专利名称：环加氧酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及环加氧酶-2抑制剂。该抑制剂可以抑制前列腺素H和I的合成或其随后代谢产物血栓烷的合成，并且可以用作治疗和预防局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化以及多种炎性疾病的药物。
环加氧酶(前列腺素-内过氧化物合成酶)是一种催化花生四烯酸底物在体内合成为前列腺素H2的酶。前列腺素H2的生理活性很高。由前列腺素H2可以生成代谢产物前列腺素D2、E2和F2以及代谢产物血栓烷A2和B2，所有这些代谢物也都具有较高的生理活性。
因此，对环加氧酶活性的抑制将使这些代谢物的合成受到抑制。所以，所述前列腺素H2抑制剂不但抑制前列腺素H2，也将抑制其他高生理活性的化合物，例如前列腺素D2、E2和F2以及血栓烷A2和B2。
普遍认为炎症中涉及到环加氧酶。为达到治疗此类炎症的目的，业已广泛应用了多种环加氧酶抑制剂，其中包括阿斯匹林和吲哚美辛。然而，在对这些药物的发现中，已知仅有一类环加氧酶普遍存在于生物体内。
近期人们又发现了另一类环加氧酶，即诱导型环加氧酶。此类诱导型环加氧酶可被多种刺激所诱发并被称作环加氧酶2，而所述普遍存在型环加氧酶现被称作环加氧酶1。此外，人们已逐渐了解到，环加氧酶2与局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化和多种炎性疾病极其相关。根据这样的观察，环加氧酶-2-抑制剂可能成为十分有效的药物用于治疗上述疾病(G.Cirino.Biochem.Pharmaol.55105-111，1998)。
鉴于上述内容，本发明提供一种含有可抑制环加氧酶2的化合物作为活性组分的药物，该药物可以作为治疗上述疾病的优异治疗药物，由于该药物毒性低、引起的副作用极小，使其适合在临床上使用。
所以，本发明提供下列1)一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有作为活性组分的下式(1)或(1’)所示化合物
其中R1代表氢原子或具有1至3个碳原子的烷基；R2代表肽或蛋白质，它们能够通过其分子内所含的巯基相结合，或R1和R2可以彼此连接成为一个单键；R3代表氢原子、卤素原子、具有1至3个碳原子的烷基、具有1至3个碳原子的烷氧基、三氟甲基或硝基；而各R4和R5可彼此相同或不同，并且代表氢原子、卤素原子、具有1至4个碳原子的烷氧基、三氟甲基，或R4和R5可以彼此连接成亚甲二氧基；或其盐，或其水合物。
2)一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮(此后将称作化合物A)、其盐或其水合物作为活性组分。
3)一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有下式(2)所代表的化合物、其盐或其水合物作为活性组分
其中R2代表肽或蛋白质，它们能够通过其分子内所含巯基相结合，而R1、R3、R4和R5如上述定义。
4)一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基)-白蛋白(此后将称作化合物B)、其盐或其水合物。
本发明也涉及药物组合物的制备方法，所述药物组合物适用于治疗和/或预防由于环加氧酶-2-抑制作用的失调和/或影响而引起的上述疾病，其中在制备组合物中以环加氧酶-2-抑制剂作为活性组分，所述环加氧酶-2-抑制剂的特征在于它们是上述通式所示的化合物。
而且，本发明优选涉及用于治疗和/或预防局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化和/或炎性疾病的药物组合物的制备方法，其中在制备所述组合物中以上述类型的环加氧酶-2-抑制剂作为活性组分。
在本发明的全文中，术语“活性组分”不但是指制备本发明组合物所用的一种活性组分，而且也包括这些活性组分的混合物。
此外，本发明还涉及一种治疗和/或预防上述由于环加氧酶-2-抑制作用的失调和/或影响所引起的疾病的方法，其中是将含有上述类型环加氧酶-2-抑制剂作为活性组分的药物组合物以0.05至2000mg的日剂量(相对于活性组分而言)对成人进行经口给药。
成人经口给药的组合物优选具有使每日给药剂量达到100至2000mg，更优选200至1000mg的所述活性组分浓度。
如果是将本发明所述方法用于治疗和/或预防上述由于环加氧酶-2-抑制作用的失调和/或影响所引起的疾病，则将含有环加氧酶-2-抑制剂作为活性组分的药物组合物以0.05至1000mg的日剂量(相对于活性组分而言)对成人进行经口给药。
优选将本发明所述方法用于治疗和/或预防局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化和/或炎性疾病。
根据活性组分的给药浓度，本发明所述组合物可以每天服用一次至三次。
下文中将对本发明进行详细描述。
如上所述，本发明提供一种含有式(1)化合物作为活性组分的环加氧酶-2-抑制剂。式(1)化合物中的取代基如下所述R1为氢原子或具有1至3个碳原子的烷基，并且优选氢。
R2为肽或蛋白质，它们能够通过分子内所含的巯基相结合，或R1和R2彼此连接成为一个单键。
R3为氢原子、卤素原子、具有1至3个碳原子的烷基、具有1至3个碳原子的烷氧基、三氟甲基或硝基。其中优选氢。
本发明还提供一种含有式(2)化合物作为活性组分的环加氧酶-2-抑制剂。式(2)化合物中的取代基如下所述式(2)中的R2代表肽或蛋白质，它们能够通过其分子内所含的巯基结合；对于所述肽或蛋白质，任何生理学可接受的肽或蛋白质均可采用；而且，优选血清内存在的蛋白质，例如白蛋白以及球蛋白。并且，在这些血清蛋白质中，更优选白蛋白；在所述白蛋白中，最优选人白蛋白。
本发明所采用的制备化合物A的方法业已公开在日本特许公告(kokoku)号2-38591(即日本特许申请公开(Kokai)号57-67568)中。化合物B的合成方法也公开在日本特许申请公开(Kokai)号7-233056中。
根据现有制剂工艺，本发明所述化合物A可以与添加剂一起被配制为片剂、胶囊、粉末、颗粒、糖浆的形式或注射用制剂，所述添加剂可例如是赋形剂、粘合剂、崩解剂和增溶剂。
下面将描述具体制剂例。
当是片剂时采用下列配方片剂化合物A 50mg羧甲基纤维素25mg淀粉 5mg结晶纤维素40mg硬脂酸镁 2mg总量 122mg当通过常规经口给药或非肠道给药(例如注射剂)时，化合物A分别表现出预期的一级药理学作用。当对成人经口给药时，化学物质A的剂量为0.05至2000mg/天，优选100至2000mg/天，更优选200至1000mg/天。所述剂量可以依据患者症状的严重程度而改变。
本发明所述2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基衍生物及其生理可接受盐可以经口或非肠道给药。当成人经口给药时，所述剂量通常为0.05至1000mg/天。毒性对于化合物A和B的毒性，采用小鼠和大鼠来测定它们的LD50值。各化合物的小鼠LD50在经口给药时不低于6810(mg/kg)，当腹膜内给药时为740(mg/kg)。就大鼠而言，需要较大剂量才可达到LD50。上述结果表明，这些化合物的给药具有很高的安全水平。我们对上述化合物中的一种，S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基)白蛋白进行了急性毒性试验。将该化合物溶解在生理盐水中并对小鼠静脉内给药(5g/kg)。其LD50比1g/kg高许多，由此证实该化合物的安全量较高。急性毒性取4只8周龄的Wistar系雄性大鼠进行急性毒性试验。将溶解在生理盐水中的S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基)白蛋白静脉内给药(1g/kg/3ml)，进而在此后的24小时内对这些大鼠进行观察。在观测期间未发现特别的副作用，并且所有大鼠均健康成活。此外，当小鼠和大鼠的给药剂量较高时，并没有观察到可疑的副作用。
在所述化合物中，S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基)白蛋白被认为具有最高的预期功效。利用环加氧酶2合成的前列腺素H2及其代谢产物，例如前列腺素D2、E2和F2以及血栓烷A2和B2处于花生四烯酸级联，即花生四烯酸的下游中。如上所述，在局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化和各种炎性疾病中均涉及上述物质。可以应用2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基衍生物及其生理学可接受盐来治疗上述疾病，并且其给药预后良好。
在本发明中，所述2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基衍生物包括化合物A和化合物B。
通过现有制剂技术，本发明所述2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基衍生物及其生理可接受盐可以与添加剂一起被配制为片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、糖浆剂或注射用制剂，所述添加剂例如是赋形剂、粘合剂、崩解剂和增溶剂。
对均属于本发明所述化合物的2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮衍生物以及2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基衍生物进行环加氧酶2活性抑制作用的体外试验，所述环加氧酶2活性是指对花生四烯酸合成为前列腺素H2的催化。其结果表明它们具有很强的抑制作用，并且比吲哚美辛更强有效(参见表1)。
因此，本发明所述2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮衍生物以及2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基衍生物是最有希望成为上述疾病治疗药物的候选物，所述疾病与环加氧酶2的前列腺素H2合成有关。
本发明将通过下列实验实施例作详细描述，但这些实施例不对本发明的保护范围起限定作用。实施例1在本实施例中以花生四烯酸为底物。将10μl花生四烯酸溶解在甲醇中(10mg/ml)并与5μCi14C标记的花生四烯酸混合；为得到干燥底物，在室温下吹入氮气以蒸发溶剂。此后，将该底物溶于50μl二甲基亚砜(DMSO)中，在该底物溶液中加入10ml的5mM Tris-HCl缓冲液(pH8.0)，该缓冲液中含有2mM苯酚；随后进行超声处理以使样品溶解达到完全。分别制备出终浓度为0.1至10μM的试验化合物溶液。在本实验中，将与人血清白蛋白(HAS)结合的化合物溶解在上述缓冲液中，其它化合物用DMSO溶解。取5μl上述各化合物溶液并且加入到5μl所述底物溶液内，进而混合。将样品在35℃下预保温约10分钟。另外，用上述缓冲液将从绵羊胎盘(Cayman Chem.)中获得的环加氧酶2稀释10倍，取20μl酶溶液加至上述各个样品中。酶促反应是在35℃下进行30分钟，进而在各样品中加入0.5ml冰冷的乙醇以使反应停止。随后，向0.9ml的各个样品中加入2.0ml2％乙酸溶液。用3.0ml乙酸乙酯提取花生四烯酸及其代谢产物-前列腺素H2。从各提取样品中，取2.0ml为一份转移到新试管中。在减压条件下将被转移样品中的溶剂蒸除，并在真空下干燥样品。随后，将各干燥样品溶解在100μl甲醇中，取5μl进行高分辨薄层层析的分析。用配比为70∶30∶8∶1∶0.5(v/v)的氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶乙酸∶水的展开液层析分离花生四烯酸及其代谢物前列腺素H2。将含有14C标准底物的层析薄板暴露于显影板(富士胶片)下，用富士胶片生物成象分析仪BAS-2000进行分析，得到放射自显影图。在对标准放射性样品所对应的点进行扫描后可以绘制出剂量-反应的标准曲线。此后，利用标准曲线，将花生四烯酸展开点和前列腺素H2展开点的扫描值转化为放射量。吲哚美辛购自Sigma，PZ25由Rhone-Poulenc Rorer赠送。
结果如表1所示。
表1环加氧酶2抑制剂
ND未做试验p-值的显著性*，P＜0.05；**P＜0.01(按照Williams-Wilcoxon试验计算)；化合物A2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮化合物BS-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基)白蛋白PZ252-苯基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮
权利要求
1.一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有作为活性组分的下式(1)或(1’)所示化合物
其中R1代表氢原子或具有1至3个碳原子的烷基；R2代表氢原子、羟基、能够通过分子内所含巯基相键合的有机基团，或R1和R2可以彼此连接成为一个单键；R3代表氢原子、卤素原子、具有1至3个碳原子的烷基、具有1至3个碳原子的烷氧基、三氟甲基或硝基；各R4和R5可彼此相同或不同，并且代表氢原子、卤素原子、具有1至4个碳原子的烷氧基、三氟甲基，或R4和R5可以彼此连接成为亚甲二氧基；或其盐，或其水合物。
2.根据权利要求1所述的环加氧酶-2-抑制剂，其中R2是肽、蛋白质或糖蛋白，并且能够通过其分子内所含巯基相键合。
3.根据权利要求1或2所述的环加氧酶-2-抑制剂，其中R2是白蛋白、谷胱甘肽基或α-氨基酸基团，并且能够通过其分子内所含巯基相键合。
4.根据权利要求3所述的环加氧酶-2-抑制剂，其中所述白蛋白为人白蛋白。
5.一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有作为活性组分的2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)-酮、其盐或其水合物。
6.一种环加氧酶-2-抑制剂，该抑制剂含有作为活性组分的S-(2-苯基氨基甲酰基-苯基氢硒基)-白蛋白、其盐或其水合物。
7.一种制备药物组合物的方法，所述药物组合物适合于治疗和/或预防由于环加氧酶-2-抑制作用的失调和/或影响而引起的疾病，其中在制备所述组合物中，将权利要求1至6任一项所述的环加氧酶-2-抑制剂用作活性组分。
8.一种制备药物组合物的方法，所述药物组合物适合于治疗和/或预防局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化和/或炎性疾病，其中在制备所述组合物中，将权利要求1至6任一项所述的环加氧酶-2-抑制剂用作活性组分。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中在制备所述组合物中，将权利要求1至6任一项所述的环加氧酶-2-抑制剂的混合物用作活性组分。
10.根据权利要求7至9任一项所述的方法，其中在制备所述组合物中，除活性组分或活性组分的混合物外还至少采用一种赋形剂、粘合剂、崩解剂和/或增溶剂。
11.根据权利要求7至10任一项所述的方法，其中所述组合物被配制为片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、糖浆的形式和/或注射用制剂。
12.一种治疗和/或预防由于环加氧酶-2-抑制作用的失调和/或影响所引起的疾病的方法，其中将含有权利要求1至6任一项所述环加氧酶-2-抑制剂作为活性组分的药物组合物以0.05至2000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述组合物以100至2000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述组合物以200至1000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
15.根据权利要求12所述的方法，其中所述组合物以0.05至1000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
16.一种治疗和/或预防局部缺血性疾病、老年性痴呆、癌症、哮喘、动脉硬化和/或炎性疾病的方法，其中将含有权利要求1至6任一项所述环加氧酶-2-抑制剂作为活性组分的药物组合物以0.05至2000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述组合物以100至2000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述组合物以200至1000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述组合物以0.05至1000mg的日剂量对成人进行经口给药，所述日剂量是相对于活性组分而言。
20.根据权利要求12至19任一项所述的方法，其中所述组合物以片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、糖浆的形式和/或注射用制剂给药。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述组合物每天给药1至3次。
全文摘要
一种环加氧酶－2－抑制剂,其含有具有环加氧酶－2抑制活性且只引起极小副作用的低毒性的化合物作为活性组分。所述活性化合物如式(1)或(1’)所示,其中R
文档编号A61P25/28GK1243749SQ9911017
公开日2000年2月9日 申请日期1999年6月29日 优先权日1998年7月1日
发明者田中淳二 申请人:纳特曼和希依有限公司