专利名称：阿魏酸与苦参碱类化合物形成的化合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物既增加阿魏酸的生物学效应又能够增加苦参碱类化合物的生物学效应。例如抗脏器纤维化作用，改善血液流变学，抗病毒作用，抗炎作用，抑制胆碱酯酶的作用，止痛和止痒作用，抗血栓作用，抗血小板聚集作用，抗菌作用，抗肿瘤作用，抗氧化作用，降血脂作用，抗动脉硬化，抗风湿、增加免疫，增加精子活力和运动，抗高血压作用等。
本发明所涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物形成化合物可明显增强阿魏酸和苦参碱类化合物的药理作用。包括对心脏和血管的作用，对中枢神经系统的作用，治疗肝炎的作用，治疗脏器纤维化的作用，改善血液流变学的作用，消炎止痛和止痒作用，改善免疫的作用，抗菌和抗病毒作用等。
本发明所涉及的阿魏酸与苦参碱类形成的盐类和酯类化合物可明显减轻阿魏酸和/或苦参碱类化合物的毒性作用。
本发明涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物可明显增加阿魏酸和苦参碱类生物碱的水溶性和脂溶性。
本发明涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物可以采用药剂学的方法制成口服制剂、注射剂、以及皮肤粘膜用制剂，其抗脏器纤维化、改善血液流变学、抗病毒、抗炎、抑制胆碱酯酶、止痛和止痒、抗血栓、抗血小板聚集、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、抗动脉硬化、抗风湿、增加免疫、增加精子活力和运动、抗高血压作用等。用于抗肿瘤、抗动脉硬化、治疗心、脑血管病、骨关节疾病、感冒、老年痴呆、皮肤的炎症、湿疹、痤疮、斑丘疹、荨麻疹、牛皮癣、胃肠道动力低下，肝炎、肾炎等脏器的炎症和脏器纤维化、以及全身和/或脏器发生的急性和慢性炎症。
具体实施例 实施例一阿魏酸苦参素复方冻干粉针的的制备 将阿魏酸用少许乙醇溶解，加入等摩尔的苦参素水溶液，按照常规方法制成冻干粉针。
实施例二阿魏酸槐果碱酰胺的合成 将阿魏酸和苦参素加入反应釜中，加入催化剂反应后，硅胶柱层析分离得化合物。
实施例三阿魏酸苦参碱酯的合成 准确称取一定量的阿魏酸置于锥形瓶中，加入一定量的苦参碱，加入催化剂溶液，封口，置于恒温振荡水浴中，80℃，反应10小时，反应完后，硅胶柱层析分离得化合物。
所合成的20种衍生物的取代基团见下表。
表1.R1和R2位置上常见的取代基代表 表2.R4，R5，R6，R7基团常见的取代基代表 实施例三几种化合物抗炎作用与苦参素和阿魏酸的抗炎作用的比较 选取健康小鼠，每组10只。灌胃给药20mg/kg，连续3天，末次给药30min后，腹腔注射0.6％醋酸10ml/kg，记录15min内小鼠出现扭体反应次数。计算药物镇痛百分率。
药物镇痛百分率(％)＝(对照组扭体次数治疗组扭体次数)/对照组扭体次数×100％ 表3.化合物对小鼠醋酸扭体的镇痛作用比较 ？鼠每组10只，称重标记后，将小鼠的右耳用二甲苯棉球接触5sec，左耳作为对照，于致炎10min后，分别在致炎耳壳上，涂覆给予药物浓度为1％受试药物，空白对照组给生理盐水，30min后将小鼠颈脱臼处死，用直径6mm打孔器取等积左(自身对照)、右耳(二甲苯处理)称重，计算耳肿胀率。耳肿胀率(％)＝右耳重量-左耳重量/左耳重量×100％.结果见表4。
表4.化合物对小鼠耳肿胀的作用 实施例四几种化合物对肝脏肝星状细胞增值和分泌型I胶原蛋白的的作用 材料与试剂大鼠I型胶原蛋白ELISA试剂盒，胰蛋白酶，胎牛血清等。
方法大鼠肝脏肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)复苏后接种在100mL塑料培养瓶中，于5％CO2、95％湿度的CO2培养箱里培养。待培养瓶中细胞长成单层后，弃去培养液，加入0.25％胰蛋白酶的消化液，收集消化液，2200rPmin离心7min，弃上清液，再用DMEM培养液离心洗涤一次，细胞团块用含20％胎牛血清DMEM培养液悬浮并计数，用含DMEM培养液稀释细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔100μl，48h后吸去培养液再用含10％小牛血清的DMEM培养液同步化细胞，使细胞同步化于静止期。实验分组(生理盐水)，加入药物使得各组培养液中药物浓度分别是50μmol/L，每组6孔重复培养3次，作用48h后，终止培养，分别在每孔加入5mg/L噻唑蓝(MTT)20μL，再培养4h，加入DMSO后振荡10min，用酶标仪(波长570nm) 测定HSC吸光度。领取药物作用后的细胞，按照上述方法培养后，吸取上清液，按照试剂盒说明书测定I型胶原蛋白含量。结果见表5 表5化合物对大鼠肝肝星状细胞增值和I型胶原蛋白含量 实施例五几种化合物抗胆碱酯酶的作用的比较 自健康大鼠取血5ml，放入加有抗凝剂的试管中，用生理盐水稀释10倍，待用。
将药物用生理盐水分别稀释为0、5、10、20、40、80、160、320、640mg/L的待测溶液。取0.05ml不同的待测溶液中加入0.5ml稀释了的全血中，充分混匀后，置37℃环境预孵1h。然后按照乙酰胆碱酯酶试剂盒说明书测定全血乙酰胆碱酯酶的活性。计算半数抑制浓度(IC50)。结果表明化合物I-X都具有抑制全血乙酰胆碱酯的作用，其中化合物III的抑制作用最强。
表6几种化合物对胆碱酯酶抑制作用的IC50 实施例六几种化合物对小鼠肠动力作用的比较 药品和试剂苦参素注射液，山东新华制药股份有限公司生产(批号0306003)；甲硫酸新斯的明注射液，山东天福制药厂生产(批号0404131)；硫酸阿托品注射液，山东天福制药厂生产(批号0409271)；硫酸吗啡控释片，北京萌蒂制药有限公司生产(批号04082312)。
动物及饲养环境健康昆明小鼠，SPF级，雌雄各半，体重18-22g，由山东绿叶制药股份有限公司动物实验中心提供。合格证号SYXK(鲁)20030020。动物每笼10只放置。饲料由山东省实验动物中心提供。屏障系统饲养，过滤送风，室内温度18-22℃；湿度50-60％；光照12小时。
实验方法小鼠灌胃给相应药物或生理盐水，连续3天，末次给药前禁食不禁水16h，于给药30min后，每只小鼠灌胃给予5％活性炭混悬液0.2ml，20min后脱臼处死小鼠，打开腹腔分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为小肠总长度，从幽门至炭末前沿的距离作为炭末在肠内推进距离。用以下公式计算炭末推进率。炭末推进率(％)＝炭末在肠内推进距离/小肠总长度×100％ 表7几种化合物对正常小鼠小肠炭末推进率的影响
与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
实施例七几种化合物急性毒性的实验数据 实验方法取小鼠，1次灌胃给药，观察72小时，记录死亡情况，结果见表8。
表8几种化合物对小鼠毒性的观察
实施例八、阿魏酸苦参素醚抗动脉硬化的观察 试验方法 药物制备将阿魏酸苦参素以1∶1分子摩尔比成醚后，柱分离即得A-，B-阿魏酸苦参素醚。见下式
按照文献方法进行[刘占涛，刘赛，王守兰，张健，仲伟珍。海洋贝类综合提取物对实验性动脉粥样硬化的治疗作用。中国动脉硬化杂志2005年第13卷第3期；305-308]。
取雄性鹌鹑140只，随机分为7组，正常对照组、模型组、阳性对照组(罗伐它丁10mg/kg)，阿魏酸口服对照组(40mg/kg)和药物高、中、低剂量组(分别给药10、20、40mg/kg)。除正常对照组喂基础饲料外，其余5组按照文献方法建立高脂食饵性动脉硬化模型。
各用药组灌胃给药，每日一次，连续用药4周。分别于用药后第4周末，每组取10只动物测定其血清脂质。于实验结束时对存活的鹌鹑进行病理学检测。
血清脂质含量测定各组于用药后第2，4周末，禁食12h后经颈静脉取血2mL，分离血清，采用酶法测定血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。
结果阿魏酸苦参素醚可明显降低动脉硬化模型鹌鹑血清TC、TG水平，其作用比阿魏酸明显增强(表9)。模型组多数主动脉有明显的病变，多数As病变在2级以上，阿魏酸苦参素醚组主动脉粥样硬化病变程度较轻，多在1～2级以下(表10)。镜下可见多数动脉内膜完整，部分有轻度脂质浸润，内含散在泡沫细胞。
表9.阿魏酸苦参素醚对高血脂模型鹌鹑血脂的影响 表10.阿魏酸苦参素醚对高血脂模型鹌鹑主动脉动脉硬化病变的影响
实施例九、阿魏酸苦参碱酮乳膏对急性风湿性关节炎的影响。
药物制备将阿魏酸苦参碱以1∶1分子摩尔比成酮后，柱分离即得。按照药剂学方法制成乳膏剂。
风湿性关节炎病人30对，其中30例为对照组，30例为试验组。对照组单独口服奈普生200g，治疗组患处涂抹阿魏酸苦参碱酮乳膏，每天1次，连续用药5天。
疗效观察肿胀和疼痛基本消失，为显效；轻度肿胀，疼痛基本消失为有效；肿胀和疼痛均未好转，为无效。
结果试验组显效21例，有效8例，总有效率为96.7％。对照组显效12例，有效11例，总有效率为76.7％。
实施例十几种化合物对皮疹的治疗作用 病例选择年龄在1825岁，身体双侧皮疹，性别不限，每种药物实验10例。在皮疹上局部涂抹1％药物，归参乳膏，自身单盲对照，左侧肢体涂抹药物，右侧肢体生理盐水，涂抹后10分钟进行结果评价。
结果评价对消肿止痒作用进行评价。显效皮疹明显消退，止痒作用明显。有效有一定的止痒作用，丘疹有一定程度的消退。无效未见明显作用。
结果见下表。
表11.几种化合物对皮疹的治疗作用疗效评价 实施例十一、化合物II、III、X对大鼠老年痴呆的治疗作用 1.药品与试剂苦参素、苦参碱和槐果碱由宁夏博尔泰力药业股份有限公司生产，石杉碱甲片由上海红旗制药厂生产。D-半乳糖为上海试剂二厂出产，鹅膏蕈氨酸(IBO)购自Sigma公司，均为分析纯。全血和脑组织总胆碱酯酶(TchE)检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
2.动物分组、造模与给药15月龄初老年雌性Wistar大鼠57只，体重300～450g，均由青岛市药检所动物中心提供。常规分笼饲养，自然照明，随意饮水和取食。随机分成6组，其中正常对照组(简称正常组)，腹腔注射生理盐水6周及脑内Meynert核注射生理盐水，AD模型组(简称模型组)，腹腔注射D_半乳糖(48mg/kg/d)6周和脑内双侧Meynert核注射IBO，石杉碱甲对照组(简称石杉碱甲组)和受试物观察组造模均同模型组。脑内注射在腹腔注射后参考有关文献进行[1]。造模结束后，石杉碱甲组灌胃给予石杉碱甲50ug/kg，化合物II、III、X组分别灌胃药物50mg/kg。正常组、模型组给予同体积的生理盐水。连续给药7天，在末次给药1小时后，进行学习能力检测，然后大鼠用戊巴比妥麻醉，在冰台上腹主动脉采血5ml，解剖迅速取出大脑皮层以生理盐水作为匀浆介质，制成10％(W/V)大脑皮层组织匀浆。按照试剂盒说明进行乙酰胆碱酯酶活性的测定，全血的乙酰胆碱酯酶活性的测定按照文献方法进行[2]。
3.检测指标动物记忆行为测试被动回避跳台试验，将大鼠置反应箱内适应环境3min。然后通以50V交流电。大鼠受到电击后。逃避反应为跳上平台以躲避伤害性刺激。记录5min内受到电击次数(错误次数)作为学习成绩以反应学习能力。24h后直接将大鼠置于平台上。记录第1次跳下的潜伏期以反应记忆能力和5min内错误次数，潜伏期超过5min者以5min计。
数据处理采用组间比较t检验，以p＜0.05作为统计显著性指标。
4.结果3种化合物均能够降低全血和脑组织胆碱酯酶水平，提高大鼠学习记忆成绩(表12，13) 表12化合物II、III、X对大鼠全血及脑组织内TChE水平的影响 与模型组比较*p＜0.05；**p＜0.01 表13化合物II、III、X对大鼠跳台试验学习和记忆能力的影响 与模型组比较*p＜0.0权利要求
1.本发明涉及阿魏酸与苦参碱类化合物化学发生酯化、酰胺化、成盐、成醚、成酮反应所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类、或酯类化合物。
2.本发明涉及阿魏酸与苦参碱类化合物化学发生酯化所形成的酯类化合物。
3.本发明涉及阿魏酸与苦参碱类化合物化学发生成盐、成酰胺化反应所形成的盐类、酰胺类化合物。
4.本发明涉及阿魏酸与苦参碱类化合物化学发生成醚、成酮反应所形成的酮类、醚类化合物。
5.根据权利要求1-4，本发明涉及的阿魏酸包括正阿魏酸和异阿魏酸以及他们的同分异构体以及所组成的无机盐类化合物。结构特征见有关文献[张娟等。阿魏酸及其衍生物合成及药理研究进展，粮食与油脂，2007年第1期，43-45]。其阿魏酸上可发生酯化、酰胺化、成盐、成醚、成酮反应可以是酚羟基和/或羧基(见下式R1，R2)。其酚羟基和/或羧基与苦参碱类生物碱反应后，其余基团可以由药学上可接受的盐或氢、羟基、羧基、羰基等基团发生亲电取代或加成等化学反应(见下式，R3-6)。例如R1与苦参碱成醚后，其余基团可与甲基、乙基、糖基、钠、钾、钙、镁、磷、铁、锌、硒、碘、氨基、羰基、羧基、苯基、苯乙基、苯甲基、以及苦参碱、氧化苦参碱(苦参素)、槐果碱、氧化槐果碱、槐醇、白金雀花碱以及苦参碱的异构体槐定碱、异苦参碱等发生化学反应。
6.根据权利要求1-5，本发明所涉及的苦参碱类化合物主要包括苦参碱、氧化苦参碱(苦参素)、槐果碱、氧化槐果碱、槐醇、白金雀花碱以及苦参碱的异构体槐定碱、异苦参碱等以及他们的同分异构体或无机盐类。其基本结构特征是具有四环的喹嗪啶，如下式其所发生的酯化、酰胺化、成盐、成醚、成酮反应可以发生在四环的喹嗪啶环上任一碳原子上。
苦参碱类生物碱的基本结构
7.根据权利要求1-6，阿魏酸可以和一种苦参碱类生物碱发生反应形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物，也可以和2种或2种以上苦参碱类生物碱发生反应形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物，其余基团可以由药学上可接受的盐或氢、羟基、羧基、羰基等基团发生亲电取代反应或加成反应。
8.根据权利要求1-7，本发明涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物既增加阿魏酸的生物学效应又能够增加苦参碱类化合物的生物学效应。例如抗脏器纤维化作用，改善血液流变学，抗病毒作用，抗炎作用，抑制胆碱酯酶的作用，止痛和止痒作用，抗血栓作用，抗菌作用，抗肿瘤作用，抗氧化作用，降血脂作用，抗动脉硬化，抗风湿、增加免疫，增加精子活力和运动，抗高血压作用等。
9.本发明涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物可明显增加阿魏酸和苦参碱类生物碱的水溶性和脂溶性。
10.本发明涉及的阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酰胺类、酮类、醚类或酯类化合物可以采用药剂学的方法制成口服制剂、注射剂、以及皮肤粘膜用制剂。其抗脏器纤维化、改善血液流变学、抗病毒、抗炎、抑制胆碱酯酶、止痛和止痒、抗血栓、抗血小板聚集、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、抗动脉硬化、抗风湿、增加免疫、增加精子活力和运动、抗高血压作用等。用于抗肿瘤、抗动脉硬化、治疗心、脑血管病、骨关节疾病、感冒、老年痴呆、皮肤的炎症、湿疹、痤疮、斑丘疹、荨麻疹、牛皮癣、胃肠道动力低下，肝炎、肾炎等脏器的炎症和脏器纤维化、以及全身和/或脏器发生的急性和慢性炎症。
全文摘要
本发明涉及阿魏酸与苦参碱类化合物所形成的盐类、酮类、醚类、酰胺类或酯类化合物。其新形成的化合物具有增加苦参碱类化合物和/或阿魏酸的生物学作用，和/或降低其毒性，和/或增加药物的溶解性。用于抗肿瘤、抗动脉硬化、治疗心、脑血管病、骨关节疾病、感冒、老年痴呆、皮肤的炎症、湿疹、痤疮、斑丘疹、荨麻疹、牛皮癣、胃肠道动力低下，肝炎、肾炎等脏器的炎症和脏器纤维化、以及全身和/或脏器发生的急性和慢性炎症。
文档编号C07D455/00GK101723944SQ20081030490
公开日2010年6月9日 申请日期2008年10月13日 优先权日2008年10月13日
发明者宋健, 彭康康, 马维富, 尚坚 申请人:青岛启元生物技术有限公司