本发明涉及兽用疫苗技术领域，具体涉及一种鸡新城疫病毒灭活疫苗制备方法。
背景技术：
鸡新城疫病毒在分类上是属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒属(Paramyxovirus)。成熟的病毒粒子近圆形，多数呈蝌蚪状，直径为120-300nm。具有囊膜，内含有一长螺旋状核衣壳，直径17-18nm，囊膜外有长约8-12nm的糖蛋白(HN和F)纤突。螺旋形核衣壳是由一个与蛋白相联结的单股RNA所形成，具有RNA聚合酶活性，它被一个双层脂质膜所包裹，脂质膜内衬有一层特殊的M蛋白，而脂质膜的外层又被具有纤突的糖蛋白所覆盖，使外形呈花穗状。
现有技术中，控制鸡新城疫病毒发病的主要手段是接种灭活全病毒疫苗，通过免疫接种来控制典型的鸡呼肠孤病毒感染，但目前灭活疫苗多为油包水型，注射时阻力大，不易吸收，并具有一定的毒副作用。因此有必要开发一种剂型更合理，更易吸收同时具有更好的免疫应答效应的疫苗产品。
技术实现要素：
为克服现有技术的技术缺陷，本发明提供一种鸡新城疫病毒灭活疫苗制备方法。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种鸡新城疫病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
1)制备原代CEF细胞，当细胞长至单层时接种鸡新城疫病毒。
2)当细胞出现80％以上病变时，收获细胞培养物，反复冻融3次，得到含上清液的细胞毒液。
3)测定病毒效价，病毒的效价应≥106.5TCID50/0.1mL。
4)将检验合格的细胞毒液置于无菌容器内进行灭活处理，加入甲醛溶液充分摇匀，甲醛溶液的加入量为灭活溶液体积的0.5‰-2‰，控制温度在37℃灭活12-48h，转速为180r/min。
5)将灭活的病毒进行灭活检验，确定最佳的灭活时间及甲醛浓度。
6)将灭活的病毒液与进口佐剂MONTANIDETMISA 206VG按1:1比例(w/w)或75:87比例(v/v)混匀，利用ATS Engineering Inc公司的AH100D型均质机对疫苗进行了乳化进行乳化，制备的灭活疫苗。
作为优选，步骤4)中所述灭活时间是16h。
作为优选，步骤4)中甲醛溶液的加入量为灭活溶液体积的1‰。
本发明的有益效果包括：采用了本土分离的鸡新城疫病毒，免疫原性好，具有更高的保护率；本发明采用鸡胚成纤维细胞取代利用鸡胚绒毛尿囊膜接种方式繁殖鸡新城疫病毒，节省了疫苗制备成本，各批间质量差异降低，产量大，病毒毒价和疫苗质量提高。
具体实施方式
实施例1
一种鸡新城疫病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
1)制备原代CEF细胞，当细胞长至单层时接种鸡新城疫病毒。
2)当细胞出现80％以上病变时，收获细胞培养物，反复冻融3次，得到含上清液的细胞毒液。
3)测定病毒效价，病毒的效价应≥106.5TCID50/0.1mL。
4)将检验合格的细胞毒液置于无菌容器内进行灭活处理，加入甲醛溶液充分摇匀，甲醛溶液的加入量为灭活溶液体积的2‰，控制温度在37℃灭活48h，转速为180r/min。
5)将灭活的病毒进行灭活检验，确定最佳的灭活时间及甲醛浓度。
6)将灭活的病毒液与进口佐剂MONTANIDETMISA 206VG按1:1比例(w/w)或75:87比例(v/v)混匀，利用ATS Engineering Inc公司的AH100D型均质机对疫苗进行了乳化进行乳化，制备的灭活疫苗。
实施例2
一种鸡新城疫病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
1)制备原代CEF细胞，当细胞长至单层时接种鸡新城疫病毒。
2)当细胞出现80％以上病变时，收获细胞培养物，反复冻融3次，得到含上清液的细胞毒液。
3)测定病毒效价，病毒的效价应≥106.5TCID50/0.1mL。
4)将检验合格的细胞毒液置于无菌容器内进行灭活处理，加入甲醛溶液充分摇匀，甲醛溶液的加入量为灭活溶液体积的0.5‰，控制温度在37℃灭活12h，转速为180r/min。
5)将灭活的病毒进行灭活检验，确定最佳的灭活时间及甲醛浓度。
6)将灭活的病毒液与进口佐剂MONTANIDETMISA 206VG按1:1比例(w/w)或75:87比例(v/v)混匀，利用ATS Engineering Inc公司的AH100D型均质机对疫苗进行了乳化进行乳化，制备的灭活疫苗。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。