一种防治慢性乙型肝炎的药物组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物技术领域，具体涉及ー种防治慢性乙型肝炎的药物组合物及 其应用。
【背景技术】
[0002] 乙型肝炎是由嗜肝的乙型肝炎病毒（HBV)引起的ー种在世界范围的传染性疾病， 全世界约有3. 5亿人感染HBV，我国约占一半。乙型肝炎给人类健康造成极大的危害，寻求 高效低毒的抗HBV的天然药物已经刻不容缓（刘健.联合抗病毒治疗慢性乙型肝炎新进展 [J] ?临床合理用药杂志，2013,6 (26) :174-176.)。
[0003]目前，市场上治疗慢性乙型肝炎的方法主要有干扰素、阿德福韦酯，恩替卡韦等药 物以及注射乙肝疫苗。但上述药物或疫苗均存在比较大的缺点，如长期服用干扰素会造成 患者出现流感感样症状、并可能使患者出现消化道症状、脱发等不良反应，严重者还能抑制 骨髓导致白细胞、血小板減少，这样就会导致患者的凝血功能下降。而服用阿德福韦酯，恩 替卡韦等核苷类似物类则会导致乳酸性酸中毒和重度的脂肪性肝肿大，且很多患者服用半 年左右就会耐药，而且还不能随时停药，否则可能会导致病情迅速恶化，甚至转化为肝硬 化、肝癌。虽然乙肝疫苗能够抑制HBV的复制，其安全性和耐受性都很好，但是还不足以打 破慢性乙型肝炎的免疫耐受状态进而清除HBV，仍需辅以抗慢性乙型肝炎药物的治疗。
[0004] 茶氨酸是ー种酰胺类化合物，化学命名为：N-乙基-L-谷氨酰胺，通常说的茶氨 酸是指L-茶氨酸，它是茶叶中的ー种非蛋白氨基酸，约占茶叶中游离氨基酸总量的40%~ 70%。研究表明，茶氨酸具有：（1)促进大脑功能和神经的生长；（2)增加肠道有益菌群和 減少血浆胆固醇；（3)降压安神、改善睡眠；(4)抑制肿瘤细胞浸润和转移。虽然茶氨酸具 有多种生物活性，但是其治疗作用较弱，因此主要应用于食品添加剂和保健品（文慧，魏时 来，张石蕊，等.L-茶氨酸在动物体内的免疫调节及抗氧化作用研究进展[J].中国畜牧兽 医杂志，2012,48(21) 84-87.)。为了提高茶氨酸的抗癌活性，季德鑫等人对其进行了结构 修饰和改造，合成了茶氨酸的衍生物茶氨酸溴香酰胺（TBrC)，并确认其对高转移的小鼠肺 癌细胞生长的抑制作用（SegesakaKakusaKawamuraK，etal.Pharmaclogicoalbeeffect oftheanine[J」?TheOrganizingCommitteeofISTS, 2012 :362-365.)0
【发明内容】
[0005] 为了克服现有乙肝治疗药物毒副作用大的缺点，本发明提供ー种新型的防治慢性 乙型肝炎的药物组合物。
[0006] 为了实现本发明的目的，发明人通过大量体外试验研究并不懈探索，最终获得了 如下技术方案：
[0007] -种防治慢性乙型肝炎的药物组合物，由活性成分和药剂学上可接受的辅料制备 而成，所述的活性成分包括茶氨酸溴香酰胺。
[0008] 优选地，如上所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其中所述药剂学上可接受的 辅料包括磺丁基-3-环糊精。进ー步优选地，磺丁基-3-环糊精与茶氨酸溴香酰胺的用 量比为（0.2-0. 8) :1。再进ー步优选地，磺丁基-(6-环糊精与茶氨酸溴香酰胺的用量比为 (0? 2-0. 4) :1。
[0009] 本发明所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其为注射剂，所述的注射剂包括注 射液、注射用冻干粉。在本发明最优选的实施例中，所述药剂学上可接受的辅料包括磺丁 基-(6-环糊精、氯化钠。
[0010] 需要说明的是，本发明人采用转染HBV的人肝癌细胞H印G2. 2. 15作为研究对 象，研究了茶氨酸溴香酰胺抗HBV的效果，结果发现茶氨酸溴香酰胺和乙型肝炎e抗原 (HBeAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)的分泌均有抑制作用，可见其抗乙型肝炎病毒的效果 很显著。因此，本发明还提供一种制药用途，即：茶氨酸溴香酰胺在制备防治慢性乙型肝炎 的药物中的应用。
[0011] 与现有技术相比，本发明涉及的含有茶氨酸溴香酰胺的药物组合物具有如下突出 的优势：（1)有较强的抗乙型肝炎病毒的生物活性，同时毒副作用低；（2)磺丁基-P-环糊 精的加入可避免茶氨酸溴香酰胺经长期储存后的降解，因此所提供的注射液稳定性高，有 望开发成抗HBV的ー线药物。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合具体实施例来进ー步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的保护范围构成任何限制。本 领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神下可以对技术方案的细节和形式进行 修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
[0013] 实施例1 :转染HBV的人肝癌细胞系H印G2. 2. 15的培养
[0014] 将转染HBV的H印G2. 2. 15细胞解冻后，接种入25cm2培养瓶，浓度为IX10 5个 /mL，待细胞长满后，加0. 25% (w/v)的胰酶溶液37°C消化3-5min。加培养液吹打，1 : 3 传代，每天收集上清，连续2周，冷藏待检。细胞培养液为MEN培养液，每IOOmL含胎牛血 清10mL，3% (w/v)的谷氨酰胺溶液lmL，G418 380iig/mL，庆大霉素50U/mL;细胞消化液为 0.25% (w/v)的胰酶溶液，用Hanks液配制。
[0015] 实施例2 :茶氨酸溴香酰胺对H印G2. 2. 15细胞的毒性试验
[0016] 取实施例1培养的对数生长期H印G2. 2. 15细胞，用细胞培养液调整细胞浓度为 IX105mじ1，将细胞接种于96孔板，每孔200iiL，37°C5%CO2培养箱中培养，待其贴壁后， 弃掉原培养液。在茶氨酸溴香酰胺不同剂量组各孔，分别加入茶氨酸溴香酰浓度为16、64、 125、250、500iimol/L培养液200iiL，另设不加药细胞培养孔为空白对照组，每组重复6孔。 将各组细胞置CO2孵箱培养72h，向每孔细胞中加入5iig/mLMTT10iiL，每孔中存留有上 清100iiL，37°C5%CO2培养箱中培养4h后，用酶标仪在參考波长630nm，检测波长570nm 处测定每个孔的光密度（OD)值。计算不同浓度茶氨酸溴香酰胺对H印G2. 2. 15细胞生长抑 制率。细胞生长抑制率（％) =(空白对照组OD值-茶氨酸溴香酰胺不同剂量组OD值）/ 空白对照组OD值X100%。根据Reed-Muench公式计算半数毒性浓度（TC5tl)。结果显示， 茶氨酸溴香酰胺的TC5tl大于64ymol/L。因此，本实验选取小于或等于64ymol/L的浓度 检测茶氨酸溴香酰胺的抗HBV活性。
[0017] 实施例3 :茶氨酸溴香酰胺对H印G2. 2. 15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制试验
[0018] 取实施例1培养的对数生长期H印G2. 2. 15细胞，用细胞培养液调整细胞浓度为 IX105mじ1，将细胞接种于96孔板，每孔200iiL，37°C5%CO2培养箱中培养，待其贴壁后，弃 掉原培养液。在茶氨酸溴香酰胺不同剂量组各孔，分别加入茶氨酸溴香酰浓度为8、16、32、 64iimol/L培养液200iiL，另设不加药细胞培养孔为空白对照组，每组重复6孔。将各组细 胞置CO2孵箱培养72h，收集各组细胞培养的上清液进行酶联免疫吸附试验測定。測定方法 按照HBeAg试剂盒、HBsAg试剂盒（华美生物工程有限公司）操作说明进行。用酶联免疫检 测仪测定450nm处OD值，并计算抑制率。HBsAg或HBeAg抑制率=(空白对照组OD值-茶 氨酸溴香酰各剂量组OD值）/空白对照组OD值X100%。试验统计结果见表1、表2。
[0019] 通过表1、表2的试验统计结果可以看出，茶氨酸溴香酰胺酮各剂量组和拉米 夫定对HBsAg及HBeAg的分泌均有抑制作用，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P < 0? 05)。
[0020] 表1茶氨酸溴香酰胺对H印G2. 2. 15细胞分泌HBeAg的影响
[0021]
【主权项】
1. 一种防治慢性乙型肝炎的药物组合物，由活性成分和药剂学上可接受的辅料制备而 成，其特征在于，所述的活性成分包括茶氨酸溴香酰胺。
2. 根据权利要求1所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其特征在于，所述药剂学上 可接受的辅料包括磺丁基-0 -环糊精。
3. 根据权利要求2所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其特征在于，磺丁基-0 -环 糊精与茶氨酸溴香酰胺的用量比为（0.2-0. 8) :1。
4. 根据权利要求3所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其特征在于，磺丁基-0 -环 糊精与茶氨酸溴香酰胺的用量比为（0.2-0. 4) :1。
5. 根据权利要求1-4任一项所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其特征在于，其为 注射剂，所述的注射剂包括注射液、注射用冻干粉。
6. 根据权利要求5所述防治慢性乙型肝炎的药物组合物，其特征在于，所述药剂学上 可接受的辅料包括磺丁基-3 -环糊精、氯化钠。
7. 茶氨酸溴香酰胺在制备防治慢性乙型肝炎的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种防治慢性乙型肝炎的药物组合物及其应用，该药物组合物由活性成分和药剂学上可接受的辅料制备而成，所述的活性成分包括茶氨酸溴香酰胺。该药物有较强的抗乙型肝炎病毒的生物活性，同时毒副作用低，所提供的注射液稳定性高，有望开发成抗HBV的一线药物。
【IPC分类】A61P31-20, A61K9-19, A61K9-08, A61P1-16, A61K31-37, A61K47-40
【公开号】CN104623676
【申请号】CN201510087980
【发明人】朱斌, 王天宝, 魏晓霞, 曾萍, 董亭方
【申请人】新乡医学院第一附属医院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月26日