一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物及其巴布膏剂的制作方法
【专利摘要】本发明属于医药领域，特别涉及一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物及其巴布膏剂。该药物组合物由黄芪32～35重量份、当归30～36重量份、徐长卿21～24重量份、仙灵脾11～14重量份、太子参8～11重量份、鹿角霜5～9重量份、马鞭草3～7重量份、水葱2～5重量份制成。该中药组合物的巴布膏剂采用醇提法制备成相对密度为1.2～1.3的浸膏，然后以甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄芪胶和水为辅料混合涂布而成。该中药组合物能够显著延长肌萎缩侧索硬化症模型小鼠的生存时间，改善模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力。
【专利说明】
一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物及其巴布膏剂
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物及其巴 布膏剂。
【背景技术】
[0002] 肌萎缩侧索硬化症属于运动神经元病，属于罕见病。据统计，该病全球患病率为4 /10万~6 /10万，发病率1 /10万~3 /10万，60%以上患者发病后3年死于呼吸肌 麻痹。该病病理特征为脊髓前角细胞和椎体细胞选择性死亡，属于选择性侵犯上、下运动神 经元的慢性、进行性、致死性疾病。截至目前，该病的病因及发病机制尚不清楚。
[0003] 已有研究显示，肌萎缩侧索硬化症运动神经元的选择性丢与多种复杂因素的相互 作用有关，包括遗传、谷氨酸介导的兴奋毒性、氧化应激、神经炎症反应、线粒体功能障碍、 蛋白聚集、加速的细胞凋亡、自身免疫、自噬和逆转录病毒感染等。
[0004] 动物实验及临床研究证明利鲁唑、依达拉奉、丙戊酸钠等化学药物对肌萎缩侧索 硬化症有一定疗效，但均无法延长肌萎缩侧索硬化症患者生存期。其中利鲁唑已被药品监 督管理部门批准用于治疗肌萎缩侧索硬化症，但其治疗价格高达5000元/月，给患者造成了 沉重的经济负担。
[0005] 根据中医理论，肌萎缩侧索硬化属中医"痿证"范畴，中医学病因与脏腑亏虚，气血 津液不足以濡养筋脉肌肉，亏损日久，四肢羸弱不用有关。发病主以脾、肝、肾三脏为本，脾 胃不调，久而发为痿证；肾精亏虚，骨枯髓空，则肝主之筋肉痿迟，也可发为痿证;肝血不 足，不能荣筋脉与爪甲，则发为筋痿。现代医家治痿多独取阳明（马腾，黄银兰，李玲.中西 医对肌萎缩侧索硬化症病因病机的研究进展.《时珍国医国药》，2015，26(12) :2990-2992.)。从脾胃论治的用药如参苓白术散、补中益气汤。从肝脾论治主要通过健脾养胃、柔 肝养血，用药配方如:黄芪30 g、白术12 g、党参15 g、当归15 g、陈皮10 g、熟地黄15 g、白 芍12 g、丹参12 g、鸡血藤15 g、伸筋草12 g。从脾肾论治以健脾益肾为主，用药配方如:黄 芪30~180 g，五爪龙30~100 g，陈皮5 g，白术、茯苓、巴戟天、肉苁蓉各15 g，升麻、柴胡、 僵蚕、水蛭各10 g，熟地黄20g等。从络病论治，常使用通络、逐瘀、补虚、扶正法，如用桃红四 物汤佐以全蝎、僵蚕、蜈蚣、地龙等虫类药物以达搜风通络之功，再予以益气养血扶正中药 (许文杰，秦勇，王琦伟，等.中医药治疗肌萎缩侧索硬化症的研究进展.《中国药房》， 2015(23) :3301-3303)。除上述药方外，目前国内关于中医药用于肌萎缩侧索硬化症的治疗 效果已开展了一定的研究。四君子汤（潘卫东，Shin Kwak，吴春M，等.加味四君子汤对肌 萎缩侧索硬化症AR2小鼠运动功能的影响.《上海中医药大学学报》，2013(1): 60-63)、龟 鹿二仙胶(金培强.龟鹿二仙胶加减治疗肌萎缩侧索硬化的临床观察.《中医临床研究》， 2013，5 (24): 28-30 .)、复元生肌颗粒(王骏，高俊鹏，郭咏梅，等.复元生肌颗粒改善肌萎 缩侧索硬化症患者中医证侯临床疗效观察.《神经病学与神经康复学杂志》，2009, 6(3): 173-175.)、健脾益肺汤（孙丽霞，杜宝新.健脾益肺汤治疗肌萎缩侧索硬化症25例分析. 《中医临床研究》，2014,6(35): 19-21.)等被证明对延缓肌萎缩侧索硬化症的恶化有一定疗 效。但目前已有的中药复方仍不能延长肌萎缩侧索硬化症患者生存期。
[0006] 另一方面，肌萎缩侧索硬化症患者往往存在吞咽困难、呼吸困难症状，需要留置胃 管或辅助机械通气。在这种情况下，采用目前已有的口服药物给药往往造成给药困难。因此 目前对于肌萎缩侧索硬化症而言，仍需要研发能够延长患者生存期的药物，且非口服给药 如外用药物更方便给药，从而克服患者吞咽困难造成的给药难题。
【发明内容】
[0007] 针对上述现有技术，本发明的目的之一是提供一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药 组合物，为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物，由以下重量份比的原料制成:黄芪32~35 重量份、当归30~36重量份、徐长卿21~24重量份、仙灵脾11~14重量份、太子参8~11重量 份、鹿角霜5~9重量份、马鞭草3~7重量份、水葱2~5重量份。
[0008] 作为发明技术方案的进一步优化，所述中药组合物由以下重量份比的原料制成： 黄苗34重量份、当归32重量份、徐长卿22重量份、仙灵脾13重量份、太子参10重量份、鹿角霜 8重量份、马鞭草6重量份、水葱4重量份。
[0009] 作为发明技术方案的进一步优化，所述中药组合物由以下重量份比的原料制成： 黄苗33重量份、当归35重量份、徐长卿23重量份、仙灵脾12重量份、太子参9重量份、鹿角霜6 重量份、马鞭草4重量份、水葱3重量份。
[0010] 作为发明技术方案的进一步优化，所述中药组合物由以下重量份比的原料制成： 黄苗33重量份、当归33重量份、徐长卿22重量份、仙灵脾13重量份、太子参10重量份、鹿角霜 7重量份、马鞭草5重量份、水葱4重量份。
[0011] 作为发明技术方案的进一步优化，上述中药组合物的剂型为巴布膏剂。
[0012] 本发明的另一方面，也提供了一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药巴布膏剂，由以 下重量份 比的原料制成:黄芪32~35重量份、当归30~36重量份、徐长卿21~24重量份、仙灵脾 11~14重量份、太子参8~11重量份、鹿角霜5~9重量份、马鞭草3~7重量份、水葱2~5重量 份;所述巴布膏剂的制备方法包括以下步骤： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目 筛备用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:2~1:5的比例加入浓度 为50%~70%的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.2~1.3的浸膏； 5) 按照浸膏:甘油:聚丙烯酸钠:羧甲基纤维素钠:明胶:西黄芪胶:水为0.3: 6.9:1.2:0.4:0.4:0.2:6的重量比称取甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄 芪胶和水，将步骤4)所得浸膏与甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠混溶作为A相，将明胶、 西黄芪胶、水混合加热溶解作为B相，50°C加热下将A、B相混合涂布于无纺布上，37°C烘干6h 即得。
[0013] 作为一个优先的技术方案，上述步骤3)中乙醇的浓度为65%，乙醇加入的料液比为 1:4;上述步骤4)中浸膏的相对密度为1.24。
[0014] 本发明的另一方面，还提供了上述治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物在制备肌 萎缩侧索硬化症治疗药物中的应用。
[0015] 本发明的技术方案中所述的黄芪已被中国药典2010版本收录，为豆科植物蒙古黄 ^^Astragalusmembranaceus (Fisch)Bge · var .mongholicus(Bge. )Hsiao或膜英黄苗 Astragalusmembranaceus(Fisch. )Bge ·的干燥根，功能与主治:补气升阳，固表止汗，利水 消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻 脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃， 久溃不敛。
[0016] 本发明的技术方案中所述的当归已被中国药典2010版本收录，为伞形科植物当归 Angelicasinensis(01iv. )Diels.的干燥根，功能与主治：补血活血，调经止痛，润肠通便。 用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡， 肠燥便秘。酒当归活血通经。用于经闭痛经，风湿痹痛，跌扑损伤。
[0017] 本发明的技术方案中所述的徐长卿已被中国药典2010版本收录，为萝蘑科植物徐 长卿Cynanchumpaniculatum(Bge · )Kitag ·的干燥根和根莖，功能与主治:祛风，化湿，止痛， 止痒。用于风湿痹痛，胃痛胀满，牙痛，腰痛，跌扑伤痛，风疹、湿疹。
[0018] 本发明的技术方案中所述的仙灵脾，也称为淫羊藿，已被中国药典2010版本收录， 为小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim·、箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum (Sieb.etZucc. ) Maxim.、柔毛淫羊藿Ep imediumpube scens · Maxim ·或朝鲜淫羊藿 EpimediumkoreanumNakai的干燥叶，功能与主治:补肾阳，强筋骨，祛风湿。用于肾阳虚衰， 阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛。
[0019] 本发明的技术方案中所述的太子参，已被中国药典2010版本收录，为石竹科植物 孩儿参？8611(1〇8丨611&1^&116丨61'(^11711&(]\^9.)?&161?&161：!1〇€；1^1.的干燥块根，功能与主治： 益气健脾，生津润肺。用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗日渴，肺燥干咳。
[0020] 本发明的技术方案中所述的鹿角霜，已被中国药典2010版本收录，为鹿角去胶质 的角块，功能与主治:温肾助阳，收敛止血。用于脾肾阳虚，白带过多，遗尿尿频，崩漏下血， 疮疡不敛。
[0021] 本发明的技术方案中所述的马鞭草，已被中国药典2010版本收录，为马鞭草科植 物马鞭草Verbenaof f icinal i sL的干燥地上部分，功能与主治:活血散瘀，解毒，利水，退黄， 截疟。用于瘕瘕积聚，痛经经闭，喉痹，痈肿，水肿，黄疸，疟疾。
[0022] 本发明的技术方案中所述的水葱，别名冲天草、翠管草、莞、莞蒲，为莎草科薦草属 植物水葱Scirpus tabernaemontani Gmel.[S. validus Vahl]的地上全草，记载于《南京 民间药草》，功能主治:除湿利尿。用于水肿胀满，小便不利。
[0023] 本发明的中药组合物以补气补血的黄芪、当归为君药，以祛风通络、补肾温肾、健 脾的徐长卿、淫羊藿、太子参、鹿角霜为臣药，发挥对肌萎缩侧索硬化症的治疗作用。在组方 研究中发明人经过大量筛选研究表明，马鞭草、水葱两味中药对上述君药和臣药组成的复 方具有显著的增效作用，组方中加入马鞭草、水葱两味中药后，能够延长肌萎缩侧索硬化症 患者的生存期，发挥了预料不到的效果。
[0024] 此外，本发明治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物制备成巴布膏剂外用给药仍能 发挥良好的治疗效果，有效解决了患者吞咽困难导致的给药难题。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例对本发明作进一步的解释。应当理解的是，以下实施例仅用于解 释本发明，而不是限制本发明的保护范围。
[0026] 实施例1治疗肌萎缩侧索硬化症的口服中药组合物及其制备 治疗肌萎缩侧索硬化症的口服中药组合物的组方见下表：
制备方法： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目筛备 用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:3的比例加入浓度为60% 的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.29的浸膏； 5) 将步骤4)所得浸膏干燥，粉碎为颗粒。装入胶囊，即得治疗肌萎缩侧索硬化症的中药 口服胶囊剂。
[0027] 实施例2治疗肌萎缩侧索硬化症的中药巴布膏剂及其制备 治疗肌萎缩侧索硬化症的中药巴布膏剂的组方见下表：
制备方法： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目 筛备用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:4的比例加入浓度为65% 的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.24的浸膏； 5) 按照浸膏:甘油:聚丙烯酸钠:羧甲基纤维素钠:明胶:西黄芪胶:水为0.3:6.9:1.2: 0.4:0.4:0.2:6的重量比称取甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄芪胶和 水，将步骤4)所得浸膏与甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠混溶作为A相，将明胶、西黄芪 胶、水混合加热溶解作为B相，50 °C加热下将A、B相混合涂布于无纺布上，37 °C烘干6h即得。
[0028]实施例3治疗肌萎缩侧索硬化症的中药巴布膏剂及其制备 治疗肌萎缩侧索硬化症的中药巴布膏剂的组方见下表： 制备方法：
1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目 筛备用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:3的比例加入浓度为70% 的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.27的浸膏； 5) 按照浸膏:甘油:聚丙烯酸钠:羧甲基纤维素钠:明胶:西黄芪胶:水为0.3: 6.9:1.2:0.4:0.4:0.2:6的重量比称取甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄 芪胶和水，将步骤4)所得浸膏与甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠混溶作为A相，将明胶、 西黄芪胶、水混合加热溶解作为B相，50°C加热下将A、B相混合涂布于无纺布上，37°C烘干6h 即得。
[0029] 实施例5治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物的药效学及安全性研究 一、为验证本发明的肌萎缩侧索硬化症的中药组合物的药效，特制备如下对比例： 对比例1:鹿角霜600g、龟甲1000g、人参750g、枸杞子1000g;取药材粉碎过120目筛，加 水没过药材，水煎两次，合并滤液，药液浓缩至相对密度1.24备用。
[0030] 对比例2:补中益气汤黄芪1800g、人参900g、炙甘草600g、当归600g、橘皮600g、升 麻600g、柴胡600g、白术900g;取药材粉碎过120目筛，加水没过药材，水煎两次，合并滤液， 药液浓缩至相对密度1.24备用。
[0031] 对比例3:黄芪1800g、党参900g、五味子180g、干姜180g、白术450g、杜仲360g、紫苑 270g、法半夏270g、菟丝子360g、麦冬270g、陈皮180g、僵蚕180g、杏仁270g、柴胡180g、桔梗 270g、制马钱子3g、炙甘草180g;取药材粉碎过120目筛，加水没过药材，水煎两次（马钱子包 煎无需粉碎），合并滤液，药液浓缩至相对密度1.24备用。
[0032] 对比例4:黄芪1800 g、白术720 g、党参900 g、当归900 g、陈皮600 g、熟地黄900 g、白芍720 g、丹参720 g、鸡血藤900 g、伸筋草720 g;取药材粉碎过120目筛，加水没过药 材，水煎两次，合并滤液，药液浓缩至相对密度1.24备用。
[0033] 对比例5:黄芪1800g、生地黄900g、仙灵脾900 g、巴戟天720 g、山茱萸500g、茯苓 450g、石斛450g、怀牛膝120g、柴胡360g、郁金120g;取药材粉碎过120目筛，加水没过药材， 水煎两次，合并滤液，药液浓缩至相对密度1.24备用。
[0034]对比例6:黄芪1800 g，五爪龙1800 g，陈皮150 g，白术、茯苓、巴戟天、肉苁蓉各 450 g，升麻、柴胡、僵蚕、水蛭各300 g，熟地黄600g;取药材粉碎过120目筛，加水没过药材， 水煎两次，合并滤液，药液浓缩至相对密度1.24备用。
[0035]二、为验证本发明的肌萎缩侧索硬化症的中药组合物的药效，特制备如下实验例： 实验例1:黄芪1700 g、当归1600g、徐长卿1100g、仙灵脾650g、太子参500g、鹿角霜 400g、马鞭草300g、水葱200g。 实验例2:黄芪1650 g、当归1750g、徐长卿1150g、仙灵脾600g、太子参450g、鹿角霜 300g、马鞭草200g、水葱100g。 实验例3:黄芪1650 g、当归1650g、徐长卿1100g、仙灵脾650g、太子参500g、鹿角霜 350g、马鞭草250g、水葱200g。 上述实验例1-3的复方药物制备方法如下： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目筛备 用； 3 )将步骤1)和步骤2 )所得药材粉末混合，按照料液比为1:3的比例加入浓度为60%的乙 醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4)将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.29的浸膏备用。 [0036] 实验例4:黄芪1700 g、当归1600g、徐长卿1100g、仙灵脾650g、太子参500g、鹿角霜 400g、马鞭草300g、水葱200g。
[0037] 实验例5:黄芪1650 g、当归1750g、徐长卿1150g、仙灵脾600g、太子参450g、鹿角霜 300g、马鞭草200g、水葱100g。
[0038] 实验例6:黄芪1650 g、当归1650g、徐长卿1100g、仙灵脾650g、太子参500g、鹿角霜 350g、马鞭草250g、水葱200g。 上述实验例4-6的复方药物制备方法如下： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目 筛备用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:4的比例加入浓度为65% 的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.24的浸膏； 5) 按照浸膏:甘油:聚丙烯酸钠:羧甲基纤维素钠:明胶:西黄芪胶:水为0.3: 6.9:1.2:0.4:0.4:0.2:6的重量比称取甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄 芪胶和水，将步骤4)所得浸膏与甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠混溶作为A相，将明胶、 西黄芪胶、水混合加热溶解作为B相，50°C加热下将A、B相混合涂布于无纺布上，37°C烘干6h 备用。
[0039] 实验例7:黄芪1700、当归1600g、徐长卿1100g、仙灵脾650g、太子参500g、鹿角霜 400g。制备方法如下： 1)取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用;2)取处方量黄芪、当归、徐长卿、 仙灵脾、太子参分别粉碎，过120目筛备用； 3 )将步骤1)和步骤2 )所得药材粉末混合，按照料液比为1:3的比例加入浓度为60%的乙 醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4)将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.29的浸膏备用。 [0040] 实验例8:黄芪1700、当归1600g、徐长卿1100g、仙灵脾650g、太子参500g、鹿角霜 400g。制备方法如下： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参分别粉碎，过120目 筛备用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:4的比例加入浓度为65% 的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.24的浸膏； 5)按照浸膏:甘油:聚丙烯酸钠:羧甲基纤维素钠:明胶:西黄芪胶:水为0.3: 6.9:1.2:0.4:0.4:0.2:6的重量比称取甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄 芪胶和水，将步骤4)所得浸膏与甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠混溶作为A相，将明胶、 西黄芪胶、水混合加热溶解作为B相，50°C加热下将A、B相混合涂布于无纺布上，37°C烘干6h 备用。
[0041]其中上述对比例1-6为目前文献已有报道的治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合 物;实验例1-3为本发明的治疗肌萎缩侧索硬化症的口服中药组合物;实验例4-6为本发明 的治疗肌萎缩侧索硬化症的巴布膏剂;实验例7、8分别为本发明的中药组合物去除马鞭草、 水葱后的口服组合物和巴布膏剂。
[0042]三、动物模型及分组和给药 肌萎缩侧索硬化S0D1G93A转基因阳性小鼠，雄性，4周龄，购自美国Jackson实验室(Bar Harbor，ME，USA)。小鼠随机分为15组，每组6只。一组为阴性对照组灌胃给予生理盐水。6 组阳性对照组，分别灌胃给予对比例1-6制备的中药浸膏，给药剂量为30g生药材/kg;8组实 验组，其中4组分别灌胃给予实验例1、2、3、7制备的中药浸膏，给药剂量为30g生药材/kg;另 外4组小鼠颈背部皮肤去毛洗净贴敷实验例4、5、6、8制备的中药巴布膏剂，给药剂量为30g 生药材/kg。各组动物每3日给药一次，连续给药10次。
[0043]四、观察指标 1.小鼠生存时间：小鼠从出生到死亡的时间为其生存时间。小鼠生存时间以天为单 位，统计各组小鼠生存时间的平均值和标准差进行比较。
[0044] 2.小鼠运动能力:使用测力计（NS-TRM-M;Neuroscience Corp.)测试小鼠抓握 力;使用小鼠专用滚筒跑步机（SN_445，Neuroscience Corp.)检测180s内在转速为10 rpm 时小鼠从跑步机上跌落之前坚持的最长时间。小鼠运动能力测定分别于首次给药前和末次 给药后24h各测定1次。小鼠抓握力数值以末次给药后测定值/首次给药前测定值X 100%表 示;小鼠滚筒爬行能力数值以末次给药后测定值/首次给药前测定值X 100%表示。
[0045] 3.小鼠给药安全性观察:给药前及给药后每隔两日观察小鼠毛色、精神状态、进 食饮水量、大小便频率及大便形状、呼吸频率、眼睑、结膜充血状态、眼睛分泌物、口腔及鼻 腔颜色和分泌物、耳朵分泌物及足爪色泽和肿胀状态、肛门分泌物及色泽、神经反应状态 (震颤、痉挛）、是否存在瘤肿、膏剂贴敷部位皮肤红肿情况，并进行日常记录。 五、统计分析 数据以平均值土标准差表示，采用SPSS17.0软件进行统计分析，组间比较用t检验。P< 0.05视为有显著差异。
[0046]六、结果 1.阴性对照组及阳性对照组药效实验结果 阴性对照组及阳性对照组生存时间及运动能力测定结果见下表。
[0047] #与生理盐水组相比Ρ<0·05 由上表可见，对比例1-6的中药组合物均可显著提高肌萎缩侧索硬化模型小鼠的抓握 力和滚筒爬行能力（与生理盐水组相比Ρ<〇.05)，但只有对比例3的中药组合物能够延长模 型小鼠的生存时间（与生理盐水组相比Ρ < 0.05 )，且对比例3的中药组合物给药后，模型小 鼠抓握力和滚筒爬行能力测定指标高于对比例1、2、4、5、6。
[0048] 2.实验组药效实验结果 实验组生存时间及运动能力测定结果见下表。
[0049] *与对比例3组相比卩<0.05;#与实验例7组相比卩<0.05,与实验例8组相比Ρ< 0.05〇
[0050]由上表可见，实验例1-3的口服中药组合物与对比例3的口服中药组合物相比对肌 萎缩侧索硬化模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力改善效果相近，无显著差异(Ρ>〇.05)，但 实验例1-3的口服中药组合物与对比例3相比可显著延长肌萎缩侧索硬化模型小鼠的生存 时间。实验例7的中药组合物不含马鞭草和水葱，该组合物对肌萎缩侧索硬化模型小鼠的生 存时间无显著延长作用，对模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力的改善作用低于对比例3(Ρ <0.05)，但优于生理盐水组。上述结果说明，本发明的组方中：黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、 太子参、鹿角霜组成复方既可改善肌萎缩侧索硬化模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力，但 对模型小鼠生存时间无显著改善作用，马鞭草和水葱的加入可导致该组方具备延长模型小 鼠生存时间的效果。
[0051]由上表可见，实验例4-6的巴布膏剂与对比例3的口服中药组合物相比既可以延长 模型小鼠的生存时间（与对比例3组相比P<0.05)，也可显著改善模型小鼠的抓握力和滚筒 爬行能力（与对比例3组相比P<0.05)。实验例8的中药组合物不含马鞭草和水葱，该组合物 对肌萎缩侧索硬化模型小鼠的生存时间无显著延长作用（显著低于对比例3组），对模型小 鼠的抓握力和滚筒爬行能力的改善作用与对比例3组无显著差异（与对比例3组相比P> 0.05)。上述结果说明，本发明的巴布膏剂组方中：黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、鹿角 霜组成复方既可改善肌萎缩侧索硬化模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力，且改善效果优于 对比例3组；但缺乏马鞭草和水葱时，该巴布膏剂组方对模型小鼠生存时间无显著改善作 用，马鞭草和水葱的加入可导致该组方具备延长模型小鼠生存时间的效果。
[0052]综上可见，本发明的治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物制成巴布膏剂外用的效 果显著优于口服给药;组方中的马鞭草和水葱对黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、鹿角 霜具有出乎意料增效作用，导致该组方具备延长模型小鼠生存时间的效果。
[0053] 3.各组动物安全性实验结果 各组动物给药前及给药后按照实验计划进行大体观察，均未见显著异常。说明本发明 的中药组合物口服及外用给药均具有良好的安全性。
【主权项】
1. 一种治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物，其特征在于，由以下重量份比的原料制 成:黄芪32~35重量份、当归30~36重量份、徐长卿21~24重量份、仙灵脾11~14重量份、太 子参8~11重量份、鹿角霜5~9重量份、马鞭草3~7重量份、水葱2~5重量份。2. 根据权利要求1所述的治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物，其特征在于，所述中药 组合物由以下重量份比的原料制成:黄芪34重量份、当归32重量份、徐长卿22重量份、仙灵 脾13重量份、太子参10重量份、鹿角霜8重量份、马鞭草6重量份、水葱4重量份。3. 根据权利要求1所述的治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物，其特征在于，所述中药 组合物由以下重量份比的原料制成:黄芪33重量份、当归35重量份、徐长卿23重量份、仙灵 脾12重量份、太子参9重量份、鹿角霜6重量份、马鞭草4重量份、水葱3重量份。4. 根据权利要求1所述的治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物，其特征在于，所述中药 组合物由以下重量份比的原料制成:黄芪33重量份、当归33重量份、徐长卿22重量份、仙灵 脾13重量份、太子参10重量份、鹿角霜7重量份、马鞭草5重量份、水葱4重量份。5. 根据权利要求1至4所述的治疗肌萎缩侧索硬化症的中药组合物，其特征在于，所述 中药组合物的剂型为巴布膏剂。6. -种权利要求1所述中药组合物的巴布膏剂，其特征在于，所述巴布膏剂的制备方法 包括以下步骤： 1) 取处方量鹿角霜捣碎，研成细末，过120目筛备用； 2) 取处方量黄芪、当归、徐长卿、仙灵脾、太子参、马鞭草、水葱分别粉碎，过120目筛备 用； 3) 将步骤1)和步骤2)所得药材粉末混合，按照料液比为1:2~1:5的比例加入浓度为 50%~70%的乙醇，70°C下恒温水浴回流提取6h，趁热过滤，得药材提取液； 4) 将步骤3)所得药材提取液减压蒸发回收乙醇，浓缩为相对密度为1.2~1.3的浸膏； 5) 按照浸膏:甘油：聚丙烯酸钠:羧甲基纤维素钠：明胶：西黄芪胶:水为0.3:6.9:1.2: 0.4:0.4:0.2:6的重量比称取甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、西黄芪胶和水，将 步骤4)所得浸膏与甘油、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠混溶作为A相，将明胶、西黄芪胶、水 混合加热溶解作为B相，50 °C加热下将A、B相混合涂布于无纺布上，37 °C烘干6h即得。7. 根据权利要求6所述的巴布膏剂，其特征在于，所述步骤3)中乙醇的浓度为65%，乙醇 加入的料液比为1:4;所述步骤4)中浸膏的相对密度为1.24。
【文档编号】A61K9/70GK105832944SQ201610367173
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】刘明, 张婧懿, 刘义楠, 隋思逸
【申请人】黑龙江中医药大学