人类抑癌基因、其编码的蛋白、包含其的表达载体的制作方法

专利名称：人类抑癌基因、其编码的蛋白、包含其的表达载体的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种人类抑癌基因、其编码的 一种蛋白以及包含其 的一种表达载体。
背景技术：
胞，因此，这些肿瘤抑制基因产物的这种功能的丧失使得正常细胞可以变为恶性转化细胞(转化体)(Klein, G， 人2, 821-825(1993))。为了^吏癌细月包可以长成一种癌，该细月包应丧失控制肿瘤抑 制基因正常拷贝数的功能。研究已发现在p53肿瘤抑制基因编码序 列中的修饰是人类癌症中最常见的遗传变化之一(Bishop, J.M., Ce〃， M, 235-248 (1991》以及Weinberg, R.A.， 5"c/e膨，2^4， 1138-1146(1991) )。然而，据估计， -仅部分宫颈癌组织表现出p53突变，因为 <又2 ~ 11 %宫颈癌中存在已才艮道的p53突变(Crook, T. et al.，丄a"cef, 339， 1070-1073 (1992);以及Busby-Earle， R,M.C. et al" 乂. Ca"cw, 迅732-737 (1994))。同时，据报道，非小细胞肺癌和小细胞肺癌中p53肿瘤抑制基 因的突变频率分别占到肺癌的大约50 %和70% ( Takahashi, T. " "/., Sc/e廳，246， 491-494 1989; Bodner， S.M. " a/" (9腳g,， 2， 743-749(1992) ; Mao, L.丄img Owcer, M, S27-S34 (2001))。吸烟是肺癌形成 和发展中最重要的因素之一，并且其它肿瘤抑制基因和癌基因连同
p53均与这些突变相关(Osada， H. & Takahashi, T. (9助g,， 2i, 7421-7434 (2002))。而且，据估计，只有部分的乳癌组织表现出p53突变，因为净艮 道的p53突变为在孝L癌中的30%的范围内(Keen, J.C. & Davidson, N. E.， CVwcer, 22， 825-833 (2003))以及Borresen-Dale, A-L.， 杨她ow， 21， 292-300 (2003))。因此，本发明发明人已积极地尝试利用用于有效显示在正常组 织如爿申、子宫颈和乳房与癌纟且织如力市癌、子宫颈癌和乳癌之间差异 表达的基因的mRNA差异显示(DD)方法，/人正常组织如肺、子 宫颈和乳房分离出新的肿瘤抑制基因(Liang, P. and Pardee, A. B.， S"'e騰，212, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al" C薩er L, 6966-6968 (1993))发明内容因此，设计本发明以解决现有技术中的问题，因此本发明的一 个目的是提供一种新的人类抑癌基因。本发明的另 一个目的是提供一种由该抑癌基因编码的抑癌蛋白。本发明的又一个目的是提供一种包含该抑癌基因的表达载体。本发明的又一个目的是提供一种用该表达载体转化的细月包。为了实i见以上目的，本发明^是供一种具有SEQ ID NO: 1的 DNA序列的抑癌基因(所谓的生长抑制基因1;也称为GIG1)。本 发明提供一种具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。 本发明还4是供一种具有SEQ ID NO: 5的DNA序列的人类抑癌 基因(所谓的生长抑制基因3;也称为GIG3)。本发明还提供一种 具有SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还提供一种具有SEQ ID NO: 9的DNA序列的人类抑癌 基因(所谓的生长抑制基因4;也称为GIG4)。本发明还提供一种 具有SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还4是供一种具有SEQ ID NO: 13的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的生长抑制基因5;也称为GIG5)。本发明还提供一 种具有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还提供一种具有SEQ ID NO: 17的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的生长抑制基因11;也称为GIGll)。本发明还提供 一种具有SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还4是供一种具有SEQ ID NO: 21的DNA序列的人类一中 癌基因(所谓的人类迁移诱导基因2;也称为MIG2)。本发明还提 供具有SEQ ID NO: 22的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还才是供一种具有SEQ ID NO: 25的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的迁移谦导基因4;也称为MIG4)。本发明还提供一 种具有SEQ ID NO: 26的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还才是供一种具有SEQ ID NO: 29的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的增生诱导基因13;也称为PIG13)。本发明还提供 一种具有SEQ ID NO: 30的氨基酸的人类抑癌蛋白质。
本发明还提供一种具有SEQ ID NO: 33的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的增生诱导基因15;也称为PIG15)。本发明还提供 一种具有SEQ ID NO: 34的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还提供一种具有SEQ ID NO: 37的DNA序列的人类才中 癌基因(所谓的增生诱导基因8;也称为PIG8)。本发明还提供一 种具有SEQ ID NO: 38的人类承P癌蛋白质。本发明还4是供一种具有SEQ ID NO: 41的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的迁移相关基因1;也称为MRG1)。本发明还4是供一 种具有SEQ ID NO: 42的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还提供一种具有SEQ ID NO: 45的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的增生诱导基因22;也称为PIG22)。本发明还提供 一种具有SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还l是供一种具有SEQ ID NO: 49的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的迁移诱导基因9;也称为MIG9)。本发明还提供一 种具有SEQ ID NO: 50的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。本发明还才是供一种具有SEQ ID NO: 53的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的迁移诱导基因11;也称为MIGll)。本发明还l是供 一种具有SEQ ID NO: 54的氨基酸的人类抑癌蛋白质。本发明还才是供一种具有SEQ ID NO: 57的DNA序列的人类抑 癌基因(所谓的迁移诱导基因15;也称为MIG15)。本发明还提供 一种具有SEQ ID NO: 58的氨基酸序列的人类抑癌蛋白质。为了实现其它目的，本发明提供一种包含各种抑癌基因的表达 载体。


本发明优选实施方式的这些和其它特征、方面和优点将在以下 参考附图的详细描述中得到更加充分的描述。图l是示出了利用SEQ ID NO: 3的随机5，-13碱基引物H-AP38 和SEQ ID NO: 4的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图2是示出了利用SEQ ID NO: 7的随机5，-13义咸基引物H-AP32 和SEQ ID NO: 8的4苗定寡-dT引物的PCR结果的;疑月交图；图3是示出了利用SEQ ID NO: 11的随机5，-13石咸基引物 H-AP35和SEQ ID NO: 12的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝胶图；图4是示出了利用SEQ ID NO: 15的随机5，-13碱基引物 H-AP34和SEQ ID NO: 16的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图5是示出了利用SEQ ID NO: 19的随机5，-13石成基引物 H-AP36和SEQ ID NO: 20的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图6是示出了利用SEQ ID NO: 23的随机5，-13碱基引物 H-AP35和SEQ ID NO: 24的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝胶图；图7是示出了利用SEQ ID NO: 27的随机5，-13石成基引物 H-AP41和SEQ ID NO: 28的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图8是示出了利用SEQ ID NO: 31的随才几5，-13石咸基引物H-AP6 和SEQ ID NO: 32的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图9是示出了利用SEQ ID NO: 35的随才几5，-13石咸基引物H-AP6 和SEQ ID NO: 36的4苗定寡-dT引物的PCR结果的;疑月交图； 图10是示出了利用SEQ ID NO: 39的随才几5，-13石威基引物 H-AP36和SEQ ID NO: 40的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图11是示出了利用SEQ ID NO: 43的随机5，-13石咸基引物 H-AP21和SEQ ID NO: 44的4苗定寡-dT引物的PCR结果的;疑月交图；图12是示出了利用SEQ ID NO: 47的随机5，-13石成基引物 H-AP24和SEQ ID NO: 48的4苗定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图13是示出了利用SEQ ID NO: 51的随机5'-13碱基引物 H-AP12和SEQ ID NO: 52的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图14是示出了利用SEQ ID NO: 55的随机5'-13碱基引物 H-AP13和SEQ ID NO: 56的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图15是示出了利用SEQ ID NO: 59的随机5，-13碱基引物 H-AP31和SEQ ID NO: 60的锚定寡-dT引物的PCR结果的凝月交图；图16至图30分别是示出了在SDS-PAGE上分析GIG1、GIG3、 GIG4、 GIG5、 GIGll 、 MIG2、 MIG4、 PIG13、 PIG15、 PIG8、 MRG1、 PIG22、 MIG9、 MIG11和MIG15的基因产物的示意图；图31(a)是示出了 GIG1基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫 癌纟且织和子宫癌细月包系中差异表达的RNA印迹(i若'泽恩印迹)结 果的示意图，而图31(b)是示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图32(a)是示出了 GIG3基因在正常肺组织、原发性肺癌组织和 肺癌细胞系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图32(b)是示 出了通过将该相同印迹与P -肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结 果的示意图33(a)是示出了 GIG4基因在正常肺组织、原发性肺癌组织和 肺癌细胞系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图33(b)是示 出了通过将该相同印迹与(3 -肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结 果的示意图；图34(a)是示出了 GIG5基因在正常肺组织、原发性肺癌组织和 肺癌细胞系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图34(b)是示 出了通过将该相同印迹与(3 -肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结 果的示意图；图35(a)是示出了 GIG11基因在正常乳房组织、原发性乳癌组 织和乳癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图34(b) 是示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印 迹结果的示意图；图36(a)是示出了 MIG2基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫 癌纟且织和子宫癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而 图36(b)是示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白探针杂交获得的 RNA印迹结果的示意图；图37(a)是示出了 MIG4基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫 癌纟且织和子宫癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而 图37(b)是示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白探针杂交获得的 RNA印迹结果的示意图；图38(a)是示出了 PIG13基因在正常肺组织、原发性肺癌组织 和月申癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图38(b)是 示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹 结果的示意图39(a)是示出了 PIG15基因在正常肺组织、原发性肺癌组织 和肺癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图39(b)是 示出了通过将该相同印迹与(3 -肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹 结果的示意图；图40(a)是示出了 PIG8基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫 癌纟且织和子宫癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而 图40(b)是示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白探针杂交获得的 RNA印迹结果的示意图；图41(a)是示出了 MRG1基因在正常外子宫颈组织、原发性子 宫癌组织和子宫癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图， 而图41(b)是示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白探针杂交获得 的RNA印迹结果的示意图；图42(a)是示出了 PIG22基因在正常肺组织、原发性肺癌组织 和肺癌细胞系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图42(b)是 示出了通过将该相同印迹与P -肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹 结果的示意图；图43(a)是示出了 MIG9基因在正常肺组织、原发性肺癌组织和 肺癌细胞系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图43(b)是示 出了通过将该相同印迹与P -肌动蛋白纟罙针杂交获得的RNA印迹结 果的示意图；图44(a)是示出了 MIG11基因在正常肺组织、原发性肺癌组织 和肺癌细胞系中差异表达的RNA印迹结果的示意图，而图44(b)是 示出了通过将该相同印迹与(3 -肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹 结果的示意图45(a)是示出了 MIG15基因在正常外子宫颈组织、原发性子 宫癌组织和子宫癌细月包系中差异表达的RNA印迹结果的示意图， 而图45(b)是示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白4笨针杂交获得 的RNA印迹结果的示意图；图46(a)是示出了 GIG1基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图46(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白纟笨针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图47(a)是示出了 GIG3基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图47(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图48(a)是示出了 GIG4基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图48(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-月几动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图49(a)是示出了 GIG5基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图49(b)是示出了通过将该相同印迹与 P -月几动蛋白纟笨针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图50(a)是示出了 GIG11基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图50(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图51(a)是示出了 MIG2基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图51(b)是示出了通过^夸该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图52(a)是示出了 MIG4基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图52(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图53(a)是示出了 PIG13基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图53(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图54(a)是示出了 PIG15基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图54(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图55(a)是示出了 PIG8基因在各种正常组织中差异表达的RNA 印迹结果的示意图，而图55(b)是示出了通过将该相同印迹与P-肌 动蛋白4果针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图56(a)是示出了 MRG1基因在各种正常iE织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图56(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图57(a)是示出了 PIG22基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图57(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图58(a)是示出了 MIG9基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图58(b)是示出了通过^1寻该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图59(a)是示出了 MIGll基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图59(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图60(a)是示出了 MIG15基因在各种正常组织中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图60(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图61(a)是示出了 GIG1基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图61(b)是示出了通过将该相同印迹与 月几动蛋白^笨针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图62(a)是示出了 GIG3基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图62(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白纟冢针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图63(a)是示出了 GIG4基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图63(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图64(a)是示出了 GIG5基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图64(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图65(a)是示出了 GIG11基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图65(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3 -月几动蛋白纟果针杂交获得的RNA印迹结果的示意图66(a)是示出了 MIG2基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图66(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3 -肌动蛋白4冢针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图67(a)是示出了 MIG4基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图67(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图68(a)是示出了 PIG13基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图68(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图69(a)是示出了 PIG15基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图69(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图70(a)是示出了 PIG8基因在各种癌细胞系中差异表达的RNA 印迹结果的示意图，而图70(b)是示出了通过将该相同印迹与(3-肌 动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图71(a)是示出了 MRG1基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图71(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图72(a)是示出了 PIG22基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图72(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白纟笨针杂交获得的RNA印迹结果的示意图； 图73(a)是示出了 MIG9基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图73(b)是示出了通过将该相同印迹与 P-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图74(a)是示出了 MIG11基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图74(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图75(a)是示出了 MIG15基因在各种癌细胞系中差异表达的 RNA印迹结果的示意图，而图75(b)是示出了通过将该相同印迹与 (3-肌动蛋白探针杂交获得的RNA印迹结果的示意图；图76是示出了野生型HeLa细胞、用GIG1基因转染的HeLa 子宫癌细^^和用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细^l包的生长曲线 的示意图；图77是示出了野生型A549肺癌细胞系、用GIG3基因转染的 A549肺癌细胞和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细爿包的生 长曲线的示意图；图78是示出了野生型A549肺癌细胞系、用GIG4基因转染的 A549肺癌细胞和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细胞的生 长曲线的示意图；图79是示出了野生型A549肺癌细胞系、用GIG5基因转染的 A549肺癌细月包和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细月包的生 长曲线的示意图80是示出了野生型MCF-7纟田月包、用GIG11基因转染的 MCF-7乳癌细胞和用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生 长曲线的示意图；图81是示出了野生型HeLa纟田月包、用MIG2基因專争染的HeLa 子宫癌细"包和用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包的生长曲线 的示意图；图82是示出了野生型HeLa细月包、用MIG4基因转染的HeLa 子宫癌细力包和用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包的生长曲线 的示意图；图83是示出了野生型A549肺癌细胞系、用PIG13基因转染的 A549肺癌细月包和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细月包的生 长曲线的示意图；图84是示出了野生型A549肺癌细胞系、用PIG15基因转染的 A549肺癌细力包和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细"包的生 长曲线的示意图；图85是示出了野生型HeLa细胞、用PIG8基因转染的HeLa 子宫癌细胞和用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞的生长曲线 的示意图；图86是示出了野生型HeLa纟田月包、用MRG1基因转染的HeLa 子宫癌细月包和用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包的生长曲线 的示意图； 图87是示出了野生型A549肺癌细胞系、用PIG22基因转染的 A549月节癌细刀包和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细月包的生 长曲线的示意图；图88是示出了野生型A549肺癌细胞系、用MIG9基因转染的 A549肺癌细J包和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细月包的生 长曲线的示意图；图89是示出了野生型A549肺癌细胞系、用MIG11基因转染 的A549肺癌细月包和用表达载体pcDNA3.1转染的A549肺癌细月包的 生长曲线的示意图；图90是示出了野生型HeLa纟田月包、用MIG15基因專争染的HeLa 子宫癌细胞和用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包的生长曲线 的示意图。
具体实施方式
下文中，^夺参照附图i羊细描述本发明。 1. GIG1本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 1的DNA序列的人类抑 癌基因l(GIGl),其以登记号AY268890保藏在美国国家卫生研究 所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31日)， 并且保藏的基因的部分DNA序列与以登记号NM_000391 j呆藏在该 凄t才居库中的智人婴儿晚期一申经元2蜡才羊脂^曷质沉积(詹-比二氏病 (Jansky-Bielschowsky disease )) ( CLN2 )的序歹'J 一致。
SEQ ID NO: 1的DNA序列具有一个对应于该DNA的石威基位 置800至1762 (碱基位置1760至1762代表终止密码子)的开放阅 读框(ORF )。由本发明的基因表达的蛋白质包括320个氨基酸残基，并具有 SEQ IDNO:2的氨基酸序列且分子量为约34 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQIDNO: 1中给出的DNA序列上的信息4艮据传统 方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌ia织或癌细月包系中 不被表达但在正常组织中被差异表达的382-bp cDNA片l炎(对应于 碱基位置3109至3490 ),可以利用SEQ ID NO: 3的随才几引物 H-AP38 ( 5'-AAGCTTCCAGTGC-3')和SEQ ID NO: 4的锚定寡-dT 引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3')，通过在乂人正常组织和癌组织 或癌细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR) 而获得，并且所得的片段(其一皮用作4罙针)可以与cDNA文库进行 嗟菌斑杂交(plaque-hybridized)而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选子宫、大脑、骨骼肌、脾、 肾、肝、胎盘、肺和外周血白细胞中被过表达以抑制致癌作用。本 发明的基因在这些组织中主要以具有约4.0 kb大小的mRNA转录 子一皮过表达，并且除了 4.0 kb mRNA转录子之外，具有约3.0 kb 大小的转录子也被表达。特别地，本发明的基因仅在正常组织中被 差异表达。例力o，本发明的基因在癌组织和癌细月包^o子宫癌ia织和子宫癌细月包系中,皮孩i弱表达或不^皮4全测到，而4又在正常组织中差异 表达。本发明的基因被引入其中的子宫癌细胞系表现出高的死亡率， 因此本发明的基因可以#皮有效用于治疗和预防癌症。2. GIG3本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 5的DNA序列的人类抑 癌基因3 ( GIG3 ),其以登记号AY423721保藏在美国国家卫生研究 所(NIH)的GenBank凄t寺居库中0>布日期2004年12月31日)， 并且保藏的基因的部分DNA序列与以登记号NMJ)03824保藏在该 凄丈据库中的智人Fas ( TNFRSF6 )相关的via死亡结构i或(FADD ) 的序列一致。SEQ ID NO: 5的DNA序列具有一个只于应于该DNA序列的石咸 基位置1至627 (碱基位置625至627代表终止密码子)的开放阅 读框(ORF )。由本发明的基因表达的蛋白包括208个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 6的氨基酸序列且分子量为约23 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 才艮据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 5中给出的DNA序列上的信息根据传统 方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细月包系中 不一皮表达^f旦在正常组织中净皮差异表达的190-bpcDNA片,殳，可以利 用SEQ ID NO: 7的随才几引物H-AP32 ( 5'-AAGCTTCTTGCAA-3') 和SEQ ID NO: 8的4苗定寡-dT引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3')， 通过在从正常组织和癌组织或癌细胞系提耳又的总RNA上实施反转 录聚合酶链反应(RT-PCR)而获得，并且所得的片段(其被用作探 针)可以与cDNA文库进4亍噬菌斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、肾和肝 中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要以具 有约1.3 kb大小的mRNA转录子被过表达，并且除了 4.0 kb mRNA
转录子之外，具有约0.7kb大小的转录子也一皮表达。特别地，本发 明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在癌组 织和癌细月包如月巿癌《且织、转移肺癌组织和月市癌细月包系(A549以及 NCI-H358 )中#皮4設弱表达或检测不到，而仅在正常肺组织中差异表 达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此 本发明的基因可以:故有效用于治疗和预防癌症。3. GIG4本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 9的DNA序列的人类抑 癌基因4 ( GIG4 ),其以登记号AY423722保藏在美国国家卫生研究 所(NIH)的GenBank凄t才居库中(^>布日期2004年12月31日)， 并且保藏的基因的DNA序列与以登记号NM一002870保藏在该凄丈据 库中的智人RAB13 (RAS癌基因家力矣的成员)(RAB13 )的序列一 致。与以前报道的RAB13的功能相反，而是从该研究结果发现， GIG4肺瘤抑制基因在各种人类肿瘤(包括肺癌)中^皮微弱表达， 而其表达在各种正常组织中一皮显著增加。SEQ ID NO: 9的DNA序列具有一个对应于该DNA序列的石咸 基位置2至613 (石咸基位置611至613代表终止密码子)的开方文阅 读框(ORF)。由本发明的基因表达的蛋白包括203个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 10的氨基酸序列且分子量为约23 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 9中给出的DNA序列上的信息才艮据传统
方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细月包系中被极孩吏弱表达但在正常组织中被差异表达的187-bpcDNA片段，可 以利用 SEQ ID NO: 11 的随机引物 H-AP35 (5'-AAGCTTCAGGGCA-3')和SEQ ID NO: 12的锚定寡-dT引物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'),通过在,人正常组织和癌组织或癌 细胞系4是取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片段(其被用作#笨针)可以与cDNA文库进4亍噬菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、肾和肝 中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要以具 有约1.3 kb大小的mRNA转录子^皮过表达。特别地，本发明的基 因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在癌组织和癌 细^5包如月市癌组织、转移肺癌组织和月申癌细月包系(A549和NCI-H358 ) 中被微弱表达，而仅在正常肺组织中差异地增加表达。本发明的基 因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此本发明的基因可 以浮皮有步文用于治疗和予贞防癌症。4. GIG5本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 13的DNA序列的人类 抑癌基因3 ( GIG3 ),其以登记号AY423723保藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 曰)，并且保藏的基因的DNA序列与以登记号ACCESSION NM一014412保藏在该数据库中转录变异体的智人钙周期素结合蛋 白(CACYBP )的序列一致。与以前报道的SIP的功能相反，而是从该研究结果发现，GIG5 肿瘤抑制基因在各种人类肿瘤(包括肺癌)中被微弱表达，而其表 达在各种正常组织中净皮显著增加。 SEQIDNO: 13的DNA序列具有一个对应于该DNA序列的石咸 基位置2至688 (碱基位置686至688代表终止密码子)的开放阅 读框(ORF )。由本发明的基因表达的蛋白质包括228个氨基酸残基，并具有 SEQIDNO: 14的氨基酸序列且分子量为约26 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 13中给出的DNA序列上的信息才艮据传 统方法进4亍筛选和克隆。作为另一个实例，在癌组织或癌细月包系中 4皮极孩i弱表达j旦在正常组织中一皮差异表达的212-bpcDNA片段，可 以利用 SEQ ID NO: 15 的 F逭才几引物 H-AP34 (5'-AAGCTTCAGCAGC-3')和SEQ ID NO: 16的4苗定寡-dT引物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3')，通过在乂人正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片段(其被用作探针)可以与cDNA文库进行噬菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、肾和肝 中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要以具 有约1.2 kb大小的mRNA转录子被过表达，并且除了 1.2 kb mRNA 转录子之外，具有约2.0kb大小的转录子也被表达。特别地，本发 明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在癌组 织和癌细力包如肺癌组织、转移肺癌组织和肺癌细力包系(A549和 NCI-H358 )中被微弱表达，而仅在正常肺组织中差异地增加表达。 本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此本发 明的基因可以一皮有^:用于治疗和预防癌症。5. GIG11
本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 17的DNA序列的人类 4中癌基因ll(GIGll)，其以登i己号AY451236保藏在美国国家卫生 研究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 曰)，并且保藏的基因的部分DNA序列与分别以登记号CR614679、 BC000666和AF132965都4呆藏在该凄史据库中的成对申经细月包瘤Cot 50-标准化的智人(人类)基因、智人硫氧还蛋白相关的跨膜蛋白2 基因和智人CGI-31蛋白mRNA基因的全长cDNA克隆体 CS0DD008YG11的序列一致。SEQ ID NO: 17的DNA序列具有一个只寸应于该DNA序列的磁^ 基位置16至768 (碱基位置766至768代表终止密码子)的开放阅 读才匡(ORF )。由本发明的基因表达的蛋白包括250个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 18的氨基酸序列且分子量为约29 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 17中给出的DNA序列上的信息根据传 统方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌《且织或癌细"包系 中不被表达但在正常组织中被差异增加表达的298-bp cDNA片段， 可以利用 SEQ ID NO: 19 的随才几引物 H-AP34 (5'-AAGCTTCGACGCT-3')和SEQ ID NO: 20的锚定寡-dT引物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3')，通过在从正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片段(其被用作探针)可以与cDNA文库进行p盆菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选乳房、大脑、心脏、肌肉、 胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中被过表达以抑制致癌作用。 本发明的基因在这些组织中主要以具有约1.5 kb大小的mRNA转 录子被过表达。特别地，本发明的基因仅在正常组织中被差异表达。 例如，本发明的基因在癌组织和癌细月包如乳癌组织、乳癌细月包系 MCF-7等中被微弱表达，而仅在正常乳房组织中差异地增加表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此 本发明的基因可以被有效用于治疗和预防癌症。6. MIG2SEQ ID NO: 21的DNA序列以登i己号AY237654 j呆藏在美国国 家卫生研究所(NIH)的GenBank lt据库中(乂>布日期2004年 12月31日)，并且DNA测序分析表明，保藏的基因的DNA序列 与以登记号D42043和NM—015150 XM—042841都^f呆藏在该lt才居库 中的智人KIAA0084 mRNA和智人筏连4妻蛋白(RAFTLIN )的序列 相似，并且其表达的氨基酸序列也与智人KIAA0084 mRNA和智人 寂连才妻蛋白(RAFTLIN)相似。SEQ ID NO: 21的DNA序列具有 一个对应于该DNA序列的石咸 基位置274至2010 (碱基位置2008至2010代表终止密码子)的开 》丈阅读才匡(ORF)。由本发明的基因表达的蛋白包括578个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 22的氨基酸序列且分子量为约63 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 21中给出的DNA序列上的信息才艮据传 统方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细月包系 中不被表达但在正常组织中被差异表达的311-bp cDNA片萃殳(对应
于石咸基^f立置2671至2981 )，可以利用SEQ ID NO: 23的随才几引物 H-AP35( 5'-AAGCTTCAGGGCA-3')和SEQ ID NO: 24的锚定寡-dT 引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3')，通过在乂人正常组织和癌组织 或癌细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR) 而获得，并且所得的片,爻(其#皮用作探针)可以与cDNA文库进行 嗟菌斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选子宫、心脏、骨骼肌、肾 和肝中#皮过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要 以具有约5.0 kb大小的mRNA转录子被过表达，并且除了 5.0 kb mRNA转录子之外，具有约2.0 kb大小的转录子也被表达。特别地， 本发明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在 癌组织和癌细月包如子宫癌组织和子宫癌细月包系中不净皮表达或#皮樣史 弱表达，而仅在正常子宫组织中差异地高度表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此 本发明的基因可以-故有,文用于治疗和预防癌症。7. MIG4本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 25的DNA序列的人类 抑癌基因(MIG4)，其以登记号AY260745 4呆藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 日)，并且表明了保藏的基因的DNA序列与以登记号NM—000688 保藏在该数据库中的转录突变体1基因的智人氨基酮戊酸盐5-合 酶1 ( ALAS 1 )的序列相似。SEQ ID NO: 25的DNA序列具有一个只十应于该DNA序列的石咸 基位置322至2244 (碱基位置320至322代表终止密码子)的开放 阅读冲匡(ORF)。
由本发明的基因表达的蛋白包括640个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 26的氨基酸序列且分子量为约70 kDa。
本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 才艮才居已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 25中纟合出的DNA序列上的信息才艮据传 纟充方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌ia织或癌细月包系 中不^皮表达但在正常组织中被差异表达的322-bp cDNA片,殳(对应 于石咸基^立置1908至2229)，可以利用SEQ ID NO: 27的随才几引物 H-AP31( 5'-AAGCTTGGTGAAC画3')和SEQ ID NO: 28的锚定寡-dT 引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'),通过在从正常组织和癌组织 或癌细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR) 而获得，并且所得的片,殳(其^皮用作探针)可以与cDNA文库进行 噬菌斑杂交而获〗寻全长cDNA克隆体。
认为本发明的基因在正常组织，优选子宫、大脑、心脏、骨骼 肌、大肠、脾、肾、肝、胎盘、肺和外周血白细胞中被过表达以抑 制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要以具有约0.5 kb大小 的mRNA转录子被过表达，并且除了 0.5 kbmRNA转录子之外， 具有约2.0kb大小的转录子也被表达。特别地，本发明的基因仅在 正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在癌组织和癌细胞如 子宫癌组织和子宫癌细月包系中不^皮表达或^皮樣i弱表达，而^又在正常 子宫组织中差异地高度表达。
本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此 本发明的基因可以#皮有凌文用于治疗和预防癌症。
8. PIG13
本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 29的DNA序列的人类 抑癌基因(PIG13)，其以登记号AY258286^f呆藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 日)，并且表明了 4呆藏的基因的DNA序列与分别以登记号 AK056487、 BC028567和AF312864都^f呆藏在该凄t据库中的智人 cDNAFLJ31925 fis、克隆体NT2RP7005493基因、智人染色体1开 力丈阅读才匡21、 mRNA ( cDNA克隆体MGC:16172 IMAGE:3635521 ) 基因和智人C1或f21 mRNA基因的序列相似。
SEQ ID NO: 29的DNA序列具有一个只t应于该DNA序列的石咸 基位置391至756 (碱基位置754至756代表终止密码子)的开放 阅读框(ORF)。
由本发明的基因表达的蛋白包括121个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 30的氨基酸序列且分子量为约14 kDa。
本发明的基因和蛋白可以,人人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 1中纟合出的DNA序列上的信息#4居传统 方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌《且织或癌细l包系中 不,皮表达j旦在正常组织中^皮差异表达的296-bpcDNA片li,可以利 用SEQ ID NO: 31的随才几引物H-AP6 ( 5'-AAGCTTGCACCAT-3') 和 SEQ ID NO: 32 的 4苗定寡 -dT 引 物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3')，通过在,人正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片段(其被用作4笨针)可以与cDNA文库进4亍噬菌 斑杂交而获4寻全长cDNA克隆体。
认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、脾、肾 和肝中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要
以具有约1.0 kb大小的mRNA转录子纟皮过表达，并且除了 1.0-kb mRNA转录子之外，具有约4.5 kb大小的转录子也被表达。期望地， 本发明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在 癌纟且织禾口癌细月包3口月市癌《且织、4争移月申癌《且织、肺癌细月包系(A549 和NCI-H358 )等中被微弱表达微弱，而仅在正常肺组织中差异地 高度表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡 率，因此本发明的基因可以 一皮有-丈用于治疗和预防癌症。
9. PIG15
本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 33的DNA序列的人类 抑癌基因(PIG15)，其以登记号AY258285保藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 曰)，并且表明了保藏的基因的DNA序列与分别以登记号L20941 和M97164保藏在该数据库中的人类铁蛋白重链mRNA基因和人 类铁蛋白重链mRNA基因的序列相似。
SEQ ID NO: 33的DNA序列具有一个乂于应于该DNA序列的石咸 基位置794至1345 (石咸基位置1343至1345代表终止密码子)的开 方丈阅读才匡(ORF )。
由本发明的基因表达的蛋白包括183个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 34的氨基酸序列且分子量为约21 kDa。
本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 33中给出的DNA序列上的信息才艮据传 统方法进行筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细胞系 中不被表达但在正常组织中被差异表达的327-bpcDNA片段，可以 利用SEQ ID NO: 35的随才几引物H-AP6 ( 5'-AAGCTTGCACCAT-3')
和 SEQ ID NO: 36 的 4苗定寡 -dT 引 物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3')，通过在乂人正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片革殳(其^皮用作:探针)可以与cDNA文库进4亍噬菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。
认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、脾、肾 和肝中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要 以具有约1.0 kb大小的mRNA转录子—皮过表达。特别地，本发明 的基因^又在正常组织中一皮差异表达。例如，本发明的基因在癌组织 和癌细月包如肺癌组织、转移肺癌组织、肺癌细月包系(A549和 NCI-H358 )等中被微弱表达微弱，而仅在正常肺组织中差异地高度 表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因 此本发明的基因可以:故有效用于治疗和预防癌症。
10. PIG8
本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 37的DNA序列的人类 4中癌基因(PIG8)，其以登记号AY239292 ^呆藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 曰)，并且表明了保藏的基因的DNA序列与分别以登记号D42054、 AP001877和NM—014679 XM—374925都保藏在该数据库中的智人 KIAA0092 m認A、智人基因组DNA、染色体11克隆体:CTD-2564P9 和智人translokin (KIAA0092)基因的序列相似。
SEQ ID NO: 37的DNA序列具有一个对应于该DNA序列的^5咸 基位置140至1642 U威基位置1640至1642代表终止密码子)的开 放阅读框(ORF)。
由本发明的基因表达的蛋白包括500个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 38的氨基酸序列且分子量为约57 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 37中给出的DNA序列上的信息才艮据传 统方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌《且织或癌细月包系 中不一皮表达^f旦在正常组织中^皮差异表达的362-bp cDNA片,殳(对应 碱基位置2586至2947)，可以利用SEQ ID NO: 39的随才几引物 H-AP36( 5'-AAGCTTGGTGAAC-3')和SEQ ID NO: 40的4苗定寡-dT 引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'),通过在乂人正常组织和癌组织 或癌细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR ) 而获得，并且所得的片段(其被用作探针)可以与cDNA文库进行 噬菌斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选子宫、大脑、心脏、骨駱 肌、肝、胎盘和外周血白细胞中被过表达以抑制致癌作用。本发明 的基因在这些组织中主要以具有约4.5 kb大小的mRNA转录子,皮过 表达。特别地，本发明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如， 本发明的基因在癌l且织和癌细月包如子宫癌《且织禾口子宫癌细月包系中 不被表达或被微弱表达微弱，而仅在正常子宫组织中差异地高度表 达。本发明的基因被引入其中的子宫癌细胞系表现出高的死亡率， 因此本发明的基因可以#皮有效用于治疗和预防癌症。11. MIG1本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 41的DNA序列的人类 抑癌基因(MIG1),其以登记号AY423731保藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 曰)，并且保藏基因的部分DNA序列与分别以登记号NM—002436
和BC002392保藏在该数据库中的智人膜蛋白、棕榈酰化1 、 55 kDa 基因(MPP1)基因和智人膜蛋白、棕榈酰化1、 55 kDa基因的序列一致。
SEQ ID NO: 41的DNA序列具有一个只于应于该DNA序列的石咸 基位置27至1427 U咸基位置1425至1427代表终止密码子)的开 方i阅读才匡(ORF)。
由本发明的基因表达的蛋白包括466个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 42的氨基酸序列且分子量为约52 kDa。
本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 41中给出的DNA序列上的信息根据传 统方法进行筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细胞系 中不被表达但在正常组织中4皮差异表达的277-bp cDNA片段(对应 于石咸基^f立置1123至1399 )，可以利用SEQ ID NO: 43的随冲几引物 H-AP21 ( 5'-AAGCTTTCTCTGG-3')和SEQ ID NO: 44的锚定寡-dT 引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3')，通过在/人正常组织和癌组织 或癌细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR ) 而获得，并且所得的片,殳(其4皮用作纟笨针)可以与cDNA文库进一亍 噬菌斑杂交而获得全长cDNA克隆体。
认为本发明的基因在正常组织，优选子宫、大脑、骨骼肌、脾、 肾、肝、胎盘、肺和外周血白细胞中被过表达以抑制致癌作用。本 发明的基因在这些组织中主要以具有约5.0 kb大小的mRNA转录 子,皮过表达，并且除了 5.0-kb mRNA转录子之外，具有约2.0 kb 大小的转录子也被表达。特别地，本发明的基因仅在正常组织中被 差异表达。例如，本发明的基因在癌组织和癌细胞如子宫癌组织和 子宫癌细胞系中不一皮表达或一皮孩史弱表达樣i弱，而^f又在正常子宫组织
中差异地高度表达。本发明的基因被引入其中的子宫癌细胞系表现 出高的死亡率，因此本发明的基因可以 一皮有效用于治疗和预防癌症。12. PIG22本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 45的DNA序列的人类 抑癌基因(PIG22),其以登记号AY423729保藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年12月31 曰)，并且表明了保藏的基因的DNA序列与分别以登记号 BC043209、 AK023913和AB085827都4呆藏在该凄t据库中的智人 cDNA克隆体IMAGE:5295100基因、智人cDNA FLJ13851 fis、克 隆体THYRO1000926、高度类似于智人cAMP-特异性磷酸二酯酶 8B(PDE8B)基因和用于磷酸二酯酶8B4基因的智人HSPDE8B4 mRNA的序列相似。然而，从该研究结果发现，PIG22肿瘤抑制基 因在各种人类肿瘤包括肺癌中被微弱，而其表达在各种正常组织中 -波显著增力口。SEQ ID NO: 45的DNA序列具有一个^f应于该DNA序列的》威 基位置11至1063 (;成基位置1061至1063代表终止密码子)的开 ;改阅读才匡(ORF)。由本发明的基因表达的蛋白包括350个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 46的氨基酸序列且分子量为约40 kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 45中给出的DNA序列上的信息根据传 统方法进行筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细胞系 中不被表达但在正常组织中被差异表达的242-bpcDNA片段，可以
利用SEQ ID NO: 47的随才几引物H-AP24( 5'-AAGCTTCACTAGC-3') 和 SEQ ID NO: 48 的 4苗定寡 -dT 引 物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'),通过在从正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片段(其被用作探针)可以与cDNA文库进行嗟菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、肝和胎 盘中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要以 具有约5 kb大小的mRNA转录子#皮过表达，并且除了 5-kb mRNA 转录子之外，具有约2.0kb大小的转录子也被表达。特别地，本发 明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的基因在癌组 织和癌细月包如月市癌*且织、4争移月市癌《且织、月市癌细月包系(A549和 NCI-H358 )等中被微弱表达，而仅在正常肺组织中差异地高度表达。 本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡率，因此本发 明的基因可以 一皮有效用于治疗和预防癌症。13. MIG9本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 49的DNA序列的人类 抑癌基因(MIG9 ),其以登记号AY423724 ^f呆藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBanktt据库中(^>布日期2004年12月31 日)，并且表明了 ^f呆藏基因的DNA序列与分别以登记号 NM—005980、 AF539739和BC006819都^f呆藏在该tt据库中的智人 S100 4丐结合蛋白P (S100P)基因、智人钙结合S100蛋白m脂A 基因和智人S100《丐结合蛋白P基因的序列一致。SEQ ID NO: 49的DNA序列具有一个只于应于该DNA序列的碱< 基位置50至316 U成基位置314至316代表终止密码子)的开方丈阅 读才匡(ORF)。
由本发明的基因表达的蛋白包括88个氨基酸残基，并具有SEQ ID NO: 50的氨基酸序列且分子量为约10kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 49中纟会出的DNA序列上的信息才艮据传 统方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌la织或癌细月包系 中一皮极微弱表达但在正常组织中,皮差异表达的178-bpcDNA片段， 可以利用 SEQ ID NO: 51 的随才几引物 H-AP12 (5'-AAGCTTGAGTGCT-3')和SEQ ID NO: 52的4苗定寡-dT引物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3')，通过在乂人正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片革殳(其一皮用作纟笨针)可以与cDNA文库进4于噬菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、肾、肝、 胎盘和外周血中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组 织中主要以具有约5kb大小的mRNA转录子被过表达，并且除了 5-kb mRNA转录子之外，具有约2 kb大小的转录子也被表达。特 别地，本发明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明的 基因在癌组织和癌细胞如肺癌组织、转移肺癌组织、肺癌细胞系 (A549和NCI-H358 )等中一皮4鼓弱表达，而4又在正常肺组织中差异 地高度表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡 率，因》匕本发明的基因可以#皮有岁文用于治疗和预防癌症。14. MIG11本发明的基因是一种具有SEQ ID NO: 53的DNA序列的人类 抑癌基因(MIGll)，其以登记号AY423726保藏在美国国家卫生研 究所(NIH)的GenBank数据库中">布日期2004年12月31
日)，并且表明了保藏基因的DNA序列与以登记号NM—005943保 藏在该数据库中的转录子变异体1基因的NM_005943智人钼辅因 子合成1 (MOCS1 )的序列相似。然而，从该研究结果发现MIGll 肺瘤抑制基因在各种人类肿瘤包括肺癌中被微弱表达，而其表达在 各种正常组织中一皮显著增加。SEQ ID NO: 53的DNA序列具有一个对应于该DNA序列的石咸 基位置7至756 (石咸基位置754至756代表终止密码子)的开i文阅 读框(ORF)。由本发明的基因表达的蛋白包括249个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 54的氨基酸序列且分子量为约27kDa。本发明的基因和蛋白可以,人人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 53中给出的DNA序列上的信息根据传 统方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细胞系 中被极微弱表达但在正常组织中被差异表达的212-bp cDNA片段， 可以利用 SEQ ID NO: 55 的随机引物 H-AP13 (5'-AAGCTTCGGCATA-3')和SEQ ID NO: 56的锚定寡-dT引物 (5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3')，通过在/人正常组织和癌组织或癌 细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR)而获 得，并且所得的片l殳(其4皮用作纟罙针)可以与cDNA文库进4亍噬菌 斑杂交而获得全长cDNA克隆体。认为本发明的基因在正常组织，优选肺、心脏、肌肉、脾、肾、 肝、胎盘和外周血中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这 些组织中主要以具有约5kb大小的mRNA转录子被过表达，并且除 了 5-kbmRNA转录子之外，具有约2 kb大小的转录子也被表达。 特别地，本发明的基因仅在正常组织中被差异表达。例如，本发明
的基因在癌组织和癌细月包如肺癌组织、转移肺癌组织、肺癌细月包系(A549和NCI-H358 )等中一皮樣i弱表达，而^f又在正常月市组织中差异 地高度表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡 率，因此本发明的基因可以被有效用于治疗和预防癌症。15. MIG15SEQ ID NO: 57的DNA序列以登i己号AY423730 {呆藏在美国国 家卫生研究所(NIH)的GenBank数据库中(公布日期2004年 12月31日)，并且DNA测序分析表明，保藏基因的DNA序列与 分另'J以登i己号BC000961、 NM—003676牙口 AF466375者卩寸呆藏在"i亥凄t 据库中的智人退化精母细胞同系物1、脂质去饱和酶(Drosophila)(DEGS1)、转录变异体1、 m脂A (cDNA克隆体MGC:5079 IMAGE:3450936)基因；智人退化精母细胞同系物1,脂质去饱和酶(Drosophila ) ( DEGS1 )、转录变异体1基因；和智人鞘类磷脂5 4 去々包和酶蛋白DES1 mRNA基因的序列相似。SEQ ID NO: 57的DNA序列具有一个只于应于该DNA序列的磁^ 基位置78至1049 (碱基位置1047至1049代表终止密码子)的开 放阅读框(ORF)。由本发明的基因表达的蛋白包括323个氨基酸残基，并具有 SEQ ID NO: 58的氨基酸序列且分子量为约38kDa。本发明的基因和蛋白可以从人类组织分离得到，或者也可以是 根据已知的用于合成DNA或肽的方法合成的。例如，本发明的基 因可以基于在SEQ ID NO: 57中给出的DNA序列上的信息才艮据传 统方法进4亍筛选和克隆的。作为另一个实例，在癌组织或癌细l包系 中不被表达但在正常组织中被差异表达的327-bp cDNA片段(对应 于石咸基^f立置1673至1999)，可以利用SEQ ID NO: 59的随才几引物
H-AP31 ( 5'-AAGCTTGGTGAAC-3')和SEQ ID NO: 60的锚定寡-dT 引物(5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'),通过在乂人正常组织和癌组织 或癌细胞系提取的总RNA上实施反转录聚合酶链反应(RT-PCR ) 而获得，并且所得的片段(其被用作探针)可以与cDNA文库进行 噬菌斑杂交而获得全长cDNA克隆体。同时，因为密码子的简并或考虑优选用于活的有机物的密码子 以表达基因，所以本发明的基因可以在没有改变由编码区表达的蛋 白的氨基酸序列的情况下在该便民区中进行各种〗奮饰，并且可在除 了在不影响基因表达的范围内的编码区的区域中进行各种修饰或 改变。这样Y务饰的基因也包括在本发明的范围内。因此，本发明还 包括具有与该基因基本上相同的DNA序列的多核苷酸；以及该基 因的片4殳。术语"基本上相同的多核苷酸"是指具有至少80%、优 选至少90% ,并且最优选至少95%的DNA序列同源性的多核苷酸。而且， 一个或多个氨基酸也可在不影响蛋白功能的范围内在该 蛋白的氨基酸序列中进行取代、插入或缺失，并且仅一些蛋白部分 可根据它们的用途被利用。这样修饰的氨基酸序列也包括在本发明 的范围内。因此，本发明也包括具有与该蛋白基本上大致相同的氨 基酸序列的多肽；以及该蛋白的片段。术语"基本上相同的多肽" 是指具有至少8(T/。、优选至少90%、并且最优选至少95%的序列 同源性的多肽。由此制备的基因可以插入本领域已知的用于在微生物或动物 细胞中表达的每一个载体中以获得表达载体，然后基因的DNA可 以大量地进行复制或其蛋白可以通过将每一个表达载体引入合适 的宿主细胞例如大肠杆菌、Hela细胞系等中来以商业量进行生产。 通过构建表达载体，DNA调节序列如启动子和终止子、自动复制 序列、分泌信号等可以根据生产该基因或蛋白的宿主细胞种类进行 合适的选4奪和组合。 认为本发明的基因在正常组织，优选子宫、心脏、骨骼肌、胸 腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和外周血白细胞中被过表达以抑制致癌作用。本发明的基因在这些组织中主要以具有约9.5 kb大小的 mRNA转录子被过表达。特别地，本发明的基因仅在正常组织中被 差异表达。例如，本发明的基因在癌组织和癌细月包如子宫癌组织和 子宫癌细月包系中不^皮表达或^皮;微弱表达，而4义在正常月申組织中差异 地高度表达。本发明的基因被引入其中的癌细胞系表现出高的死亡 率，因此本发明的基因可以 一皮有效用于治疗和预防癌症。下文中，将参照优选实施例详细描述本发明。因此，本文中提 出的描述是仅用于描述目的的优选实施例，而不用于限制本发明的 范围。基准(对照)实施例总RNA的分离总RNA才羊品利用总RNA 4是耳又试剂盒(Qiagen Inc., Germany )， 然后将污染的DNA利用信息清洁纯化试剂盒(message clean kit) (GenHunter Corp., MA, U.S.)从RNA样品除去。实施例1:总RNA的分离和mRNA的差异显示1-1. GIG1感兴趣的基因的差异表达在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌纟且织和子宫癌细月包系中冲企测:^下。正常外子宫颈ia织才羊品在子宫士刀 除术过程中获自患有子宫肿瘤的患者，而原发性子宫瘤组织样品和 转移骼淋巴结肿瘤组织样品在根治性子宫切除术过程中获自患有 子宫癌的患者(其在外科手术之前没有进4于过方t射和/或抗癌疗法)。将CUMC-6 (Kim, J. W. " a/.， G戸co/. (9腳/. 62: 230-240， 1996 )
用作人类子宫癌细月包系。总RNA才羊品以如在基准实施例中描述的 相同方式分离自这些组织和细月包。才艮才居在/>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., Sc/e"ce, 212， 967-971 (1992)以及Liang, R et al" 6966-6968 (1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA才羊品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(RNAimage试剂 盒，GenHunter ),将0.2 ju g的总RNA用SEQ ID NO: 4的锚定寡-dT 引物进4亍反转录，然后利用相同的4苗定寡-dT引物和SEQ ID NO: 3 的P逸才几5， 13-石咸基引4勿H-AP38 ( RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, U.S.)，在0.5 mM [ oc -35S]-标i己的dATP (1,200 Ci/mmol) 存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反应共40个扩增 循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在4(TC下2分钟的退火步 骤和在72。C下40秒的扩展步骤，以及接下来的一个72。C下5分钟 的扩展步骤。扩增的片段在6 %聚丙烯酰胺凝胶中电泳以进行DNA 测序，然后进行放射自显影。图1示出了利用SEQ ID NO: 3的随机5， 13-石成基引物H-AP38 和SEQIDNO: 4的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图1中，泳道1 表示正常外子宫颈组织；泳道2表示子宫癌组织；泳道3表示转移 骼淋巴结组织；泳道4表示子宫癌细胞系CUMC-6。如图1所示， 证实了 382-bpcDNA片段在子宫癌组织、转移骼淋巴结组织和子宫 癌细月包系CUMC-6中不一皮表达，而^又在正常外子宫颈组织中#1差异 表达。该cDNA片4史命名为CG381。将382-bp带(CG381片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以 洗脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实 施PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不^f吏用[oc-"S]-标记的 dATP和20 ju M dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的 cDNA片段CG381克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测 序酶2.0 X反DNA测序系纟克(United States Biochemical Co.)确定其 DNA序列。1-2, GIG3感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细胞系中冲企测如下。正常肺组织样品、肺癌组织样品和转移肺癌组织一羊品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国 典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细胞系。 总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 禾口纟田月包。才艮才居在7>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., 5We"ce, 212， 967-971 (1992)以及Liang, P. et al., ， 12， 6966-6968(1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(RNAimage试剂 盒，GenHunter ),将0.2 m g的该总RNA用SEQ ID NO: 8的4苗定寡 -dT引物进4亍反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 7的卩逸才几5， 13-石成基引4勿H-AP32( RNAimage primer set 1， GenHunter Corporation, U.S.)，在0.5 mM [ a -35S]-标记的dATP (1,200 Ci/mmol) 存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反应共40个扩增 循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在4(TC下2分钟的退火步 骤和在72。C下40秒的扩展步骤，以及接下来的一个72。C下5分钟 的扩展步骤。扩增的片段在6 %聚丙烯酰胺凝胶中电泳以进行DNA 测序，然后进4于力文射自显影。图2示出了利用SEQ ID NO: 7的随机5'13-碱基引物H-AP32 和SEQ ID NO: 8的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图2中，泳道1 表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌组织；
泳道4表示肺癌细月包系A549。如图2所示，i正实了 190-bp cDNA 片l史在月市癌《且织、4争移月市癌会且织和月申癌细月包系中不^皮表达，而4又在 正常月市《且织中一皮差异表达。该cDNA片段命名为L935。将190-bp带(L935片段)从干凝月交中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA ，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不使用[oc-"S]-标记的dATP 和20 ju M dNTP。利用TA克隆系统(Promega ) ^j寻再扩增的cDNA 片段L935克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0 片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序 列。1-3. GIG4正常肺组织才羊品、肺癌组织才羊品和转移肺癌组织才羊品以在实施 例1-2中描述的相同方式在外科手术过程中获自肺癌患者。总RNA 样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织和细胞。才艮4居在7>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., <SWewce, 257, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al" C維er /^.， 6966-6968 (1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA 4羊品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(RNAimage试剂 盒，GenHunter ),将0.2 ju g的该总RNA用SEQ ID NO: 12的锚定寡 -dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 11 的随才几5， 13画石咸基引4勿H-AP35 (RNAimage primer set 1， GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ cx-358]-标^己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分钟的退火步骤和在72。C下40秒的扩展步骤，以及接下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进行DNA测序，然后进行放射自显影。图3示出了利用SEQIDNO: 11的随机5，13-石咸基引物H-AP35 和SEQ ID NO: 12的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图3中，泳道 1表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌组 织；泳道4表示肺癌细i包系A549。如图3所示，i正实了 187-bp cDNA 片段(全长GIG4基因序列的碱基位置从435到621 )在肺癌组织、 转移肺癌组织和肺癌细胞系中,皮樣吏弱表达，而^又在正常肺组织中#皮 差异表达。该cDNA片段命名为L951。将187-bp带(L951片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不使用[a-"S]-标记的dATP 和20 ju M dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的cDNA 片段L951克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0 片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序 列。1-4. GIG5感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细月包系中4佥测如下。正常肺组织才羊品、肺癌组织 样品和转移肺癌组织样品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国 典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细胞系。 总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 牙口纟田月包。
根据在公开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., 5Wewce， ^12， 967-971 (1992)以及Liang, R et al., C"膨r ^2， 6966-6968(1993))中描述的》务饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(RNAimage试剂 盒，GenHunter )，将0.2 ju g的该总RNA用SEQ ID NO: 16的锚定寡 -dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 15的P逭才几5， 13-石威基引4勿H-AP32 (RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, U.S.)，在0.5 mM [cx-35S]-标记的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分4t的退火步艰《和在72。C下40秒的扩展步-骤，以及4妾下来的 一个72°C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6 %聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进行DNA测序，然后进4亍方文射自显影。图4示出了利用SEQIDNO: 15的随机5， 13-石威基引物H-AP34 和SEQIDNO: 16的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图4中，泳道 1表示正常爿申组织；泳道2表示力申癌组织；泳道3表示转移肺癌组 织；泳道4表示月市癌细月包系A549。如图4所示，i正实了 212-bp cDNA 片段(全长GIG5基因序列的碱基位置从497到708 )在肺癌组织、 转移肺癌组织和肺癌细胞系中不被表达，而仅在正常肺组织中^皮差 异表达。该cDNA片段命名为L952。将212-bp带(L952片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA,然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不使用[oc-"S]-标记的dATP 和20juMdNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的cDNA 片段L935克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0 片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序 列。 1-5. GIG11感兴趣的基因的差异表达在正常乳房组织、原发性乳癌组织和 乳癌细月包系中4企测如下。正常乳房组织样品在乳房切除术过考呈中获自乳癌患者。而原发 性乳癌组织在根治性乳房切除术过程中获自患有子宫癌的患者(其 在外科手术之前没有进;f亍过方文射和/或抗癌疗法。将MCF-7 (美国典 型i咅养物收藏中心；ATCC号HTB-22)用作人类乳癌细月包系。总RNA 样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织和细胞。才艮才居在7>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., Sc/ewce， 212, 967-971 (1992)以及Liang， R et al., Ca"cer 12, 6966-6968(1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(RNAimage试剂 盒，GenHunter ),将0.2 ju g的该总RNA用SEQ ID NO: 20的锚定寡 -dT引物进4亍反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 19的F逸才几5， 13 —石咸基引计勿H—AP36 (RNAimage primer set 1， GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [a-35S]-标i己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分钟的退火步骤和在72。C下40秒的扩展步骤，以及接下来的 一个72°C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6 %聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍》文射自显影。图5示出了利用SEQ ID NO: 3的随机5，13-石咸基引物H-AP36 和SEQ ID NO: 4的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图5中，泳道1 、 2和3表示正常乳房组织；泳道4、 5和6表示乳癌组织；而泳道7 表示乳癌细胞系MCF-7。如图5所示，i正实了 298-bpcDNA片段(全 长GIG11基因序列的碱基位置从741到1038 )在乳癌组织和乳癌
细月包系中被4敬弱表达，而^又在正常乳房组织中被差异表达。该cDNA 片,史命名为BBCC311N。将298-bp带(BBCC311N片段)从干凝胶中取出，煮沸15分 钟以洗脱cDNA,然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件 下实施PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不Y吏用[oc -35S]-才示i己 的dATP和20 |u M dNTP。利用TA克隆系统(Promega ) ^!寻再扩增 的cDNA片4殳BBCC311N克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后 利用测序酶2.0版DNA测序系统(United States Biochemical Co.) 确定其DNA序列。1-6. MIG2感兴趣的基因的差异表达在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 纟且织和子宫癌细月包系中4全测力口下。正常外子宫颈《且织冲羊品在子宫士刀 除术过程中获自患有子宫肿瘤的患者，而原发性子宫瘤组织样品和 转移骼淋巴结肿瘤组织样品在才艮治性子宫切除术过程中获自患有 子宫癌的患者(其在外科手术之前没有进行过放射和/或抗癌疗法)。 将CUMC-6 ( Kim， J. W. " a/.， G戸co/. (9歸/. 62: 230-240, 1996 ) 用作人类子宫癌细胞系。总RNA样品以如在基准实施例中描述的 相同方式分离自这些组织和细月包。才艮氺居在乂>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., S"'ewce, 967-971 (1992);以及Liang, P. et al., ■ ， 12， 6966-6968(1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(RNAimage试剂 盒，GenHunter ),将0.2 ju g的该总RNA用SEQ ID NO: 24的锚定寡 -dT引物进一亍反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 23的随才几5， 13-石咸基引4勿H-AP35 (RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [a-35S]-标i己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分钟的退火步骤和在72。C下40秒的扩展步骤，以及接下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍》文射自显影。图6示出了利用SEQIDNO:23的随才几5， 13-石威基引物H-AP35 和SEQ ID NO: 24的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图6中，泳道 1表示正常外子宫颈组织；泳道2表示子宫癌组织；泳道3表示转 移骼淋巴结组织；泳道4表示子宫癌细胞系CUMC-6。如图6所示， 证实了 311-bpcDNA片段在子宫癌组织、转移骼淋巴结组织和子宫 癌细月包系CUMC-6中不#1表达，而4义在正常外子宫颈组织中一皮差异 表达。该cDNA片)殳命名为CA352。将311-bp带(CA352片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以 洗脱cDNA ，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实 施PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不使用[oc-"S]-标记的 dATP和20 ju M dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的 cDNA片4爻CA352克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测 序酶2.0 X反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其 DNA序列。1-7. MIG4感兴趣的基因的差异表达在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 纟且织和子宫癌细月包系中冲企测i口下。正常外子宫颈《且织4羊品在子宫切 除术过程中获自患有子宫肿瘤的患者，而原发性子宫瘤组织样品和 转移骼'淋巴结肿瘤组织样品在才艮治性子宫切除术过程中获自患有 子宫癌的患者(其在外科手术之前没有进行过放射和/或抗癌疗法)。 将CUMC-6 ( Kim， J. W. " "/ ， G戸co/. 6>歸/. 62: 230-240， 1996 )
用作人类子宫癌细胞系。总RNA样品以如在基准实施例中描述的 相同方式分离自这些组织和细月包。才艮才居在/>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B" 6Wewce， 212, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al" 12, 6966-6968(1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA才羊品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter ),将0.2 ju g的该总脂A用SEQ ID NO: 28的锚定 寡-dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 27的f遺才几5， 13-石成基引物H-AP31 (RNAimage primer set 5， GenHunter Corporation, U.S.)，在0.5 mM [ a -358]-标"^己的dATP (1，200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分钟的退火步骤和在72。C下40秒的扩展步骤，以及一妾下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍i文射自显影。图7示出了利用SEQ ID NO: 27的随机5'13-石咸基引物H-AP31 和SEQIDNO:28的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图7中，泳道 1表示正常外子宫颈组织；泳道2表示子宫癌组织；泳道3表示转 移格淋巴结组织；泳道4表示子宫癌细胞系CUMC-6。如图7所示， 证实了 322-bpcDNA片段在子宫癌组织、转移骼淋巴结组织和子宫 癌细月包系CUMC-6中不,皮表达，而4又在正常外子宫颈《且织中净皮差异 表达。该cDNA片,殳命名为MA41 。将322-bp带(MA41片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以 洗脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实 施PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不使用[a-35S]-标记的 dATP和20mM dNTP。利用TA克隆系统(Promega ) 一t再扩增的 cDNA片l殳MA41克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序
酶2.0片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA 序列。1-8. PIG13感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细胞系中4企测如下。正常肺组织样品、肺癌组织 样品和转移肺癌组织样品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国 典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细胞系。 总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 禾口纟田月包。才艮才居在/>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B.， S"'e"ce, 257, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al., Owcw 2， 6966-6968(1993))中描述的^f奮饰方法，利用分离自所述组织和细月包的每一个 总RNA才羊品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter ),将0.2 |u g的该总RNA用SEQ ID NO: 32的锚定 寡-dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 31的随机5, 13-石咸基引物H-AP6 (RNAimage primer set 1， GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ oc陽358]一才示^己^| dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分4中的退火步-骤和在72。C下40秒的扩展步-骤，以及4妻下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍i文射自显影。图8示出了利用SEQ ID NO: 31的随才几5'13-石咸基引物H-AP6 和SEQ ID NO: 32的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图8中，泳道 1表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌组 织；泳道4表示肺癌细月包系A549。如图8所示，i正实了 296-bp cDNA 片段(全长PIG13基因序列的碱基位置从643到938 )在肺癌组织、 转移肺癌组织和肺癌细胞系中不被表达或微弱表达，而仅在正常肺 组织中4皮差异表达。该cDNA片,殳命名为L50-211 。将296-bp带(L50-211片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟 以洗脱cDNA,然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下 实施PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不使用[a-"S]-标记的 dATP和20 m M dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的 cDNA片#殳L50-211克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测 序酶2.0片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其 DNA序列。1-9. PIG15感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细月包系中才企测如下。正常肺组织样品、肺癌组织 样品和转移肺癌组织样品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国 典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细胞系。 总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 和细胞。才艮才居在7>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., 5We"ce, 212, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al., C麵w細.，12, 6966-6968 (1993))中描述的^奮饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter )，将0.2 ju g的该总RNA用SEQ ID NO: 36的锚定 寡-dT引物进4亍反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 35的卩逭才几5， 13-义威基引净勿H-AP6 (RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ oc-358]-标记的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分钟的退火步-骤和在72。C下40秒的扩展步艰难，以及4妻下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙蜂酰胺凝胶 中电;永以进4亍DNA测序，然后进4亍》文射自显影。图9示出了利用SEQ ID NO: 35的随机5'13-石咸基引物H-AP6 和SEQ ID NO: 36的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图9中，泳道 1表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌组 织；泳道4表示肺癌细月包系A549。如图9所示，i正实了 327-bp cDNA 片段(全长PIG15基因序列的碱基位置从1373到1699)在肺癌组 织、转移肺癌组织和肺癌细胞系中不被表达或微弱表达，而仅在正 常肺组织中被差异表达。该cDNA片段命名为L50。将327-bp带(L50片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA,然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不4吏用[cc -358]-才示{己的dATP 和20 |u M dNTP。利用TA克隆系统(Promega ) 一寻再扩增的cDNA 片段L50克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0版 DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序列。1-10. PIG8感兴趣的基因的差异表达在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 组织和子宫癌细月包系中4全测3。下。正常外子宫颈《且织才羊品在子宫切 除术过程中获自患有子宫肿瘤的患者，而原发性子宫瘤组织样品和转移骼淋巴结肿瘤组织样品在4艮治性子宫切除术过程中获自患有 子宫癌的患者(其在外科手术之前没有进4于过^:射和/或抗癌疗法)。 将CUMC-6 (Kim， J. W. et al. Gynecol. Oncol. 62: 230-240， 1996 )
用作人类子宫癌细胞系。总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些《且织,口细月包。才艮|居在乂>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B.， 5Wewce, 252, 967-971 C1992)以及Liang， R et al" C薩er g, 6966-6968(1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter )，将0.2 ja g的该总RNA用SEQ ID NO: 40的锚定 寡-dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 39的随才几5， 13-石成基引物H-AP36 (RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [oc-358]-标^己的dATP (1，200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分^t的退火步吞聚和在72。C下40秒的扩展步-骤，以及〗妄下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝月交 中电泳以进4亍DNA测序，然后进行力文射自显影。图10示出了利用SEQIDNO: 39的随机5，13-碱基引物H-AP36 和SEQ ID NO: 40的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图10中，泳 道1表示正常外子宫颈组织；泳道2表示子宫癌组织；泳道3表示 專争移骼'淋巴结《且织；泳道4表示子宫癌细月包系CUMC-6。如图10 所示，证实了 362-bpcDNA片段在子宫癌组织、转移骼淋巴结组织和子宫癌细月包系CUMC-6中不4皮表达，而《义在正常外子宫颈ia织中被差异表达。该cDNA片段命名为CA361 。将362-bp带(CG361片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以 洗脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实 施PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不使用[oc-"S]-标记的 dATP和20 ju M dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的 cDNA片段CG361克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测
序酶2.0片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其 DNA序列。l陽ll. MRG1感兴趣的基因的差异表达在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌纟且织和子宫癌细月包系中4企测3口下。正常外子宫颈ia织才羊品在子宫切 除术过程中获自患有子宫肿瘤的患者，而原发性子宫瘤组织样品和 转移骼淋巴结肿瘤组织样品在根治性子宫切除术过程中获自患有 子宫癌的患者(其在外科手术之前没有进4于过方文射和/或抗癌疗法)。将CUMC-6 (Kim， J. W. " a/.， G戸co/. (9腳/. 62: 230-240, 1996 )用作人类子宫癌细胞系。总RNA样品以如在基准实施例中描述的 相同方式分离自这些组织和细月包。才艮才居在乂>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B.， Sc/e"ce, 211, 967-971 (1992)以及Liang, R et al" C騰e尸We ., 12, 6966-6968 (1993))中描述的》务饰方法，利用分离自所述组织和细月包的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter )，将0.2 n g的该总RNA用SEQ ID NO: 44的锚定 寡-dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 43的随才几5， 13-;成基引物H-AP21 (脂Aimage primer set 5， GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [a-35S]-标i己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步备聚、在40°C 下2分4中的退火步-银和在72。C下40秒的扩展步-骤，以及4妻下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝月交 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍力文射自显影。图11示出了利用SEQIDNO: 43的随机5， 13-石咸基引物H-AP21 和SEQ ID NO: 44的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图11中，泳道1表示正常外子宫颈组织；泳道2表示子宫癌组织；泳道3表示 转移駱淋巴结组织；泳道4表示子宫癌细月包系CUMC-6。如图11 所示，证实了 277-bpcDNA片段在子宫癌组织、转移然淋巴结组织 和子宫癌细月包系CUMC-6中不一皮表达，而^叉在正常外子宫颈《且织中 一皮差异表达。该cDNA片段命名为MG21 。将277-bp带(MG21片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以 洗脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实 施PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不使用[ot-"S]-标记的 dATP和20 m M dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的 cDNA片|殳MG21克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序 酶2.0片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA 序歹'J 。1-12. PIG22感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细l包系中才全测如下。正常肺组织才羊品、肺癌组织 样品和转移肺癌组织样品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国 典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细胞系。 总RNA才羊品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 禾口纟田月包。才艮才居在7>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B.， 5Wewce, 2^Z, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al., 6966-6968 (1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA冲羊品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter )，将0.2 m g的该总RNA用SEQ ID NO: 48的锚定 寡-dT引物进4亍反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID
NO: 47的随才几5， 13-石威基引物H-AP24 (RNAimage primer set 1， GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ ot-35S]-标i己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分钟的退火步4f和在72。C下40秒的扩展步艰《，以及"t妾下来的 一个72°C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6 %聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进行DNA测序，然后进行放射自显影。图12示出了利用SEQ ID NO: 47的随机5 ， 13 -石咸基31物H-AP24 和SEQ ID NO: 48的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图12中，泳 道1表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌 纟且织；〉永道4表示月申癌细月包系A549。 ^!。图12戶斤示，i正实了 242-bp cDNA片段(全长PIG22基因序列的碱基位置从738到979 )在肺 癌组织、转移肺癌组织和肺癌细胞系中被微弱表达，而仅在正常肺 组织中一皮差异表达。该cDNA片段命名为L989。将242-bp带(L989片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA,然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不使用[oc-35s]-标记的dATP 和20 u M dNTP。利用TA克隆系统(Promega ) 3寻再扩增的cDNA 片段L989克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0 片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序 列。1-13. MIG9感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细月包系中4全测如下。正常肺组织才羊品、月申癌组织 样品和转移肺癌组织才羊品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国
典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细^^系。 总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 和细月包。才艮才居在乂〉开内容(Liang， P. and Pardee, A. B., 5Wewce, 257, 967-971 (1992)以及Liang， P. et al., C薩er g, 6966-6968(1993))中描述的i^饰方法，利用分离自所述组织和细月包的每一个 总RNA才羊品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter )，将0.2 ju g的该总RNA用SEQ ID NO: 52的4笛定 寡-dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 51的F遺才几5， 13-石咸基引物H-AP12 (RNAimage primer set 1， GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ oc -358]-标^己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包4舌在95。C下40秒的变性步-骤、在40°C 下2分4中的退火步备聚和在72。C下40秒的扩展步芬聚，以及4妻下来的 一个72°C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6 %聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍方文射自显影。图13示出了利用SEQ ID NO: 51的随机5， 13-石成基引物H-AP12 和SEQ ID NO: 52的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图13中，泳 道l表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌 组织；泳道4表示肺癌细胞系A549。如图13所示，i正实了 178-bp cDNA片段(全长MIG9基因序列的碱基位置从132到309 )在肺 癌组织、转移肺癌组织和肺癌细胞系中被孩史弱表达，而仅在正常肺 组织中被差异表达。该cDNA片段命名为L741 。将178-bp带(L741片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA，只是其中不使用[ct-"S]-标记的dATP 和20 ju M dNTP。利用TA克隆系统(Promega) 4夸再扩增的cDNA
片4殳L741克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0 版DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序列。1-14. MIG11感兴趣的基因的差异表达在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细胞系中4企测如下。正常肺组织样品、肺癌组织 样品和转移肺癌组织样品在外科手术过程中获自肺癌患者。将A549 (美国典型培养物收藏中心；ATCC号CCL-185)和NCI-H358 (美国 典型培养物收藏中心；ATCC号CRL-5807)用作人类肺癌细I包系。 总RNA样品以如在基准实施例中描述的相同方式分离自这些组织 和细胞。冲艮才居在7A开内容(Liang, P. and Pardee, A. B.， Sc/ewce， 2^2， 967-971 (1992)以及Liang, R et al.， C",r 12， 6966-6968(1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter )，将0.2 n g的该总RNA用SEQ ID NO: 56的锚定 寡-dT引物进4亍反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 55的随才几5， 13-石咸基引物H-AP13 (RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ oc-35S]-标i己的dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分《中的退火步-骤和在72。C下40秒的扩展步-骤，以及4妻下来的 一个72。C下5分钟的扩展步骤。扩增的片段在6%聚丙烯酰胺凝胶 中电泳以进4亍DNA测序，然后进4亍力丈射自显影。图14示出了利用SEQIDNO:55的随机5 ， 13 -碱基引物H-AP13 和SEQ ID NO: 56的4笛定寡-dT引物的PCR结果。在图14中，泳
道1表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移肺癌 组织；泳道4表示月申癌细月包系A549。如图14所示，i正实了212-bp cDNA片^殳(全长MIG11基因序列的石咸基位置从568到779 )在肺 癌组织、转移肺癌组织和肺癌细胞系中一皮樣t弱表达，而4又在正常肺 组织中一皮差异表达。该cDNA片段命名为L861 。将212-bp带(L861片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以洗 脱cDNA,然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实施 PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不使用[a-"S]-标记的dATP 和20 iu M dNTP 。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的cDNA 片段L861克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测序酶2.0 片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其DNA序 列。1-15. MIG15感兴趣的基因的差异表达在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 组织和子宫癌细月包系中4企测力口下。正常外子宫颈《且织才羊品在子宫切 除术过程中获自患有子宫肿瘤的患者，而原发性子宫瘤组织样品和 转移骼淋巴结肿瘤组织样品在根治性子宫切除术过程中获自患有 子宫癌的患者(其在外禾牛手术之前没有进4于过》文射和/或抗癌疗法)。 将CUMC-6 ( Kim, J. W. " a/" G戸co/. 62: 230-240， 1996 )用作人类子宫癌细胞系。总RNA样品以如在基准实施例中描述的 相同方式分离自这些l且织和细月包。才艮才居在^>开内容(Liang, P. and Pardee, A. B., S"'ewce， 212, 967-971 (1992)以及Liang, P. et al., C纖er細.，H， 6966-6968 (1993))中描述的修饰方法，利用分离自所述组织和细胞的每一个 总RNA样品实施RT-PCR反应如下。利用试剂盒(tRNAimage试 剂盒，GenHunter ),将0.2 |a g的该总RNA用SEQ ID NO: 60的锚定 寡-dT引物进行反转录，然后利用相同的锚定寡-dT引物和SEQ ID NO: 59的随才几5， 13-石咸基引物H-AP31 (RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, U.S.),在0.5 mM [ ot画358]-才示^己6勺dATP (1,200 Ci/mmol)存在下实施PCR反应。在以下条件下实施PCR反 应共40个扩增循环，包括在95。C下40秒的变性步骤、在40°C 下2分4中的退火步專聚和在72。C下40秒的扩展步-骤，以及冲妄下来的 一个72°C下5分钟的扩展步骤。扩增的片l殳在6 %聚丙烯酰胺凝月交 中电泳以进行DNA测序，然后进行放射自显影。图15示出了利用SEQ ID NO: 5 9的随机5 ， 13 -石咸基？ 1物H-AP31 和SEQ ID NO: 60的锚定寡-dT引物的PCR结果。在图15中，泳 道1表示正常外子宫颈组织；泳道2表示子宫癌组织；泳道3表示 转移格'淋巴结组织；泳道4表示子宫癌细胞系CUMC-6。如图15 所示，证实了 327-bpcDNA片段在子宫癌组织、转移骼淋巴结组织 和子宫癌细胞系CUMC-6中被孩史弱表达，而4又在正常外子宫颈组织 中被差异表达。该cDNA片段命名为CC312。将327-bp带(CC312片段)从干凝胶中取出，煮沸15分钟以 洗脱cDNA，然后利用如上所述的相同引物在相同的所述条件下实 施PCR反应以再扩增该cDNA,只是其中不使用[a-"S]-标记的 dATP和20juM dNTP。利用TA克隆系统(Promega )将再扩增的 cDNA片#史CC312克隆入表达载体pGEM-T Easy中，然后利用测 序酶2.0片反DNA测序系统(United States Biochemical Co.)确定其 DNA序列。实施例2: cDNA文库筛选2-1: GIG1
将在实施例1-1中获得的cDNA片段CG381才艮据在公开内容 (Feinberg, A.R and Vogelstein， B., J"a/. 5/oc/7e肌，132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得"P-标记的FC26 cDNA探针，并才艮据/>开 内容(Sambrook, J. et al., Mo/ecw/"r C7om'wgv j丄o6orafory wa"wwa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法^1寻该 32P-标记的FC26 cDNA 4果针与谨菌体X gt 11人胚肺成纤维细月包 cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))进4亍嗟菌斑杂 交以获得人类抑癌基因GIG1的全长cDNA克隆体。该全长cDNA ,皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 1 —致。 该cDNA序列具有一个编码320个氨基酸残基的开方文阅读才匡，并且 来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 2—致。衍生的 蛋白还具有约34 kDa的分子量。将所得全长GIG1 cDNA克隆体插入原核表达载体 pBAD/thio-Topo (Invitrogen, U.S.)的多克隆4立点以获得载体 pBAD/thio-Topo/GIGl,然后爿寻大肠才干菌(五"/zeWc/^" co//y> Top 10 (Invitrogen, U.S.)用所得pBAD/thio-Topo/GIGl进行转化。将待表达 的蛋白HT-Thioredoxin(HT-琉氧还蛋白)插到载体pBAD/thio-Topo 的多克隆位点的上游。将转化的大肠杆菌菌林在LB肉汤培养基中 进行振荡孵育，并将所得培养物1/100稀释，然后再反应3小时。 向其中加入0.5 mM L-阿拉伯糖(Sigma, U.S.)以诱导蛋白生产。 将培养基中的大肠杆菌在L-阿拉伯糖诱导之前和之后进行超声处 理，然后用超声处理的匀浆实施12%十二》克基石克酸钠聚丙蹄酰胺;疑 胶电泳(SDS-PAGE)。图16是示出了利用SDS-PAGE，用载体 pBAD/thio-Topo/GIGl转化的大肠杆菌ToplO菌抹的蛋白的表达模 式的示意图，并且其表明了具有约49kDa分子量的融合蛋白谱带在 L-阿^立伯^f唐"i秀导之后可以清楚;也^L察到。该49-kDa融合蛋白乂于应
于包括「 4翁入到载体 pBAD/thio-Topo/GIGl 的约 15-kDa HT-thioredoxin蛋白和约34-kDa GIG1蛋白的蛋白质。图16是示出了 GIG1蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 16中，泳道1表示在L-阿拉伯糖诱导之前的蛋白样品，而泳道2 表示在L-阿拉伯糖诱导之后的蛋白样品。2-2: GIG3将在实施例1-2中获得cDNA片段L935根据在公开内容 (Feinberg, A.R and Vogelstein， B.,力w"/. S/oc/^肌，132, 6-13 (1983)) 中的方法进4亍标记以获得"P-标记的L935 cDNA探针，并根据乂^开 内容(Sambrook， J. et al" Mo/ecw/ar C7o"/wg.'爿丄"6orator少m a/, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法将该 "P-标记的L935 cDNA纟笨针与嗟菌体入gtll人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))进4亍噬菌斑杂 交以获得人类抑癌基因GIG3的全长cDNA克隆体。该全长cDNA 一皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 5 —致。 该cDNA序列具有一个编码208个氨基酸残基的开放阅读框，并且 来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 6—致。衍生的 蛋白还具有约23 kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌4朱在LB肉汤培养基中进4亍孵育，然后将 1 mM异丙基-l-(3-D-碌u代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37。C下反应3小时以表达该GIG2基因。蛋白样品获自该 i备养物，然后才艮才居在7>开内容(Sambrook, J. et al.， j/o/ecw/w C/om'"g.'丄a6ora o/"j柳of朋wa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。
图17是示出了 GIG3蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 17中，泳道1表示在IPTG诱导之前的蛋白样品，而泳道2表示 GIG3基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图17所示， 表达的GIG3蛋白具有约23kDa的分子量(对应于一个衍生自它的 DNA序列的蛋白的分子量)。2-3: GIG4将在实施例1-3中获得cDNA片革殳L951根据在7>开内容 (Feinberg, A.R and Vogelstein, B., ^""/.肠c/z簡.，132, 6-13 (1983)) 中的方法进4亍标记以获得"P-标记的L951 cDNA^笨针，并4艮据/>开 内容(Sambrook, J. et al" Mo/ecw/ar C7om'"g: ZvaZ)Oiratorj waw"wa/' New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法将该 3￥-标记的L951 cDNA ^!笨针与喧菌体入gt11人胚肺成纤维细月包 cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))进4亍噬菌斑杂 交以获得人类抑癌基因GIG4的全长cDNA克隆体。该全长cDNA 一皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 9 —致。 该cDNA序列具有一个编码203个氨基酸残基的开放阅读框，并且 来源于该开力文阅读才匡的氨基酸序列与SEQ ID NO: 10—致。书亍生的 蛋白还具有约23 kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌林在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-l-(3-D-石克代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该GIG4基因。蛋白样品荻自 该培养物，然后冲艮据在乂>开内容(Sambrook, J. et al.， Mo/ecw/ar C/ow'wgv v4 /^oratory waw"wof/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。
图18是示出了 GIG4蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 18中，泳道1表示在IPTG豫导之前的蛋白样品，而泳道2表示 GIG4基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图18所示， 表达的GIG4蛋白具有约23kDa的分子量(对应于一个衍生自它的 DNA序列的蛋白的分子量)。2-4: GIG5将在实施例1-4中获得cDNA片段L952根据在公开内容 (Feinberg， A.R and Vogelstein, B.， ^w"/. 5/oc/zew., JJ2， 6-13 (1983)) 中的方法进4亍标记以获得32P-标记的L952 cDNA 4冢针，并才艮据乂>开 内容(Sambrook, J. et al.， A/o/ecw/ar C7om'^gv ^丄a6oratory w"w聽"/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法将该 32P-标记的L952 cDNA纟果针与嗟菌体入gtll人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki， T. et al., Gene， 83, 137-146 (1989))进4亍嗟菌斑杂 交以获得人类抑癌基因GIG5的全长cDNA克隆体。该全长cDNA ,皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 13 — 致。该cDNA序列具有一个编码228个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开^:阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 14—致。衍 生的蛋白还具有约26kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌林在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-1-(3 -D-石危代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该GIG5基因。蛋白样品获自 该i备养物，然后才艮才居在/>开内容(Sambrook, J. et al.， A/o/ecw/ar C7owz'"gv J ZvaZwrafory maw"wa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白才羊品实施SDS-PAGE。
图19是示出了 GIG5蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 19中，泳道1表示在IPTG豫导之前的蛋白样品，而泳道2表示 GIG5基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图19所示， 表达的GIG5蛋白具有约26 kDa的分子量(对应于一个衍生自它的 DNA序列的蛋白的分子量)。2-5: GIG11(Feinberg, A.P. and Vogelstein， B., J""/, ^/oc/ ew., 132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得"P-标记的BBCC311N cDNA探针，并根 才居公开内容(Sambrook， J. et al" Afo/ecw/"r C7om.wgv爿Z^6orato/^ mo朋認/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的 方法将该32P-标记的BBCC311N cDNA探针与嗟菌体入gtll人胚肺 成纤维细月包cDNA文库(Miki, T. et al" Gene, 83， 137-146 (1989))进 行噬菌斑杂交以获得人类抑癌基因GIG11的全长cDNA克隆体。该全长cDNA 一皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 17 — 致。该cDNA序列具有一个编码250个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 18—致。衍 生的蛋白还具有约29 kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-l-(3-D-石克代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该GIG11基因。蛋白样品获自 该培养物，然后才艮据在/>开内容(Sambrook, J. et al.， Tkfo/ecw/ar C7om'Mgv 爿丄aZwrato/^ wawwwa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。
图20是示出了 GIG11蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 20中，泳道1表示在IPTG i秀导之前的蛋白才羊品，而泳道2表示 GIG11基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图20所示， 表达的GIG11蛋白具有约29 kDa的分子量(对应于一个衍生自它 的DNA序列的蛋白的分子量)。2-6: MIG2将在实施例1-6中获得cDNA片段CA352根据在公开内容 (Feinberg, A.P. and Vogelstein, B.,」"a/.肠c/2e附.，6-13 (1983)) 中的方法进4亍标记以获得"P-标记的FC26 cDNA 4笨针，并才艮据7>开 内容(Sambrook, J. et al" Mo/ecw/"r C7o"/"g.'爿丄aZ orartor少w""ww"/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法将该 32 -标记的FC26 cDNA 一笨针与噬菌体入gtll人胚月申成纤维细胞 cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))进4亍嗟菌斑杂 交以获得人类抑癌基因MIG2的全长cDNA克隆体。该全长cDNA 4皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 21 — 致。该cDNA序列具有一个编码578个氨基酸残基的开力丈阅读才匡， 并且来源于该开力文阅读冲匡的氨基酉臾序列与SEQ ID NO: 22—至丈。衍 生的蛋白还具有约63 kDa的分子量。将所得全长MIG2 cDNA克隆体插入原核表达载体 pBAD/thio-Topo (Invitrogen, U.S.)的多克隆位点以获得载体 pBAD/thio-Topo/MIG2，然后一夸大肠4干菌ToplO (Invitrogen, U.S.)用 所得pBAD/thio-Topo/MIG2进行转化。将待表达的蛋白 HT-Thioredoxin (HT-AlL氧还蛋白)插到载体pBAD/thio-Topo的多 克隆位点的上游。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行 振荡孵育，并将所得培养物1/100稀释，然后再反应3小时。向其 中力口入0.5 mM L-阿^立伯冲唐(Sigma, U.S.)以i秀导蛋白生产。将培 养基中的大肠杆菌在L-阿拉伯糖诱导之前和之后进行超声处理，然 后用超声处理的匀浆实施12 %十二烷基碌u酸钠聚丙烯酰胺凝月交电泳(SDS画PAGE)。图21是示出了利用SDS-PAGE，用载体pBAD/thio-Topo/ MIG2 转化的大肠杆菌ToplO菌林的蛋白的表达模式的示意图，并且其表 明了具有约78 kDa分子量的融合蛋白谱带在L-阿拉伯糖诱导之后 可以清楚地观察到。该78-kDa融合蛋白对应于包括插入到载体 pBAD/thio-Topo/MIG2的约 15-kDa HT-thioredoxin蛋白和约 63-kDaMIGl蛋白的蛋白质。图21是示出了 MIG2蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 21中，泳道1表示在L-阿拉伯糖诱导之前的蛋白样品，而泳道2 表示MIG2基因的表达在被L-阿拉伯糖诱导之后的蛋白样品。2-7: MIG4将在实施例1-7中获得cDNA片段MA41根据在公开内容 (Feinberg， A.R and Vogelstein, B., J憩/. Woc/zew., 132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得"P-标记的FC26 cDNA探针，并根据公开 内容(Sambrook， J. et al" Mo/ecw/ar C7om'"gv j Z/a6orafor_y New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法^1寻该 "P-标记的FC26 cDNA探针与嗟菌体入gtll人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))进4亍嗟菌斑杂 交以获得人类抑癌基因MIG4的全长cDNA克隆体。该全长cDNA ^皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 25 — 致。该cDNA序列具有一个编码640个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 26—致。衍 生的蛋白还具有约70 kDa的分子量。
将所得全长MIG42 cDNA克隆体插入原核表达载体 pBAD/thio-Topo (Invitrogen, U.S.)的多克隆4立点以获得载体 pBAD/thio-Topo/MIG4，然后将大肠杆菌ToplO (Invitrogen, U.S.)用 所得pBAD/thio-Topo/MIG4进行转化。将待表达的蛋白 HT-Thioredoxin (HT-石危氧还蛋白)插到载体pBAD/thio-Topo的多 克隆位点的上游。将转化的大肠杆菌菌林在LB肉汤培养基中进行 才展荡孵育，并将所得培养物1/100稀释，然后再反应3小时。向其 中力口入0.5 mM L-阿^立伯4唐(Sigma, U.S.)以i秀导蛋白质生产。将 培养基中的大肠杆菌在L-阿拉伯糖诱导之前和之后进行超声处理， 然后用超声处理的匀浆实施12 %十二烷基石克酸钠聚丙烯酰胺凝月交 电泳(SDS-PAGE)。图22是示出了利用SDS-PAGE ，用载体 pBAD/thio-Topo/ MIG4转4匕的大肠4干菌Top10菌4朱的蛋白的表达才莫 式的示意图，并且其表明了具有约85 kDa分子量的融合蛋白谱带 在L-阿拉伯糖诱导之后可以清楚地观察到。该85-kDa融合蛋白对 应于包4舌插入到载体pBAD/thio-Topo/MIG4 的约 15-kDa HT-thioredoxin蛋白和约70-kDa MIG4蛋白的蛋白质。图22是示出了 MIG4蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 22中，泳道1表示在L-阿々立伯净唐i秀导之前的蛋白才羊品，而泳道2 表示MIG4基因的表达在被L-阿拉伯糖诱导之后的蛋白样品。2-8: PIG13将在实施例1-8中获得cDNA片,殳L50-211才艮据在7>开内容 (Feinberg, A.P. and Vogelstein, B.，勘a/.肠c/7謂.，132, 6-13 (1983)) 中的方法进4亍标i己以获得"P-标记的L50-211 cDNA 4笨4十，并才艮据 公开内容(Sambrook, J. et al" Mo/ecw/ar C7om'"gv爿^a6orafor_y mam ""/' New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的 方法将该"P-标记的L50-211 cDNA纟罙4十与p藍菌体A gtll人胚肺成
纤维细J包cDNA文库(Miki， T. et al.， Gene， 83， 137-146 (1989))进4亍 噬菌斑杂交以获得人类抑癌基因PIG13的全长cDNA克隆体。该全长cDNA #皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 29 — 致。该cDNA序列具有一个编码121个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开;^文阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 30—致。衍 生的蛋白还具有约14kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-l-(3 -D-石克代半乳糖吡喃糖苦(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该PIG13基因。蛋白样品获自 该i备养物，然后才艮才居在/>开内容(Sambrook, J. et al.， 7kfo/ecw/ar C7om'"gv 力丄a6orator少附，服o/' New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。图23是示出了 PIG13蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 23中，泳道1表示在IPTG诱导之前的蛋白样品，而泳道2表示PIG13 基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图23所示，表达的 PIG13蛋白具有约14 kDa的分子量(对应于一个书亍生自它的DNA 序列的蛋白的分子量)。2-9: PIG15将在实施例1-9中获得cDNA片段L50根据在公开内容 (Feinberg， A.P. and Vogelstein, B., ^"a/.肠c/7識，132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得"P-标记的L50 cDNA探针，并才艮据7>开 内容(Sambrook， J. et al., Mo/ecw/ar C7om'wgv 丄a6onartofy waw"wa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法a夸该 "P-标记的L50 cDNA #笨4十与嗟菌体入gtl 1人胚肺成纤维细月包cDNA
文库(Miki, T. et al.， Gene, 83, 137-146 (1989))进行嗟菌斑杂交以获 得人类抑癌基因PIG15的全长cDNA克隆体。该全长cDNA #皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 33 — 致。该cDNA序列具有一个编码183个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 34—致。衍 生的蛋白还具有约21 kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-l-(3 -D-碌u代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该PIG15基因。蛋白样品获自 该i咅养物，然后才艮才居在/>开内容(Sambrook, J. et al., Mo/ecw/"r C7cw/w J 丄(3Zwra/orjK附a朋編/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。图24是示出了 PIG15蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 24中，泳道1表示在IPTG诱导之前的蛋白样品，而泳道2表示PIG15 基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图24所示，表达的 PIG15蛋白具有约21 kDa的分子量(对应于一个衍生自它的DNA 序列的蛋白的分子量)。2-10: PIG8将在实施例1-10中获得cDNA片l殳CA361才艮据在7>开内容 (Feinberg, A.P. and Vogelstein， B.,血a/.肠c/z缀，132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得32P-标记的FC26 cDNA纟笨针，并才艮据/〉开 内答(Sambrook, J. et a"A/o/ecw/"r C7ow'wgv J Z/"Z or"Zorj)7附"wwwfl/, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法4寻该 "P-标记的FC26 cDNA探针与嗟菌体入gtll人胚肺成纤维细月包cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))进4亍p羞菌斑杂 交以获得人类抑癌基因PIG8的全长cDNA克隆体。该全长cDNA被测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 37 — 致。该cDNA序列具有一个编码500个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 38—致。衍 生的蛋白还具有约57kDa的分子量。将所得全长PIG8 cDNA克隆体插入原核表达载体 pBAD/thio-Topo (Invitrogen， U.S.)的多克隆位点以获得载体 pBAD/thio-Topo/PIG8，然后一夸大肠4干菌ToplO (Invitrogen, U.S.)用所 得pBAD/thio-Topo/PIG8进行转化。将待表达的蛋白HT-Thioredoxin (HT-硫氧还蛋白)插到载体pBAD/thio-Topo的多克隆位点的上游。 将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行振荡孵育，并将所 得培养物1/100稀释，然后再反应3小时。向其中力口入0.5 mM L-阿4立伯糖(Sigma, U.S.)以i秀导蛋白质生产。将培养基中的大肠杆 菌在L-阿拉伯糖诱导之前和之后进行超声处理，然后用超声处理的 匀浆实施12 %十二烷基碌^酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE )。 图25是示出了利用SDS-PAGE,用载体pBAD/thio-Topo/ PIG8转化 的大肠杆菌ToplO菌林的蛋白的表达模式的示意图，并且其表明具 有约72 kDa分子量的融合蛋白语带在L-阿拉伯糖诱导之后可以清 楚地观察到。该72-kDa融合蛋白对应于包括插入到载体 pBAD/thio-Topo/PIG8的约15-kDa HT-thioredoxin蛋白禾口约5 7-kDa PIG8蛋白的蛋白质。图25是示出了 PIG8蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 25中，泳道1表示在L-阿拉伯糖诱导之前的蛋白样品，而泳道2 表示PIG8基因的表达在被L-阿拉伯糖诱导之后的蛋白样品。2-11: MRG1 将在实施例1-11中获得cDNA片段CA361根据在乂>开内容 (Feinberg, A.P. and Vogelstein， B.,爿"a/. ^,oc/^附.，132， 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得"P-标记的FC26 cDNA探针，并才艮据7>开 内容(Sambrook, J. et al" Mo/ecw/ar C7om'"gv Z^6orator_y wotww"/, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法S寻该 3卞-标记的FC26 cDNA 4笨针与嗟菌体入gtl 1人胚肺成纤维细月包 cDNA文库(Miki， T. et al" Gene, 83, 137-146 (1989))进行喧菌斑杂 交以获得人类抑癌基因MRGl的全长cDNA克隆体。该全长cDNA #皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 41 — 致。该cDNA序列具有一个编码466个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 42—致。衍 生的蛋白还具有约52kDa的分子量。将所得全长MRGl cDNA克隆体插入原核表达载体 pBAD/thio-Topo (Invitrogen， U.S.)的多克隆4立点以获得载体 pBAD/thio-Topo/MRGl ，然后将大肠杆菌ToplO (Invitrogen, U.S.)用 所得pBAD/thio-Topo/MRGl 进4亍转化。将待表达的蛋白 HT-Thioredoxin (HT-石克氧还蛋白)插到载体pBAD/thio-Topo的多 克隆位点的上游。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行 振荡孵育，并将所得培养物1/100稀释，然后再反应3小时。向其 中力口入0.5 mM L-阿4立伯冲唐(Sigma, U.S.)以i秀导蛋白生产。将培 养基中的大肠杆菌在L-阿拉伯糖诱导之前和之后进行超声处理，然 后用超声处理的匀浆实施12 %十二烷基碌^酸钠聚丙烯酰胺;疑月交电 泳(SDS-PAGE )。图26是示出了利用SDS-PAGE ，用载体 pBAD/thio-Topo/ MRGl转化的大肠杆菌ToplO菌才朱的蛋白的表达 模式的示意图，并且其表明了具有约67 kDa分子量的融合蛋白谱 带在L-阿拉伯糖裔导之后可以清楚地观察到。该67-kDa融合蛋白
对应于包括插入到载体pBAD/thio-Topo/MRGl 的约 15-kDa HT-thioredoxin蛋白和约52-kDa MRG1蛋白的蛋白质。图26是示出了 MRG1蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 26中，泳道1表示在L-阿拉伯糖诱导之前的蛋白样品，而泳道2 表示MRG1基因表达在一皮L-阿拉伯糖诱导之后的蛋白样品。2-12: PIG22将在实施例1-12中获得cDNA片段L989才艮据在公开内容 (Feinberg, A.P. and Vogelstein, B.,爿w"/.肠士附.，132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得"P-标记的L989 cDNA纟笨针，并4艮据7>开 内容(Sambrook， J. et al" Mo/ecw/"r C7om."gv Z/a6on3tor_y mcm"w"/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方〉去4夸i亥 32P-标记的L989 cDNA纟笨针与喧菌体入gtll人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki， T. et al" Gene, 83, 137-146 (1989))进行噬菌斑杂 交以获得人类抑癌基因PIG22的全长cDNA克隆体。该全长cDNA被测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 45 — 致。该cDNA序列具有一个编码350个氨基S臾残基的开i丈阅读才匡， 并且来源于该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 46—致。衍 生的蛋白还具有约40kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-1-P-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该PIG22基因。蛋白样品获自 该i咅养物，然后才艮才居在7^开内容(Sambrook， J. et al., Mo/ecw/w C7cw/"gv 丄"60raf07 附""",/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。
图27是示出了 PIG22蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 27中，泳道1表示在IPTG诱导之前的蛋白样品，而泳道2表示PIG22 基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图27所示，表达的 PIG22蛋白具有约40 kDa的分子量(对应于一个书于生自它的DNA 序列的蛋白的分子量)。2-13: MIG9将在实施例1-13中获得cDNA片段L741根据在公开内容 (Feinberg， A.P. and Vogelstein， B.,血a/.肠c/ 隱，132, 6-13 (1983)) 中的方法进4亍标记以获4寻32P-标记的L741 cDNA ^罙4十，并才艮据^>开 内答(Sambrook， J. et al.， Mo/ecw/ar C7om'wg: j丄"Zwrato^y附a朋編/' New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法卄寻该 "P-标记的L741 cDNA t笨针与嗟菌体入gtll人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki, T. et al., Gene, 83， 137-146 (1989))进4亍p笪菌斑杂 交以获得人类抑癌基因MIG9的全长cDNA克隆体。该全长cDNA净皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 49 — 致。该cDNA序列具有一个编码88个氨基S臾残基的开方欠阅读冲匡， 并且来源于该开》文阅读才匡的氨基酸序列与SEQ ID NO: 50 —致。书亍 生的蛋白还具有约lOkDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌抹在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-l-(3-0-碌1/^半乳糖吡喃冲唐普(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该MIG9基因。蛋白样品获自 该i咅养物，然后才艮才居在/>开内容(Sambrook, J. et al., A/o/ecw/"r C7ow/"gv ^ 丄a6om組y w"wwwa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白样品实施SDS-PAGE。
图28是示出了 MIG9蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 28中，泳道1表示在IPTG诱导之前的蛋白样品，而泳道2表示 MIG9基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图28所示， 表达的MIG9蛋白具有约10kDa的分子量(对应于一个衍生自它的 DNA序列的蛋白的分子量)。2-14: MIG11将在实施例1-14中获得cDNA片,史L861冲艮据在7>开内容 (Feinberg， A.R and Vogelstein， B.， ^w"/. 5/oc/7e肌，132, 6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得32P-标记的L935 cDNA #果针，并根据^^开 内容(Sambrook， J. et al" Afo/ecw/"r C7ow/wgv」丄"6oraftory w"w"w"/, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法爿寻该 "P-标记的L935 cDNA ^t冢针与嗟菌体人gt11人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki， T. et al" Gene, 83， 137-146 (1989))进行噬菌斑杂 交以获得人类抑癌基因MIG11的全长cDNA克隆体。该全长cDNA被测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 53 — 致。该cDNA序列具有一个编码249个氨基酸残基的开》文阅读框， 并且来源于该开力文阅读片匡的氨基酸序列与SEQ ID NO:54 —致。右f 生的蛋白还具有约27kDa的分子量。将转化的大肠杆菌菌4朱在LB肉汤培养基中进行孵育，然后将 1 mM异丙基-l-l3-D-石克代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入该培养基 中，并在37 。C下反应3小时以表达该MIG11基因。蛋白样品获自 该i咅养物，然后才艮才居在7>开内容(Sambrook， J. et al.， Mo/ecw/or C7om'wgv J 丄"60rato7 附awww"/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中描述的方法用该蛋白才羊品实施SDS-PAGE。 图29是示出了 MIG11蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 29中，泳道1表示在IPTG诱导之前的蛋白样品，而泳道2表示 MIG11基因的表达在被IPTG诱导之后的蛋白样品。如图29所示， 表达的MIG11蛋白具有约27 kDa的分子量(对应于一个々'亍生自它 的DNA序列的蛋白的分子量)。2-15: MIG15将在实施例1-15中获得cDNA片段CC312根据在公开内容 (Feinberg, A.R and Vogelstein， B.，勘a/.肠c/z簡.，6-13 (1983)) 中的方法进行标记以获得32P-标记的CC312 cDNA才果针，并4艮据7> 开内容(Sambrook， J. et al., Mo/ecw/ar C7om'"gv ^ Z^Z on^or;v m /wwa/， New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))中4苗述的方法4夸该 "P-标记的CC312 cDNA ^^笨针与噬菌体入gt11人胚肺成纤维细胞 cDNA文库(Miki, T. et al.， Gene, 83, 137-146 (1989))进行谨菌斑杂 交以获得人类抑癌基因MIG15的全长cDNA克隆体。该全长cDNA #皮测序，因此其DNA序列与SEQ ID NO: 57 — 致。该cDNA序列具有一个编码323个氨基酸残基的开放阅读框， 并且来源于该开;^文阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO: 58—致。书亍 生的蛋白还具有约38kDa的分子量。一寻所4寻全长MIG15 cDNA克隆体插入原冲亥表达载体 pBAD/thio-Topo (Invitrogen, U.S.)的多克隆位点以获得载体 pBAD/thio-Topo/MIG15，然后将大肠杆菌Top 10 (Invitrogen, U.S.) 用所得pBAD/thio-Topo/MIGl 5进行转化。将待表达的蛋白 HT-Thioredoxin (HT-石克氧还蛋白)插到载体pBAD/thio-Topo的多 克隆位点的上游。将转化的大肠杆菌菌林在LB肉汤培养基中进行 振荡孵育，并将所得培养物1/100稀释，然后再反应3小时。向其 中力口入0.5 mM L-阿拉伯糖(Sigma, U.S.)以诱导蛋白质生产。将
培养基中的大肠杆菌在L-阿拉伯糖诱导之前和之后进行超声处理， 然后用超声处理的匀浆实施12 %十二烷基石克酸钠聚丙晞酰胺凝月交电泳(SDS-PAGE)。图2是示出了利用SDS-PAGE,用载体 pBAD/thio-Topo/MIG15转化的大肠杆菌ToplO菌4朱的蛋白的表达 模式的示意图，并且其表明了具有约53 kDa分子量的融合蛋白谱 带在L-阿拉伯糖诱导之后可以清楚地观察到。该53-kDa融合蛋白 对应于包4舌插入到载体pBAD/thio-Topo/MIGl 5的约 15-kDa HT-thioredoxin蛋白和约3 8-kDa MIG15蛋白的蛋白质。图30是示出了 MIG15蛋白的SDS-PAGE分析的示意图。在图 30中，泳道1表示在L-阿4立伯4唐i秀导之前的蛋白才羊品，而泳道2 表示在MIG15基因的表达被IPTG i秀导之后的蛋白才羊品。实施例3:基因的RNA印迹3-1. GIG1为了评价GIG1基因的表达水平，实施RNA印迹(或诺泽恩 印迹)如下。将20 jug的每一种如在实施例1-1中一才羊获自三个正常外子宫 颈纟且织、三个原发'1"生子宫癌《且织禾口两个子宫癌细月包系的总RNA才羊 品进行变性并在1%甲醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所得琼脂 并唐;疑月交專争牙多至!j尼龙月莫(Boehringer-Mannheim, Germany )。纟《后矛J用 在实施例1-1中获得的全长GIG1 cDNA将该尼龙膜在42。C下用32P-标记的随机引物探针杂交过夜。将该RNA印迹步骤重复两次；一 次利用光密度计进行定量而另一次用P -肌动蛋白探针进行杂交以 确定总mRNA。
图31(a)示出了 GIG1基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 纟且织和子宫癌细月包系中^皮差异表达的RNA印迹结果，而图31(b)是 示出了 P-肌动蛋白的表达的RNA印迹结果。在图31(a)和图31(b) 中，泳道1至3表示正常外子宫颈组织样品，泳道4至6表示子宫 癌组织才羊品，泳道7表示子宫癌细月包系HeLa的才羊品，而;永道8表 示子宫癌细胞系CUMC-6的样品。如图31(a)和图31(b)所示，其表 明了 GIG1基因的表达水平在所有正常外子宫颈组织的三个样品中 都是可一皮高度4企测到的，而其表达水平在子宫癌组织的三个样品中 比正常组织显著更低，而且在子宫癌细胞系的两个样品中没有被枱r 测到。图46(a)示出了 GIG1基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图46(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图46(a)所示，约4.0 kb大小 的优势GIG1 mRNA转录子一皮过表达而约3.0 kb大小的转录子在正 常组织如脑、心脏、骨骼肌、脾、肾、肝、胎盘、肺和外周白细胞 中一皮另外表达。图61(a)示出了 GIG1基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图61(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 ^罙针杂交所获得的RNA印迹结果。如图61(a)所示，GIG1基因在 诸如前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、'l"曼性髓细胞性白 血病细月包系K-562、类'淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特'淋巴瘤 (Burkitt's lymphoma ) ( Raji )、 SW480结肠癌纟田月包、A549月巿癌纟田月包 和G361黑色素瘤细胞的组织中被微弱表达。根据这样的结果，表 明本发明的GIG1基因在正常组织如子宫、脑、心脏、骨膝肌、脾、 肾、肝、胎盘、肺和外周白细胞中具有抑制肿瘤(抑癌)功能。3-2. GIG3
为了评价GIG3基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 iug的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细力包系(A549和 NCI-H358 )的总RNA才羊品进4亍变性并在1 %曱醛琼脂^f唐;疑月交中进 行电泳，然后将所得琼脂糖凝月交转移到尼龙膜 (Boehringer-Mannheim, Germany )。 然后利用Rediprime II随机引 物标记系统(Amersham, United Kingdom ) ^)寻该尼龙月莫在42 °C下用 乂人全长GIG3 cDNA制备的"P-标记的随才几引物对笨针杂交过巧复。该 RNA印迹步4聚重复两次； 一次利用光密度计进4于定量而另一次用P -月几动蛋白神笨针进行杂交以确定总mRNA。图32(a)示出了 GIG3基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图32(b) 示出了通过用P -肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA印迹 结果。如图32(a)和图32(b)所示，表明GIG3基因的表达水平在所 有正常肺组织的三个样品中被高度检测到，而其表达水平在肺癌组 织的两个样品、转移肺癌组织的两个才羊品和肺癌细"包系的两个才羊品 中没有冲全测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细月包系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过将印迹(其中乂人正常组织和癌 细月包系才是耳又的每一个总RNA才羊品^皮專争移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可/人/>司Clontech( U.S.)商购获得， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是 例如选自由前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、慢性髓细 胞性白血病细月包系K-562、类淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特 淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌纟田月包、A549肺癌细i包和G361黑色 素瘤细力包组成的纟且。
图47(a)示出了 GIG3基因在各种正常组织中 一皮差异表达的 RNA印迹结果，而图47(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图47(a)所示，约1.3 kb大小 的优势GIG2mRNA转录子在正常组织如肺、心脏、肌肉、肾和肝 中被高度表达。另外，约0.7kb大小的转录子也在正常组织中被表 达。
图62(a)示出了 GIG3基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图62(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 ^罙针杂交所获得的RNA印迹结果。如图62(a)所示，在正常组织冲企 测到的约1.3-kb的优势GIG3 mRNA转录子一点也不一皮表达， <旦约 2.0或0.5 kb的不同大小的转录子在诸如前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、十曼性髓细胞性白血病细月包系K-562、类'淋巴母细 月包MOLT-4、伯基4争淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549月申 癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中被微弱表达。根据这样的结 果，表明本发明的GIG3基因在正常组织如肺、心脏、肌肉、肾和 肝中具有抑制肿瘤(抑癌)功能。
3-3. GIG4为了评价GIG4基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细月包系(A549和 NCI-H358 )的总RNA样品进行变性并在1 %甲醛琼脂糖凝胶中进 4亍电泳，然后将所得琼脂冲唐卩疑月交转移到尼龙月莫 (Boehringer-Mannheim, Germany )。 然后利用Rediprime II随机引 物标记系统(Amersham, United Kingdom )将该尼龙膜在42 °C下用 乂人全长GIG4 cDNA制备的"P-标记的随才几引物4笨4十杂交过4复。该
RNA印迹步-骤重复两次； 一次利用光密度计进4于定量而另一次用P -肌动蛋白4笨针进行杂交以确定总mRNA。图33(a)示出了 GIG4基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细胞系中^皮差异表达的RNA印迹结果，而图33(b) 示出了通过用(3 -肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA印迹 结果。如图33(a)和图33(b)所示，表明GIG4基因的表达水平在所 有正常肺组织的三个样品中被高度检测到，而其表达水平在肺癌组 织的两个才羊品、4争移月申癌纟且织的两个才羊品禾口月市癌细月包系的两个才羊品 中没有4企测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细月包系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是"i兌，通过将印迹(其中乂人正常组织和癌 细胞系提取的每一个总RNA样品被转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可从/>司Clontech(U.S.)商购获得， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是 例如选自由前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、'f曼性髓细 胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病MOLT-4、伯基特 淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549肺癌细月包和G361黑色 素瘤细"包纟且成的纟且。图48(a)示出了 GIG4基因在各种正常组织中^皮差异表达的 RNA印迹结果，而图48(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图48(a)所示，约1.3 kb大小 的优势GIG4mRNA转录子在正常组织如肺、心脏、肌肉、肾和肝 中被高度表达。另外，约0.7kb大小的转录子在正常组织如大肠、 小肠和胎盘中也被表达。
图63(a)示出了 GIG4基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图63(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图63(a)所示，在正常组织检 测到的约1.3-kb优势GIG4 mRNA转录子在诸如HeLa子宫癌细胞、 A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中^皮孩i弱表达，4旦在诸 如前髓细月包性白血病HL-60、 'ft性髓细胞性白血病细月包系K-562、 类淋巴母细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤(Raji)和SW480结肠癌细 胞的组织中一点也不被表达。根据这样的结果，表明本发明的GIG4 基因在正常组织如肺、心脏、肌肉、脾、肾、肝、大小肠和胎盘中 具有抑制肿瘤(抑癌)功能。3-4. GIG5为了评价GIG5基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细胞系(A549和 NCI-H358 )的总RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进 行电泳，然后将所得琼脂糖凝"交转移到尼龙膜 (Boehringer-Mannheim， Germany )。 纟求后矛J用Rediprime II卩逭才几引 物标i己系统(Amersham， United Kingdom ) 一寻该尼龙月莫在42 °C下用 ,人全长GIG5 cDNA制备的32P-标记的随才几引物^笨4十杂交过j复。该 RNA印迹步-骤重复两次； 一次利用光密度计进4于定量而另一次用(3 -肌动蛋白探针进行杂交以确定总mRNA。图34(a)示出了 GIG5基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移肺癌组织和肺癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图34(b) 示出了通过用|3 -肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA印迹 结果。如图34(a)和图34(b)所示，表明GIG5基因的表达水平在所 有正常肺组织的三个样品中净皮高度才企测到，而其表达水平在肺癌组 织的两个样品、转移肺癌组织的两个样品和肺癌细力包系的两个4羊品 中没有^f企测到。在正常人类多个组织(Clontech )和人类癌细J包系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过将印迹(其中乂人正常组织和癌 细胞系拔:取的每一个总RNA样品一皮转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可乂人公司Clontech(U.S.)商购获得， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是 例如选自由前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、'l"曼性髓细 月包性白血病细胞系K-562、类'淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特 、淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549肺癌细胞和G361黑色 素瘤细月包纟且成的纟且。图49(a)示出了 GIG5基因在各种正常组织中 一皮差异表达的 RNA印迹结果，而图49(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图49(a)所示，约1.2 kb大小 的优势GIG2 mRNA转录子一皮高度表达而约2.0 kb大小的转录子在 正常组织如心脏和月几肉中另外一皮高度表达。而且，该1.2 kb和2.0-kb mRNA转录子在正常组织如脑、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠和 胎盘中被微弱表达。图64(a)示出了 GIG5基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图64(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 4笨针杂交所获得的RNA印迹结果。如图64(a)所示，在正常组织才佥 测到的约1.3-kb优势GIG5 mRNA转录子和约2.0-kb转录子在诸如 前骨逸细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、'l"曼性髓细月包性白血病 细月包系K-562、类'淋巴母细胞MOLT-4、伯基特'淋巴瘤(Raji )、 SW480 结肠癌细胞、A549肺癌细月包和G361黑色素瘤细胞的组织中寻皮才及孩t
弱表达或一点也不被表达。根据这样的结果，表明本发明的GIG5基因在正常组织如肺、心脏和肌肉中具有抑制肿瘤(抑癌)功能。3-5. GIG11为了评^介GIG11基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如实施例1中描述的获自三个正常乳房组 织、三个原发性乳癌l且织和乳癌细月包系MCF-7的总RNA才羊品进4亍 变性并在1 %甲醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所得琼脂糖凝胶 #争详多到尼龙月莫 (Boehringer—Mannheim, Germany )。 然后利用 Rediprime II卩逭才几引净勿才示i己系纟克(Amersham, United Kingdom )卄夺"i亥 尼龙膜在42。C下用从全长GIGll cDNA的部分序列BBCC311N cDNA制备的"P-标记的随机引物探针杂交过夜。该RNA印迹步骤 重复两次； 一次利用光密度计进行定量而另一次用(3-肌动蛋白探针 进4亍杂交以确定总mRNA。图35(a)示出了 GIGll基因在正常乳房组织、原发性乳癌组织 和乳癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图35(b)示出了通 过用P -肌动蛋白^^笨针杂交该相同印迹所获得的RNA印迹结果。如 图35(a)和图35(b)所示，表明GIGll基因的表达水平在所有正常乳 房组织的三个样品中被高度检测到，而其表达水平在乳癌组织的两 个样品中比正常组织显著更^氐，并且甚至在乳癌细月包系的一个样品 中被极孩i弱检测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细月包系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过将印迹(其中乂人正常组织和癌 细胞系提取的每一个总RNA样品被转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可/人7^司Clontech(U.S.)商购获4寻， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是例如选自由前髓细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、t曼性ft细 胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病MOLT-4、伯基特 淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细"包组成的纟且。图50(a)示出了 GIG11基因在各种正常ia织中一皮差异表达的 RNA印迹结果，而图50(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图50(a)所示，约1.5 kb大小 的优势GIG11 mRNA转录子在正常组织如乳房、脑、心脏、月几肉、 胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中被过表达。另外，1.5-kbGIGll mRNA转录子甚至在正常组织如大肠和外周血中一皮表达。图65(a)示出了 GIG11基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图65(b)示出了通过将该相同印迹与(3-月几动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图65(a)所示，GIG11基因在 诸如前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、'f曼性髓细胞性白 血病细月包系K-562、类淋巴母细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549月申癌细月包和G361黑色素瘤细月包的组织 中被极微弱表达。根据这样的结果，表明本发明的GIG11基因在正 常组织如乳房、脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、 肺、大肠和外周血中具有抑制肿瘤(抑癌)功能。3-6. MIG2为了评价MIG2基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如在实施例1中获得的一样获自三个正常 外子宫颈组织、三个原发性子宫癌纟且织和两个子宫癌细力包系的总 RNA样品进行变性并在1 o/。曱醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所 4寻琼脂冲唐;疑月交專t移到尼龙月莫(Boehringer-Mannheim, Germany )。然 后利用在实施例1中获得的全长MIG2cDNA将该尼龙膜在42。C下 用"P-标记的随机引物探针杂交过夜。该RNA印迹步骤重复两次； 一次利用光密度计进行定量而另 一次用(3 -肌动蛋白探针进行杂交 以确定总mRNA。图36(a)示出了 MIG2基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 纟且织,口子宫癌细月包系中^皮差异表达的RNA印迹结果，而图36(b)是 示出了 (3-肌动蛋白的表达的RNA印迹结果。在图36(a)和图36(b) 中，泳道1至3表示正常外子宫颈组织才羊品，泳道4至6表示子宫 癌组织样品，泳道7表示子宫癌细胞系HeLa的样品，而泳道8表 示子宫癌细月包系CUMC-6的才羊品。如图36(a)和图36(b)所示，表明 MIG2基因的表达水平在所有正常外子宫颈组织的三个样品中^皮高 度4企测到，而其表达水平在子宫癌组织的三个样品中比正常组织显 著更<氐，而且在子宫癌细月包系的两个才羊品中没有冲企测到。图51(a)示出了 MIG2基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图51(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图51(a)所示，约5.0kb大小 的优势MIG2 mRNA转录子^皮过表达而约2.0 kb大小的转录子在正 常组织如心脏、骨骼肌、肾和肝中也被表达。图66a示出了 MIG2基因在各种癌细胞系中被差异表达的RNA 印迹结果，而图66(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白探针 杂交所获得的RNA印迹结果。如图66(a)所示，MIG2基因在诸如 前髓细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、'f曼性髓细胞性白血病 细月包系K-562、类'淋巴母细月包MOLT-4、伯基特淋巴瘤(Raji )、 SW480 结肠癌纟田月包、A549肺癌细月包和G361黑色素瘤细月包的纟且织中不4皮表 达。根据这样的结果，表明本发明的MIG2基因在正常组织如子宫、
心脏、骨骼肌、肾、肝、肺和外周白细胞中具有抑制肿瘤(抑癌) 功能。3-7. MIG4为了评价MIG4基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如在实施例1中获4寻的一才羊获自三个正常 外子宫颈《且织、三个原发性子宫癌组织和两个子宫癌细"包系的总 RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所 《寻琼脂4唐;疑月交4争移到尼龙月莫(Boehringer-Mannheim, Germany )。然 后利用在实施例1中获得的全长MIG4cDNA将该尼龙膜在42。C下 用32P-标i己的随才几引物纟冢4十杂交过^复。该RNA印迹步吝聚重复两次； 一次利用光密度计进行定量而另 一次用(3 -肌动蛋白探针进行杂交 以确定总mRNA。图37(a)示出了 MIG4基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 组织和子宫癌细月包系中^皮差异表达的RNA印迹结果，而图37(b)是 示出了 (3-肌动蛋白的表达的RNA印迹结果。在图37(a)和图37(b) 中，泳道1至3表示正常外子宫颈组织样品，泳道4至6表示子宫 癌组织样品，泳道7表示子宫癌细胞系HeLa的样品，而泳道8表 示子宫癌细胞系CUMC-6的样品。如图37(a)和图37(b)所示，表明 MIG4基因的表达水平在所有正常外子宫颈组织的三个样品中被高 度才企测到，而其表达7j^平在子宫癌组织的三个片羊品中比正常组织显 著更低，而且在子宫癌细月包系的两个样品中没有才企测到。图52(a)示出了 MIG4基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图52(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 才笨针杂交所获得的RNA印迹结果。如图52(a)所示，约0.5 kb大小 的优势MIG4 mRNA转录子一皮过表达而约2.0 kb大小的转录子在正
常组织如脑、心脏、骨骼肌、大肠、皮、肾、肝、胎盘、肺和外周 血白细月包中也一皮表达。图67a示出了 MIG4基因在各种癌细胞系中^皮差异表达的RNA 印迹结果，而图67(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白探针 杂交所获得的RNA印迹结果。如图67(a)所示，MIG4基因在诸如 前髓细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细刀包、t曼性髓细月包性白血病 细月包系K-562、类'淋巴母细月包MOLT-4、伯基特'淋巴瘤(Raji )、 SW480 结肠癌纟田胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不被表 达。根据这样的结果，表明本发明的MIG4基因在正常组织如脑、 心脏、骨駱肌、大肠、皮、肾、肝、胎盘、肺和外周血白细胞中具 有抑制肿瘤(抑癌)功能。3-8. PIG13为了评价PIG13基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细胞系(A549和 NCI-H358 )的总RNA样品进4亍变性并在1 %甲醛琼脂4唐凝月交中进 行电泳，然后将所得琼脂糖凝胶转移到尼龙膜 (Boehringer—Mannheim, Germany )。'然后矛J用Rediprime II卩逸才几引 物标i己系统(Amersham， United Kingdom )将该尼龙月莫在42°C下用 ,人全长PIG13 cDNA制备的"P-标i己的随才几引物4罙4十杂交过^艾。该 RNA印迹步骤重复两次； 一次利用光密度计进行定量而另一次用P -肌动蛋白探针进行杂交以确定总mRNA。图38(a)示出了 PIG13基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、 寿争移月申癌《且织,口月市癌细月包系中净皮差异表达的RNA印迹结果，而图 38(b)示出了通过用P-肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA
印迹结果。如图38(a)和图38(b)所示，表明PIG13基因的表达水平 在所有正常肺组织的三个样品中#皮高度4企测到，而其表达水平在肺 癌组织的两个才羊品、转移肺癌组织的两个样品和肺癌细胞系的两个 样品中一皮才及;微弱表达或没有才企测到。在正常人类多个纟且织(Clontech)和人类癌细月包系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过一夺印迹(其中乂人正常组织和癌 细胞系^是取的每一个总RNA样品被转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可/人/>司Clontech(U.S.)商购获4寻， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、月台盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是 例如选自由前髓细^/性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、慢性髓细 月包性白血病细月包系K-562、类'淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特 -淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549月市癌纟田月包和G361黑色 素瘤细力包组成的组。图53(a)示出了 PIG13基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图53(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图53(a)所示，约1.0 kb大小 的优势PIG13 mRNA转录子在正常组织如月申、脑、心脏、月几肉、大 肠、脾、肾、肝和小肠中被高度过表达。另外，约4.5kb大小的转 录子在正常组织中也蜂皮表达。图68(a)示出了 PIG13基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图68(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图68(a)所示，在正常组织检 测到的约1.0-kb优势PIG13 mRNA转录子在"i者如前髓细胞性白血病 HL-60、 HeLa子宫癌细胞、l曼性髓细胞性白血病细胞系K-562、类 淋巴母细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌纟田月包、 A549月申癌细月包和G361黑色素瘤细胞的组织中 一点也不净皮表达。才艮 据这样的结果，表明本发明的PIG13基因在正常组织如肺、脑、心脏、肌肉、大肠、脾、肾、肝和小肠中中具有抑制肿瘤(抑癌)功沐 f]匕。3-9. PIG15为了评1介PIG15基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 ju g的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细力包系(A549和 NCI-H358 )的总RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进 行电泳，然后将所得琼脂糖凝胶转移到尼龙膜 (Boehringer-Mannheim， Germany )。 然后利用Rediprime II随机引 物标i己系统(Amersham， United Kingdom )将该尼龙月莫在42°C下用 从全长PIG15 cDNA制备的"P-标记的随机引物探针杂交过夜。该 RNA印迹步-骤重复两次； 一次利用光密度计进4于定量而另一次用(3 -肌动蛋白纟冢针进^亍杂交以确定总mRNA 。图39(a)示出了 PIG15基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、 转移肺癌组织和肺癌细胞系中4皮差异表达的RNA印迹结果，而图 39(b)示出了通过用|3-肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA 印迹结果。如图39(a)和图39(b)所示，表明PIG15基因的表达水平 在所有正常肺组织的三个才羊品中 一皮高度4企测到，而其表达水平在肺 癌纟且织的两个才羊品、4t移"申癌纟且织的两个才羊品禾口肺癌细"包系的两个 才羊品中净皮才及樣丈弱表达或没有^r测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细胞系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过将印迹(其中/人正常组织和癌 细胞系4是取的每一个总RNA样品被转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可,人/>司Clontech(U.S.)商购获得，
并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细月包组成的组，而癌细胞系是例如选自由前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细胞、慢性髓细 胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病MOLT-4、伯基特 '淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549肺癌细月包和G361黑色 素瘤细万包组成的组。图54(a)示出了 PIG15基因在各种正常组织中一皮差异表达的 RNA印迹结果，而图54(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 4罙4十杂交所获4寻的RNA印迹结果。如图54(a)所示，约1.0 kb大小 的优势PIG15 mRNA转录子在正常组织如肺、脑、心脏、月几肉、大 肠、脾、肾、肝和小肠中被高度过表达。图69(a)示出了 PIG15基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图69(b)示出了通过将该相同印迹与(3-月几动蛋白 :探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图69(a)所示，在正常组织斗全 测到的约1.0-kb优势PIG15 mRNA转录子在i者如前髓细月包性白血病 HL-60、 HeLa子宫癌细月包、l曼性髓细月包性白血病细月包系K-562、类 、淋巴母细月包MOLT-4、伯基净寺、淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌纟田月包、 A549肺癌纟田月包和G361黑色素瘤细月包的组织中 一点也不一皮表达。才艮 据这样的结果，表明本发明的PIG15基因在正常组织如肺、脑、心 脏、肌肉、大肠、脾、肾、肝和小肠中具有抑制肿瘤(抑癌)功能。3-10. PIG8为了评价PIG8基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 iug的每一种如在实施例1中获得的一样获自三个正常 外子宫颈组织、三个原发性子宫癌组织和两个子宫癌细力包系的总 RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所 得琼脂^t;疑月交转移到尼龙月莫(Boehringer-Mannheim, Germany )。然 后利用在实施例1-1中获得的全长PIG8 cDNA将该尼龙膜在42。C 下用32P-标记的随机引物探针杂交过夜。该RNA印迹步骤重复两 次； 一次利用光密度计进4亍定量而另一次用|3-月几动蛋白纟罙4j"进^亍杂 交以确定总mRNA。图40(a)示出了 PIG8基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫癌 纟且织和子宫癌细月包系中^皮差异表达的RNA印迹结果，而图40(b)是 示出了 P-肌动蛋白的表达的RNA印迹结果。在图40(a)和图40(b) 中，泳道1至3表示正常外子宫颈组织样品，泳道4至6表示子宫 癌组织才羊品，泳道7表示子宫癌细月包系HeLa的才羊品，而泳道8表 示子宫癌细胞系CUMC-6的样品。如图40(a)和图40(b)所示，表明 PIG8基因的表达水平在所有正常外子宫颈组织的三个才羊品中^皮高 度才企测到，而其表达水平在子宫癌组织的三个冲羊品中比正常组织显 著更j氐，而且在子宫癌细月包系的两个才羊品中没有4全测到。图55(a)示出了 PIG8基因在各种正常组织中被差异表达的RNA 印迹结果，而图55(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白探针 杂交所获4寻的RNA印迹结果。如图55(a)所示，约4.5 kb大小的伊C 势PIG8 mRNA转录子在正常组织如脑、心脏、骨骼3几、肝、胎盘 和外周白细胞中被过表达，而约2.2 kb大小的转录子在正常肝组织 中也被表达。图70(a)示出了 PIG8基因在各种癌细胞系中被差异表达的RNA 印迹结果，而图70(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白探针 杂交所获得的RNA印迹结果。如图70(a)所示，PIG8基因在诸如前 髓细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、l曼性髓细月包性白血病细 月包系K-562、类'淋巴母细胞MOLT-4、伯基净争'淋巴瘤(Raji )、 SW480 结肠癌纟田月包、A549肺癌纟田月包和G361黑色素瘤细月包的组织中不#皮表 达。根据这样的结果，表明本发明的PIG8基因在正常组织如脑、
心脏、骨骼肌、肝、胎盘和外周白细胞中具有抑制肿瘤(抑癌)功6匕 S匕。3-11. MRG1为了评价MRG1基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jug的每一种如在实施例1中获得的一样获自三个正常 外子宫颈纟且织、三个原发性子宫癌组织和两个子宫癌细力包系的总 RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所 4寻琼脂冲唐凌是月交4争移到尼龙月莫(Boehringer-Mannheim, Germany )。然 后利用在实施例1-1中获得的全长MRG1 cDNA将该尼龙膜在42 。C下用32P-标记的随机引物探针杂交过夜。该RNA印迹步骤重复两 次； 一次利用光密度计进行定量而另一次用P-月几动蛋白纟罙4十进4亍杂 交以》角定总mRNA。图41(a)示出了 MRG1基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫 癌组织和子宫癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图41(b) 是示出了 (3-肌动蛋白的表达的RNA印迹结果。在图41(a)和图41(b) 中，泳道1至3表示正常外子宫颈组织样品，泳道4至6表示子宫 癌组织才羊品，泳道7表示子宫癌细月包系HeLa的冲羊品，而泳道8表 示子宫癌细胞系CUMC-6的样品。如图41(a)和图41(b)所示，表明 MRG1基因的表达水平在所有正常外子宫颈组织的三个样品中被 高度4企测到，而其表达 K平在子宫癌组织的三个才羊品中比正常组织 显著更〗氐，而且在子宫癌细l包系的两个样品中没有冲全测到。图56(a)示出了 MRG1基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图56(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 4笨4十杂交所获4寻的RNA印迹结果。如图56(a)所示，约5,0 kb大小的优势MRG1 mRNA转录子被过表达，并且约2.0 kb大小的转录 子在正常组织如心脏、骨骼肌、肾、肝和胎盘中也被表达。图71(a)示出了 MRG1基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图71(b)示出了通过将该相同印迹与(3-月几动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图71(a)所示，MRG1基因在 诸如前髓细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、十曼性髓细月包性白 血病细月包系K-562、类、淋巴母细月包MOLT-4、伯基净争'淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549肺癌细月包和G361黑色素瘤细胞的组织 中不一皮表达。才艮据这样的结果，表明本发明的MRG1基因在正常组 织如子宫、心脏、骨骼肌、肾、肝、胎盘、肺和外周白细胞中具有 抑制肿瘤(抑癌)功能。3-12. PIG22为了评1"介PIG22基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 jag的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细胞系(A549和 NCI-H358 )的总RNA样品进行变性并在1 %甲醛琼脂糖凝胶中进 4亍电泳，然后将所得琼脂糖凝月交转移到尼龙膜 (Boehringer-Mannheim, Germany )。 》求后矛J用Rediprime II卩遺才几引 物标记系统(Amersham， United Kingdom )将该尼龙膜在42。C下用 从全长PIG22 cDNA制备的32P-标记的随机引物探针杂交过夜。该 RNA印迹步-骤重复两次； 一次利用光密度计进4亍定量而另一次用P -肌动蛋白探针进行杂交以确定总mRNA。图42(a)示出了 PIG22基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、 转移肺癌组织和肺癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图 42(b)示出了通过用P-肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA 印迹结果。如图42(a)和图42(b)所示，表明PIG22基因的表达水平 在所有正常肺组织的三个样品中一皮高度4企测到，而其表达水平在肺 癌组织的两个样品、转移肺癌组织的两个样品和肺癌细力包系的两个 才羊品中 一皮纟鼓弱一全测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细胞系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是"i兌，通过将印迹(其中乂人正常组织和癌 细胞系揭:耳又的每一个总RNA样品一皮转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可/人,>司Clontech(U.S.)商购获々寻， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是 例如选自由前髓细月包性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、l曼性髓细 月包性白血病细胞系K-562、类'淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特 淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色 素瘤细"包纟且成的纟且。图57(a)示出了 PIG22基因在各种正常组织中,皮差异表达的 RNA印迹结果，而图57(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 4笨针杂交所获得的RNA印迹结果。如图57(a)所示，约5 kb大小的 优势PIG22mRNA转录子在正常组织如肺、心脏、肌肉、肾和肝中 被高度过表达。另外，约2kb大小的转录子在正常组织中也被表达。图72(a)示出了 PIG22基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图72(b)示出了通过将该相同印迹与(3 -肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图72(a)所示，在正常组织检 测到的约1.3 -kb <尤势PIG22 mRNA專争录子在i者如前髓细月包性白血病 HL-60、 HeLa子宫癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类 淋巴母细月包MOLT-4、伯基净争'淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌纟田月包、 A549肺癌细月包和G361黑色素瘤细月包的组织中 一点也不净皮表达或,皮
微弱表达。根据这样的结果，表明本发明的PIG22基因在正常组织如肺、心脏、肌肉、肝和胎盘中具有抑制胂瘤(抑癌)功能。3-13. MIG9为了评^介MIG9基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 iu g的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和肺癌细力包系(A549和 NCI-H358 )的总RNA冲羊品进4亍变性并在1 %甲醛琼脂辟唐凑是月交中进 4亍电泳，然后将所得琼脂糖凝胶转移到尼龙膜 (Boehringer-Mannheim, Germany )。 然后利用Rediprime II随机引 物标记系统(Amersham, United Kingdom )将该尼龙月莫在42°C下用 从全长MIG9 cDNA制备的"P-标记的随机引物探针杂交过夜。该 RNA印迹步骤重复两次； 一次利用光密度计进4亍定量而另一次用(3 -肌动蛋白探针进行杂交以确定总mRNA。图43(a)示出了 MIG9基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、转 移月市癌ifL织和月市癌细月包系中—皮差异表达的RNA印迹结果，而图43(b) 示出了通过用P -肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA印迹 结果。如图43(a)和图43(b)所示，表明MIG9基因的表达水平在所 有正常肺组织的三个样品中被高度检测到，而其表达水平在肺癌组 织的两个才羊品、转移肺癌组织的两个才羊品和力市癌细力包系的两个样品 中一皮樣i弱4佥测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细胞系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过将印迹(其中乂人正常组织和癌 细胞系提取的每一个总RNA样品被转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可/人爿^司Clontech(U.S.)商购获得， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是例^(。选自由前骨it细月包寸生白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、十曼寸生骨逸细 月包性白血病细月包系K-562、类'淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特 淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549肺癌细J包和G361黑色 素瘤细"包纟且成的纟且。图58(a)示出了 MIG9基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图58(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图58(a)所示，约5 kb大小的 优势MIG9mRNA转录子在正常组织如心脏、肌肉、肾、肝、胎盘 和外周血中被高度过表达。另夕卜，约2kb大小的转录子在正常组织 中也被表达。图73(a)示出了 MIG9基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图73(b)示出了通过将该相同印迹与P-月几动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图73(a)所示，在正常组织检 测到的约5-kb优势MIG9 mRNA转录子在i者如前髓细月包性白血病 HL-60、 HeLa子宫癌细月包、十曼性髓细胞性白血病细月包系K-562、类 淋巴母细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细胞、 A549肺癌细月包和G361黑色素瘤细胞的组织中不一皮表达或一皮农i弱表 达。才艮据这样的结果，表明本发明的MIG9基因在正常组织如肺、 心脏、肌肉、肾、肝、胎盘和外周血中具有抑制肿瘤(抑癌)功負fe。3-14. MIG11为了评价MIGll基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 m g的每一种如实施例1中描述的获自三个正常肺组织、 两个原发性肺癌组织、两个转移肺癌组织和月申癌细胞系(A549和 NCI-H358 )的总RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进
行电泳，然后将所得琼脂糖凝胶转移到尼龙月莫(Boehringer-Mannheim， Germany )。亥求后矛J用Rediprime II卩逸才几引 物标i己系统(Amersham， United Kingdom )爿寻该尼龙月莫在42°C下用 乂人全长MIG11 cDNA制备的"P-标记的随^L引物^:针杂交过^^。该 RNA印迹步4聚重复两次； 一次利用光密度计进4亍定量而另一次用(3 -肌动蛋白探针进行杂交以确定总mRNA。图44(a)示出了 MIG11基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、 转移肺癌组织和肺癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图 44(b)示出了通过用(3-肌动蛋白探针杂交该相同印迹所获得的RNA 印迹结果。如图44(a)和图44(b)所示，表明MIG11基因的表达水平 在所有正常肺组织的三个样品中被高度检测到，而其表达水平在肺 癌纟且织的两个才羊品、4争移"市癌组织的两个才羊品和S申癌细力包系的两个 样品中初G鼓弱4佥测到。在正常人类多个组织(Clontech)和人类癌细月包系(Clontech ) 上实施RNA印迹。也就是i兌，通过^]夸印迹(其中/人正常组织和癌 细胞系提取的每一个总RNA样品被转移)以上述相同方式杂交而 实施RNA印迹，其中所述印迹可AU^司Clontech( U.S.)商购获得， 并且正常组织是例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、 肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系是 例如选自由前髓细胞性白血病HL-60、 HeLa子宫癌细月包、慢性髓细 胞性白血病细月包系K-562、类'淋巴母细月包白血病MOLT-4、伯基特 -淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌细月包、A549肺癌细月包和G361黑色 素瘤细力包纟且成的组。图59(a)示出了 MIG11基因在各种正常组织中^皮差异表达的 RNA印迹结果，而图59(b)示出了通过将该相同印迹与|3-肌动蛋白 才笨针杂交所获得的RNA印迹结果。如图59(a)所示，约5 kb大小的 优势MIGll mRNA转录子在正常组织如心脏、肌肉、脾、肾、肝、
胎盘和外周血中被高度过表达。另外，约2kb大小的转录子在正常 组织中也^皮表达。图74(a)示出了 MIG11基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图74(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图74(a)所示，在正常组织氺全 测到的约5-kb优势MIGll mRNA转录子在诸如前髓细胞性白血病 HL-60、 HeLa子宫癌细月包、十曼性髓细胞性白血病细月包系K-562、类 淋巴母细胞MOLT-4、伯基净争淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠癌纟田刀包、 A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不被表达或被微弱表 达。4艮据这样的结果，表明本发明的MIG11基因在正常组织如肺、 心脏、肌肉、脾、肾、肝、胎盘和外周血中具有抑制肿瘤(抑癌) 功能。3-15. MIG15为了评价MIG15基因的表达水平，实施RNA印迹如下。将20 iug的每一种如在实施例1中获得的一样获自三个正常 外子宫颈组织、三个原发性子宫癌组织和两个子宫癌细"包系的总 RNA样品进行变性并在1 %曱醛琼脂糖凝胶中进行电泳，然后将所 4寻琼脂冲唐;疑月交4i移到尼龙月莫(Boehringer-Mannheim, Germany )。然 后利用在实施例1中获得的全长MIG15 cDNA将该尼龙膜在42°C 下用"P-标记的随机引物探针杂交过夜。该RNA印迹步骤重复两 次； 一次利用光密度计进行定量而另一次用P-肌动蛋白探针进行杂 交以；角定总、mRNA。图45(a)示出了 MIG15基因在正常外子宫颈组织、原发性子宫 癌组织和子宫癌细胞系中被差异表达的RNA印迹结果，而图45(b) 是示出了 (3 -肌动蛋白的表达的RNA印迹结果。在图45(a)和图45(b) 中，泳道1至3表示正常外子宫颈组织样品，泳道4至6表示子宫 癌组织才羊品，泳道7表示子宫癌细l包系HeLa的才羊品，而泳道8表 示子宫癌细月包系CUMC-6的才羊品。^口图45(a),口图45(b)所示，表明 MIG15基因的表达水平在所有正常外子宫颈《且织的三个才羊品中蜂皮 高度4全测到，而其表达水平在子宫癌组织的三个样品中比正常组织 显著更4氐，而且在子宫癌细胞系的两个样品中被微弱检测到。图60(a)示出了 MIG15基因在各种正常组织中被差异表达的 RNA印迹结果，而图60(b)示出了通过将该相同印迹与(3-肌动蛋白 ^笨4十杂交所获4寻的RNA印迹结果。如图60(a)所示，约9.5 kb大小 的优势MIG15 mRNA转录子在正常组织如心脏、骨骼肌、胸腺、 脾、肾、肝、小肠、胎盘和外周血中被过表达。图75(a)示出了 MIG15基因在各种癌细胞系中被差异表达的 RNA印迹结果，而图75(b)示出了通过将该相同印迹与P-肌动蛋白 探针杂交所获得的RNA印迹结果。如图75(a)所示，MIG15基因在 诸如前髓细胞性白血病HL-60、伯基特淋巴瘤(Raji)、 SW480结肠 癌纟田月包、A549肺癌细月包和G361黑色素瘤细月包的组织中不一皮表达， 并且在诸如HeLa子宫癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562 和类'淋巴母细胞MOLT-4的组织中 一皮4及樣i弱表达。根据这样的结果，表明本发明的MIG15基因在正常组织如子 宫、心脏、骨骼肌、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和外周血中具 有抑制肿瘤(抑癌)功能。实施例4:表达载体的构建和转染4-1. GIG1 包含GIG1的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长GIG1 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/GIGl 。利用脂质体 (lipofectamine (Gibco BRL)) 一寻该表达载体專争染到HeLa子宫癌细 胞系(ATCC CCL-2 )中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 ( Gibco ) 的DMEM培养基中孵育以选4奪转染的细胞。这时，将由缺少GIG1 cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包用作只于照纟且。4-2. GIG3包含GIG3的编码区的表达载体,皮构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长GIG3 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG3 。利用脂质体 (lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549月t癌纟田月包 系中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培养基中 孵育以选冲奪转染的细胞。这时，将由缺少GIG3 cDNA的表达载体 pcDNA3.1 4#染的A549细月包用作乂于照纟且。4-3. GIG4包含GIG4的编码区的表达载体一皮构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长GIG4 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG4。利用月旨质体 (lipofectamine (Gibco BRL))—寻该表达载体转染到A549肺癌细月包 系中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培养基中 孵育以选择转染的细胞。这时，将由缺少GIG4 cDNA的表达载体 pcDNA3.1转染的A549细胞用作对照组。4-4. GIG5
包含GIG5的编码区的表达载体^皮构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长GIG5 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG5 。利用月旨质体 (lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549月申癌细月包 系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培养基中 孵育以选l奪转染的细胞。这时，将由缺少GIG5 cDNA的表达载体 pcDNA3.1转染的A549细胞用作对照组。4-5. GIG 11包含GIGll的编码区的表达载体纟皮构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长GIG11 cDNA克隆体4翁入真冲亥表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获^f表达载体pcDNA3.1/GIGl 1 。利用 脂质体(lipofectamine (Gibco BRL))卄寻该表达载体專争染到MCF-7 享'L癌细月包系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM 培养基中孵育以选^奪转染的细胞。这时，将由缺少GIG11 cDNA的 表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞用作对照组。4-6. MIG2包含MIG2的编码区的表达载体,皮构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长MIG2 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/MIG2。利用脂质体 (lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到HeLa子宫癌细 胞系(ATCC CCL-2 )中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 ( Gibco ) 的DMEM培养基中聘育以选一奪转染的细胞。这时，将由缺少MIG2 cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包用作对照组。4-7. MIG4 包含MIG4的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长MIG4 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获4寻表达栽体pcDNA3.1/MIG4。利用脂质体 (lipofectamine (Gibco BRL) ) ^1寻该表达载体4争染到HeLa子宫癌细 胞系(ATCC CCL-2 )中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 ( Gibco ) 的DMEM培养基中孵育以选择转染的细胞。这时，将由缺少MIG4 cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞用作对照组。4-8. PIG13包含PIG13的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长PIG13 cDNA克隆体插入真核表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen， U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/PIG13。利用 脂质体(lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549肺 癌细胞系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培 养基中孵育以选择转染的细胞。这时，将由缺少PIG13 cDNA的表 达载体pcDNA3.1转染的A549细月包用作对照组。4-9. PIG15包含PIG15的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长PIG15 cDNA克隆体插入真核表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获4寻表达载体pcDNA3.1/PIG15。利用 脂质体(lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549肺 癌细月包系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培 养基中孵育以选择转染的细胞。这时，将由缺少PIG15 cDNA的表 达载体pcDNA3.1转染的A549细胞用作对照组。4-10. PIG8
包含PIG8的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施例2中制备的全长PIG8 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/PIG8 。利用月旨质体 (lipofectamine (Gibco BRL)) 一寻该表达载体4争染到HeLa子宫癌细 胞系(ATCC CCL-2 )中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 ( Gibco ) 的DMEM ;咅养基中孵育以选々奪淬争染的纟田月包。这时，^)寻由缺少PIG8 cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包用作对照组。4-11. MRG1包含MRG1的编码区的表达载体,皮构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长MRGl cDNA克隆体插入真核表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/MRGl 。利用 脂质体(lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到HeLa子 宫癌细月包系(ATCC CCL-2)中，然后在包才舌0.6 mg/ml的G418 (Gibco )的DMEM培养基中卯孚育以选才奪转染的细胞。这时，将由 缺少MRGl cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包用作对 照组。4-12. PIG22包含PIG22的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长PIG22 cDNA克隆体4翁入真斗亥表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen， U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/PIG22。利用 脂质体(lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549肺 癌细月包系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培-养基中孵育以选择转染的细胞。这时，将由缺少PIG22cDNA的表 达载体pcDNA3.1转染的A549细月包用作对照组。4-13. MIG9
包含MIG9的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实施 例2中制备的全长MIG9 cDNA克隆体插入真核表达载体pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/MIG9。利用月旨质体 (lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549肺癌细月包 系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM培养基中 孵育以选才奪转染的细月包。这时，将由缺少MIG9 cDNA的表达载体 pcDNA3.1转染的A549细月包用作对照组。4-14. MIG11包含MIG11的编码区的表达载体一皮构建如下。首先，将在实 施例2中制备的全长MIG11 cDNA克隆体插入真核表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/MIG11。利 用脂质体(iipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到A549 月申癌细月包系中，然后在包4舌0.6 mg/ml的G418 ( Gibco )的DMEM 培养基中孵育以选才奪转染的细胞。这时，将由缺少MIG11 cDNA的 表达载体pcDNA3,1转染的A549细月包用作对照组。4-15. MIG15包含MIG15的编码区的表达载体被构建如下。首先，将在实 施例2中制备的全长MIG15 cDNA克隆体插入真核表达载体 pcDNA3.1 (Invitrogen, U.S.)以获得表达载体pcDNA3.1/MIGl5。利 用脂质体(lipofectamine (Gibco BRL))将该表达载体转染到HeLa 子宫癌细胞系(ATCCCCL-2)中，然后在包括0.6 mg/ml的G418 (Gibco)的DMEM培养基中孵育以选择转染的细胞。这时，将由 缺少MIG15 cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞用作对 照组。实施例5:由基因转染的细胞的生长曲线
5-1. GIG1为了确定GIG1基因对子宫癌细胞生长的影响，将正常HeLa 纟田月包、由实施例4中制备的GIG1基因4争染的HeLa子宫癌细月包和 ^义由载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞分别以1 x 105个细"包/ml的细 月包浓度在DMEM i咅养基中孵育9天。将细月包乂人它们附着的i条养并瓦 中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)，然后才艮据 台盼蓝染泮牛4非除(Freshney, LR., Culture of Animal Cells, 2nd Ed, A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄丈存活的细月包。图76示出了正常HeLa纟田月包、由实施例4中制备的GIG1基因 转染的HeLa子宫癌细胞和^义由表达载体pcDNA3.1转染的HeLa 细月包的生长曲线。如图76所示，其表明与由表达载体pcDNA3.1 转染的HeLa细月包和正常HeLa纟田月包相比，由GIG1基因4争染的HeLa 子宫癌细胞表现出更高的死亡率。在孵育9天之后，当与正常HeLa 纟田月包相比时，仅有50 %的由GIG 1基因转染的HeLa子宫癌纟田月包Y呆 持存活。根据这样的结果，可以看出GIG1基因抑制子宫癌细胞的 生长。5-2. GIG3为了确定GIG3基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG3转染的A549肺癌 细月包和^f又由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个纟田月包 /ml的细胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的 i咅养并瓦中分离出来(每一个i咅养液用月夷蛋白酶(Sigma)处理)，然 后才艮据台盼蓝染并十排除法(Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2ndEd. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄史存 5舌的纟田月包。 图77示出了野生型A549细胞、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/GIG3转染的A549肺癌细月包和4又由载体pcDNA3.1转染 的A549细胞的生长曲线。如图77所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细月包和野生型A549纟田胞相比，由载体 pcDNA3.1/GIG3转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在孵 育9天之后，当与野生型A549细胞相比时，4又有约70%的由载体 pcDNA3.1/GIG3转染的A549肺癌细胞保持存活。根据这样的结果， 可以看出GIG3基因抑制肺癌细胞的生长。5-3. GIG4为了确定GIG4基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG4转染的A549肺癌 细胞和1义由载体pcDNA3.1转染的A549细胞分别以1 x 105个细月包 /ml的细胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的 培养瓶中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sig ma )处理),然 后才艮据台盼蓝染泮十排除法(Freshney, LR.， Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7牙口 9天i十凄t存 S舌的纟田月包。图78示出了野生型A549纟田月包、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/GIG4转染的A549肺癌细胞和仅由载体pcDNA3.1转染 的A549细胞的生长曲线。如图78所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细月包和野生型A549纟田胞相比，由载体 pcDNA3.1 /GIG4转染的A549月申癌细月包表现出更高的死亡率。在孵 育9天之后，当与野生型A549细月包相比时， <又有约70%的由载体 pcDNA3.1/GIG4转染的A549肺癌细胞保持存活。才艮据这样的结果， 可以看出GIG4基因抑制肺癌细胞的生长。5-4. GIG5 为了确定GIG5基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG5转染的A549肺癌 细月包和^又由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个细月包 /ml的细J包浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞乂人它们附着的 培养瓶中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)，然 后才艮据台盼蓝染#牛排除法(Freshney, I.R.， Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第l、 3、 5、 7和9天计凄t存 5舌的纟田月包。图79示出了宝予生型A549纟田月包、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/GIG5转染的A549肺癌细胞和4义由载体pcDNA3.1转染 的A549细月包的生长曲线。如图79所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1 4争染的A549纟田月包和野生型A549纟田月包相比，由载体 pcDNA3.1/GIG5转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在孵 育9天之后，当与野生型A549细胞相比时，4又有约70%的由载体 pcDNA3.1/GIG5转染的A549肺癌细月包保持存活。才艮据这样的结果， 可以看出GIG5基因抑制肺癌细胞的生长。5-5. GIGU为了确定GIGll基因对乳癌细胞生长的影响，将野生型MCF-7 细胞、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG11转染的MCF-7乳 癌细月包和^又由载体pcDNA3.1转染的MCF-7细月包分别以1 x 105个 细月包/ml的细i包浓度在DMEMi备养基中將育9天。将细月包,人它们附 着的培养瓶中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma )处理)， 然后4艮氺居台盼蓝染泮牛朝卜除法(Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2ndEd. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄丈存 ;舌的细月包。
图80示出了野生型MCF-7细胞、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/GIG11转染的MCF-7乳癌细胞和仅由载体pcDNA3.1转 染的MCF-7细胞的生长曲线。如图80所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的MCF-7细月包和野生型MCF-7纟田月包相比，由载体 pcDNA3.1/GIG11專争染的MCF-7乳癌细月包表i见出更高的死亡率。在 孵育9天之后，当与野生型MCF-7细胞相比时，仅有50%的由载 体pcDNA3.1/GIG11转染的MCF-7乳癌细胞保持存活。根据这样 的结果，可以看出GIG11基因抑制乳癌细胞的生长。5-6. MIG2为了确定MIG2基因对子宫癌细胞生长的影响，将正常HeLa 纟田月包、由实施例4中制备的MIG2基因转染的HeLa子宫癌细胞和 <又由载体pcDNA3.1 !争染的HeLa纟田！包分另'J以1 x 105个细月包/ml的细 胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的培养瓶 中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)，然后才艮据 台盼蓝染料排除法(Freshney, I.R" Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss， New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计lt存活的细 胞。图81示出了正常HeLa细胞、由实施例4中制备的MIG2基因 转染的HeLa子宫癌细胞和^f又由表达载体pcDNA3.1转染的HeLa 细胞的生长曲线。如图81所示，其表明与由表达载体pcDNA3.1 转染的HeLa细胞和正常HeLa细胞相比，由MIG2基因转染的HeLa 子宫癌细胞表现出更高的死亡率。在孵育9天之后，当与正常HeLa 纟田月包相比时，4义有20 %的由MIG2基因寿争染的HeLa子宫癌细月包j呆 持存活。根据这样的结果，可以看出MIG2基因抑制子宫癌细胞的 生长。5-7. MIG4
为了确定MIG4基因对子宫癌细胞生长的影响，将正常HeLa 细月包、由实施例4中制备的MIG4基因4争染的HeLa子宫癌细月包和 <又由载体pcDNA3.1專争染的HeLa纟田月包分另ll以1 x 105个细月包/ml的细 胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的培养瓶 中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)，然后根据 台盼蓝染料排除法(Freshney, I.R.， Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R.Liss， New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄史存活的细 胞。图82示出了正常HeLa纟田月包、由实施例4中制备的MIG4基因 转染的HeLa子宫癌细胞和仅由表达载体pcDNA3.1转染的HeLa 细月包的生长曲线。如图82所示，其表明与由表达载体pcDNA3.1 转染的HeLa细月包和正常HeLa纟田月包相比，由MIG4基因转染的HeLa 子宫癌细胞表现出更高的死亡率。在孵育9天之后，当与正常HeLa 细月包相比时，4又有50 %的由MIG4基因4争染的HeLa子宫癌纟田月包4呆 持存活。根据这样的结果，可以看出MIG4基因抑制子宫癌细胞的 生长。5-8. PIG13为了确定PIG13基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG13转染的A549肺 癌细月包和4叉由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个纟田 胞/ml的细胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着 的培养并瓦中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)， 然后才艮据台盼蓝染并牛排除法(Freshney, I.R.， Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R.Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄t存 5舌的纟田月包。
图83示出了野生型A549细胞、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/PIG13转染的A549肺癌细胞和仅由载体pcDNA3.1转染 的A549细胞的生长曲线。如图83所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细胞和野生型A549纟田胞相比，由载体 pcDNA3.1/PIG13转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在孵 育9天之后，当与野生型A549细胞相比时， <又有约30%的由载体 pcDNA3.1 /PIG 13转染的A549肺癌细胞保持存活。根据这样的结果， 可以看出PIG13基因抑制肺癌细胞的生长。5-9. PIG15为了确定PIG15基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG15转染的A549肺 癌细J包和yf又由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个细 月包/ml的细月包浓度在DMEM培养基中將育9天。将细月包/人它们附着 的培养瓶中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)， 然后根据台盼蓝染料排除法(Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄t存 5舌的纟田月包。图84示出了野生型A549纟田月包、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/PIG15转染的A549肺癌细胞和4叉由载体pcDNA3.1转染 的A549细月包的生长曲线。如图84所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细月包禾口虔予生型A549细月包才目比，由载体 pcDNA3.1/PIG15转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在將 育9天之后，当与野生型A549细胞相比时，仅有约30%的由载体 pcDNA3.1/PIG15转染的A549肺癌细胞保持存活。才艮据这样的结果， 可以看出PIG15基因抑制肺癌细胞的生长。5-10. PIG8
为了确定PIG8基因对子宫癌细胞的影响，将正常HeLa细胞、 由实施例4中制备的PIG8基因转染的HeLa子宫癌细胞和仅由载体 pcDNA3.1转染的HeLa纟田月包分另'j以1 x 105个细月包/ml的细月包浓度在 DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的培养瓶中分离出来 (每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)，然后才艮据台盼蓝染料 排除法(Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7禾口 9天计凄t存活的细月包。图85示出了正常HeLa纟田月包、由实施例4中制备的PIG8基因 转染的HeLa子宫癌细胞和仅由表达载体pcDNA3.1转染的HeLa 细月包的生长曲线。如图85所示，其表明与由表达载体pcDNA3.1 转染的HeLa细胞和正常HeLa细胞相比，由PIG8基因转染的HeLa 子宫癌细月包表i见出更高的死亡率。在孵育9天之后，当与正常HeLa 细月包相比时，仅有50%的由PIG8基因寿争染的HeLa子宫癌细月包^f呆 持存活。根据这样的结果，可以看出PIG8基因抑制子宫癌细胞的 生长。5-11. MRG1为了确定MRG1基因对子宫癌细月包生长的影响，将正常HeLa 纟田月包、由实施例4中制备的MRG1基因4争染的HeLa子宫癌细月包和 i"又由载体pcDNA3.1转染的HeLa细月包分别以1 x 1(^个细胞/ml的细 胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的培养瓶 中分离出来(每一个培养液用月夷蛋白酶(Sigma)处理)，然后才艮据 台盼蓝染泮+4非除法(Freshney, I.R.， Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄t存活的细 胞。图86示出了正常HeLa细胞、由实施例4中制备的MRG1基 因转染的HeLa子宫癌细胞和仅由表达载体pcDNA3.1转染的HeLa
细胞的生长曲线。如图86所示，其表明与由表达载体pcDNA3.1 转染的HeLa细胞和正常HeLa细胞相比，由MRG1基因转染的HeLa 子宫癌细胞表现出更高的死亡率。在將育9天之后，当与正常HeLa 细胞相比时，仅有40%的由MRGl基因转染的HeLa子宫癌细胞保 持存活。根据这样的结果，可以看出MRGl基因抑制子宫癌细胞的 生长。5-12. PIG22为了确定PIG22基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG22转染的A549肺 癌细月包和l又由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个纟田 月包/ml的细胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞,人它们附着 的培养瓶中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)， 然后4艮据台盼蓝染泮牛排除法(Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄t存 5舌的纟田月包。图87示出了罢予生型A549纟田月包、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/PIG22转染的A549肺癌细胞和4叉由载体pcDNA3.1转染 的A549细月包的生长曲线。如图87所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细月包和野生型A549纟田月包相比，由载体 pcDNA3.1/PIG22转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在孵 育9天之后，当与野生型A549细胞相比时， <义有约40%的由载体 pcDNA3.1/PIG22转染的A549肺癌细胞保持存活。根据这样的结果， 可以看出PIG22基因抑制肺癌细胞的生长。5-13. MIG9m
为了确定MIG9基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 细月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/MIG9转染的A549月，癌 细月包和4又由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个细月包 /ml的细胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着的 i咅养弁瓦中分离出来(每一个i咅养'液用月夷蛋白酶(Sigma)处理)，然 后才艮据台盼蓝染泮+排除法(Freshney, I.R.， Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss， New York (1987))在第1 、 3 、 5 、 7和9天计凄t存 活的细月包。图88示出了野生型A549细^^、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/MIG9转染的A549肺癌细月包和^f又由载体pcDNA3.1 4争染 的A549细l包的生长曲线。如图88所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细胞和野生型A549纟田月包相比，由载体 pcDNA3.1/MIG9转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在聘 育9天之后，当与野生型A549细胞相比时， <又有约40%的由载体 pcDNA3.1/MIG9转染的A549肺癌细胞保持存活。根据这样的结果， 可以看出MIG9基因抑制肺癌细胞的生长。5-14. MIG11为了确定MIGll基因对肺癌细胞生长的影响，将野生型A549 纟田月包、由实施例4中制备的载体pcDNA3.1/MIG11转染的A549肺 癌细月包和1，又由载体pcDNA3.1转染的A549细月包分别以1 x 105个细 胞/ml的细胞浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞从它们附着 的培养瓶中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)， 然后才艮据台盼蓝染谇牛才非除法(Freshney， I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss， New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄t存 5舌纟田月包。
图89示出了野生型A549细胞、由实施例4中制备的载体 pcDNA3.1/MIG11转染的A549肺癌细胞和仅由载体pcDNA3.1转染 的A549细胞的生长曲线。如图89所示，其表明与由表达载体 pcDNA3.1转染的A549细月包和野生型A549细月包相比，由载体 pcDNA3.1/MIG11转染的A549肺癌细胞表现出更高的死亡率。在 孵育9天之后，当与野生型A549纟田月包相比时， <义有约30 %的由载 体pcDNA3.1/MIG11转染的A549肺癌细胞保持存活。根据这样的 结果，可以看出MIG11基因抑制肺癌细胞的生长。5-15. MIG15为了确定MIG15基因对子宫癌细胞生长的影响，将正常HeLa 细月包、由实施例4中制备的MIG15基因寿争染的HeLa子宫癌细万包禾口 <义由载体pcDNA3.1转染的HeLa纟田月包分另'J以1 x 105个细月包/ml的细 月包浓度在DMEM培养基中孵育9天。将细胞乂人它们附着的培养^f瓦 中分离出来(每一个培养液用胰蛋白酶(Sigma)处理)，然后根据 台盼蓝染料排除法(Freshney, l.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))在第1、 3、 5、 7和9天计凄t存活细月包。图90示出了正常HeLa纟田月包、由实施例4中制备的MIG15基 因转染的HeLa子宫癌细胞和仅由表达载体pcDNA3.1转染的HeLa 细胞的生长曲线。如图90所示，其表明与由表达载体pcDNA3.1 转染的HeLa细月包和正常HeLa纟田月包相比，由MIG15基因转染的 HeLa子宫癌细月包表i见出更高的死亡率。在孵育9天之后，当与正 常HeLa纟田月包相比时，仅有约50%的由MIG15基因转染的HeLa子 宫癌细胞保持存活。才艮据这样的结果，可以看出MIG15基因抑制 子宫癌细力包的生长。工业应用如上可看出，本发明的这些基因可用于i貪断和预防人类癌症。
权利要求
1. 一种人类抑癌蛋白，具有选自由SEQ ID NO2、SEQ ID NO6、SEQ ID NO10、SEQ ID NO14、SEQ ID NO18、SEQ ID NO22、SEQ ID NO26、SEQ ID NO30、SEQ ID NO34、SEQ IDNO38、SEQ ID NO42、SEQ ID NO46、SEQ ID NO50、SEQ ID NO54、和SEQ ID NO58组成的组中的氨基酸序列。
2. 根据权利要求1所述的人类抑癌基因，其中，人类抑癌基因以 选自由SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 5、 SEQ ID NO: 9、 SEQ ID NO: 13、 SEQ ID NO: 17、 SEQ ID NO: 21、 SEQ ID NO: 25、 SEQ ID NO: 29、 SEQ ID NO: 33、 SEQ ID NO: 37、 SEQ ID NO: 41、 SEQ ID NO: 45、 SEQ ID NO: 49、 SEQ ID NO: 53、和SEQ ID NO: 57组成的组中的DNA序列限定，其中每一个所述 DNA序列编码所述蛋白。
3. 根据权利要求1所述的人类抑癌蛋白，其中，所述癌来源于选 自由肺、心脏、肌肉、肾、子宫、乳房和肝组成的组中的正常 组织。
4. 根据权利要求2所述的人类抑癌基因，其中，所述癌来源于选 自由肺、心脏、肌肉、肾、子宫、乳房和肝组成的组中的正常 组织。
5. —种表达载体，包含权利要求2中所定义的每一种所述基因。
全文摘要
本发明披露了一种人类抑癌基因、其编码的一种蛋白、包含该抑癌基因的一种表达载体以及用该载体转化的微生物。根据本发明的所述基因可以用于诊断和预防人类癌症。
文档编号C07K14/47GK101128481SQ200580048681
公开日2008年2月20日 申请日期2005年12月28日 优先权日2004年12月28日
发明者金弦起, 金振宁 申请人:金弦起