赫赛汀修饰的载多西他赛的三重靶向纳米粒载体系统的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明公开一种赫赛汀修饰的载多西他赛的三重靶向纳米粒载体系统，同时还提 供了该靶向纳米粒载体系统的制备方法，涉及医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 多西他赛（Docetaxel，DTX)，是第二代紫杉烷类抗肿瘤药物，属于植物类抗肿瘤药 微管抑制剂，其抗肿瘤活性是紫杉醇的2 ~ 4倍，已被FDA批准用于卵巢癌、乳腺癌、非小细 胞肺癌以及前列腺癌的临床治疗。目前已上市的剂型只有多西他赛注射液（Taxoter e)JS 由于DTX水溶性差，其生物利用度较低，增溶剂吐温-80带来严重的超敏反应，改变药物体 内行为。因此选择合适的载体系统提高DTX生物利用度，降低不良反应，实现药物缓控释、 靶向性，成为当前的研宄热点。
[0003] 纳米给药系统，在实现提高难溶性药物生物利用度、缓控释给药、靶向性给药、降 低药物不良反应等方面展现了良好的应用前景。其中，聚合物纳米粒作为抗肿瘤药物载体， 具有众多独特的优势：稳定性高，毒性低；延长药物体内循环时间，静脉注射后，更易到达 肿瘤部位；表面化学修饰改变电荷分布、亲疏水性等理化性质从而实现被动靶向；表面偶 联靶向分子实现主动靶向；采用有特殊敏感性的材料例如酸度、温度敏感性也可以实现主 动靶向。此外，纳米给药系统以其粒径的优势（〈200 nm)可以在肿瘤组织中选择性滞留，即 EPR效应。
[0004] 赫赛汀（Here印tin)，靶向HER2的单抗，已被FDA批准用于治疗HER2过表达的转 移性乳腺癌。此外，赫赛汀与某些化疗药物联用时，还具有协同抗肿瘤作用。因此，赫赛汀偶 联在纳米粒表面后，纳米粒既可将药物带到HER2过表达的肿瘤细胞上，又可实现与多西他 赛的协同作用，从而产生更强的细胞毒性。赫赛汀修饰的载多西他赛的纳米粒对治疗HER2 过表达的实体瘤具有潜在的应用价值。
[0005] 环己烷-1,4-二基二亚甲基丙酮缩酮（聚缩酮，PCADK)，一种新型高分子材料，具 有良好的生物相容性、生物降解性和特殊酸敏感性。聚缩酮在正常的碱性或中性生理环境 中基本不降解，在酸性环境中快速分解为无毒的中性降解产物，不改变周围环境 PH，不影响 所包载药物的活性。聚缩酮载体携带药物到达具有酸性环境的肿瘤部位后，被细胞摄取，在 溶酶体内迅速分解释放药物分子，从而实现靶向治疗。目前市场上尚无聚缩酮产品上市，但 聚缩酮极具潜力成为未来靶向药物研宄的热点。
[0006] 聚乙酰亚胺（PEI)，目前最高效的基因传递载体，携带高密度的正电荷，有较强的 细胞黏附能力。进入细胞后的PEI能够通过质子海绵效应引发溶酶体破裂，释放药物。高 分子量的PEI (25 kD)转染效率高，但细胞毒性大。但与其它载体材料联用，可降低其细胞 毒性。此外，PEI (25 kD)，呈分枝状结构，分子内有大量高反应活性伯氨，可与富含羧基的 靶向分子相偶联。赋予纳米粒靶向性。
[0007] 聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA)，是缓控释制剂领域应用最广泛的注射用制剂的缓 控释基质骨架。其中，德国柏林格殷格翰低黏度的RG 5050系列，分子量小，降解周期短，其 释放行为学对于维持肿瘤治疗所需的药物治疗窗有理想的效果。
【发明内容】
[0008] 本发明提供一种赫赛汀修饰的载多西他赛的三重靶向纳米粒载体系统，实现了药 物的三重靶向性，即生物靶向性、理化靶向性、静电吸附靶向：纳米粒通过表面的修饰分子 赫赛汀抗体主动靶向癌细胞表面的抗原；纳米粒基质中的PCADK能够在肿瘤的酸性环境中 加速纳米粒的降解，并释放药物；纳米粒基质中的PEI阳离子通过静电吸附作用靶向癌细 胞的带负电荷的细胞膜表面。
[0009] 本发明进一步公开了赫赛汀修饰的载多西他赛的三重靶向纳米粒载体系统，其特 征在于： 由生物可降解性材料PLGA、阳离子材料PEI和酸敏感性材料PCADK三种聚合物为载体 材料制备的具有核壳结构的纳米粒、包载于纳米粒疏水核心的多西他赛以及纳米粒亲水表 面的修饰配体赫赛汀单抗构成。
[0010] 本发明所述的一种赫赛汀修饰的载多西他赛的PEI/PCADK/PLGA三重靶向纳米粒 传递系统的制备方法，包括： 1) 分别称取5 mg多西他赛，9 mg PCADK，36 mg PLGA溶解于2 mL二氯甲烷中，作为有 机相（0相)，称取1. 08 mg PEI超声溶解于30 mL，2% PVA水溶液，作为水相（W相)，混合0 相和W相，冰浴间断超声分散制备0/W乳剂，室温低速搅拌，挥发除去二氯甲烧，过膜去除大 颗粒纳米粒，离心收集，冷冻干燥； 2) 上述冻干纳米粒超声分散溶解在PBS (0.1 M，pH 7. 4)中，加入EDC/NHS (5 :1，w/ w)试剂，加入5 mg赫赛汀，三乙胺调节pH值到8. 0, 25°C反应4 h，离心洗涤，去除未连接的 赫赛汀，冷冻干燥，4°C保存；即得赫赛汀修饰的载多西他赛的PEI/PCADK/PLGA三重靶向纳 米粒传递系统。
[0011] 本发明所述的制备方法，其特征在于：PLGA为羧基封端，型号为RG 502H，黏度为 0. 16 ~ 0. 24 dl/g〇
[0012] 本发明所述的制备方法，其特征在于：PCADK为环己烷-1，4-二基二亚甲基丙酮缩 酮，分子量范围9000 ~ 10000。
[0013] 本发明所述的制备方法，其特征在于：乙酰亚胺（PEI)为分支结构聚乙酰亚胺 (bPEI)，分子量为25 kD。
[0014] 本发明所述的制备方法，其特征在于：多西他赛理论载药量为10%，PCADK : PLGA=2 :8〇
[0015] 本发明所述的制备方法，其特征在于：PEI在2% PVA水溶液中比例为3. 6%(w/v)。
[0016] 本发明所述的制备方法，其特征在于：冰浴间断超声功率为100W，超声时间120s。
[0017] 本发明所述的制备方法，其特征在于：〇相与W相的体积比为1 :15。
[0018] 本发明的积极效果在于：制备的纳米粒实现了药物的三重靶向性：（1)生物靶向 性，利用连接在纳米粒表面的赫赛汀单抗分子；（2)理化靶向性，利用纳米粒载体中的聚缩 酮对肿瘤酸性环境敏感的特点，而且其中性降解产物不改变环境PH ; (3)静电吸附作用，利 用纳米粒载体中的PEI的氨基基团，偶联单抗分子，同时富余的正电荷增加与肿瘤细胞间 的黏附性，增加了细胞摄取。
【附图说明】
[0019] 图1为纳米粒的示意图； 图2为纳米粒的粒径电位分布图； 图3为纳米粒的SEM图； 图4为纳米粒的体外释药曲线； 图5为纳米粒的细胞毒实验； 图6为SKBR3和A549细胞对纳米粒摄取的激光共聚焦结果； 图7为SKBR3和A549细胞对纳米粒摄取的流式细胞仪结果。
【具体实施方式】
[0020] 通过