相关申请的交叉参考
本申请要求2014年12月18日申请的美国临时申请第62/093,586号的权益，其以全文引用的方式并入本文中。
本发明是关于用于治疗或预防由类法尼醇x受体介导的病状的方法。
发明背景
类法尼醇x受体激动剂(fxr)是由胆汁酸活化的核受体(calkin和tontonoz(2012),naturereviewsmolecularcellbiology13,213-24)。fxr在胆汁酸代谢的主要部位(例如肝脏、肠和肾脏)表达，以组织特异性方式介导对多个代谢通路的作用。当活化时，fxr影响一种控制敏感负反馈回路的基因表达，该回路控制胆汁酸代谢中导致胆汁酸水平降低的多个方面(zollner等人(2006),molecularpharmaceutics3:231-51)。
在肝脏中，fxr通过下调参与胆汁酸合成的酶(例如胆固醇7α-羟化酶(cyp7a1)和固醇12-α羟化酶(cyp8b1))的表达来减少胆固醇到胆汁酸的转化。fxr也通过增加其他胆汁酸修饰酶(包括磺基转移酶2a1(sult2a1)、udp-葡萄糖醛酸基转移酶2b4(ugt2b4)和cyp3a4)来减少肝脏中的胆汁酸毒性。胆汁酸在分泌入胆汁之前与甘氨酸或牛磺酸结合，这也是受控于fxr的过程。fxr通过增加胆汁酸coa合成酶(bacs)和胆汁酸coa-氨基酸n乙酰基转移酶(baat)的表达来增强胆汁酸结合，且fxr通过胆汁盐输出泵(bsep)、多药耐药性蛋白质2(mdr2)和mdr3促进胆汁酸转运至胆囊(calkin和tontonoz,同上)。
在肠内，fxr通过下调顶端钠依赖性胆汁酸转运体(asbt)减少胆汁酸吸收，通过回肠胆汁酸结合蛋白(ibabp)促进跨越肠上皮细胞的胆汁酸移动，且通过有机溶质转运体-α(ostα)和-β(ostβ)促进胆汁酸再循环至肝脏。另外，fxr通过减少有机阴离子转运多肽(oatp)和牛磺胆酸钠共转运多肽(ntcp)的表达来减少肝摄取胆汁酸。fxr也促进自肠释放成纤维细胞生长因子15(啮齿动物中的fgf15、人类中的fgf19)。fgf15/19行进至肝脏，作用于fgf4受体(fgf4r)以减少cyp7a1和cyp8b1表达并因此抑制胆汁酸合成。另外，fxr通过由抑制固醇调节元件结合蛋白1c(srebp1c)和脂肪酸合成酶(fas)来减少脂肪生成从而影响循环脂质水平。
技术实现要素：
本发明是关于治疗或预防由类法尼醇x受体(fxr)介导的病状的方法；更具体地，是关于fxr激动剂或部分激动剂用于治疗或预防肝病和胃肠疾病的应用。
本文中描述本发明的多个(列举)实施方式。应认识到在各实施方式中指定的特征可与其他指定特征组合，以提供本发明的其他实施方式。
实施方式1：式(i)化合物
或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐的应用；
其中z是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基或苯并噻唑基；其中的每一个可任选被选自卤素、c1-6烷基或c1-6烷氧基的1-2个r3基团取代；
r1是卤代c1-6烷基或卤代c1-6烷氧基；
r2是-co2r、-conr-(cr2)-co2r、-conr-(cr2)2-so3r或
或式(ii)化合物
或其立体异构体、对映异构体、医药上可接受盐、氨基酸结合物或酰基葡糖苷酸结合物的应用；
其中z1是伸苯基、伸吡啶基、伸嘧啶基、伸吡嗪基、伸哒嗪基、伸噻唑基、苯并噻唑基、苯并[d]异噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹啉基、1h-吲哚基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1h-吲唑基、苯并[d]异恶唑基、喹唑啉基、1h-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基；其中的每一个可任选被选自以下的1-2个r6基团取代：卤素、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基或环丙基；
r3是苯基、吡啶基、双环[3.1.0]己基、螺[2.3]己基、双环[3.1.1]庚基、螺[2.5]辛基、双环[4.1.0]庚基、双环[3.1.0]己-6-基、螺[2.3]己-5-基、双环[3.1.1]庚-3-基、螺[2.5]辛-4-基、双环[4.1.0]庚-3-基、环己基或环戊基，其中的每一个可任选被1-3个r3a取代；或r3是环丙基可任选取代有1-2个r3a或苯基；
r3a是卤素、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基或环丙基；
r4是c1-3烷基、卤代c1-3烷基或环丙基，其可任选被c1-3烷基或卤代c1-3烷基取代；
r5是-x-co2r7、羟基c1-6烷基、conr7r8、conr(cr2)1-4co2r7、conr(cr2)1-4so3r8或四唑基；其中x是键、c1-2伸烷基或环丙基；且
r、r7和r8独立地是氢或c1-6烷基；
其用于制造治疗或预防由类法尼醇x受体(fxr)介导的病状的药剂，其中所述病状是胆汁酸吸收障碍或胆汁酸腹泻(例如是原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病或肠外营养相关肝病。
实施方式2：如实施方式1中所定义的式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐；且可任选与第二治疗剂组合，供应用于治疗或预防由fxr介导的病状；其中所述由fxr介导的病状是胆汁酸吸收障碍或胆汁酸腹泻(例如原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病或肠外营养相关肝病。
实施方式3：根据实施方式1的式(i)化合物的应用或实施方式2所述供应用的式(i)化合物，其中r1是三氟甲基或三氟甲氧基。
实施方式4：根据实施方式1或3的式(i)化合物的应用或实施方式2或3所述供应用的式(i)化合物，其中r2是-co2r；且r是氢或c1-6烷基。
实施方式5：根据实施方式1和3-4中任一项的式(i)化合物的应用或实施方式2-4中任一项所述供应用的式(i)化合物，其中r3是甲基、甲氧基或氟。
实施方式6：根据实施方式1和3-5中任一项的式(i)化合物的应用或实施方式2-5中任一项所述供应用的式(i)化合物，其中z是吡啶基。
实施方式7：根据实施方式1和3-5中任一项的式(i)化合物的应用或实施方式2-5中任一项所述供应用的式(i)化合物，其中z是嘧啶基。
实施方式8：根据实施方式1和3-5中任一项的式(i)化合物的应用或实施方式2-5中任一项所述供应用的式(i)化合物，其中z是吡嗪基。
实施方式9：根据实施方式1和3-5中任一项的式(i)化合物的应用或实施方式2-5中任一项所述供应用的式(i)化合物，其中z是苯并噻唑基。
实施方式10：根据实施方式1的式(i)或(ii)化合物的应用或用于实施方式1的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物选自：
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-甲酸乙酯、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-甲酸乙酯、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({6-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸、
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
2-({6-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸、
6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸甲酯、
6-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸甲酯、
6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸、
6-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸、
5-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸甲酯、
5-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸甲酯、
5-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸、
5-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-6-甲基嘧啶-4-甲酸、
2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-6-甲基嘧啶-4-甲酸、
(2s,3s,4s,5r,6s)-6-((2-((1r,3s,5s)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-羰基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-哌喃-2-甲酸、
6-((2-(3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-羰基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-哌喃-2-甲酸、
(2s,3s,4s,5r,6s)-6-((2-((1r,3s,5s)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-羰基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-哌喃-2-甲酸、
6-((2-(3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4-氟苯并[d]噻唑-6-羰基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-哌喃-2-甲酸、
(2s,3s,4s,5r,6s)-6-((6-((1r,3s,5s)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)烟碱酰基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-哌喃-2-甲酸、
6-((6-(3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)烟碱酰基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-哌喃-2-甲酸；或
其药学上可接受盐。
实施方式11：根据实施方式1的式(i)或(ii)化合物的应用或用于实施方式1的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物选自：
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸、
6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸甲酯、
6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸、
5-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸甲酯、
5-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸，和
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-6-甲基嘧啶-4-甲酸；
或其药学上可接受盐。
实施方式12：根据实施方式1和3-11中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-11中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物是2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，例如2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸或其药学上可接受盐。
实施方式13：根据实施方式1和3-11中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或用于实施方式2-11中任一项的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物是2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，例如2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸或其药学上可接受盐。
实施方式14：根据实施方式1和3-11中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-11中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物是2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，例如2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸或其药学上可接受盐。
实施方式15：根据实施方式1和3-11中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-11中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物是6-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，例如6-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡啶-3-甲酸或其药学上可接受盐。
实施方式16：根据实施方式1和3-11中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-11中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物是5-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，例如5-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]吡嗪-2-甲酸或其药学上可接受盐。
实施方式17：根据实施方式1和3-11中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-11中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中所述式(i)或(ii)化合物是2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-6-甲基嘧啶-4-甲酸或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，例如2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-6-甲基嘧啶-4-甲酸或其药学上可接受盐。
实施方式18：根据实施方式1和3-17中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-17中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中由fxr介导的病状是胆汁酸吸收障碍。
实施方式19：根据实施方式1和3-18中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-18中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中由fxr介导的病状是原发性胆汁酸腹泻。
实施方式20：根据实施方式1和3-18中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-18中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中由fxr介导的病状是继发性胆汁酸腹泻。
实施方式21：根据实施方式1和3-18中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用或实施方式2-18中任一项所述供应用的式(i)或(ii)化合物，其中所述化合物的ec50值在0.1nm与500nm之间。
实施方式22：根据实施方式21中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用，其中所述化合物的ec50值在0.1nm与100nm之间。
实施方式23：根据实施方式21中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用，其中所述化合物的ec50值在0.1nm与50nm之间。
实施方式25：根据实施方式21中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用，其中所述化合物的ec50值在0.1nm与30nm之间。
实施方式26：根据实施方式1和3-17中任一项的式(i)或(ii)化合物的应用，其用于制造治疗由类法尼醇x受体(fxr)介导的病状的药剂，其中所述病状是胆汁酸吸收障碍或胆汁酸腹泻(例如原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病或肠外营养相关肝病。
实施方式27：根据实施方式2-17中任一项的式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐；且可任选与第二治疗剂组合，用于治疗由fxr介导的病状；其中所述由fxr介导的病状是胆汁酸吸收障碍或胆汁酸腹泻(例如原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病或肠外营养相关肝病。
实施方式28：一种在罹患由类法尼醇x受体(fxr)介导的病状的对象中治疗或预防所述病状的方法，包含向对象施用治疗有效量的如实施方式1和3-17中任一项所述的式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐；且可任选与第二治疗剂组合；其中所述由fxr介导的病状是胆汁酸吸收障碍或胆汁酸腹泻(例如原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病或肠外营养相关肝病。
实施方式29：一种在罹患腹泻或腹泻性疾病的对象中治疗或预防所述疾病的方法，包含向对象施用治疗有效量的如实施方式1和3-17中任一项所述的式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐。
本发明的详细说明
定义
出于解释本说明书的目的应用以下定义，且在合适的情况下，以单数形式使用的术语也包括复数，反之亦然。
如本文所用，术语“fxr激动剂”是指直接结合到fxr且上调fxr活性的药剂。
如本文所用，“立体异构体”是指由通过相同键键合的相同原子组成的化合物，但其具有不可互换的不同三维结构；且涵盖多种立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、立体异构体的混合物或单一立体异构体。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指足以达成所述效果的式(i)或(ii)化合物的量。因此，用于治疗或预防由fxr介导病状的式(i)或(ii)化合物的治疗有效量是足够用于治疗或预防由fxr介导的病状的量。
如本文所用，术语“对象”指动物。动物通常是哺乳动物。对象也指例如灵长类动物(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方式中，对象是灵长类动物。在其他实施方式中，对象是人类。
如本文所用，在一个实施方式中术语“治疗(treat、treating或treatment)”任何疾病或病症是指改善该疾病或病症(即减缓或阻滞或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一实施方式中，“治疗”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括患者可能无法辨别的身体参数。在另一个实施方式中，“治疗”是指在身体上(例如可辩别症状的稳定)、生理上(例如身体参数的稳定)或这两方面上调节疾病或病症。在又一实施方式中，“治疗”是指预防或延缓疾病或病症的发作或发展或进展。
如本文所用，若对象将在生物学、医学或生活品质上受益于治疗，则该对象“需要”该治疗。
如本文所用，术语“腹泻”或“腹泻性疾病”涵盖一种、数种或所有腹泻亚型，包括选自下组的那些亚型：与炎性疾病相关的腹泻(例如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)、感染性腹泻(例如大肠杆菌、沙门氏菌、艰难梭菌、霍乱、弯曲杆菌、轮状病毒等)、肠易激综合征(特定是ibs-d亚型)、药物诱导的腹泻(例如化疗诱导的腹泻)、胆汁酸诱导的腹泻(例如短肠综合征、胆囊切除术等)、糖尿病腹泻(例如由肠病或药物使用引起的那些腹泻)、过敏性腹泻、与乳糜泻相关的腹泻和与类癌综合征相关的腹泻。
附图说明
图1a-1d展示式(i)化合物(“化合物a”)在慢性治疗大鼠anit模型中对胆汁淤积和肝脏损坏的血清标记物的效果。
图1e展示在慢性大鼠anit诱导的胆汁淤积模型中用式(i)化合物(“化合物a”)治疗后的血清fgf15蛋白水平。
具体实施方式
本发明提供fxr激动剂或部分激动剂的应用，其用于治疗或预防肝病和胃肠疾病。
在一个方面中，本发明提供式(i)化合物
或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐的应用；
其中z是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基或苯并噻唑基；其中的每一个可任选被选自卤素、c1-6烷基或c1-6烷氧基的1-2个r3基团取代；
r1是卤代c1-6烷基或卤代c1-6烷氧基；
r2是-co2r、-conr-(cr2)-co2r、-conr-(cr2)2-so3r或
或式(ii)化合物
或其立体异构体、对映异构体、医药上可接受盐、氨基酸结合物或酰基葡糖苷酸结合物的应用；
其中z1是伸苯基、伸吡啶基、伸嘧啶基、伸吡嗪基、伸哒嗪基、伸噻唑基、苯并噻唑基、苯并[d]异噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、喹啉基、1h-吲哚基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1h-吲唑基、苯并[d]异恶唑基、喹唑啉基、1h-吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基；其中的每一个可任选被选自以下的1-2个r6基团取代：卤素、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基或环丙基；
r3是苯基、吡啶基、双环[3.1.0]己基、螺[2.3]己基、双环[3.1.1]庚基、螺[2.5]辛基、双环[4.1.0]庚基、双环[3.1.0]己-6-基、螺[2.3]己-5-基、双环[3.1.1]庚-3-基、螺[2.5]辛-4-基、双环[4.1.0]庚-3-基、环己基或环戊基，其中的每一个可任选被1-3个r3a取代；或r3是环丙基可任选取代有1-2个r3a或苯基；
r3a是卤素、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基或环丙基；
r4是c1-3烷基、卤代c1-3烷基或环丙基，其可任选被c1-3烷基或卤代c1-3烷基取代；
r5是-x-co2r7、羟基c1-6烷基、conr7r8、conr(cr2)1-4co2r7、conr(cr2)1-4so3r8或四唑基；其中x是键、c1-2伸烷基或环丙基；且
r、r7和r8独立地是氢或c1-6烷基；
其用于治疗或预防肝病或胃肠疾病。
在另一方面中，本发明提供式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐的应用，其用于制造治疗或预防肝病或胃肠疾病的药剂。
在一个实施方式中，本发明提供式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，其用于治疗或预防胆汁淤积性肝脏病症，尤其是alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病和肠外营养相关肝病(pnald，也称为肠道衰竭相关肝病)。
肠外营养相关肝病(pnald)在不耐受经肠摄食的婴儿、尤其是那些患有后天性或先天性肠道疾病的婴儿中是严重的肠外营养(pn)并发症。近期报导已显示，输注衍生自鱼油(fo)而非大豆油(so)的脂质乳液能改善已确立的pnald，且在pn溶液中so脂质剂量降低能减轻pnald。一种so乳液组分——植物甾醇与pnald有关。机理研究证明，存在于so乳液的植物甾醇之中，豆固醇在抑制fxr活性方面最有效，fxr在培养的肝细胞中调节胆汁酸转运体的转录。基于体外研究，已表明豆固醇通过抑制核受体fxr促进胆汁淤积，该抑制将导致减少各种fxr依赖性基因的肝细胞表达，包括胆汁分泌的主要决定子、胆汁盐输出泵(bsep)(abcb11)。(carter等人,pediatr.res.62:301-306(2007)；elkasmi等人,sci.transl.med.5:1-10(2013))。
在另一实施方式中，本发明提供式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐，供应用于治疗或预防胃肠疾病，尤其是胆汁酸吸收障碍或胆汁酸腹泻(包括原发性胆汁酸腹泻和继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎和炎性肠疾病(ibd)，尤其是胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎和未定型结肠炎。
原发性胆汁酸腹泻(pbad)是慢性腹泻的常见病因，其特征是其中胆汁酸合成的反馈调节循环被打断使得产生额外胆汁酸。胆汁酸合成的反馈调节受内分泌通路控制，其中核胆汁酸受体fxr的活化诱导啮齿动物中成纤维细胞生长因子15(fgf15)和人类中fgf19的肠内表达。在肝脏中，fgf15或fgf19与fxr介导的较小杂二聚体搭配物表达共同起作用，以抑制胆汁酸合成(jung等人,journaloflipidresearch48:2693-2700(2007)waltersjr,natrevgastroenterolhepatol.11(7):426-34(2014))。
许多患有pbad的患者的回肠激素成纤维细胞生长因子19(fgf19)水平降低，fgf19是肝胆汁酸合成的抑制性调节子，其响应fxr活化而分泌。在回肠中的fgf19产生通过胆汁酸结合至fxr并激活转录来刺激。近期研究显示，使用fxr激动剂的疗法显著增加原发性和继发性bad组中的fgf19，其进而与减少的胆汁酸合成和临床改善相关(waltersjr等人,natrevgastroenterolhepatol.11(7):426-34(2014)；waltersjr等人,alimentpharmacolther.2014年10月20日.doi:10.1111/apt.12999)。
来自十二指肠胃反流的胆汁酸促进发炎，并增加患胃食道癌症的风险。fxr是由胆汁酸(例如cdca(鹅去氧胆酸))调节的转录因子，且保护肝脏和肠道以免胆汁酸过量。(lian等人,biochemj.438:315-323(2011))。
胶原性结肠炎(cc)是起源未知的炎性肠疾病(ibd)。在相当大比例(44％)的胶原性结肠炎患者中，患者同时出现胆汁酸吸收障碍。(ung等人,gut46:170-175(2000))。相较胶原性结肠炎，胆汁酸吸收障碍在淋巴细胞性结肠炎中较不常见；然而，75sehcat值表明胆汁酸在淋巴细胞性结肠炎中有一定作用。两名淋巴细胞性结肠炎患者转变成胶原性结肠炎和淋巴细胞性结肠炎中的胆汁酸吸收紊乱，表明淋巴细胞性结肠炎和胶原性结肠炎代表相同疾病的变化形式。(ung等人,hepato-gastroenterology49:432-437(2002))。fxr活化也已展现出能预防化学诱导的肠发炎，且结肠炎症状改善。(gadaleta等人,gut60:463-472(2011))。
在另一方面中，本发明提供式(i)或(ii)化合物或其立体异构体、对映异构体或药学上可接受盐的应用，用于治疗由类法尼醇x受体(fxr)介导的病状，其中所述病状是胆汁酸吸收障碍(例如原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病或肠外营养相关肝病。
在一个实施方式中，用于以上任意实施方式中的式(i)或(ii)化合物的活性ec50值在0.1nm与500nm之间，可使用本领域已知的分析进行测定，例如pct/us2011/062724中所述的gst-fxrlbd共活化剂相互作用分析。在另一实施方式中，用于以上任意实施方式的式(i)或(ii)化合物的ec50值在0.1nm与100nm之间、在0.1nm与50nm之间或在0.1nm与30nm之间。在又一实施方式中，用于以上任意实施方式的式(i)或(ii)化合物的ec50值<0.1nm或>500nm。
用于本发明方法的化合物可与一或多种其他治疗剂同时或在其之前或之后施用。用于本发明方法的化合物可通过相同或不同施用途径单独施用，或与其他试剂在同一医药组合物中一起施用。
在用于本发明方法的组合疗法中，式(i)或(ii)化合物和其他治疗剂可由相同或不同制造商制造和/或调配。此外，式(i)或(ii)化合物和其他治疗剂可在以下情况下形成组合疗法：(i)在发放组合产品到医师前(例如在药盒包含式(i)或(ii)化合物和其他治疗剂的情况下)形成；(ii)在临施用前由医师自身(或在医师指导下)形成；(iii)在患者自身中(例如在依次施用式(i)或(ii)化合物和其他治疗剂期间)形成。
因此，本发明提供式(i)或(ii)化合物用于治疗或预防由fxr介导的疾病或病状的应用，其中药剂制备成供施用另一治疗剂或与另一种治疗剂一起施用。本发明也提供用于治疗或预防由fxr介导疾病或病状的方法的一种式(i)或(ii)化合物，其中所制备式(i)或(ii)化合物用于施用或与另一种治疗剂一起施用。本发明也提供另一种用于治疗或预防由fxr介导的疾病或病状的方法的治疗剂，其中所制备其他治疗剂用于施用或与式(i)或(ii)化合物一起施用。
本发明也提供式(i)或(ii)化合物用于治疗或预防由fxr介导的疾病或病状的应用，其中患者先前(例如在24小时内)已用另一种治疗剂治疗。或者，本发明提供另一种治疗剂用于治疗或预防由fxr介导的疾病或病状的应用，其中患者先前(例如在24小时内)已用式(i)或(ii)化合物治疗。
本发明进一步提供包含式(i)或(ii)化合物的医药组合物或组合，其用于治疗或预防如本文所述的肝病和胃肠疾病。化合物、医药组合物或其组合的有效治疗剂量取决于对象的物种、体重、年龄和个体情况、所治疗的病症或疾病或其严重度。本领域普通医师、临床医生或兽医可容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病的进展所需要的各活性成分有效量。
在一个实施方式中，式(i)或(ii)化合物以日剂量施用。
在另一实施方式中，式(i)或(ii)化合物经肠施用，更具体地经口施用。
除非另外规定，否则用于本发明方法的化合物是指式(i)或(ii)化合物、其药学上可接受盐、前药和固有形成部分(例如多晶型物、溶剂化物和/或水合物)。用于本发明方法的化合物可是立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、立体异构体的混合物或单一立体异构体、互变异构体或经同位素标记的化合物(包括氘取代物)。本文给出的任何化学式也代表化合物未经标记的形式和用同位素标记的形式。
实施例
用于本发明方法的式(i)或(ii)化合物的实施例描述于pct/us2011/062724中。提供以下实施例用以说明但不限制用于本发明方法的化合物。
缩写
acoh乙酸
anitα-萘基-异硫氰酸酯
alp碱性磷酸酶
alt丙氨酸转氨酶
ast天冬氨酸转氨酶
etoac乙酸乙酯
etoh乙醇
fgf15/19成纤维细胞生长因子(在人类中称为fgf19)
ggtγ-谷氨酰基转肽酶
llq定量的下限
meoh甲醇
thf四氢呋喃
tba总胆汁酸
tbil总胆红素
实施例1
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(1-1b)和2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(1-2b)
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯(1-1a).向装备有搅拌棒的25-ml圆底烧瓶中依次加入4-(((1r,3r,5s)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑(1.29mmol)、n,n-二甲基乙酰胺(3.6ml)、碳酸铯(3.31mmol)和2-溴-4-氟苯并[d]噻唑-6-甲酸甲酯(3.87mmol)。在室温下搅拌所得浆料10分钟后，随后将混合物升温到60℃，并搅拌1h。使反应浆料冷却至室温，并用200ml乙酸乙酯稀释，且用水(3×30ml)洗涤。有机萃取物在真空下浓缩，并使用正相硅胶层析法(40g硅胶柱)以10％-60％乙酸乙酯/己烷的15min梯度直接纯化。所需组分在真空中浓缩，且所得残余物在静置后结晶，得到呈白色结晶固体的2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯(1-1a)。ms(m/z):618.2(m+1)。
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(1-1b).向装备有搅拌棒的25-ml圆底烧瓶中加入酯(0.89mmol)、thf(4ml)、meoh(2ml)和3nkoh水溶液(1ml,3mmol)。所得均相溶液在70℃下搅拌1小时，冷却至室温，随后用acoh(约0.2ml冰乙酸，3mmol)淬灭，直至达到ph＝6(whatmanph级条状试纸)。此时反应用乙酸乙酯(40ml)稀释，并用水(3×5ml)洗涤。乙酸乙酯部分在真空下浓缩，得到油状残余物。随后向所得油状物中加入meoh(6ml)。油状物迅速溶解，随即开始结晶。在静置2.5小时后移出母液，并洗涤晶体(3×2ml的冰meoh)。晶体在真空干燥(在45℃、10mmhg压力下过夜)，并随后从乙腈中重结晶、过滤，并在真空下干燥，得到2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(1-1b)。2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(1-2b)。
实施例1-2a和对应酸1-2b可遵循相同步骤从中间体4-((8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲基)苯基)异恶唑的反应制备。
实施例2
2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸
2-氯-4-甲氧基苯并[d]噻唑-6-甲酸甲酯(0.48mmol)和4-(((1r,3r,5s)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑(0.48mmol)和二异丙基乙胺(0.1ml,0.7mmol)依次溶解于二甲基乙酰胺(1ml)中，并加热至120℃后过夜。反应混合物冷却至室温，随后用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液稀释。分离有机物，用乙酸乙酯再洗涤水层，将有机物合并、干燥(mgso4)随后在真空中蒸发。在通过硅胶层析法以0-100％乙酸乙酯/己烷的梯度纯化后获得呈澄清油状物的2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸甲酯(2a)。ms(m/z):630.1(m+1)。
酯(2a)(0.26mmol)溶解于四氢呋喃(1ml)和乙醇(1ml)中，并加入氢氧化钾水溶液(2.5mmol溶于2ml水中)。混合物加热至60℃持续2小时，随后在真空中移除溶剂。混合物用5％柠檬酸水溶液稀释，再用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。有机物干燥(mgso4)，随后在真空中蒸发。产物通过快速二氧化硅层析法以0-100％乙酸乙酯/己烷的梯度纯化，得到对应酸(2)。1hnmr(meod,400mhz):δ8.77(s,2h),7.66-7.58(m,2h),7.51(appt,j＝8.0hz,2h),4.63(bs,2h),4.40(s,2h),3.55(t,j＝4.4hz,1h),2.31-2.24(m,1h),1.99-1.88(m,4h),1.86-1.81(m,2h),1.76(d,j＝14.0hz,2h),1.19-1.15(m,4h)。ms(m/z):616.1(m+1)。
实施例3
以下化合物根据针对实施例1或2的制备所述的步骤从4-((8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑和市售2-氯苯并[d]噻唑-6-甲酸乙酯制备。
实施例4
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙酸(4-1)
2-((1r,3r,5s)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)苯并[d]噻唑-6-甲酸(实施例3)(0.06mmol)与甘氨酸甲酯盐酸盐(0.06mmol)、hatu(o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯)(0.065mmol)、二异丙基乙基乙酸酯(0.05ml)和二氯甲烷(2ml)合并。混合物搅拌1小时，随后在真空中移除溶剂。残余物悬浮于乙酸乙酯(15ml)中，并用碳酸氢钠溶液(5ml)洗涤。合并有机物，干燥(mgso4)随后在真空中蒸发。粗产物通过快速二氧化硅层析法以0-100％乙酸乙酯/己烷纯化，得到酯(4a)。
将酯(4a)与4nlioh水溶液(2ml)和二氧六环(2ml)混合，且搅拌2小时。在真空中减少溶剂，且混合物用5％柠檬酸(10ml)稀释，再用乙酸乙酯(2×8ml)萃取。合并有机物，干燥(mgso4)随后在真空中蒸发。产物用快速二氧化硅层析法以甲醇/二氯甲烷以0-40％梯度纯化，得到呈白色固体形式的标题化合物。
实施例4-2、4-3和4-4可使用适当中间体遵循相同步骤制备。
实施例5
2-({2-[(1r,3r,5s)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-恶唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1,3-苯并噻唑-6-基}甲酰胺基)乙烷-1-磺酸(5-1)
向可重密封且可耐受压力的容器中按顺序加入以下：2-((1r,3r,5s)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)苯并[d]噻唑-6-甲酸(实施例3)(0.1mmol)、四氢呋喃(1.0ml)、n-甲基吗啉(约0.1ml，0.7mmol)。悬浮液在室温下搅拌若干分钟直至起始酸完全溶解。随后加入2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.15mmol)，且所得溶液在50℃下搅拌20分钟直至形成精细白色沉淀物。该沉淀物以物理方式搅拌以确保所有材料充分混合。随后以二甲基乙酰胺(4ml)悬浮液形式加入牛磺酸(0.40mmol)。所得悬浮液密封于容器中，且加热至80℃持续2小时。混合物随后冷却至室温，用乙酸乙酯20ml稀释，并用水(2×3ml)洗涤。有机物在真空下干燥，所得残余物用3mlmeoh稀释，且液体使用醋酸铵(0.05％)作为改性剂以20-70％乙腈/水的梯度使用质量引导反相hplc直接纯化。所得产物冷真空浓缩，得到呈白色粉末状的标题化合物。
实施例5-2、5-3和5-4可使用适当中间体遵循相同步骤制备。
实施例6
以下实施例可遵循实施例1中所述步骤，从4-(((1r,3r,5s)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异恶唑(i-1)和对应的吡啶基和吡嗪基衍生物的反应制备。
实施例7
实施例7遵循实施例1中的步骤，从4-((8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲基)苯基)异恶唑(i-2)和对应的嘧啶基试剂制备。
实施例8
以下实施例根据kittelmann,m.等人,adv.synth.catal.2003,345,825-829中所述的步骤制备。
实施例9
测试化合物在慢性治疗大鼠anit模型中的效果
在胆汁淤积的慢性治疗模型中，在0.01-3mg/kg的剂量范围内评估式(i)化合物。在用化合物a以所指示剂量治疗前，大鼠用食品中的anit(0.1％w/w)处理3天(“veh”)。非胆汁淤积性对照组在无anit的情况下喂食标准饲料，且作为非胆汁淤积性对照动物(“对照”)。在14天口服给药后，在血清中测量所指示分析物。llq，定量的下限。平均值±sem,n＝5。
anit处理引起肝胆损伤指标升高，例如升高水平的循环天冬氨酸转氨酶(ast)(图1a)、丙氨酸转氨酶(alt)(图1b)、胆红素(图1c)和胆汁酸(图1d)(“veh”相对于“对照”)。这些数据证实了anit暴露诱导的严重胆汁淤积和肝细胞损坏。相比之下，化合物a从低至0.01mg/kg的剂量起始改善了许多这些指标。观测到用化合物a治疗后血清胆汁酸和胆红素浓度显著降低。与用化合物a治疗相关的总胆汁酸(tba)水平降低与fxr激动剂的药理学作用一致，所述fxr激动剂的药理学作用是通过减少肝脏中的胆汁酸积累、促进胆道中胆汁酸分泌并抑制胆汁酸合成。化合物a对血清结合的胆红素(肝功能的直接指标)的改善说明胆汁淤积恢复，伴随改善的胆汁分泌。
另外，化合物a在慢性治疗大鼠anit模型中以剂量依赖性方式刺激血清fgf15表达(图1e)。血清fgf15水平使用fgf15mesoscalediscovery(msd)分析定量。来自r&dsystems的小鼠fgf15抗体(af6755)在分析中用作捕捉和检测抗体。msd磺酸基-标记nhs-酯用于标记fgf15抗体。msd标准96孔板涂布有fgf15捕捉抗体，并用msd阻断剂a(r93aa-2)阻断。在用pbs+0.05％tween20洗涤板后，msd稀释剂4分配到各孔中，并培育30min。25μl校准稀释液或样品(血清或edta血浆)分配至各孔中，且在室温下振荡培育。在洗涤后，加入检测抗体，在室温下振荡培育1h。在洗涤并加入msd读取缓冲剂(r92tc-2)后，在msdsectorimager6000上读板。使用msd数据分析软件计算标准曲线和未知样品的图。
回肠中的fxr活化会诱导成纤维细胞生长因子15(啮齿动物中的fgf15、人类中的fgf19)的表达，所述成纤维细胞生长因子15是分泌于门静脉血液中并向肝脏发信号以与shp协同抑制cyp7a1表达的激素。fgf15/19的直接fxr依赖性诱导以及fgf15/19的抗胆汁淤积性质使其成为适宜用于检测fxr激动剂的目标接合的血清生物标记物。使用化合物a治疗观测到fgf15的显著剂量依赖性诱导，这展现了化合物a对fxr的目标接合。
图1中所展现的结果与式(i)化合物用于治疗例如以下胆汁淤积性肝脏病症的应用一致：胆汁酸吸收障碍(例如原发性或继发性胆汁酸腹泻)、胆汁反流性胃炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、改道性结肠炎、未定型结肠炎、alagille综合征、胆道闭锁、胆管消失性肝脏移植排斥、骨髓或干细胞移植相关移植物抗宿主疾病、囊性纤维化肝病和肠外营养相关肝病。
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应理解，本文所述的实施例和实施方式仅出于说明的目的，且根据其进行的各种修饰或变化为本领域技术人员所理解且包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求书的范畴内。本文所引用的所有公开、专利和专利申请以引用方式并入本文用于所有目的。