充血，水肿等反应，病理组织检查亦 未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著性差异。
[0142] 3、对豚鼠的致敏试验
[0143] 选取健康豚鼠42只，将豚鼠随机分为试验组、阴性对照组和阳性对照组，阴性对 照组给予同体积的溶媒；阳性对照组给予牛血清白蛋白已知致敏阳性物质；试验组每只腹 腔注射本发明实施例6-12 (每个实施例6只）制备的serelaxin注射液I. 0ml，隔日注射1 次，共注射3次。然后随机各分2组，分别在第1次给药后14天或21天，静注注射液，观察 豚鼠有无兴奋不安，呼吸困难等过敏症状。
[0144] 结果表明，试验组豚鼠均活动正常，未见呼吸异常等，未有过敏反应。
[0145] 4、体外溶血性试验
[0146] 制备2%家兔红细胞悬液。取试管7支，按表8加入各种液体。将各试管轻轻摇匀， 置37°C恒温水浴中孵育，观察0. 5、1、2、3、6小时的结果。红细胞体外凝集与溶血的判断标 准见表9。serelaxin注射液为实施例6-12制备的serelaxin注射液。
[0147] 表8注射液体外溶血试验加样表
[0152] 按照上述方法以及表9的判断标准，蒸馏水对照管在0. 5小时完全溶血。生理盐 水和serelaxin注射液在6小时内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和serelaxin注射 液管底沉积的红细胞均能完全分散，表明本发明serelaxin注射液无红细胞凝聚反应。
[0153] 5、急性全身毒性试验
[0154] 取健康小鼠35只，将小鼠随机分为试验组和对照组，将小鼠放入固定器内。试验 组自尾静脉分别注入本发明实施例6-12制备的serelaxin注射液供试液(每个实施例5 只)，对照组注入空白对照液，注射速度为0. lml/s，注射剂量为50ml/kg。注射完毕后，观察 小鼠即时反应，并于4、24、48和72小时，观察和记录试验组和对照组动物的一般状态、毒性 表现和死亡动物数。
[0155] 表10注射后动物反应观察指标
[0157] 按照上述方法以及表10的观察指标，在72小时观察期内，试验组动物的反应不大 于对照组动物，动物无中毒反应，无动物死亡，体质量无明显变化。
[0158] 综上所述，注射本发明实施例6-12制备的serelaxin注射液具有良好的组织相容 性。表明本发明制备的serelaxin注射液安全性好，可供临床注射使用。
[0159] 实施例16 :本发明实施例6-12制备的serelaxin注射液药效学研究
[0160] 1、急性心力衰竭模型的建立
[0161] 选取比格犬（Beagle犬），体重7~10kg，42只，每只以5~8mg/kg缓慢静脉推 注普萘洛尔后，心输出量自模前（1603 ±411) mL/min降为模后（924± 195) mL/min，下降 42.4%。（^/社自模前（4343±1619)臟取/8降为模后（2000±407)臟取/8，下降53.9%，达 到心力衰竭的标准。
[0162] 将造模成功的动物随机分为模型组和试验组，试验组有6组，分别为试验组1 (实 施例6)，试验组2 (实施例7)，试验组3 (实施例8)，试验组4 (实施例9)，试验组5 (实施 例10)，试验组6 (实施例11)，试验组7 (实施例12)，每组动物数各为6只。试验组首先股 静脉快速注射serelaxin注射液5ug/kg，随后以40ug/ (kg · min)持续静脉滴注60min和 120min。模型组给予等量的生理盐水。
[0163] 2、试验组对急性心衰犬血浆血管紧张素 II (Ang II)和（Ang II和内皮素-I(ET-I)) 水平的影响
[0164] 试验组的Ang II和ET-I明显下降。药后60min及药后120min (停药后60min) 八叩11由（109.02±43.80)口8/11^降至（50.70±16.80)口8/11^(?〈0.05)和（87.99±34.60) pg/mL(P〈0·05)，分别下降了53·5%和19·29%。ET-l由（202·05±32·82)pg/mL降 至（147.74±36.62)pg/mL(P〈0.01)和（151.58±38.62)pg/mL(P〈0.05)，分别下降了 26. 9%(Ρ〈0· 01)和 25. 0%(Ρ〈0· 05)。
[0165] 模型组药后60min及药后120min Ang II的含量为（105. 71±20. 81)和 (1〇2· 13±18· l2)pg/mL。ET-I 含量为（2IL 04±28· 69)和（215· 55±26· 46)pg/mL，均无明 显变化。
[0166] 以上结果表明，给予serelaxin注射液60min及给药后120min(停药后60min) Ang II值下降（P〈0. 05)，有利于改善心肌重塑，促进肾脏排钠利尿等作用，延缓心衰的恶 化。ET-I值下降，有利于改善急性心力衰竭时的血流动力学状态，减轻心肌纤维化。
[0167] 3、serelaxin注射液对急性心衰犬尿量及尿钠、尿钾及血钠、血钾水平的影响
[0168] 急性心衰犬给予serelaxin注射液后第1个单位时间（30min)内尿量较基础值增 加最为明显（P〈〇. 01)，第2个30min内（药后30~60min)较基础值亦增加（P〈0. 05)，此 后每单位时间（30min)内的尿量与基础值相比无统计学差异。给药后尿钠排泄量较基础值 增加（P〈0. 05)，排钾量减少（P〈0. 01)。serelaxin注射液对血清钠含量的影响与基础值相 比无统计学差异，血清钾含量与基础值相比无统计学差异。
[0169] 以上结果表明，给予serelaxin注射液后心衰犬单位时间（30min)内的尿量明显 增加，尿钠排泄量较基础值增加（P〈〇. 05)，排钾量减少（P〈0. 01)，产生稳定协调的利尿作 用，降低循环容量，平衡体内电解质水平，缓解心衰的恶化。
[0170] 由此可见，本发明的serelaxin注射液可以显著降低急性心衰犬血浆Ang II和 ET-I的水平，同时产生稳定的利尿作用，对急性心力衰竭发挥较好的治疗作用。
【主权项】
1. 一种含有serelaxin的药物组合物，其包含治疗有效量的serelaxin或其药学上可 接受的盐以及药学上可接受的载体，所述的药学上可接受的载体包括缓冲液、渗透压调节 剂、pH调节剂和抗氧化剂。2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中serelaxin药学上可接受的盐为 serelaxin的醋酸盐、盐酸盐、硫酸盐，磷酸盐或柠檬酸盐。3. 根据权利要求1或2所述的药物组合物,其中serelaxin或其药学上可接受的盐 在药物组合物中的浓度为〇?lmg/ml~30mg/ml，优选为0?lmg/ml~10mg/ml，最优选为 0?lmg/ml~3mg/ml〇4. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述的缓冲液选自醋酸盐，磷酸盐， 枸橼酸盐或酒石酸盐，优选为醋酸盐，所述缓冲液在药物组合物中的浓度为l_30mM，优选为 1-lOmM。5. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述的渗透压调节剂选自甘露醇、葡 萄糖、氯化钠、果糖、氯化镁、山梨醇、乳糖或蔗糖，优选甘露醇、氯化钠或葡萄糖，其中氯化 钠在药物组合物中的浓度优选为l_9mg/ml，甘露醇或葡萄糖在药物组合物中的浓度优选为 10mg/ml~60mg/ml〇6. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述的pH调节剂选自氢氧化钠、盐酸、 醋酸、柠檬酸、酒石酸或磷酸，优选为醋酸或盐酸，调节PH值为3. 5-6. 0,优选为4. 0~5. 5。7. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述的抗氧化剂选自硫代硫酸钠、亚硫 酸钠、没食子酸丙酯、谷胱甘肽、硫脲、巯基乙酸、维生素E或人体20种氨基酸，优选人体20 种氨基酸、谷胱甘肽或维生素E，最优选为谷胱甘肽、维生素E、甲硫氨酸、苯丙氨酸或半胱 氨酸，所述抗氧化剂在药物组合物中的浓度为〇. 〇lmg/ml~10mg/ml，优选为0. 01mg/ml~ 0? 5mg/ml，最优选为 0? 05mg/ml~0? 20mg/ml。8. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其是通过除菌过滤法制备而来的。9. 根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述的除菌过滤法是采用0. 2pm除菌过滤 器进行过滤。10. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其为注射制剂组合物。11. 制备权利要求1-10中任一项所述的药物组合物的方法，包括如下步骤： (1) 称取处方量的serelaxin或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体； (2) 将药学上可接受的载体分别溶解后，混合均匀，将serelaxin或其药学上可接受的 盐溶解后加入到混合均匀的载体液中混匀，继续加注射用水至总体积； (3) 用pH调节剂将pH值调节到预定值后，搅拌混匀； (4) 采用除菌过滤法进行过滤，分装。12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述的除菌过滤法是采用0. 2ym除菌过滤器进 行过滤。13. 根据权利要求11或12所述的方法，其中所述的药物组合物为注射制剂组合物。
【专利摘要】本发明属于药物制备技术领域，公开了一种含有serelaxin的药物组合物，其包含治疗有效量的serelaxin或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体，其中药学上可接受的载体包括缓冲液、渗透压调节剂、pH调节剂和抗氧化剂。此外，本发明还公开了制备上述药物组合物的方法。本发明所制备的药物组合物有效克服了现有serelaxin注射液所存在的各种缺陷，同时具有良好的组织相容性，安全性好，符合国家对药品安全性的评价，可供临床注射使用。
【IPC分类】A61K47/26, A61P9/04, A61K9/08, A61K38/22
【公开号】CN104922661
【申请号】CN201410105936
【发明人】郑春莲, 潘俊锋, 马亚平, 袁建成
【申请人】深圳翰宇药业股份有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2014年3月20日