内皮系统的吞噬，从而延长了使用该超支化聚合物纳米药物载体负载的药物在人体内的循环时间，提高药物的作用疗效。
图1为一实施方式的超支化聚合物纳米药物载体的结构示意图；图2为图1所示的超支化聚合物纳米药物载体的改性的端羟基超支化聚酯的结构示意图；图3为一实施方式的超支化聚合物纳米药物载体的制备方法流程图；图4为一实施方式的抗癌药物制剂的制备方法示意图；图5为实施例1的抗癌药物制剂中的抗癌纳米药物颗粒的粒径分布图；图6为实施例1的抗癌药物制剂中透射电镜图(TEM)；图7为实施例4的抗癌药物制剂中的抗癌纳米药物颗粒的粒径分布图；图8为实施例4的抗癌药物制剂中透射电镜图(TEM)。
具体实施例方式为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式
做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。请参阅图1，一实施方式的超支化聚合物纳米药物载体，包括多个纳米胶100。每个纳米胶束100包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核10和连接于内核10表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂20。
请同时参阅图2，改性的端羟基超支化聚酯10为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯。改性的端羟基超支化聚酯由端羟基超支化聚酯与马来酸酐(mah)反应，端羟基超支化聚酯开环马来酸酐，且端羟基超支化聚酯的-OH与马来酸酐的C=O生成-C00H，得到改性的端羟基超支化聚酯。端轻基超支化聚酯为Boltorn H30、Boltorn H40 等,优选为 Boltorn H40oBoltornH40不仅具有良好的生物相容性和优越的可生物降解性，且Boltorn H40具有规则的空间结构以及许多等同位置的羟基，便于后续合成。改性的端轻基超支化聚酯的表示为H40-mah-C00H,如图2所示。甲氧基氨基封端的聚乙二醇或甲氧基巯基封端的聚乙二醇与改性的端羟基超支化聚酯反应，生成连接在改性的端羟基超支化聚酯表面的聚乙二醇单甲醚，在改性的端羟基超支化聚酯的表面形成多个支臂20，得到纳米胶束100，该纳米胶束的结构如图1所示，多个支臂20围绕于内核10的表面。聚乙二醇单甲醚连接在改性的端羟基超支化聚酯表面，能够很好地修饰改性的端羟基超支化聚酯， 使得该超支化聚合物纳米药物载体可以逃离网状内皮系统的吞噬，从而延长了使用该超支化聚合物纳米药物载体负载的药物在人体内的循环时间，提高药物作用疗效。优选地，聚乙二醇单甲醚的分子量为2000 5000。优选地，纳米胶束100的粒径为30纳米 50纳米。请参阅图3，一实施方式的超支化聚合物纳米药物载体的制备方法，包括如下步骤:步骤SllO:将端羟基超支化聚酯和马来酸酐溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，加入4-二甲氨基吡啶，反应24小时后，透析、过滤、冻干得到改性的端羟基超支化聚酯。按一定的质量比将端羟基超支化聚酯和马来酸酐溶解于无水N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯。优选地，端羟基超支化聚酯的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5。DMAP与马来酸酐的质量比为1:20。端羟基超支化聚酯可以开环马来酸酐生成C00H，得到改性的端羟基超支化聚酯。改性的端羟基超支化聚酯为多羧基超支化聚酯，表示为端羟基超支化聚酯-mah-COOH。端羟基超支化聚酯优选为Boltorn H40。改性的端羟基超支化聚酯表示为H40-mah-C00H。步骤S120:将改性的端羟基超支化聚酯溶解于溶剂中，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇或甲氧基巯基封端的聚乙二醇，反应12小时 24小时，透析、过滤、冻干得到超支化聚合物纳米药物载体。在一种实施方式中，将改性的端羟基超支化聚酯溶解于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，活化1 2小时后，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)，反应12小时 24小时，然后用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体，超支化聚合物纳米药物载体表示为H40-Mah-mPEG。H40-Mah_mPEG中，改性的端羟基超支化聚酯H40-Mah与聚乙二醇单甲醚(mPEG)通过酰胺键连接。改性的端羟基超支化聚酯的羧基与甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)的摩尔比(羧基:mPEG-NH2)为 1: 1.5。向改性的端羟基超支化聚酯的DMF溶液中加入EDC和NHS活化改性的端羟基超支化聚酯的羧基(-C00H)，以利于改性的端羟基超支化聚酯的羧基与甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)反应，提高反应速率。优选地，改性的端羟基超支化聚酯的羧基与EDC的摩尔比为1: 4。EDC的稳定性较差，加入NHS能够很好地维持EDC的活性。优选地，EDC与NHS的摩尔比为2:1。在另一种实施方式中，将改性的端羟基超支化聚酯溶解于四氢呋喃中，再加入偶氮二异丁腈(AIBN)和甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)，回流反应12小时 24x小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体，表示为H40-Mah-mPEG。反应过程中，甲氧基巯基封端的聚乙二醇的巯基(-SH)与H40-Mah的Mah上的双键发生加成反应，使mPEG连接于H40_Mah上得到H40-Mah_mPEG。改性的端羟基超支化聚酯的羧基与甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)的摩尔比为1: 1.5。偶氮二异丁腈(AIBN)作为改性的端羟基超支化聚酯与甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)反应的引发剂，改性的端羟基超支化聚酯的双键与AIBN的摩尔比(双键:AIBN)优选为5:1。上述超支化聚合 物纳米药物载体的制备方法用端羟基超支化聚酯开环马来酸酐，用以改性端羟基超支化聚合物的末端基团，形成多羧基超支化聚酯，然后将该多羧基超支化聚酯和功能化的聚乙二醇(甲氧基氨基封端的聚乙二醇或甲氧基巯基封端的聚乙二醇)反应，得到超支化聚合物纳米药物载体。该方法简单易行、反应条件温和，制备成本低。—实施方式的抗癌纳米药物颗粒，包括上述超支化聚合物纳米药物载体及负载于该超支化聚合物纳米药物载体上的具有抗癌疗效的药物。具有抗癌疗效的药物优选为阿霉素(DOX)或顺钼(DDP)。阿霉素通过腙键负载于超支化聚合物纳米药物载体的支臂上。顺钼通过配位作用共轭于超支化聚合物纳米药物载体的支臂上。优选地，当具有抗癌疗效的药物为阿霉素时，抗癌纳米药物颗粒的载药量为
7.91% 11.37%，即阿霉素与超支化聚合物纳米药物载体的质量比优选为7.91:100
11.37:100。优选地，当具有抗癌疗效的药物为顺钼时，抗癌纳米药物颗粒的载药量为
1.27% 3.33%，即顺钼与超支化聚合物纳米药物载体的质量比优选为1.27:100 3.33:100。优选地，抗癌纳米药物颗粒的粒径为30纳米 50纳米。具有抗癌疗效的药物负载于上述超支化聚合物纳米药物载体的支臂上，超支化聚合物纳米药物载体的支臂具有无毒、良好的生物降解特性及优越的亲水性，使得该抗癌药物颗粒具有较高的水溶性和生物相容性。并且，由于上述超支化聚合物纳米药物载体可以逃离网状内皮系统的吞噬，使得该抗癌纳米药物颗粒在人体内的循环时间较长，延长药物的作用时间。
一实施方式的抗肿癌纳米药物制剂，包括超纯水和分散于超纯水中的上述抗癌纳米药物颗粒。当上述抗癌纳米药物颗粒中的具有抗癌疗效的药物的为阿霉素时，该抗癌纳米药物颗粒的浓度优选为1.25mg/mL。当上述抗癌纳米药物颗粒中的具有抗癌疗效的药物的为顺钼时，该抗癌纳米药物颗粒的浓度优选为0.35mg/mL。使用上述抗癌纳米药物制剂进行治疗癌症有以下优点:1、端羟基超支化聚酯尤其是Boltorn H40及聚乙二醇单甲醚具有良好的生物相容性，使得由改性的端羟基超支化聚酯与聚乙二醇单甲醚形成的超支化聚合物纳米药物载体具有良好的生物相容性，上述抗癌纳米药物颗粒可以生物降解并通过正常的生理途径吸收或排出体外；2、聚乙二醇单 甲醚(mPEG)作为支臂连接于改性的端羟基超支化聚酯的表面形成亲水性外壳，可以降低免疫源性并增强载抗癌纳米药物颗粒体内循环的半衰期，提高使用的安全性和疗效。一实施方式的抗癌纳米药物制剂的制备方法，包括如下步骤:将超支化聚合物纳米药物载体溶解于水中，加入具有抗癌疗效的药物，搅拌12小时 24小时，透析得到抗癌药物制剂。该抗癌药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体及负载于超支化聚合物纳米药物载体上的具有抗癌疗效的药物。透析的步骤为用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，且每隔八个小时换一次超纯水。具有抗癌疗效的药物为阿霉素或顺钼。从制备超支化聚合物纳米药物载体开始至制备抗癌瘤纳米药物制剂的示意图如图4所示。图4中,H40-mah-DDP-mPEG表示上述超支化聚合物纳米药物载体负载顺钼形成的抗癌药物颗粒，H40-mah-D0X-mPEG表示上述超支化聚合物纳米药物载体负载阿霉素形成的抗癌药物颗粒。当超支化聚合物纳米药物载体为改性的端羟基超支化聚酯与甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)反应得到时，将超支化聚合物纳米药物载体溶解于水中的步骤之前，还包括对超支化聚合物纳米药物载体的改性。对超支化聚合物纳米药物载体改性的步骤为将改性的端羟基超支化聚酯与甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)反应得到的超支化聚合物纳米药物载体与巯基乙酸甲酯溶解于四氢呋喃中，回流反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后将得到的冻干样品和水合肼溶解于四氢呋喃中，回流反应12小时 24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后得到改性的超支化聚合物纳米药物载体。对超支化聚合物纳米药物载体进行改性的目的是在超支化聚合物纳米药物载体上引入肼键，进而可以通过腙键负载阿霉素，以使抗癌纳米药物颗粒具有酸敏感效应，从而得到酸敏感的抗癌瘤纳米药物制剂，使药物在酸性条件下释放，控制药物在体内缓慢释放，提闻疗效。使用上述超支化聚合物纳米药物载体负载阿霉素时，优选在75°C下进行搅拌。
上述抗癌瘤纳米药物制剂的制备方法工艺简单，条件温和，制备成本低。以下为具体实施例。实施例11、将一定量的端羟基超支化聚酯Boltorn H40和马来酸酐溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，使Boltorn H40的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5 ;加入一定量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂(DMAP与马来酸酐的质量比为1:20)，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯，改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯,表示为H40-mah-C00H ；2、将改性的端羟基超支化聚酯(H40-mah_C00H)溶解于四氢呋喃中，再加入偶氮二异丁腈(AIBN)和甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)，回流反应12小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体H40-Mah-mPEG);其中，改性的端羟基超支化聚酯的双键与甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)的摩尔比(双键:mPEG-SH)为1:1.5，改性的端羟基超支化聚酯的双键与AIBN的摩尔比(双键:mPEG-SH=)为5:1 ;3、将20mg上述超支化聚合物纳米药物载体溶解于5mL超纯水中，再加入2.0mg的顺钼，缓慢匀速搅拌12小时，然后转移到截留分子量为3500的纤维素透析袋中，透析24小时，其中每隔八个小时换一次超纯水，然后用0.22微米的滤头过滤后得到抗癌纳米药物制齐U，该抗癌纳米药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG)和负载于超支化聚合物纳米药物载体的支臂上的(H40-Mah-mPEG)的顺钼，表示为H40-Mah-DDP_mPEG，抗癌纳米药物颗粒的载药量为1.27%。图5为用动态光闪射(DLS)测定得到的上述的抗癌纳米药物制剂中的抗癌纳米药物颗粒的粒径分布图。由图5可看出，抗癌纳米药物颗粒的粒径为40纳米 50纳米。图6为抗癌药物制剂中透射电镜图(TEM)。图6进一步证实了上述抗癌纳米药物颗粒的粒径为40纳米 50纳米。实施例21、将一定量的端羟基超支化聚酯Boltorn H40和马来酸酐溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，使Boltorn H40的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5 ;加入一定量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂(DMAP与马来酸酐的质量比为1:20)，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯，改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯,表示为H40-mah-C00H ；2、将改性的端羟基超支化聚酯(H40-mah_C00H)溶解于四氢呋喃中，再加入偶氮二异丁腈(AIBN)和甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)，回流反应12小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG); 其中，改性的端羟基超支化聚酯的双键与甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)的摩尔比(双键:mPEG-SH)为1:1.5，改性的端羟基超支化聚酯的双键与AIBN的摩尔比(双键:mPEG-SH=)为5:1 ;
3、将20mg上述超支化聚合物纳米药物载体溶解于5mL超纯水中，再加入3.0mg的顺钼，缓慢匀速搅拌12小时，然后转移到截留分子量为3500的纤维素透析袋中，透析24小时，其中每隔八个小时换一次超纯水，然后用0.22微米的滤头过滤后得到抗癌纳米药物制齐U，该抗癌纳米药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG)和负载于超支化聚合物纳米药物载体的支臂上(H40-Mah-mPEG)的顺钼，表示为H40-Mah-DDP_mPEG，抗癌纳米药物颗粒的载药量为2.67%。实施例31、将一定量的端羟基超支化聚酯Boltorn H40和马来酸酐溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，使Boltorn H40的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5 ;加入一定量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂(DMAP与马来酸酐的质量比为1:20)，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯，改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯,表示为H40-mah-C00H ；2、将改性的端羟基超支化聚酯(H40-mah_C00H)溶解于四氢呋喃中，再加入偶氮二异丁腈(AIBN)和甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)，回流反应12小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG);改性的端羟基超支化聚酯的双键与甲氧基巯基封端的聚乙二醇(mPEG-SH)的摩尔比(双键:mPEG-SH)为1:1.5，改性的端羟基超支化聚酯的双键与AIBN的摩尔比(双键:mPEG-SH=)为5:1 ;3、将20mg上述超支化聚合物纳米药物载体溶解于5mL超纯水中，再加入4.5mg的顺钼，缓慢匀速搅拌12小时，然后转移到截留分子量为3500的纤维素透析袋中，透析24小时，其中每隔八个小时换一次超纯水，然后用0.22微米的滤头过滤后得到抗癌纳米药物制齐U，该抗癌纳米药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG)和负载于超支化聚合物纳米药物载体的支臂上(H40-Mah-mPEG)的顺钼，表示为H40-Mah-mPEG-DDP_mPEG，抗癌纳米药物颗粒的载药量为3.33%。实施例41、将一定量的端羟基超支化聚酯Boltorn H40和马来酸酐溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，使Boltorn H40的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5 ;加入一定量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂(DMAP与马来酸酐的质量比为1:20)，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯，改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯,表示为H40-mah-C00H ；
2、将改性的端羟基超支化聚酯(H40-mah_C00H)溶解于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，活化I小时后，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)，反应24小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG);其中 H40-mah_C00H 的羧基与 EDC 的摩尔比(羧基:EDC)为 1:4，EDC 与 NHS的摩尔比为2:1 ；3、超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah_mPEG)与巯基乙酸甲酯溶解于四氢呋喃中，回流反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后将得到的冻干样品和水合肼溶解于四氢呋喃中，回流反应12小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后得到改性的超支化聚合物纳米药物载体；4、将20mg上述改性的超支化聚合物纳米药物载体和3.0mg阿霉素溶于5mL 二甲基亚砜中，75°C磁力搅拌24小时，反应结束后冷却至室温，然后用截留分子量为3500的纤维素透析袋在超纯水中透析24 (超纯水用氨水调节ph值至8.4，每隔8个小时换水一次)，透析完毕后，用0.22微米滤头过滤一遍，得到抗癌纳米药物制剂，该抗癌纳米药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG)和负载于超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah_mPEG)的支臂上的阿霉素，表示为H40-Mah-D0X-mPEG，抗癌纳米药物颗粒的载药量为9.83%。图7为用动态光闪射(DLS)测定得到的上述的抗癌纳米药物制剂中的抗癌纳米药物颗粒的粒径分布图。由图7可看出，抗癌纳米药物颗粒的粒径为30纳米 50纳米。图8为抗癌药物制剂中透射电镜图(TEM)。图8进一步证实了上述抗癌纳米药物颗粒的粒径为40纳米 45纳米。实施例51、将一定量的端羟基超支化聚酯Boltorn H40和马来酸酐溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，使Boltorn H40的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5 ;加入一定量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂(DMAP与马来酸酐的质量比为1:20)，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯，改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯,表示为H40-mah-⑶OH ；2、将改性的端羟基超支化聚酯(H40-mah_C00H)溶解于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，活化I小时后，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)，反应24小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG);其中 H40-mah_C00H 的羧基与 EDC 的摩尔比(羧基:EDC)为 1:4，EDC 与 NHS的摩尔比为2:1 ；3、超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah_mPEG)与巯基乙酸甲酯溶解于四氢呋喃中，回流反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后将得到的冻干样品和水合肼溶解于四氢呋喃中，回流反应12小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后得到改性的超支化聚合物纳米药物载体；4、将30mg上述改性的超支化聚合物纳米药物载体和3.0mg阿霉素溶于5mL 二甲基亚砜中，75°C磁力搅拌24小时，反应结束后冷却至室温，然后用截留分子量为3500的纤维素透析袋在超纯水中透析24 (超纯水用氨水调节ph值至8.4，每隔8个小时换水一次)，透析完毕后，用0.22微米滤头过滤一 遍，得到抗癌纳米药物制剂，该抗癌纳米药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG)和负载于超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah_mPEG)的支臂上的阿霉素，表示为H40-Mah-D0X-mPEG，抗癌纳米药物颗粒的载药量为7.91%。实施例61、将一定量的端羟基超支化聚酯Boltorn H40和马来酸酐溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，使Boltorn H40的羟基与马来酸酐的摩尔比为1:1.5 ;加入一定量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂(DMAP与马来酸酐的质量比为1:20)，反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干得到改性的端羟基超支化聚酯，改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯,表示为H40-mah-C00H ；2、将改性的端羟基超支化聚酯(H40-mah_C00H)溶解于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，活化I小时后，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇(mPEG-NH2)，反应24小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋透析24小时，过滤，冻干后得到超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG);其中，H40-mah_C00H 的羧基与 EDC 的摩尔比(羧基:EDC)为 1:4，EDC 与NHS的摩尔比为2:1 ；3、超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah_mPEG)与巯基乙酸甲酯溶解于四氢呋喃中，回流反应24小时后，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后将得到的冻干样品和水合肼溶解于四氢呋喃中，回流反应12小时，用截留分子量为3500的纤维素透析袋进行透析24小时，过滤、冻干后得到改性的超支化聚合物纳米药物载体；
4、将20mg上述改性的超支化聚合物纳米药物载体和4.0mg阿霉素溶于5mL 二甲基亚砜中，75°C磁力搅拌24小时，反应结束后冷却至室温，然后用截留分子量为3500的纤维素透析袋在超纯水中透析24 (超纯水用氨水调节ph值至8.4，每隔8个小时换水一次)，透析完毕后，用0.22微米滤头过滤一遍，得到抗癌纳米药物制剂，该抗癌纳米药物制剂包括超纯水和分散于超纯水中的抗癌纳米药物颗粒，抗癌纳米药物颗粒包括超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah-mPEG)和负载于超支化聚合物纳米药物载体(H40-Mah_mPEG)的支臂上的阿霉素，表示为H40-Mah-D0X-mPEG，抗癌纳米药物颗粒的载药量为11.37%。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
权利要求
1.一种超支化聚合物纳米药物载体，其特征在于，包括多个纳米胶束，每个纳米胶束包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核和连接于所述内核表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂；所述改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯。
2.根据权利要求1所述的超支化聚合物纳米药物载体，其特征在于，所述端羟基超支化聚酯为超支化聚酯Boltorn H40。
3.根据权利要求1所述的超支化聚合物纳米药物载体，其特征在于，所述聚乙二醇单甲醚的分子量为2000 5000。
4.根据权利要求1所述的超支化聚合物纳米药物载体，其特征在于，所述纳米胶束的粒径为30纳米 50纳米。
5.一种超支化聚合物纳米药物载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 将端羟基超支化聚酯和马来酸酐溶解于N，N- 二甲基甲酰胺中，加入4- 二甲氨基吡啶，反应24小时后，透析、过滤、冻干得到改性的端羟基超支化聚酯； 将所述改性的端羟基超支化聚酯溶解于溶剂中，加入甲氧基氨基封端的聚乙二醇或甲氧基巯基封端的聚乙二醇，反应12小时 24小时，透析、过滤、冻干得到超支化聚合物纳米药物载体，所述超支化聚合物纳米药物载体包括多个纳米胶束，每个纳米胶束包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核和连接于所述内核表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂，所述改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯。
6.一种抗癌纳米药物颗粒，其特征在于，包括如权利要求1 4任一项所述的超支化聚合物纳米药物载体及负载于所述超支化聚合物纳米药物载体上的具有抗癌疗效的药物。
7.根据权利要求6所述的抗癌纳米药物颗粒，其特征在于，所述具有抗癌疗效的药物为阿霉素，所述阿霉素通过腙键负载于所述超支化聚合物纳米药物载体的支臂上。
8.根据权利要求7所述的抗癌纳米药物颗粒，其特征在于，所述抗癌纳米药物颗粒载药量为7.91% 11.37%。
9.根据权利要求6所述的抗癌纳米药物颗粒，其特征在于，所述具有抗癌疗效的药物为顺钼，所述顺钼通过配位作用负载于所述超支化聚合物纳米药物载体的支臂上。
10.根据权利要求9所述的抗癌纳米药物颗粒，其特征在于，所述抗癌纳米药物颗粒载药量为1.27 3.33%。
11.根据权利要求6所述的抗癌纳米药物颗粒，其特征在于，所述抗癌纳米药物颗粒的粒径为30纳米 50纳米。
12.一种抗癌药物纳米制剂，其特征在于，包括超纯水及分散于所述超纯水中的如权利要求6所述的抗癌纳米药物颗粒。
13.一种抗癌药物制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 将如权利要求1 4任一项所述的超支化聚合物纳米药物载体溶解于水中，加入具有抗癌疗效的药物，搅拌12小时 24小时,透析得到抗癌药物制剂,所述抗癌药物制剂包括所述超支化聚合物纳米药物载体及负载于所述超支化聚合物纳米药物载体上的具有抗癌疗效的药物。
全文摘要
本发明涉及一种超支化聚合物纳米药物载体及其制备方法、抗癌药物纳米颗粒、抗癌药物制剂及其制备方法。该超支化聚合物纳米药物载体包括多个纳米胶束，每个纳米胶束包括由改性的端羟基超支化聚酯形成的内核和连接于内核表面的由聚乙二醇单甲醚形成的多个支臂；改性的端羟基超支化聚酯为马来酸酐开环与端羟基超支化聚酯连接形成的多羧基超支化聚酯。聚乙二醇单甲醚连接在改性的端羟基超支化聚酯表面，能够很好地修饰改性的端羟基超支化聚酯，使得该超支化聚合物纳米药物载体可以逃离网状内皮系统的吞噬，从而延长了使用该超支化聚合物纳米药物载体负载的药物在人体内的循环时间，提高药物的作用疗效。
文档编号A61K47/34GK103169977SQ20131010241
公开日2013年6月26日 申请日期2013年3月27日 优先权日2013年3月27日
发明者蔡林涛, 邓吉喆, 魏伟, 吴蕾, 孙茜, 马轶凡 申请人:深圳先进技术研究院