分泌型IgA组合物、其制备方法和使用方法_2

文档序号:9277561阅读:来源:国知局
粘膜制备物中的其它蛋白质分离。
[0029] 在另一实施方案中,SIgA是猪或牛的干燥肠粘膜的形式,其中所述肠粘膜是未经 水解的。在一具体的实施方案中,干燥肠粘膜包含有效提高动物的生长速率和/或提高其 饲料效率的量的SIgA。虽然之前已使用猪肠粘膜作为动物饲料中氨基酸的来源,但是肠粘 膜是经水解的以将蛋白质成分还原成氨基酸。本申请的发明人已意外地发现未经水解的干 燥猪或牛肠粘膜是SIgA的来源。未经水解的干燥猪或牛肠粘膜可用作例如动物饲料组合 物中的补充剂。本文中使用的术语未经水解的指制备物未经酶、加热(大于90°C )或化学 物质在期望将蛋白质成分还原成氨基酸的条件下处理。
[0030] 在一实施方案中,干燥肠粘膜是经冻干、滚筒干燥或喷雾干燥的。
[0031] 在一实施方案中,提高对象的生长速率、提高对象的饲料效率、减少对象的胃肠炎 症、降低对象的胃肠感染的风险或其组合的方法包括向所述对象施用有效提高所述对象的 生长速率、提高所述对象的饲料效率、减少所述对象的胃肠炎症、降低所述对象的胃肠感染 的风险或其组合的量的SIgA。示例性的对象包括人、禽类、猪、牛、绵羊、山羊、鱼、爬行动物、 软体动物、无脊椎动物、马、狗或猫。SIgA可以作为如本文中所述之由猪或牛的肠腔液或肠 粘膜制备的纯的SIgA或分离的SIgA来添加。或者,SIgA作为未经水解的干燥肠粘膜添加。 在一实施方案中,所述动物是鸡,并且SIgA以包含SIgA的动物食物组合物的形式施用,与 基础食物组合物相比,所述动物食物组合物具有提高的饲料效率。在一实施方案中,所述动 物是猪,并且SIgA以包含SIgA的动物食物组合物的形式施用,与基础食物组合物相比,所 述动物食物组合物具有提高的饲料效率。
[0032] 在一个实施方案中,提高动物的生长速率、提高动物的饲料效率、减少动物的胃肠 炎症、降低动物的胃肠感染的风险或其组合的方法包括向所述动物施用来自猪或牛的干燥 肠粘膜,其中所述干燥肠粘膜是未经水解的,并且其中所述干燥肠粘膜包含有效提高所述 动物的生长速率、提高所述动物的饲料效率、减少所述动物的胃肠炎症、降低所述动物的胃 肠感染的风险或其组合的量的SIgA。示例性的动物包括禽类、猪、牛、绵羊、山羊、鱼、爬行 动物、软体动物、无脊椎动物、马、狗或猫。在一实施方案中,所述动物是鸡,并且SIgA以包 含SIgA的动物食物组合物的形式施用,与基础食物组合物相比,所述动物食物组合物具有 提尚的伺料效率。
[0033] 在另一实施方案中,食物组合物包含基础食物组合物和有效提高动物的生长速 率、提高动物的饲料效率、减少动物的胃肠炎症、降低动物的胃肠感染的风险或其组合的量 的SIgA。有效提高动物的生长速率、提高动物的饲料效率、减少动物的胃肠炎症或降低动 物的胃肠感染的风险的SIgA量可容易地由本领域的普通技术人员确定。例如,预期大于 0. lmg/Kg基础动物或人食物的浓度产生有益结果。
[0034] 术语"基础食物组合物"指可与添加剂(例如本文中所述的SIgA组合物)组合的 食物组合物。基础食物组合物可适合人或动物摄取。适合人摄取的示例性食物组合物包括 全营养配方、乳制品、冷冻或耐储存的饮料、汤、饮食补充剂(例如维生素)、食物替代品、营 养棒、糖果或其它食物组合物。
[0035] 术语"基础动物食物组合物"指可与添加剂(例如本文中所述的SIgA组合物)组 合的动物食物。基础动物食物组合物可包含以下组分,例如蛋白质、谷物、香味组分、维生 素、矿物质、防腐剂等。在一些具体的实施方案中,所述基础动物食物组合物用于禽类、猪、 牛、绵羊、山羊、鱼、爬行动物、软体动物、无脊椎动物、马、狗或猫。
[0036] 在一实施方案中,分泌型IgA是分离自猪之肠腔液的任选经巴氏灭菌的纯的分泌 型IgA组合物的形式。在一具体的实施方案中,所述经巴氏灭菌的纯的分泌型IgA组合物 在基础食物组合物中大于0. lmg/Kg。
[0037] 在一实施方案中,所述基础动物食物组合物用于鸡,并且其中与基础食物组合物 相比,所述动物食物组合物具有提高的饲料效率。在另一实施方案中,所述鸡饲料组合物包 含Img至IOg SIgA/Kg鸡饲料。
[0038] 在一实施方案中,以来自猪或牛之干燥肠粘膜的形式向基础食物组合物添加 SIgA,其中所述干燥肠粘膜是未经水解的。在一实施方案中,浓度是Img至IOg干燥肠粘膜 每Kg基础动物食物组合物。在一具体的实施方案中,所述基础食物组合物用于鸡,并且其 中与基础食物组合物相比,所述动物食物组合物具有提高的饲料效率。
[0039] 本文包括药物组合物,其包含经巴氏灭菌的纯的SIgA和可药用赋形剂。本文中 使用的"药物组合物"指治疗有效量的化合物以及可药用赋形剂,例如稀释剂、防腐剂、增溶 剂、乳化剂和助剂。本文中使用的"可药用赋形剂"是本领域技术人员所公知的。
[0040] 用于口服施用的片剂和胶囊剂可以是单位剂型,并且可包含常规的赋形剂,例如 粘合剂,例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮;填充剂,例如乳 糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸;压片润滑剂,例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇 或二氧化硅;崩解剂,例如马铃薯淀粉,或可接受的湿润剂,例如十二烷基硫酸钠。片剂可根 据标准制药实践中公知的方法进行包衣。口服液体制剂可以是例如水性或油性混悬剂、溶 液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式,或者可以以干产品的形式提供用于在使用前与水或其它 合适载剂重构。这样的液体制剂可包含常规的添加剂,例如混悬剂,例如山梨糖醇、糖浆、甲 基纤维素、葡萄糖浆、明胶、氢化可食用脂肪;乳化剂,例如卵磷脂、失水山梨醇单油酸酯或 阿拉伯胶;非水性载剂(其可包括可食用油),例如杏仁油、分馏椰子油、油酯(如甘油)、丙 二醇或乙醇;防腐剂,例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸,以及常规的芳 香剂或着色剂(如有需要)。
[0041] 对于局部施用于皮肤,可将药物制备成膏剂、洗剂或软膏剂。可用于药物的膏或软 膏制剂是本领中公知的常规制剂。局部施用包括经皮制剂,例如贴剂。
[0042] 对于局部施用于眼部,可将抑制剂制备成在合适无菌水性或非水性载剂中的溶 液剂或混悬剂。还可包含添加剂,例如缓冲剂,如偏亚硫酸钠或优地酸二钠 (disodium edeate);防腐剂,包括杀细菌剂和杀真菌剂,如乙酸苯汞或硝酸苯汞、苯扎氯铵或氯己定; 以及增稠剂,如羟丙甲纤维素。
[0043] 通过以下非限制性实施例对本发明进行进一步说明。
[0044] 实施例1.从市售的已屠宰猪的腔物质分离SIgA
[0045] 从市售的已屠宰猪收集腔液。将腔液与3. 5% PEG 8000w/v (聚乙二醇,分子量为 6000至8000)合并,并在4°C下以14, OOOx g离心10分钟。收集澄清的液体并通过玻璃棉过 滤以除去可能留下的任何脂肪。然后,将澄清的液体与8.5%PEG SOOOw/v合并,并在4°C下 以14, OOOx g离心10分钟。随后,倒掉上清液并将管中的沉淀物重悬于去离子水中的12% PEG8000W/V中。接着,将混合物在4°C下以 14,000xg离心10分钟。然后,倒掉上清液,将 剩余的沉淀物冷冻于_80°C下并随后冻干。通过ELISA确定了沉淀物的纯度。简单地,将96 孔板用溶解于包被缓冲液(I. 59gNa2C03,2. 93g NaHC03,0. 2g NaN3,pH 9. 6,总体积 1000 mL) 的来自 Bethyl Laboratories (Montgomery TX)的山羊抗-猪 IgA 抗体(120 μ L)包被过夜 以允许该抗体附着于NuncMaxis〇rp?F板(Thermo-Fisher Scientific,Rochester NY) 上。然后,将板用不含蛋白质的封闭缓冲液(Pierce,Rockford IL)封闭1小时。随后,将 板用 PBS-0. 05% Tween(Fisher_Scientific,Pittsburgh PA)洗绦 3 次。接着,将样品以 10倍的稀释度(1 : 10至1 : 1,〇〇〇, 〇〇〇, 〇〇〇)添加至板1小时以确定存在的IgA的量。 提供了猪参考血清作为对照。然后,将板用PBS-0. 05% Tween洗涤3次。随后,在封闭缓 冲液中加入山羊抗-猪 IgA 二抗(Bethyl Laboratories,Montgomery TX) (5 μ L2。抗体: 12. 5mL封闭缓冲液),保持30分钟。将板用洗涤缓冲液洗涤6次。之后,在底物缓冲液(二 乙醇胺 97mL,100mg MgCl2,0.2g NaN3,800mL ddH20, pH 9.8)中加入底物、孵育 15 分钟,并 在450nm下读数。
[0046] 表1 :从腔液分离的IgA的量
[0047]
[0048] IgA纯度:使用腔液(通过挤出肠内含物而不破坏粘膜内衬(mucosal lining)的 一系列滚轴从肠道内收集的液体)并证明样品的纯度大于90%。通过使用10倍稀释度,每 200mg总产物具有193至199mg IgA。
[0049] 试图进一步量化IgA的相对纯度,使用SDS-PAGE确定了 IgA中是否存在任何污染 物。使用了经过滤灭菌的腔内含物:简单地,一旦完成了腔内含物的最终离心,就将沉淀物 用去离子水水合并通过 〇.2um stericup 过滤器(Fishe
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