一种造影材料、其制备方法及应用_3

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光谱分析在日立F-4600型荧光光谱仪进行样品光谱分析。
[0066] 细胞毒性分析利用MTT法在UV754PC型紫外可见分光光度计上进行细胞毒性分 析。
[0067] 超声成像分析在DP-10型迈瑞超声诊断仪上进行样品成像研宄。
[0068] 荧光成像分析在LWD300-38LFT型倒置荧光显微镜上进行样品成像研宄。
[0069] 磁共振成像分析在Micro MR型低场磁共振成像仪上进行样品成像研宄。
[0070] 实施例1样品1#的制备
[0071] (1)制备右旋糖酐包覆的Fe3O4纳米粒子:向250mL三角烧瓶通入氮气30min备用, 称取二价铁盐(FeCl 2 · 4H20)0. 2982g,称取三价铁盐(FeCl3 · 6H20)0. 5406g,混匀后溶解于 30mL水中,置于队保护的三角烧瓶中并快速搅拌(800rpm),以lmL/s速度滴加 IOmL氨水 至混合溶液中,50°C温度下快速搅拌30min ;搅拌完成后按质量比称取0. 15g右旋糖酐滴加 至混合溶液中,50°C温度下快速搅拌60min ;所得混合溶液经磁分离,1000 Orpm离心沉淀, 用去离子水清洗1~3次后,加入30ml超纯水重悬,滴加柠檬酸0. 006g,得到含有右旋糖酐 包裹Fe3O4纳米粒子的液体,于4°C保存。
[0072] (2)称取质量分数为5%的牛血清白蛋白0. 05g溶于ImL由十二水合磷酸氢二钠 和二水合磷酸二氢钠配置pH为7. 2的PBS缓冲液中混匀,同时加入120 μ L质量浓度为25% 戊二醛溶液并混匀,静置6〇sec ;滴加步骤(1)所得的含有右旋糖酐包裹Fe3O4纳米粒子的 液体ImL至混合溶液中并混勾;将超声探头置于液相与气相氮气界面处,超声60sec后取出 超声探头,得到具有包裹右旋糖酐包覆的Fe 3O4纳米粒子和氮气且表面含有西佛碱的牛血 清白蛋白微球的体系。
[0073] (3)称取叶酸0.25g,溶于IOmL的无水二甲亚砜(DMSO)中,滴加三乙胺40 μ L避光 搅拌,完全溶解后滴加 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)O. Ig和二环己基碳二亚胺(DCC)O. 15g到 混合溶液中并继续避光反应过夜,次日抽虑后所得叶酸活性酯;滴加〇. 〇〇5g叶酸活性酯到 步骤(2)所得体系2mL中,室温避光反应60min,经透析、柱分离后,所得即为包裹右旋糖酐 包裹的Fe 3O4纳米粒子和氮气、表面含有西佛碱和叶酸靶向配基的牛血清白蛋白微球材料, 记为样品1#。所得样品1#的结构示意图见图1(a),步骤(2)和(3)的示意图见图1(b)。
[0074] 实施例2样品2#的制备
[0075] (1)制备右旋糖酐包裹的γ-FeA纳米粒子:向250mL三角烧瓶通入氮气 (N2) 10~30min备用,称取二价铁盐(FeCl2 · 6H20) 0· 5964g,称取I. 0812g三价铁盐 (FeCl3 ·6Η20),混匀后溶解于60mL水中,置于队保护的三角烧瓶中并快速搅拌(1000 rpm), 以I. 2mL/s速度滴加60mL氨水(20% )至混合溶液中,95°C温度下加热回流90min ;搅拌完 成后称取0. 32g右旋糖酐滴加至混合溶液中,50°C温度下快速搅拌30min ;所得混合溶液经 磁分离,12000rpm离心沉淀,用去离子水清洗1~3次后加入60ml超纯水重悬,滴加柠檬酸 0. 012g,得到含有右旋糖酐包裹Y-Fe2O3纳米粒子的液体,于4°C保存。
[0076] (2)称取质量分数为5%的牛血清白蛋白(BSA)0.0 5g溶于ImL由十二水合磷酸氢 二钠和二水合磷酸二氢钠配置pH为6. 8的PBS缓冲液中混匀,同时加入120 μ L质量浓度 为25%戊二醛溶液并混匀,静置60sec ;滴加步骤(1)所得的含有右旋糖酐包裹Y-Fe2O3纳 米粒子的液体ImL至混合溶液中并混匀;将超声探头置于液相与气相(N 2)界面表层,超声 6〇sec后取出超声探头,得到具有包裹右旋糖酐包覆的Y-Fe2O 3纳米粒子和氮气且表面含 有西佛碱的牛血清白蛋白微球的体系。
[0077] (3)称取叶酸0· 25g,溶于IOmL的无水二甲亚砜(DMSO)中,滴加三乙胺40 μ L避 光搅拌,完全溶解后滴加 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)O. Ig和二环己基碳二亚胺(DCC)O. 15g 到混合溶液中并继续避光反应过夜,次日抽虑后所得叶酸活性酯;滴加0. 005g叶酸活性酯 到步骤(2)所得体系2mL中,室温避光反应60min,经透析,柱分离后,所得即为包裹右旋糖 酐包裹的Y-Fe 2O3纳米粒子和氮气、表面含有西佛碱和叶酸靶向配基的牛血清白蛋白微球 材料,记为样品2#。
[0078] 实施例3样品3#的制备
[0079] (1)制备右旋糖酐包裹的γ-FeA纳米粒子:向250mL三角烧瓶通入氮气 (N2) 10~30min备用,称取二价铁盐(FeCl2 · 6H20) 0· 2982g,称取0· 5406g三价铁盐 (FeCl3 · 6H20),混匀后溶解于30mL水中,置于队保护的三角烧瓶中并快速搅拌(900rpm), 以lmL/s速度滴加30mL氨水(20% )至混合溶液中,95°C温度下加热回流90min ;搅拌完成 后称取〇. 5g甘露醇后快速搅拌20min,搅拌完成后称取0. 32g右旋糖酐滴加至混合溶液中, 50°C温度下快速搅拌30min ;所得混合溶液经磁分离,12000rpm离心沉淀,用去离子水清洗 1~3次后,加入30ml超纯水重悬,滴加柠檬酸0.0 lg,得到含有右旋糖酐包裹γ -Fe2O3纳 米粒子的液体,于4°C保存。
[0080] (2)称取质量分数为5%的牛血清白蛋白(BSA)0.0 5g溶于ImL由十二水合磷酸氢 二钠和二水合磷酸二氢钠配置pH为7. 0的PBS缓冲液中混匀,同时加入120 μ L质量浓度 为20%戊二醛溶液并混匀,静置60sec ;滴加步骤(1)所得的含有右旋糖酐包裹Y-Fe2O3纳 米粒子的液体ImL至混合溶液中并混匀;将超声探头置于液相与气相(N 2)界面表层,超声 6〇sec后取出超声探头,得到具有包裹右旋糖酐包覆的Y-Fe2O 3纳米粒子和氮气且表面含 有西佛碱的牛血清白蛋白微球的体系。
[0081] (3)称取叶酸0.25g,溶于IOmL的无水二甲亚砜(DMSO)中,滴加三乙胺40 yL避 光搅拌,完全溶解后滴加 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)O. Ig和二环己基碳二亚胺(DCC)O. 15g 到混合溶液中并继续避光反应过夜,次日抽虑后所得叶酸活性酯;滴加0. 004g叶酸活性酯 到步骤(2)所得体系2mL中,室温避光反应60min,经透析,柱分离后,所得即为包裹右旋糖 酐包裹的Y-Fe 2O3纳米粒子和氮气、表面含有西佛碱和叶酸靶向配基的牛血清白蛋白微球 材料,记为样品3#。
[0082] 实施例4
[0083] 原料配比、制备步骤、条件与实施例1 一样,仅将步骤氮气换成氩气,所得样品记 为样品4#。
[0084] 实施例5
[0085] 原料配比、制备步骤、条件与实施例2 -样,仅将步骤氮气换成二氧化碳其他,所 得样品记为样品5#。
[0086] 实施例6
[0087] 原料配比、制备步骤、条件、与实施例1 一样,仅将0. 5964g的FeCl2,6H20和 I. 0812g的FeCl3 · 6H20换成2g的CoCl2 · 6H20,将氮气换成氦气,所得样品记为样品6#。
[0088] 实施例7
[0089] 原料配比、制备步骤、条件、与实施例1 一样,仅将0. 5964g的FeCl2 · 6H20和 I. 0812g的FeCl3 · 6H20换成2g的NiCl2 · 6H20,将氮气换成氦气,所得样品记为样品7#。 [0090] 实施例8
[0091] 原料配比、制备步骤、条件、与实施例1 一样,仅将右旋糖酐换成同等质量的壳聚 糖,将氮气换成空气,所得样品记为样品8#。
[0092] 实施例9
[0093] 原料配比、制备步骤、条件、与实施例1 一样,仅将右旋糖酐换成同等质量的纤维 素,将戊二醛换成同等摩尔数的乙二醛,所得样品记为样品9#。
[0094] 实施例10
[0095] 原料配比、制备步骤、条件、与实施例1 一样,仅将戊二醛换成同等摩尔数的1, 8-辛二醛,所得样品记为样品10#。
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