096] 对比例1
[0097] 取质量百分含量为5%的牛血清白蛋白（BSA)0.0 5g溶于ImL由十二水合磷酸氢二 钠和二水合磷酸二氢钠配置pH为7. 2的PBS缓冲液中混匀，同时加入100 μ L戊二醛溶液 并混匀，静置60sec ;将超声探头（直径6_，功率490W)置于液相与气相（N2)界面表层，超 声60sec后取出超声探头，得到具有包裹氮气且表面含有西佛碱的牛血清白蛋白微球的体 系。收集体系表面的微泡并4°C保存，记为样品11#。
[0098] 对比例2
[0099] 叶酸偶联BSA-GA复合材料：称取叶酸0· 25g，溶于IOmL的无水二甲亚砜（DMSO) 中，滴加三乙胺40 μ L避光搅拌，完全溶解后滴加 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)O. Ig和二环己 基碳二亚胺（DCC)O. 15g到混合溶液中并继续避光反应过夜，次日抽虑后所得叶酸活性酯； 滴加0. 005g叶酸活性酯到对比例1所得具有包裹氮气且表面含有西佛碱的牛血清白蛋白 微球的体系2mL中，室温避光反应60min，经透析，柱分离后得到包裹氮气且表面含有西佛 碱和叶酸的牛血清白蛋白微球材料，记为样品12#。
[0100] 实施例11粒径分布
[0101] 检测了样品1#~样品10#的粒径分布，所得样品的粒径在0. 5 μ m~3 μ m之间， 均适合作为超声造影剂。以样品1#为典型代表，其粒径分布图如图2所示，在0. 8 μ m~ 1. 3μπ?范围内，粒径分布集中在I. 1 μL?左右。
[0102] 实施例12
[0103] 分别对对比例1中，PBS缓冲液中的牛血清白蛋白、戊二醛和样品11#进行了荧光 光谱分析，结果如图3所示。图3中（a)为激发波长为468nm牛血清白蛋白、戊二醛、具有包 裹氮气且表面含有西佛碱的牛血清白蛋白微球的荧光光谱图；(b)为激发波长为536nm牛 血清白蛋白、戊二醛、具有包裹氮气且表面含有西佛碱的牛血清白蛋白微球的荧光光谱图； (c)为激发波长为630nm牛血清白蛋白、戊二醛、具有包裹氮气且表面含有西佛碱的牛血清 白蛋白微球的荧光光谱图。可以看出，单独的牛血清白蛋白及戊二醛没有荧光效果，只有两 者结合产生西佛碱后，才产生荧光。
[0104] 实施例13
[0105] 分别对样品1#~样品12#进行了细胞毒性检测，均展示了低细胞毒性。以样品1# 为典型代表，其细胞毒性分析图如图4所示。随着浓度的升高，细胞存活率没有出现明显的 下降趋势，证明1#~12#样品的毒性均为低细胞毒性。
[0106] 实施例14
[0107] 分别以样品1#~样品10#作为造影剂，进行了超声造影检测，均展示了较显著的 超声造影功能。以样品1#为典型代表，其超声造影图如图5所示。其中（a)为空白对比成 像图（b)为1#样品即包裹右旋糖酐包覆的Fe 3O4纳米粒子和氮气且表面含有西佛碱的牛血 清白蛋白微球，可以看出图（b)空管中显示为白色（超声造影功能增强），说明样品1#~样 品10#均具有明显的超声成像功能。
[0108] 实施例15
[0109] 分别以样品1#~样品10#作为造影剂，进行了荧光造影检测，均展示了较显著的 荧光造影功能。以样品1#为典型代表，其荧光造影图如图6所示。其中（a)为荧光显微镜 普通视野下的成像图；(b)为荧光显微镜在激发波长为536nm下的绿色荧光成像图；（c)为 荧光显微镜在激发波长为630nm下的红色荧光成像图；（d)为b图和c图的合并图。可以 看出在不同激发光激发下，样品能够发出红光及绿光等荧光（荧光造影功能增强），说明样 品1#~样品10#均具有明显的焚光成像功能。
[0110] 实施例16
[0111] 分别以样品1#~样品10#作为造影剂，进行了磁共振造影检测，均展示了较显著 的磁共振造影功能。以样品1#-3#为典型代表，其磁共振造影图如图7所示。可以看出在 周围水相环境呈浅灰色时，样品1#_3#均呈现黑色（MRI T2造影功能增强），说明样品1#~ 样品10#均具有明显的磁共振成像功能。
[0112] 实施例17
[0113] 对样品1#~样品10#的弛豫率进行了测定，均具备较典型的MRI 1~2弛豫特性。以 样品1#为典型代表，其弛豫率测定结果如表1所示。
[0114] 表 1
[0116] 本申请虽然以较佳实施例公开如上，但并不是用来限定权利要求，任何本领域技 术人员在不脱离本申请精神和范围内，都可以做出可能的变动和修改，因此本申请的保护 范围应当以本申请权利要求所界定的范围为准。
【主权项】
1. 一种造影材料，其特征在于，所述造影材料为至少包裹有亲水性磁性纳米粒子和气 体A的牛血清白蛋白微球；所述牛血清白蛋白微球表面含有牛血清白蛋白中的赖氨酸残基 与至少含有2个醛基的化合物交联形成的西佛碱；所述牛血清白蛋白微球表面含具有肿瘤 靶向功能的靶向配基； 所述亲水性磁性纳米粒子为亲水性聚合物包覆的磁性纳米粒子，所述亲水性聚合物任 选自葡聚糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、纤维素及其衍生物中的一种或几种，所述磁性 纳米粒子任选自具有磁性的金属氧化物纳米粒子中的一种或几种； 所述气体A任选自空气、氮气、氦气、氩气、二氧化碳中的一种或几种。2. 根据权利要求1所述的造影材料，其特征在于，所述造影材料的粒径为0. 5 y m~ 3 u m〇3. 根据权利要求1所述的造影材料，其特征在于，所述亲水性聚合物任选自右旋糖酐、 右旋糖酐衍生物中的一种或几种；所述磁性纳米粒子任选自铁的氧化物纳米粒子、钴的氧 化物纳米粒子、镍的氧化物纳米粒子中的一种或几种；所述磁性纳米粒子优选为Fe 3O4和/ 或rT-Fe2O3纳米粒子。4. 根据权利要求1所述的造影材料，其特征在于，所述至少含有2个醛基的化合物任 选自碳原子为2~20含有2个醛基的化合物；所述至少含有2个醛基的化合物优选为戊二 醛；所述具有肿瘤靶向功能的靶向配基为与牛血清白蛋白偶联的叶酸。5. -种制备权利要求1所述造影材料的方法，其特征在于，至少含有如下步骤： a) 向分散有磁性纳米粒子的体系中，加入亲水性聚合物，搅拌均匀后，经磁分离、洗涤 后，得到亲水性磁性纳米粒子； b) 将步骤a)所得到的亲水性磁性纳米粒子，加入到含有牛血清白蛋白和至少含有2个 醛基的化合物的液相体系中，混合均匀后，在与液相体系表面接触的气体中含有气体A的 条件下，对气、液两相界面进行超声处理，得到包裹有亲水性磁性纳米粒子和气体A且表面 含有西佛碱的牛血清白蛋白微球； c) 将含有具有肿瘤靶向功能的靶向配基的化合物与步骤b)所得到的包裹有亲水性磁 性纳米粒子和气体A且表面含有西佛碱的牛血清白蛋白微球混合均匀，经过分离得到所述 造影材料。6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤a)所述亲水性聚合物与磁性纳米粒 子的质量比不小于1 : 5;步骤a)所述亲水性磁性纳米粒子为包覆右旋糖酐的磁性纳米粒 子。7. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤b)所述含有牛血清白蛋白和至少含 有2个醛基的化合物的液相体系，为牛血清白蛋白和至少含有2个醛基的化合物溶解于磷 酸缓冲盐溶液后形成；步骤c)所述含有具有肿瘤靶向功能的靶向配基的化合物为叶酸活 性酯；步骤c)所述分离，方法为透析分离和/或柱层析分离。8. 权利要求1-4任一项所述造影材料和/或根据权利要求5-7任一项所述方法制备的 造影材料在荧光造影检测方面的应用。9. 权利要求1-4任一项所述造影材料和/或根据权利要求5-7任一项所述方法制备的 造影材料在超声造影检测方面的应用。10. 权利要求1-4任一项所述造影材料和/或根据权利要求5-7任一项所述方法制备 的造影材料在磁共振造影检测方面的应用。
【专利摘要】本申请公开了一种超声、磁共振及荧光的多模态靶向型造影材料、其制备方法及应用。该造影材料理化性质稳定，可提供更快捷、精确、高解析度、高分辨率的成像效果，可广泛用于生物分析、医学诊断与成像等领域。
【IPC分类】A61K49/14, A61K49/00, A61K49/18, A61K49/22
【公开号】CN104984370
【申请号】CN201510465373
【发明人】陈天翔, 吴爱国, 龚安
【申请人】中国科学院宁波材料技术与工程研究所
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月31日
【公告号】CN104174040A