1.Ii基因序列在猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用,所述Ii基因碱基序列见序列表中序列8。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于将Ii基因载体和猪流行性腹泻病毒S1(m)基因载体混合或者将Ii基因与猪流行性腹泻病毒S1(m)基因连接后用于猪流行性腹泻病毒基因疫苗的制备, S1(m)基因碱基序列见序列表中序列10。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于Ii基因与S1(m)基因通过2A基因连接,Ii-2A基因碱基序列见序列表中序列9。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其特征在于Ii基因增强猪流行性腹泻病毒S1(m)基因蛋白诱导产生的体液免疫和细胞免疫应答,提高ELISA抗体水平,促进分泌IL-4的T细胞产生。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用,其特征在于操作如下:
(1)设计并合成用于扩增Ii基因的引物,见序列表中序列6和7,设计并合成用于扩增猪流行性腹泻病毒S1(m)基因的引物,见序列表中序列4和5;
(2)提取猪脾脏RNA,以反转录得到的cDNA为模板,用序列表中序列6和7经PCR扩增得到Ii基因,碱基序列见序列表中序列8;以优化合成的S1(m)基因为模板,用序列表中序列4和5经PCR扩增得到S1(m)基因,碱基序列见序列表中序列10;
(3)将Ii基因和S1(m)基因分别插入质粒pVAX得到重组质粒pVAX-Ii和pVAX-S1(m),将两种重组质粒混合后使用。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的应用,其特征在于操作如下:
(1)设计并合成用于扩增Ii基因的引物,见序列表中序列6和7,设计并合成用于扩增口蹄疫2A基因的Ii基因Ii-2A的引物,见序列表中序列1、2和3,设计并合成用于扩增猪流行性腹泻病毒S1(m)基因的引物,见序列表中序列4和5;
(2)提取猪脾脏RNA,以反转录得到的cDNA为模板,用序列表中序列6和7经PCR扩增得到Ii基因,碱基序列见序列表中序列8;以得到的Ii基因为模板,分别用序列表中序列1和2、序列表中序列1和3经PCR逐步扩增得到Ii-2A基因,碱基序列见序列表中序列9;以优化合成的S1(m)基因为模板,用序列表中序列4和5经PCR扩增得到S1(m)基因,碱基序列见序列表中序列10;
(3)将Ii-2A基因与S1(m)基因连接,并连接入质粒pVAX得到重组质粒VAX-Ii-2A- S1(m)。
7.根据权利要求5或6所述的应用,其特征在于PCR体系为2× primerSTAR Mix 12.5μlμl,F引物 1.0μlμl,R引物 1.0μlμl,模板0.2μlμl,ddH2O 11.3μlμl,总计25.0μlμl。
8.根据权利要求5或6所述的应用,其特征在于PCR反应程序是98℃ 1s;98℃ 10s,55℃ 30s,72℃ 2min 30s进行35个循环, 72℃ 5min。