光热效果(图7a)。而对于pDOAuNSs-PEI，随着照射时间的延长，纳米颗粒水溶液的温度明显增加。而且随着Au浓度的增加，温度的增加更加明显(图7b)。
[0062]实施例7
[0063]瘤内注射pDOAuNSs-ΡΕΙ的PBS溶液([Au] = 5.6mM, 0.1mL)到裸鼠的肿瘤部位(如图8a)，然后用808nm激光照射肿瘤部位，通过红外摄像机来评价体内肿瘤部位的近红外成像效果，同时以注射相同体积的PBS的裸鼠作为对照组(如图Sb)。结果表明注射后113秒后，注射？0_11呢8^^1的小鼠肿瘤部位的温度明显升高，达到了 58.3°C，而此时注射PBS小鼠的肿瘤部位的温度仅仅达到31.4°C。在随后的一段时间内，注射pDOAuNSs-PEI的小鼠肿瘤部位的温度在很长时间内保持在50°C以上。而对照小鼠肿瘤部位的温度仅仅维持在31°C左右。实验结果说明本发明制备的pDOAuNSs-PEI能使肿瘤部位的温度升高，从而达到杀死肿瘤细胞的作用。
[0064]实施例8
[0065]负荷肿瘤的裸鼠被分为四组(每组4只)，然后分别经过不同方式处理:(a)瘤内注射生理盐水(PBS)但不经过激光照射，(b)瘤内注射本发明制备的pDOAuNSs-PEI，(c)肿瘤只经激光照射10分钟，(d)瘤内注射实施例1制备的pDOAuNSs-PEI且经过激光照射10分钟。随后观察并记录各组老鼠在不同时间点的肿瘤体积大小(肿瘤相对体积=VA^V表示裸鼠在不同时间点的肿瘤体积，V。表示第O天的肿瘤体积)、裸鼠体重变化以及裸鼠存活率。从图9a可以看出，a-c三组裸鼠的肿瘤体积随着时间的变化逐渐增加，而d组裸鼠的肿瘤体积经过照射后明显减小，大约在14天左右肿瘤体积变为O。从图9b可以看出，b-d三组裸鼠的体重与对照组a组裸鼠的体重相比，无明显的差异，表明注射的纳米材料无明显的毒副作用。从图9c可以看出，a组裸鼠在实验开始的第56天存活率降为0%，b组裸鼠在实验开始的第59天存活率降为0%，c组裸鼠在实验开始的第42天存活率降为25%，而d组裸鼠的存活率始终保持在100%。因此可见，本发明制备的pDOAuNSs-PEI对肿瘤的光热治疗效果良好，不仅能有效抑制肿瘤的生长，还可以有效提高荷瘤鼠的成活率。
[0066]对比例I
[0067](I)将 500mg 柠檬酸三钠(Na3C6H5O7.2Η20，Mw = 294.1)加入到 49.5mL 水中配制成I %柠檬酸三钠溶液。再将ImM的氯金酸的1mL水溶液加热至沸腾，在其中加入1.5mL I %柠檬酸三钠溶液，在沸腾条件下搅拌反应10分钟后，冷却至室温并用0.22 μ m的硝化纤维素膜过滤，得到的金种子溶液，静置备用。其中，柠檬酸三钠与氯金酸的摩尔比为3.434:1 ;
[0068](2)将13.8 yL巯基乙酸加入到1mL超纯水中，再加入10mg EDC(l-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐，Mw= 191.70)活化0.5-3h，然后边搅拌边滴加溶于15mL水的50mg聚乙烯亚胺，反应I?2天后，将反应产物用透析膜(MffCO = 8000-14000)在PBS缓冲液中透析2天，然后再用蒸馏水透析2天，最后将纯化的产物冷冻干燥得到部分巯基化修饰的聚乙烯亚胺(PE1-SH)，产物储存于-20°C下备用；
[0069](3)将100 μ L金种子溶液快速加入到1mL浓度为0.25mM的氯金酸溶液中，快速搅拌情况下加入100 μ L 3mM AgNO3溶液和50 μ L 0.1M抗坏血酸溶液(AA)，搅拌反应I分钟，迅速加入溶于ImL水的5.86mg巯基化聚乙烯亚胺(PE1-SH)，反应12_24h，得到巯基化聚乙烯亚胺稳定的金纳米星溶液(AuNSs-PEI);
[0070](4)在步骤(3)所得的AuNSs-PEI室温下高速离心(转速为6000_7000r/min) 3次后得到未包裹多巴胺的金纳米星颗粒用于光热治疗的对比产物AuNSs-PEI。
[0071]合成过程中对得到的产品AuNSs-PEI进行紫外吸收表征，金纳米星颗粒的表面等离子体共振(SPR)峰约在600-900nm之间，证明了金纳米星的成功合成。进一步以电感親合等离子体发射光谱仪测定(ICP-OES)产物中Au含量，根据测得结果，配置与实施例6中与pDOAuNSs-PEI具有相同金浓度(0.35mM)水溶液0.2mL，以等体积的水溶液为对照，用808nm激光照射，观察温度变化情况。结果显示，在同样浓度金纳米星情况下，pDOAuNSs-PEI比对照材料AuNSs-PEI具有更好的升温效果(图7a)，表明pD的包覆增强了金纳米星的光热效果O
【主权项】
1.一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，包括: (1)将氯金酸的水溶液加热至沸腾，加入柠檬酸钠溶液，在沸腾条件下搅拌反应10-12分钟，冷却，过滤，得到金种子溶液；其中，柠檬酸钠与氯金酸的摩尔比为3.434:1 ; (2)在巯基乙酸的水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC活化，然后边搅拌边滴加聚乙烯亚胺PEI的水溶液，反应I?2天，透析，冷却干燥，得到部分巯基化修饰的聚乙烯亚胺PE1-SH ;其中，EDC与巯基乙酸的摩尔比为2.5:1，巯基乙酸与PEI的摩尔比为100:1 ； (3)将三羟甲基氨基甲烷缓冲液Tris缓冲液调节pH至8.5，然后加入多巴胺盐酸盐，得到多巴胺Tris缓冲液；其中，多巴胺盐酸盐和三羟甲基氨基甲烷的摩尔比为0.632:1 ; (4)将步骤(I)中得到的金种子溶液加入到氯金酸溶液中，搅拌条件下加入AgNO3溶液和抗坏血酸溶液，搅拌反应50-60秒，得到金纳米星溶液，加入步骤(2)中得到的PE1-SH，反应12?24h，得到巯基化聚乙烯亚胺修饰的金纳米星溶液AuNSs-PEI ;其中，AgNO3溶液与抗坏血酸溶液的摩尔比为0.06:1 ;金纳米星溶液与PE1-SH的摩尔比为1:10 ;金种子溶液与氯金酸溶液的摩尔比例为1:25 ;金种子溶液与AgNO3溶液的摩尔比例为1:3 ; (5)将步骤(4)中得到的AuNSs-PEI加入到步骤(3)中得到的多巴胺Tris缓冲液中，室温搅拌3.5?4h，形成聚多巴胺pD包裹的纳米材料，离心，得到具有计算机断层扫描造影CT成像功能和光热治疗功能的多功能纳米颗粒，即聚多巴胺包覆金纳米星pDOAuNSs-PEI ;其中，AuNSs-PEI与多巴胺Tris缓冲液的摩尔比为1:12。2.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中氯金酸水溶液的浓度ImM;柠檬酸钠溶液的质量浓度为1%。3.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中过滤采用硝化纤维素膜，材质是改良聚醚砜膜，膜孔径为0.22 μ m。4.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中PEI为支化聚乙烯亚胺，分子量为25000。5.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中透析为透析膜先在PBS缓冲液中透析3-5次，然后再在蒸馏水中透析3-5次，透析膜为纤维素透析膜，其中，MffCO = 1000。6.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中PE1-SH为巯基化修饰的超支化聚乙烯亚胺，分子量为 32400-32500。7.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中用盐酸调节Tris缓冲液的pH，盐酸的浓度为ImM。8.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中Tris缓冲液的浓度为10mM。9.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中搅拌的速度为780r/min。10.根据权利要求1所述的一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，其特征在于，所述步骤⑷中氯金酸溶液的浓度为0.25mM，AgNO3S液的浓度为3mM，抗坏血酸溶液的浓度为0.1mM。
【专利摘要】本发明涉及一种聚多巴胺包裹的聚乙烯亚胺稳定的金纳米星光热治疗剂的制备方法，包括：用氯金酸和柠檬酸钠制备金种子溶液；利用EDC活化巯基乙酸，然后加入PEI的水溶液反应，透析，冷却干燥，得到PEI-SH；向Tris缓冲液中加入多巴胺盐酸盐，得到多巴胺Tris缓冲液；将金种子溶液加入到氯金酸溶液中，搅拌条件下加入AgNO3溶液和抗坏血酸溶液，搅拌反应后加入PEI-SH，反应得到AuNSs-PEI；将AuNSs-PEI加入到多巴胺Tris缓冲液中，搅拌，离心，即得。本发明的方法简单，反应条件温和，易于操作，具有产业化实施的前景，得到的星形纳米颗粒在CT成像诊断和癌症的光热治疗领域有着潜在的应用。
【IPC分类】A61K41/00, A61K9/51, A61K47/34, A61K47/32, A61K49/04, A61P35/00
【公开号】CN105031647
【申请号】CN201510393447
【发明人】史向阳, 李杜, 温诗辉
【申请人】东华大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月7日