芳香族阳离子肽及其用途
【专利摘要】本公开内容提供了芳香族阳离子肽组合物及其使用方法。该方法包括肽在电子传递、心磷脂过氧化的抑制、以及细胞凋亡和坏死的抑制中的用途，以治疗、预防或改善自身免疫疾病或病症的症状。
【专利说明】芳香族阳离子肽及其用途
[0001] 与相关申请的夺Y衾#
[0002]本专利申请要求于2012年2月23日提交的美国临时申请号61/602, 418的利益 和优先权，所述美国临时申请全文以引用方式并入本文。
【技术领域】
[0003]本技术总体涉及芳香族阳离子肽组合物和在治疗、预防或改善自身免疫疾病或病 症症状中的使用方法。
【背景技术】
[0004]自身免疫疾病的特征在于针对身体自身组织的方面的免疫应答。取决于主要临床 和病理学疾病特点，自身免疫疾病可广泛分成两类：损害许多器官的自身免疫疾病（系统 性）和其中仅单一器官或组织被自身免疫过程直接损害的自身免疫疾病（局限性）。系统 性自身免疫疾病尤其例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、抗磷脂综合征和系统性硬化 症通常特征在于与广泛多样的自身抗原反应的自身抗体，所述自身抗原包括DNA、细胞表面 分子和细胞内基质蛋白质。尽管系统性自身免疫的原因仍不明了，但已牵涉几种免疫机制， 连同遗传和环境因子。
【发明内容】
[0005] 在一些方面，本技术提供了通过给受试者施用治疗有效量的芳香族阳离子肽或其 药学可接受的盐，用于治疗患有自身免疫疾病的受试者，用于减少患有自身免疫疾病的受 试者中的心磷脂氧化，和/或用于减少患有自身免疫疾病的受试者中的炎症的方法。在该 方法的一些实施例中，自身免疫疾病的特征在于增加水平的针对心磷脂的抗体。在一些实 施例中，自身免疫疾病是系统性红斑狼疮或抗磷脂综合征。
[0006] 在本文公开的方法的一些实施例中，施用于受试者的芳香族阳离子 肽包括选自下述的一种或多种肽：2' ,6' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys_NH2(SS-02); Phe-D~Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20) ；D-Arg-2 ' ,6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)； 2 ' ，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap_NH2 (SS-19)，其中（atn)Dap 是 β -氛茴 酰-L-α，β-二氨基丙酸；和 2' ,6，-Dmt-D-Arg-Aid-Lys-NH2(SS-36)，其中 Aid 是 β -(6，-二甲基氨基-2'_萘酰）丙氨酸。在一些实施例中，盐是乙酸盐或三氟乙酸盐。在 一些实施例中，该肽包含 D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)。
[0007] 在一些实施例中，给有此需要的受试者施用治疗有效量的芳香族阳离子肽或其药 学可接受的盐（例如用于治疗患有自身免疫疾病的受试者中的自身免疫疾病，减少心_脂 氧化和/或减少炎症）导致自身免疫疾病的一种或多种症状的减少。例如，在一些实施例 中，受试者患有系统性红斑狼疮，并且芳香族阳离子肽施用减少或改善系统性红斑狼疮的 一种或多种症状，其中所述系统性红斑狼疮的症状是选自下述的一种或多种症状：增加的 心磷脂抗体水平，发热，血管血栓形成，血小板减少症，心脏瓣膜疾病，网状青斑，胸膜炎，胸 腔积液，狼疮性肺炎，慢性弥漫性间质性肺疾病，肺性高血压，肺栓塞，肺出血，肺收缩综合 征，心包炎，心肌炎，心内膜炎，贫血，低血小板和白细胞计数，延长部分凝血活酶时间，骨关 节结核，肌痛，面颊疫，盘状狼疮，脱发（allopecia)，口、鼻、泌尿道和阴道溃瘍，多发性神经 病和颅内压增高综合征。
[0008]在一些实施例中，芳香族阳离子肽经口、肠胃外、静脉内、皮下、经皮、局部或通过 吸入施用。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图 1A 和 1B 是显示肽 D-Arg-2 '，6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增加细胞色素 C 还原率的图表。
[0010]图 2(上图）是显示肽 D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增强通过细胞 色素 c的电子扩散的图表。图2(下图）是显示在l〇〇mV/s下具有渐增SS-31剂量（20mM Tris-硼酸盐-EDTA(TBE)缓冲液 PH7的溶液中的细胞色素 c的循环伏安图的图。
[0011]图 3A 和 3B 是显示肽 D-Arg-2 '，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增加细胞色素 c 中的电子容量的图表。 _2] 图4是显示肽D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)诱导围绕细胞色素 c血 红素的新型：π-?ι相互作用的图表。
[0013]图 5A 和 5B 是显不肽 D-Arg-2' ,6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增加分离的线粒 体中的02消耗的图表。
[0014] 图6是显不肽D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增加分离的线粒体中的 ATP合成的图表。
[0015]图7是显示肽D-Arg-2 '，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增强细胞色素 C耗尽的 丝状体中的呼吸的图表。
[0016]图 8 是显不肽 D-Arg-2 ' ，6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)促进细胞色素 c还原的图表。
[0017]图9是显示如通过分离的大鼠肾线粒体中的〇2消耗测量的，肽D_ Arg-2'，6，_D mt-Lys-Phe-NH2(SS-31)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)促进电子流量的图表。
[0018] 图 1〇 是显示肽 D-Arg-2 ，，6 ，-Dmt-Lys-Phe_NH2(SS-31)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)增加分离的线粒体中的ATP生产率的图表。
[0019] 图 11A-11C 是显不肤 2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap_NH2(SS-19)(图 11A)、 2 '，6' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2 (SS-36)(图 11C)和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Ald- NH2(SS-37)(图11B)与心磷脂的相互作用的图表。
[0020]图 12A-12D 是显示肽 2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2(SS-19)与细胞色 素 c的相互作用的图表。
[0021] 图 13A-13D 是显不肤 2 '，6 ' -Dnrt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2 (SS-19)(图 13A、 13B)、2 '，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Ald-NH2 (SS-37)(图 13C)和 2，，6，-Dmt-D-Arg-Aid -Lys-NH2(SS-36)(图13D)与细胞色素 c和心磷脂（CL)的相互作用的图表。
[0022] 图 14A-14E 是显不肽 2，，6 , -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2(SS-19) (图 14B)、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20)(图 14D)、D-Arg-2 ' ，6 ，-Dmt-Lys-P he-NH2(SS-31)(图 14A)、2 ' ，6 ' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2(SS-36)(图 14C)和 D-Arg-Tyr^Lys-Phe-NH2(SPI-231)(图14E)保护细胞色素c的血红素环境不受心磷脂的酰 基链影响的图表。
[0023]图 15A-15C 是显示肽 D-Arg-2，，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)(图 15A、15B)、 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)(图 15C)、D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2(SPI-231)(图 15C)防 止由心磷脂引起的细胞色素 c还原的抑制的图表。
[0024]图肅-懸是显示肽 D-Arg_2 '，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)(图 16A)和 Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-2〇)(图1明）增强分离的线粒体中的〇 2消耗的图表。
[0025]图17是显示肽D-Arg-2'，6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)增加分离的线粒体中 的ATP合成的图表。
[0026]图 18 是显示肽 D-Arg-2 '，6 ' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31)增强细胞色素 C 耗尽 的丝状体中的呼吸的图表。
[0027]图 19A-19C 是显示肽 D-Arg-2 '，6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)(图 19A、19B)、 2 '，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe- (atn) Dap-NH2 (SS-19)、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20)、2，， 6 ' -Dmt-D-Arg-Aid-Lys-NH2(SS-36)、2 '，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Aid-NH2(SS-37)和 D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2(SPI-231)(图19C)防止细胞色素c/心磷脂复合物中的过氧化物 酶活性的图表。
[0028]图 20A 是肽类似物 SS-02、[atn] SS-02 (也称为 SS-19)、[aid] SS-02 (也称为 SS-36)和SS-31结构的图示。图20B显示了加入luM[atn]SS-02中的不同浓度心磷脂的 代表性发射光谱。图20C显示了加入1 μ M[ald]SS-02中的不同浓度心磷脂的代表性发射 光谱。图20D显示了在添加1 μ M[ald]SS_〇2后的P〇PS、POPA、DPPG和心磷脂的代表性发射 光谱。图20E是显示加入心磷脂（CL)、DPPG、P0PS、P0PA、PE和P0PC中的[ald]SS-02的相 对荧光的条形图。图20F是比较加入不同浓度心磷脂和脂质体中的心磷脂中的[ atn]SS-02 的相对荧光的线图。图2〇G是显示加入lyM[atn]SS-02中的不同浓度心磷脂（25、50、75、 100 μ g/mL)的相对荧光的条形图。
[0029]图21A显示了加入不同浓度（2、4、6μΜ)细胞色素 c中的[atn]SS_02(luM)的代 表性发射光谱。图21B显示了加入不同浓度（2、4、6μΜ)细胞色素 c中的[ald]SS-02(luM) 的代表性发射光谱。图21C是通过添加渐增浓度（1-?〇μΜ)的细胞色素 c的[atn] SS-02(luM)荧光猝灭的线图。图21D是在心磷脂（l〇Ug/ml)的存在和不存在下，[ atn] SS-02 (1 μ Μ)和细胞色素 c (2 μ Μ)随着时间过去的相对荧光的图。图21E是在渐增浓度的 单独的心磷脂或与脂质体混合的心磷脂中，通过细胞色素 c的[atn] SS-02 (1 μ Μ)荧光猝灭 的线图。图21F显示了在心磷脂（CL)的存在下，以及在心磷脂和细胞色素 c的存在下，单独 的[aid] SS-02的代表性发射光谱。图21G是比较在线粒体相对于细胞色素 c缺乏丝状体 中[atn]SS_02的荧光猝灭百分比的条形图。图21H显示了来自通过2μΜ细胞色素 c(图 21Η中的标记C)的序贯添加，伴随75ug/ml BSA(图21Η中的标记Α)的进一步添加猝灭的 [ant] SS-02的代表性荧光发射光谱。图211显示了来自通过TMRM (图211中的标记C)的 序贯添加，伴随75μ g/ml BSA(图211中的标记A)的进一步添加粹灭的[ant]SS-02的代 表性荧光发射光谱。
[0030]图22A是伴随不同浓度（0、10、20、4(^1)33-31肽的添加，关于细胞色素(；和心磷 脂的混合物在A55Q/5ro中的变化的曲线图。图22B是比较关于不同肽（对照、SS-02、[atn] SS-02、[ald]SS-02和SS-31)的细胞色素 c氧化率的条形图。
[0031] 图23是显示在SS肽类似物的不存在或存在下，单独的或具有心磷脂（CL)的复合 物中的铁细胞色素 c的索雷带（Soret band)的代表性圆二色光谱。
[0032] 图24是比较关于SS-02、[atn]SS-02、[ald]SS-02和SS-31，作为对照百分比的细 胞色素 c过氧化率的条形图。
[0033] 图 25 是比较不同肽类似物（40μΜ ;SS-02、[atn]SS-02、[ald]SS-02 和 SS-31)在 其促进通过抗坏血酸盐诱导的心磷脂-细胞色素 c复合物还原的能力中的条形图。CL是不 含添加的SS肽类似物的心磷脂-细胞色素 c复合物。
【具体实施方式】
[0034] 应当理解本发明的某些方面、模式、实施例、变化和特点在下文以不同的详细水平 描述，以便提供本发明的基本理解。如本说明书中使用的某些术语的定义在下文提供。除 非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语一般具有与本发明所属领域普通技术人员通 常理解相同的含义。
[0035] 在实践本公开内容中，使用细胞生物学、分子生物学、蛋白质生物化学、免疫学和 细菌学的许多常规技术。这些技术是本领域众所周知的，并且在任何数目的可用出版物中 提供，包括Current Protocols in Molecular Biology,第 I-III卷，Ausubel，编辑（1997); Sambrook 等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第二版（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989)。
[0036] 如本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式"一个"、"一种"和"该/所述"包 括复数所指对象，除非内容另有明确说明。例如，提及"细胞"包括两种或更多种细胞的组 合等等。
[0037] 如本文使用的，试剂、药物或肽对受试者的"施用"包括将化合物引入或递送至受 试者以执行其预期功能的任何途径。施用可通过任何合适途径执行，包括经口、经鼻、肠胃 外（静脉内、肌内、腹膜内或皮下）、局部、经外表皮、经直肠、皮内、经皮、吸入、动脉内、大脑 内、骨内、鞘内、离子电渗法、经眼、阴道内等。施用包括自施用和通过另一者的施用。
[0038]如本文使用的，术语"氨基酸"包括天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及氨基酸 类似物和氨基酸模拟物，其以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。天然存在的氨基酸 是由遗传密码编码的氨基酸，以及以后修饰的氨基酸，例如羟腩氨酸、羧基谷氨酸盐和 〇-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物指这样的化合物，其具有与天然存在的氨基酸相同的基本化 学结构，即与氢、羧基、氨基和R基结合的α -碳，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、 甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有经修饰的R基（例如正亮氨酸）或经修饰的肽主链，但 保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物指这样的化学化合物，其具 有不同于氨基酸的一般化学结构的结构，但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。氨 基酸在本文中可由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的 单字母符号提及。
[0039] 如本文使用的，术语"有效量"指足以实现所需治疗和/或预防效应的数量。在治 疗或预防应用的背景下，施用于受试者的组合物量将取决于疾病的类型和严重性，以及个 体的特征，例如一般健康、年龄、性别、体重和对药物的耐受。它还将取决于疾病的程度、严 重性和类型。取决于这些及其他因素，技术人员将能够测定适当剂量。组合物还可与一种 或多种另外的治疗性化合物组合施用。在一些实施例中，术语"有效量"指足以实现所需疗 效，例如缓解（aleviate)或改善疾病或病症例如抗磷脂综合征或系统性红斑狼疮的体征 或症状的数量。
[0040]如本文使用的，"外源核酸"指这样的核酸（例如DNA、RNA)，其并非天然存在于宿 主细胞内，而是从外部源引入。如本文使用的，外源核酸指未整合到宿主细胞的基因组内而 是保持分离的核酸，例如细菌质粒核酸。如本文使用的，"细菌质粒"指细菌起源的环状 DNA， 其充当目的序列的载体和用于在细菌宿主细胞中表达序列的工具。
[0041 ] "分离的"或"纯化的"多肽或肽基本上不含来自试剂源自其的细胞或组织来源的 细胞材料或其他污染多肽，或当化学合成时，基本上不含化学前体或其他化学品。例如，分 离的芳香族阳离子肽或分离的细胞色素 c蛋白质将不含这样的材料，其将干扰试剂的诊断 或治疗用途，或干扰肽的电导或电子特性。此类干扰材料可包括酶、激素及其他蛋白质性和 非蛋白质性溶质。
[0042] 如本文使用的，"诱导型启动子"指这样的启动子，其受某些条件例如温度或特定 分子的存在影响，且仅在满足这些条件时，促进可操作地连接的目的核酸序列的表达。
[0043] 如本文使用的，"组成型启动子"指这样的启动子，其在所有或大多数环境条件下 促进可操作地连接的目的核酸序列的表达。
[0044] 如本文使用的，术语"多肽"、"肽"和"蛋白质"在本文中可互换使用，以意指包含通 过肽键或经修饰的肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸的聚合物，即肽等排物。多肽指通 常被称为肽、糖肽或寡聚物的短链，和一般被称为蛋白质的更长链两者。多肽可含有20种 基因编码的氨基酸以外的氨基酸。多肽包括通过天然过程例如翻译后加工、或通过本领域 众所周知的化学修饰技术进行修饰的氨基酸序列。
[0045] 如本文使用的,"重组细菌"指已改造为携带和/或表达一种或多种外源核酸（例 如DNA)序列的细菌。
[0046] 如本文使用的，术语"处理"或"治疗"或"减轻"指治疗性处理和预防或防止措施 两者，其中目的是预防或减慢（减轻）靶向病理学病症或障碍。还应当理解如所述的医学 病症的多种治疗或预防模式意指"基本的"，其包括完全治疗或预防以及少于完全治疗或预 防，并且其中达到一些生物学或医学相关结果。
[0047] 如本文使用的，障碍或病症的"预防"或"防止"指这样的化合物，相对于未经处理 的对照样品，其降低经处理的样品中的障碍或病症的出现，或者相对于未经处理的对照样 品，延迟障碍或病症的-种或多种症状的爆发或降低障碍或病症的一种或多种症状的严重 性。
[0048] 芳莕旌阳离子狀:
[0049] 本技术涉及芳香族阳离子肽的用途。在一些实施例中，该肽可用于涉及治疗或改 善特征在于抗心磷脂抗体的存在的症状、病症或疾病（例如抗磷脂综合征和系统性红斑狼 疮）的方面。
[0050]芳香族阳离子肽是水溶性和高度极性的。尽管有这些特性，该肽仍可容易地穿透 细胞膜。芳香族阳离子肽通常包括由肽键共价连接的最少三个氨基酸或最少四个氨基酸。 芳香族阳离子肽中存在的氨基酸的最大数目是由肽键共价连接的约二十个氨基酸。适当 地，氨基酸的最大数目是约十二、约九或约六。
[0051]芳香族阳离子肽的氨基酸可以是任意氨基酸。如本文使用的，术语"氨基酸"用于 指含有至少一个氨基和至少一个羧基的任何有机分子。通常，至少一个氨基在相对于羧基 的α位置处。氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括例如在哺乳动物蛋白质 中通常发现的二十种最常见的左旋（L)氨基酸，即丙氨酸（Ala)、精氨酸（Arg)、天冬酰胺 (Asn)、天冬氨酸（Asp)、半胱氨酸（Cys)、谷氨酰胺（Gin)、谷氨酸（Glu)、甘氨酸（Gly)、组氨 酸（His)、异亮氨酸（lie)、亮氨酸（Leu)、赖氨酸（Lys)、甲硫氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)、 脯氨酸（Pro)、丝氨酸（Ser)、苏氨酸（Thr)、色氨酸（Trp)、酪氨酸（Tyr)和缬氨酸（Val)。其 他天然存在的氨基酸包括例如在与蛋白质合成不相关的代谢过程中合成的氨基酸。例如， 氨基酸鸟氨酸和瓜氨酸在尿素生产过程中的哺乳动物代谢中合成。天然存在的氨基酸的另 一个例子包括轻脯氨酸（Hyp)。
[0052]该肽任选含有一种或多种非天然存在的氨基酸。最佳地，该肽不具有天然存在的 氨基酸。天然存在的氨基酸可以是左旋的（L-)、右旋的（D-)或其混合物。非天然存在的氨 基酸是这样的氨基酸，其通常在活生物体中的正常代谢过程中未合成，并且在蛋白质中未 天然存在。另外，天然存在的氨基酸适当地也不由常见蛋白酶识别。天然存在的氨基酸可 存在于肽中的任何位置处。例如，非天然存在的氨基酸可在N末端、C末端或N末端和C末 端之间的任何位置处。
[0053] 非天然氨基酸可例如包含在天然氨基酸中未发现的烷基、芳基或烷基芳基。非天 然烷基氨基酸的一些例子包括α -氨基丁酸、β -氨基丁酸、γ -氨基丁酸、δ -氨基戊酸和 ε -氨基己酸。非天然芳基氨基酸的一些例子包括邻、间和对氨基苯甲酸。非天然烷基芳基 氨基酸的一些例子包括邻、间和对氨基苯乙酸和苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨 基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可例如包括一个或多个 化学基团对天然存在的氨基酸的添加。
[0054] 例如，一个或多个化学基团可加入苯丙氨酸或酪氨酸残基的芳环的W、3'、4'、 5'或…位置或者色氨酸残基的苯并环的4'、5<、6<或7'位置中的一个或多个。基团 可以是可加入芳环的任何化学基团。此类基团的一些例子包括分支或未分支的(^-(；烷基， 例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基、(^-(；烷基氧基（即烷氧基）、氨基、 crc4烷基氨基和CrC4二烷基氨基（例如甲基氨基、二甲氨基）、硝基、羟基、卤素（即氟、氯、 溴或碘）。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些具体例子包括正缬氨酸（Nva) 和正亮氨酸（Nle)。
[0055]肽中的氨基酸修饰的另一个例子是肽的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基的衍生化。 一个衍生化例子是由氨或者由伯胺或仲胺酰胺化，所述伯胺或仲胺例如甲胺、乙胺、二甲胺 或二乙胺。另一个衍生化例子包括由例如甲醇或乙醇酯化。另一种此类修饰包括赖氨酸、 精氨酸或组氨酸残基的氨基的衍生化。例如，此类氨基可以是酰化的。一些合适的酰基包 括例如苯甲酰基或包含上文提及的Q-Q烷基中的任一个的烷酰基例如乙酰基或丙酰基。 [00 56] 非天然存在的氨基酸适当地对常见蛋白酶是抗性或不敏感的。对蛋白酶是抗性或 不敏感的非天然存在的氨基酸的例子包括右旋（D-)形式的上述天然存在的L-氨基酸中的 任一个，以及L-和/或D-非天然存在的氨基酸。D-氨基酸通常不存在于蛋白质中，尽管它 们在某些肽抗生素中发现，所述肽抗生素由细胞的正常核糖体蛋白合成机制以外的方法合 成。如本文使用的，D-氨基酸视为非天然存在的氨基酸。
[0057] 为了使蛋白酶敏感性降到最低，该肽应具有由常见蛋白酶识别的小于五个、小于 四个、小于三个或小于两个连接L-氨基酸，与氨基酸是天然存在的还是非天然存在的无 关。在一个实施例中，该肽仅具有D-氨基酸，且不具有L-氨基酸。如果该肽含有蛋白酶敏 感的氨基酸序列，则氨基酸中的至少一个优选是非天然存在的D-氨基酸，由此赋予蛋白酶 抗性。蛋白酶敏感序列的例子包括由常见蛋白酶例如内肽酶和胰蛋白酶容易切割的两个或 更多个连接的碱性氨基酸。碱性氨基酸的例子包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
[0058] 与肽中的氨基酸残基总数目相比较，芳香族阳离子肽应在生理pH下具有最小数 目的净正电荷。在生理pH下的净正电荷的最小数目在下文将被称为（p m)。肽中的氨基酸 残基总数目在下文将被称为（r)。下文讨论的净正电荷的最小数目均在生理pH下。如本文 使用的术语"生理pH"指在哺乳动物机体的组织和器官的细胞中的正常pH。例如，人的生 理pH通常为大约7. 4,但哺乳动物中的正常生理pH可以是约7. 0-约7. 8的任何pH。
[0059] 如本文使用的"净电荷"指由肽中存在的氨基酸携带的正电荷数目和负电荷数目 的平衡。在本说明书中，应当理解净电荷在生理pH下测量。在生理pH下带正电的天然存 在的氨基酸包括L-赖氨酸、L-精氨酸和L-组氨酸。在生理pH下带负电的天然存在的氨 基酸包括L-天冬氨酸和L-谷氨酸。
[0060] 通常，肽具有带正电的N末端氨基和带负电的C末端羧基。电荷在生理pH下彼此 抵消。作为计算净电荷的例子，肽Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg具有一个带负电 的氨基酸（即Glu)和四个带正电的氨基酸（即两个Arg残基、一个Lys和一个His)。因 此，上述肽具有净正电荷三。
[0061] 在一个实施例中，芳香族阳离子肽具有的在生理pH下的净正电荷的最小数目（Pm) 和氨基酸残基的总数目（r)之间的关系为：其中3ρ π是小于或等于r+1的最大数。在该实 施例中，净正电荷的最小数目（pj和氨基酸残基总数目（r)之间的关系如下：
[0062] 表1.氨基酸数目和净正电荷（3Ρπ彡p+1)
[0063]
【权利要求】
1. 一种用于治疗患有特征在于增加水平的心磷脂抗体的自身免疫疾病的受 法，所述方法包括： 给所述受试者施用治疗有效量的芳香族阳离子肽或其药学可接受的盐。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述芳香族阳离子肽包含选自下述的一种或多种1 肽：2 ,，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH 2 (SS-02) ;Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2 (SS-20) ;D-Arg-2 ',6，-Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31);2, ,6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH 2(SS-19)，其中 (atn) Dap 是 β -氣茵酿-L- α , β -二氛基丙酸；和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2 (SS 3 6)，其中Aid是β -(6' -二甲基氨基-2' -萘酰）丙氨酸。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述盐是乙酸盐或三氟乙酸盐。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述肽包含D-Arg-2' , 6' -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS - 31) 〇
5. 根据权利要求1所述的方法，其中所述自身免疫疾病选自系统性红斑狼疮和抗_月旨 综合征。 ^
6. 根据权利要求5所述的方法，其中治疗包括减少或改善系统性红斑狼疮的一种或多 种症状，其中所述系统性红斑狼疮的症状是选自下述的一种或多种症状：增加的心磷脂抗^ 体水平，发热，血管血栓形成，血小板减少症，心脏瓣膜疾病，网状青斑，胸膜炎，胸腔积$， 狼疮性肺炎，慢性弥漫性间质性肺疾病，肺性高血压，肺栓塞，肺出血，肺收缩综合征，力@ 炎，心肌炎，心内膜炎，贫血，低血小板和白细胞计数，延长部分凝血活酶时间，骨关节结核， 肌痛，面颊疹，盘状狼疮，脱发，口、鼻、泌尿道和阴道溃疡，多发性神经病和颅内压增高综合 征。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中所述芳香族阳离子肽经口、肠胃外、静脉内、皮下、 经皮、局部或通过吸入施用。
8. -种用于减少患有自身免疫疾病的受试者中的心磷脂氧化的方法，所述方法包括： 给所述受试者施用有效量的芳香族阳离子肽或其药学可接受的盐。
9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述芳香族阳离子肽是选自下述的一种或多种：2 ',6' -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-02) ；Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20) ；D-Arg-2, ,6r -Dmt-Lys-Phe-NH2 (SS-31) ;Dmt-D-Arg-Phe- (atn) Dap-NH2 (SS-19)，其中（atn) Dap 是 β -氨 茵醜-L- α, β -二氛基丙酸；和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Ald-LysHNH2 (SS-36)，其中 Aid 是 β -(6' -二甲基氨基-2' -萘酰）丙氨酸。
10. 根据权利要求8所述的方法，其中所述盐是乙酸盐或三氟乙酸盐。
11. 根据权利要求8所述的方法，其中所述自身免疫疾病的特征在于增加水平的针对 心磷脂的抗体。
12. 根据权利要求8所述的方法，其中所述自身免疫疾病选自系统性红斑狼疮和抗磷 脂综合征。
13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述方法包括减少或改善系统性红斑狼疮的一 种或多种症状，其中所述系统性红斑狼疮的症状是选自下述的一种或多种症状：增加的心 磷脂抗体水平，发热，血管血栓形成，血小板减少症，心脏瓣膜疾病，网状青斑，胸膜炎，胸腔 积液，狼疮性肺炎，慢性弥漫性间质性肺疾病，肺性高血压，肺栓塞，肺出血，肺收缩综合征， 心包炎，心肌炎，心内膜炎，贫血，低血小板和白细胞计数，延长部分凝血活酶时间，骨关节 结核，肌痛，面颊疹，盘状狼疮，脱发，口、鼻、泌尿道和阴道溃疡，多发性神经病和颅内压增 高综合征。
14. 根据权利要求8所述的方法，其中所述芳香族阳离子肽经口、肠胃外、静脉内、皮 下、经皮、局部或通过吸入施用。
15. -种用于减少患有自身免疫疾病的受试者中的炎症的方法，所述方法包括： 给具有自身免疫疾病的受试者施用有效量的芳香族阳离子肽或其药学可接受的盐。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述芳香族阳离子肽是选自下述的一种或多 种：2，,6! -Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-02) ;Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS_20) ;D_Arg-2 ',6' -Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31) ;2'，6' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap-NH2(SS-19)，其中 (atn) Dap 是 β -氨茴酰-L- α，β -二氨基丙酸；和 2'，6' -Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2 (SS-3 6)，其中Aid是β _(6' -二甲基氨基-2' -萘酰）丙氨酸。
17. 根据权利要求15所述的方法，其中所述盐是乙酸盐或三氟乙酸盐。
18. 根据权利要求15所述的方法，其中所述自身免疫疾病产生针对心磷脂的抗体。
19. 根据权利要求15所述的方法，其中所述自身免疫疾病选自系统性红斑狼疮和抗磷 脂综合征。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中所述方法包括减少或改善系统性红斑狼疮的一 种或多种症状，其中所述系统性红斑狼疮的症状是选自下述的一种或多种症状：增加的心 磷脂抗体水平，发热，血管血栓形成，血小板减少症，心脏瓣膜疾病，网状青斑，胸膜炎，胸腔 积液，狼疮性肺炎，慢性弥漫性间质性肺疾病，肺性高血压，肺栓塞，肺出血，肺收缩综合征， 心包炎，心肌炎，心内膜炎，贫血，低血小板和白细胞计数，延长部分凝血活酶时间，骨关节 结核，肌痛，面颊疹，盘状狼疮，脱发，口、鼻、泌尿道和阴道溃疡，多发性神经病和颅内压增 高综合征。
21. 根据权利要求15所述的方法，其中所述芳香族阳离子肽经口、肠胃外、静脉内、皮 下、经皮、局部或通过吸入施用。
22. 根据权利要求8或15所述的方法，其中所述肽包含D-Arg-2' W -Dmt-Lys-Phe- NH2(SS-31)〇
23. 根据权利要求1、8或15所述的方法，其中所述肽包含 2 1 ，6 ' -Dmt-D-Arg-Phe-(atn)Dap_NH2 (SS-19)，其中（atn) Dap 是 β -氨茴 醜-L- α，β _ -?見基丙fe。
24. 根据权利要求1、8或15所述的方法，其中所述肽包含2' ,6' -Dmt-D-Arg-Ald-Ly s-NH2(SS-36)，其中Aid是β -(6' -二甲基氨基_2' -萘酿）丙氨酸。
【文档编号】A61K38/07GK104203262SQ201380016624
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2013年2月22日 优先权日:2012年2月23日
【发明者】黑兹尔·H·司徒 申请人:康奈尔大学