专利名称：一种slco1b3基因多态性检测特异性引物和液相芯片的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种SLC01B3 基因多态性检测特异性引物和液相芯片。
背景技术：
有机阴离子转运多妝0ATP1B3 (又称 organic anion-transporting polypeptide8，0ATP8，编码基因SLC01B3)，OATP1B3药物转运体在耐药和药代动力学方面起到非常重要的作用，它与药物的耐受、吸收、分布、排泄、药效发挥、以及药物毒性作用等密切相关。有研究表明，SLC01B3基因多态性与其编码蛋白的活性密切相关。目前，对SLC01B3基因多态性进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。本发明目标检测的SLC01B3基因突变位点(多态性位点)，如表所示
权利要求
1.一种SLC01B3基因多态性检测液相芯片，其特征是，包括有(A).针对SLC01B3基因不同多态性位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因多态性位点的特异性引物序列组成,所述特异性引物序列为针对T182G位点的SEQ IDN0. 5和SEQ IDN0. 6 ;和/或针对G77A位点的 SEQID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 ;所述 tag 序列选自 SEQ ID NO. I SEQ ID NO. 4 ；(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 12，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有相应多态性位点的目标序列的引物。
2.根据权利要求I所述的SLC01B3基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为针对T182G位点的SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 14 ;和/或针对G77A位点的SEQ IDNO. 15 和 SEQ IDN0. 16。
3.根据权利要求I所述的SLC01B3基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述ASPE引物为针对T182G位点的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 5组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ IDN0. 6组成的序列；和/或针对G77A位点的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 7组成的序列及由SEQID NO. 4和SEQ ID NO. 8组成的序列。
4.根据权利要求I所述的SLC01B3基因多态性检测液相芯片，其特征是(A)所述ASPE引物为针对T182G位点的由SEQIDN0. I和SEQ IDN0. 5组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 6组成的序列；和/或针对G77A位点的由SEQ ID NO. 3和SEQ IDN0. 7组成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 8组成的序列；(B)有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 12，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).所述扩增引物为:针对T182G位点的SEQID NO. 13和SEQ ID NO. 14 ;和针对G77A位点的 SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 16。
5.根据权利要求1-4任一项所述的SLC01B3基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂为5-10个T。
6.用于SLC01B3基因多态性检测的特异性引物，其特征是，所述特异性引物序列为针对 T182G 位点的 SEQ ID NO. 5 和 SEQ ID NO. 6 ;和 / 或针对 G77A 位点的 SEQ ID NO. 7 和 SEQIDN0. 8。
全文摘要
本发明公开了一种SLCO1B3基因多态性检测特异性引物和液相芯片，该液相芯片主要包括有每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因多态性位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为针对T182G位点的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；和/或针对G77A位点的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
文档编号C12N15/11GK102952872SQ20111025166
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月29日 优先权日2011年8月29日
发明者许嘉森, 何嘉英 申请人:广州益善生物技术有限公司