本发明涉及医药领域，提供一种达托霉素金属盐或包含该盐的组合物及其制备方法。
背景技术：
达托霉素用于治疗复杂性皮肤和皮肤结构感染以及菌血症的环状脂肽抗生素。注射用达托霉素可静脉内给药，主要以固体干粉末的形式保存，在使用时将其溶解重建。
为了提高固体干粉形式的达托霉素的储存稳定性，在干粉制备过程中需要加入保护剂，专利wo2011063419公开了以甘氨酸、蔗糖、海藻糖或甘露醇作为保护剂制备固体形式的达托霉素制剂，提高了达托霉素固体制剂的稳定性。
达托霉素自身具有多个游离羧基，可以与碱性物质形成盐。us20110124551公开了钙源可以稳定液体达托霉素从而减缓其降解速率，且说明液体达托霉素可长期保存，而不需要制备成冻干的形式。cn101240013a公开了以钙作为稳定剂的达托霉素溶液。wo02059145公开了达托霉素钙盐晶体及其制备方法。但是现有技术中没有公开无定型的达托霉素钙盐，也没有公开如何制备这种无定型的达托霉素盐，更没有披露其稳定性的数据。
技术实现要素：
本发明惊奇的发现，当通过喷雾干燥的方法使达托霉素与金属离子特别是钙离子形成盐后其稳定性大大提高，在其以固体粉末形式储存时能够保持很好的稳定性，且优于存在保护剂特别是蔗糖保护剂的冻干形式的制剂；本发明的达托霉素盐是非晶体状或非结晶性质的，不具有晶体结构，是无定型形式的达托霉素盐。
本发明提供一种达托霉素的盐或包含该盐的组合物，所述的达托霉素与金属离子形成盐，本发明的达托霉素盐是非晶体状、非结晶性的。
本发明的一个实施方案中，所述的达托霉素盐选自钙盐、镁盐、锌盐和锰盐中的任意一种或多种。
本发明的另一个实施方案中，所述的达托霉素盐是钙盐。
本发明的一些实施方案中，所述的组合物可选的包含赋形剂，选自但不限于乳糖、蔗糖、棉籽糖、葡聚糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、纤维素二糖、麦芽糖、海藻糖、甘氨酸。
本发明还提供一种制备达托霉素的盐或包含该盐的组合物的方法，通过喷雾干燥包含如下组分的溶液制备：所述溶液包含达托霉素、金属离子和溶剂。本发明的溶剂为包含一种或多种溶剂的体系，可选的但非限制性的溶剂为醇和/或水。
本发明的一个实施方案中，通过喷雾干燥的方法使达托霉素与多价金属离子形成盐。
本发明的另一个实施方案中，所述的金属离子选自二价金属离子或三价金属离子。
本发明的又一个实施方案中，所述的金属离子选自锌离子、镁离子、锰离子和钙离子的任意一种或多种。
本发明的再一个实施方案中，所述的金属离子是钙离子。
本发明一个实施方案中，所述的溶剂中包含水。
本发明的另一个实施方案中，所述的溶剂中还包含醇。
本发明又一个实施方案中，所述的溶剂中的醇选自但不限于甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇和叔丁醇。
本发明的再一个实施方案中，所述的醇是叔丁醇。
本发明的又一个实施方案中，叔丁醇与水的体积比是1至5。
本发明的再一个实施方案中，叔丁醇与水的体积比是3。
本发明的另一个实施方案中，叔丁醇与水的体积比是2。
本发明的一些实施方案中，所述溶液中达托霉素与金属离子的摩尔比是1:10至1:2范围内的任意值。
本发明的另一些实施方案中，所述溶液中达托霉素与金属离子的摩尔比是1:8至1:4范围内的任意值。
本发明的再一些实施方案中，所述溶液中达托霉素与金属离子的摩尔比是1:6。
本发明的一些实施方案中，所述溶液的ph为4.0-8.0范围内的任意值。
本发明的另一些实施方案中，所述溶液的ph为5.0-8.0范围内的任意值。
本发明的又一些实施方案中，所述溶液的ph选自5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.4。
本发明的再一些实施方案中，所述溶液的ph为7.4。
本发明的一些实施方案中，所述溶液中的所述金属离子来自硝酸盐、盐酸盐、氢氟酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、亚硫酸盐、氢硫酸盐、醋酸盐中的一种或多种。
本发明的另一些实施方案中，所述金属离子来自醋酸盐。
本发明的又一些实施方案中，所述金属离子来自醋酸钙、醋酸镁和醋酸锌的任意一种或几种。
本发明的再一些实施方案中，所述金属离子来自醋酸钙。
本发明的一个实施方案中，通过喷雾干燥的方法将液体达托霉素溶液转化为固体形式，所述的达托霉素溶液包含达托霉素、醋酸钙和溶剂；其中达托霉素与醋酸钙的摩尔比是1:10至1:2范围内的任意值；ph选自4.0-8.0范围内的任意值。
本发明的一个实施方案中，通过喷雾干燥的方法将液体达托霉素溶液转化为固体形式，所述的达托霉素溶液包含达托霉素、醋酸钙和溶剂；其中达托霉素与醋酸钙的摩尔比是1:8至1:4范围内的任意值；ph选自5.0-8.0范围内的任意值。
本发明的另一个实施方案中，通过喷雾干燥的方法将液体达托霉素溶液转化为固体形式，所述的达托霉素溶液包含达托霉素、醋酸钙和溶剂；其中达托霉素与醋酸钙的摩尔比是1:6；ph选自5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.4。
本发明的又一个的实施方案中，通过喷雾干燥的方法将液体达托霉素溶液转化为固体形式，所述的达托霉素溶液包含达托霉素、醋酸钙、叔丁醇和水；其中达托霉素与醋酸钙的摩尔比是1:10至1:2范围内的任意值；叔丁醇与水的体积比是1至5范围内的任意值；ph选自4.0-8.0范围内的任意值。
本发明的再一个的实施方案中，通过喷雾干燥的方法将液体达托霉素溶液转化为固体形式，所述的达托霉素溶液包含达托霉素、醋酸钙、叔丁醇和水；其中达托霉素与醋酸钙的摩尔比是1:8至1:4范围内的任意值；叔丁醇与水的体积比是1至3范围内的任意值；ph选自5.0-8.0范围内的任意值。
本发明的又一个的实施方案中，通过喷雾干燥的方法将液体达托霉素溶液转化为固体形式，所述的达托霉素溶液包含达托霉素、醋酸钙、叔丁醇和水：其中达托霉素与醋酸钙的摩尔比是1:6；叔丁醇与水的体积比是2；ph选自5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.4。
本发明的一些实施方案中，所述的喷雾干燥方式可替换为其它干燥方式，如冷冻干燥，且在喷雾干燥步骤之后还包含进一步干燥处理的步骤，优选的进一步干燥的方法为冷冻干燥，其它任意的能够保证达托霉素稳定的干燥方法同样适用于本发明。
本发明的一些实施方案中，所述的溶液中可选的包含赋形剂，选自但不限于乳糖、蔗糖、棉籽糖、葡聚糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、纤维素二糖、麦芽糖、海藻糖、甘氨酸。
本发明“组合物”表示含有一种或多种本文所述达托霉素或其盐与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。本文中，“组合物”和“制剂”并不互相排斥。
具体实施方式
通过以下实施例和实验例进一步详细说明本发明。这些实施例和实验例仅用于说明性目的，而并不用于限制本发明的范围。本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照有利于生产的常规条件或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例1：达托霉素钙盐固体粉末制剂的制备
a、喷雾干燥方法制备
(1)溶液的配制
稀醋酸溶液：2.85ml冰醋酸至50ml烧杯，加入约30ml纯化水稀释，转移至50ml容量瓶中，纯化水定容。
氢氧化钙溶液：称取3.7g氢氧化钙至50ml烧杯中，加50ml水，用前混匀。
叔丁醇/水溶液(v/v＝3:1)：150ml叔丁醇+50ml水。
20％达托霉素叔丁醇/水溶液(v/v＝3:1)：称取约10g达托霉素至100ml烧杯中，加入约24ml叔丁醇/水溶液(v/v＝3:1)，保持低温搅拌至完全溶解，溶解后转移至50ml容量瓶，叔丁醇/水溶液(v/v＝3:1)定容。
1m醋酸钙溶液：称取4.40g一水醋酸钙至50ml烧杯，加入约10ml纯化水，搅拌溶解后，转移至25ml容量瓶，纯化水定容。
叔丁醇：水(v/v)＝2:1：150ml叔丁醇中加入75ml水。
20％达托霉素叔丁醇/水溶液(v/v＝2:1)：称取约10g达托霉素至100ml烧杯中，加入约24ml叔丁醇/水溶液(v/v＝2:1)，保持低温搅拌至完全溶解，溶解后转移至50ml容量瓶，叔丁醇/水溶液(v/v＝2:1)定容。
(2)制备
处方信息1：
注：dap表示达托霉素；dap：caac2表示达托霉素与醋酸钙的摩尔比。
按照处方量制备溶液
处方220：移取10ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液(v/v＝3:1)，加入2.5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，加入7.5ml叔丁醇，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至6.0。
处方221：移取10ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，加入15ml叔丁醇，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至6.0。
处方222：移取10ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入7.5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，加入22.5ml叔丁醇，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至6.0。
处方223、224、225：对应上述三个处方中的配制方法，用氢氧化钙悬浊液调节ph至7.4。
对上述溶液进行喷雾干燥处理，喷干后分装至西林瓶，进一步干燥处理。
将上述制剂在40℃条件下放置7天，分析达托霉素纯度变化及杂质含量变化，具体数据见表1-表3。
处方信息2
注：dap表示达托霉素；dap：caac2表示达托霉素与醋酸钙的摩尔比。
按照处方量制备溶液
283：移取10ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入7.5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，加入15ml叔丁醇，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至5.0。
284-288：移取10ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入7.5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，加入15ml叔丁醇，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph值分别为5.5，6.0，6.5，7.0，7.4。
用氢氧化钙调剂ph时，将氢氧化钙悬浊液混匀后进行调节。调节过程中氢氧化钙缓慢加入，并保持适度的搅拌，防止氢氧化钙过量。调节ph前后，对氢氧化钙悬浊液进行称重，用减重法计算氢氧化钙的使用量。
对上述处方溶液进行喷雾干燥处理，喷干后分装至西林瓶，用冻干机干燥，将上述制剂在40℃条件下放置7天，分析达托霉素纯度变化及杂质含量变化，具体数据见表4。
b、冷冻干燥方法制备
(1)溶液的配制
稀醋酸溶液：2.85ml冰醋酸至50ml烧杯，加入约30ml纯化水稀释，转移至50ml容量瓶中，纯化水定容。
氢氧化钙溶液：称取3.7g氢氧化钙至50ml烧杯中，加50ml水，混匀。
叔丁醇：水(v/v＝2:1)溶液：60ml叔丁醇+30ml水。
20％达托霉素叔丁醇/水溶液：称取约5g达托霉素至100ml烧杯中，加入约12ml叔丁醇/水(v/v＝2:1)溶液，保持低温搅拌至完全溶解，溶解后转移至25ml容量瓶，叔丁醇/水溶液定容。
1m醋酸钙溶液：称取4.40g一水醋酸钙至50ml烧杯，加入约10ml纯化水，搅拌溶解后，转移至25ml容量瓶，纯化水定容。
(2)制备
处方信息3：
注：dap表示达托霉素；dap：caac2表示达托霉素与醋酸钙的摩尔比。
按照处方量制备溶液
处方226：移取5ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入2.5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，搅拌溶解。后称取0.1g磺丁基β环糊精加入，保持低温，加入6.6ml叔丁醇之后，加0.8ml水，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至6.0。
处方227：移取5ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入2.5ml1m醋酸钙溶液，保持低温，搅拌溶解。后称取0.1g磺丁基β环糊精加入，保持低温，加入6.6ml叔丁醇之后，加0.8ml水，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至7.4。
处方236：移取5ml20％达托霉素叔丁醇/水溶液，加入3.75ml1m醋酸钙溶液，保持低温，加入6.6ml叔丁醇之后，加0.8ml水，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至7.4。
处方240：移取5ml20％达托霉素水溶液，加入3.75ml1m醋酸钙溶液，保持低温，搅拌溶解。用氢氧化钙悬浊液调节ph至7.4，将上述溶液转移至10ml容量瓶中，水溶液定容。
处方086和098：量取5ml20％达托霉素溶液，加入对应量的柠檬酸，搅拌溶解后，用4mnaoh溶液调节至相应ph。加入对应量的冻干保护剂，搅拌溶解后用1mnaoh溶液调节至相应ph，转移至10ml容量瓶，纯水定容，即得终溶液。
将上述样品冷冻干燥处理后在40℃条件下放置7天，分析达托霉素纯度变化，具体数据见表5。
实施例2、加入冻干保护剂的达托霉素冻干制剂
(1)溶液的配制
20％达托霉素水溶液：称取约5g达托霉素至100ml烧杯中，加入约15ml纯化水，冰水浴搅拌至溶解(溶解过程中，磁子慢速搅拌，避免产生太多泡沫，不利于后期定容)。转移至25ml容量瓶，纯化水定容。
4mnaoh溶液：称取约1.6g氢氧化钠至25ml烧杯中，加入约6ml纯化水搅拌溶解，转移至10ml容量瓶，冷却至室温，纯化水定容。
1mnaoh溶液：称取约0.8g氢氧化钠至50ml烧杯中，加入约15ml纯化水搅拌溶解，转移至20ml容量瓶，冷却至室温，纯化水定容。
磷酸盐缓冲液：按照公知的方法配制不同ph的磷酸盐缓冲液。
(2)制备
按照处方量制备达托霉素固体制剂
处方信息4：
处方265：移取5ml20％达托霉素水溶液，称取1.5g蔗糖加入，冰水浴搅溶解。用氢氧化钠调节ph至4.7，将上述溶液转移至10ml容量瓶中，加入相应ph的磷酸盐缓冲液定容。
处方266：移取5ml20％达托霉素水溶液，用氢氧化钠调节ph至4.7，将上述溶液转移至10ml容量瓶中，加入相应ph的磷酸盐缓冲液定容。
处方267：移取5ml20％达托霉素水溶液，称取0.8g肌醇加入，冰水浴搅溶解。用氢氧化钠调节ph至4.7，将上述溶液转移至10ml容量瓶中，加入相应ph的磷酸盐缓冲液定容。
对应265-267的配制方法，按照处方信息调整ph值配制268-282。
注：样品逐一配制，配置过程中样品需放置至室温再定容。配制后分装至西林瓶中加盖密封。
将上述配制好的溶液样品冷冻干燥处理后在40℃条件下放置7天，分析达
托霉素纯度变化及杂质含量变化，具体数据见表6。
结果及分析：
将实施例中各个处方制备的固体制剂在40℃放置7天后检测达托霉素的纯度变化，结合实施例1和实施例2中的实验结果，可见通过喷雾干燥方法制备的达托霉素钙盐固体制剂表现良好的稳定性，其与加入冻干保护剂的达托霉素冻干制剂相比效果相当，甚至更优，详细数据见表5和表6。
表1喷雾干燥方法制备的达托霉素钙盐制剂中达托霉素的纯度及总杂质变化
表2喷雾干燥方法制备的达托霉素钙盐制剂杂质变化
表3喷雾干燥方法制备的达托霉素钙盐制剂杂质变化
注：辅料中的比值指的是达托霉素与醋酸钙的摩尔比
表4不同ph条件下喷雾干燥方法制备钙盐制剂中达托霉素的纯度变化
表5冷冻干燥方法制备的达托霉素钙盐制剂中达托霉素纯度变化
注:sbecd表示磺丁基-β-环糊精
表6含冻干保护剂的达托霉素冻干制剂的稳定性结果