新型抗-α5β1抗体及其应用的制作方法

专利名称：：新型抗-α5β1抗体及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新型α5β工抗体，包括所述抗体的组合物和试剂盒，以及使用所述抗体的方法。
背景技术：
：αδβ整合素是一种细胞膜糖蛋白，其通过其主要配体纤连蛋白介导细胞-ECM相互作用。α5β1整合素在细胞迁移、分化和存活中起作用。在肿瘤血管内皮(例如，胃癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、子宫宫颈癌、和乳腺癌)和其它血管源性血管中，α5β1整合素水平升高。在血管发生过程中，α5β1整合素调节周细胞与内皮细胞的缔合以及内皮胞外基质的装配。因此，α5β1整合素是抑制血管发生和使细胞对VEGF拮抗剂的作用敏感的有效靶标。因此，在本领域中存在对于靶向α5β1整合素的组合物和方法的需求。本发明满足这一需求和其它的需求。发明概述本发明提供来源于单克隆抗体18C12的新型抗-Cij1抗体，包括所述新型抗-α5βi抗体的试剂盒和组合物，以及制备和/或使用它们的方法。本发明的一个实施方案提供一种抗-α5β工抗体，所述抗体包括VL结构域，其包括含有TL-S/T-S/P/T-Q/N-H-F/S-T/I-Y-K/T-I-G/D/S(SEQIDNO:15)的CDR-Ll；含有L/I-N/T-S-D/H/S-G/S-S/L/T-H/Y-N/K/Q/1-K/F-G/A-D/S/V(SEQIDNO:16)的CDR-L2；含有G/A-S/A/Y-S/Y-Y-S/A/Y-S/Y/T-GY-V/I(SEQIDNO17)的CDR-L3；和VH结构域，其包括含有GFTFS-N/A-RW-I/V-Y(SEQIDNO:18)的CDH-H1；含有GIKTKP-N/A/T-I/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19)的CDR-H2；和含有L/V-TG-M/K-R/K-YFDY(SEQIDNO:20)的⑶R-Hl。在一些实施方案中，所述抗-α5β工抗体包括VL结构域和VH结构域，所述VL结构域包括分别含有图3列出的序列的⑶R-L1，⑶R-L2，和⑶R-L3，所述VH结构域包括分别含有图3列出的序列的⑶R-H1，⑶R-H2，和⑶R-H3，即，这样的VL结构域，其包括含有SEQIDNO21，22，23，或M列出的序列的CDR-Ll，含有SEQIDNO25，洸，27，或沘列出的序列的CDR-L2，和含有SEQIDNO29，30，31，或32列出的序列的CDR-L3；和这样的VH结构域，其包括含有SEQIDNO:34或35列出的序列的⑶R-Hl，含有SEQIDNO:36或37列出的序列的CDR-H2，和含有SEQIDNO:38，39，或40列出的序列的CDR-H3。在一些实施方案中，所述抗-Qj1抗体包括含有SEQIDNOS:3_8中任一项的VL结构域和含有SEQIDNOSII-14中任一项的VH结构域。在一些实施方案中，所述抗-aJ1抗体包括含有SEQIDNO:4的VL结构域和含有SEQIDNO:11的VH结构域。在一些实施方案中，所述抗-α5βi抗体包括含有SEQIDNO5的VL结构域和含有SEQIDNO12的VH结构域。在一些实施方4案中，所述抗-Qj1抗体包括含有SEQIDNO6的VL结构域和含有SEQIDNO13的VH结构域。在一些实施方案中，所述抗-aJ1抗体包括含有SEQIDNO:7的VL结构域和含有SEQIDNO:13的VH结构域。在一些实施方案中，所述抗-α5βi抗体包括含有SEQIDNO:8的VL结构域和含有SEQIDNO:14的VH结构域。在一些实施方案中，所述抗-α5βi抗体是人的、人源化的或嵌合的抗体。在一个实施方案中，所述抗-α5β工抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗-Ci5^抗体与18C12抗体竞争结合Ci5^整合素。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗-α5β工抗体是结合Cij1的抗体片段。在一些实施方案中，所述抗-aJ1抗体选自Fab，Fab，，F(ab)，2，单链Fv(scFv)，Fv片段；双抗体和线性抗体。在一些实施方案中，所述抗-α5β工抗体是全长IgGl或全长IgG4。在一些实施方案中，所述抗-α5β工抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。在一些实施方案中，所述双特异性抗体结合VEGF和αJ1，并且是VEGF拮抗剂。在一些实施方案中，所述抗-α5β工抗体具有改变的效应子功能。在一些实施方案中，改变所述抗-aJ1抗体以减少或防止抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性(例如，通过改变编码抗体Fc部分的核酸序列)。在一些实施方案中，抗体的Fc部分包括拟97Α置换。在一些实施方案中，所述抗-α5β工抗体已被修饰，从而增加或减少其在人中的半衰期(例如，通过改变编码抗体Fc部分的核酸序列)。在一些实施方案中，所述αJ1抗体是与另一种实体(例如，治疗剂或可检测的标记)缀合的免疫缀合物的一部分。在一些实施方案中，所述治疗实体是细胞毒性剂(例如，放射性同位素，毒素，生长抑制剂，或化疗剂)。在一些实施方案中，所述可检测的标记是荧光染料、放射性同位素、或酶。本发明的其它实施方案提供编码本文所述的任一种抗-α5βi抗体的核酸分子，包括所述核酸的表达载体，和包括所述核酸的宿主细胞。本发明的另一些其它实施方案提供产生本文所述的任一种抗-α5β工抗体的方法，所述方法包括培养所述宿主细胞，从而产生所述抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述抗体。本发明的另一些实施方案提供包括本发明的αJ1抗体和药用载体的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物还包括至少一种、两种、三种、四种、或多种附加剂，其包括，例如，VEGF拮抗剂。在一些实施方案中，所述附加剂选自细胞毒性剂、化疗剂、生长抑制剂、或抗血管发生剂。在一些实施方案中，所述VEGF拮抗剂是抗-VEGF抗体。在一些实施方案中，所述抗-VEGF抗体是贝伐珠单抗(bevacizumab)。本发明还提供包括检测Qj1(例如，在已经用VEGF拮抗剂治疗的受试者中)的使用说明的制品(articlesαfmanufacture)禾口试剂盒。本发明的另一个实施方案提供治疗患有包括异常血管发生、血管通透性或血管渗漏的疾病或病症的受试者的方法。所述方法包括，向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-α5βi抗体，由此治疗所述疾病或病症(例如，通过部分或完全抑制异常血管发生、血管通透性或血管渗漏)。在一些实施方案中，还向受试者施用VEGF拮抗剂。在一些实施方案中，所述VEGF拮抗剂和所述抗-α5βi抗体同时给药。在一些实施方案中，所述VEGF拮抗剂和所述抗-α5βi抗体相继地给药。在一些实施方案中，所述疾病或病症响应VEGF拮抗剂治疗。在一些实施方案中，所述疾病或病症选自癌症，免疫疾病或眼科疾病。根据一个实施方案，所述疾病或病症选自实体瘤，转移性肿瘤，软组织肿瘤，具有眼睛新血管形成的疾病，具有异常血管发生的炎性病，在移植到受试者后引起的疾病和具有异常的纤维血管组织增生的疾病。根据另一个实施方案，所述癌症选自乳腺癌(breastcancer)(包括转移性乳腺癌)，宫颈癌(cervicalcancer)，结肠直肠癌(colorectalcancer)(包括转移性结肠直肠癌)，肺癌(lungcancer)(包括非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer))，非霍奇HE*；(non-Hodgkinslymphoma)(NHL),E^ffllfifiifil^l(chroniclymphocyticleukemia),肾细胞癌(renalcellcancer),前列腺癌(prostatecancer)(包括激素拮抗性前列腺癌(homonerefractoryprostatecancer))，月干癌(livercancer)，头禾口颈癌(headandneckcancer),黑素瘤(melanoma),卵巢癌(ovariancancer),间皮瘤(mesothelioma),软组织癌(softtissuecancer),胃肠基质瘤(gastrointestinalstromaltumor)，多形性成胶质细胞瘤(glioblastomamultiforme)和多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)。根据另一个实施方案，所述疾病选自视网膜病变(retinopathy)，年龄相关的黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration)(例如，湿性AMD(wetAMD))，糖尿病性黄斑水月中(diabeticmacularedema)，视网膜静脉闭塞(retinalveinocclusion)(RVO)，和干性AMD(dryAMD)/地理性萎缩(geographicatrophy)(用于预防湿性AMD进展)发红(rubeosis)；银屑病(psoriasis),炎性肾病(inflammatoryrenaldisease),溶血性尿毒症综合征(haemolyticuremicsyndrome)，糖尿病肾病(diabeticnephropathy)(例如，增生性糖尿病肾病(proliferativediabeticretinopathy))，关节炎(arthritis)(例如，银屑病关节炎(psoriaticarthritis)，骨关节炎(osteoarthritis)，类风湿关节炎(rheumatoidarthritis))，炎性肠病(inflammatoryboweldisease)，慢性炎症(chronicinflammation),'11N111(chronicretinaldetachment),'11膜炎(chronicuveitis)，慢性玻璃体炎(chronicvitritis)，角膜移植排斥(cornealgraftrejection)，角HififiIiWifj^(cornealneovascularization),^IM#^SifiliWMl^l(cornealgraftneovascularization),MWi^^Mi(Crohn'sdisease),1(myopia)，目艮睛新血管病(ocularneovasculardisease)，佩吉特病(Pagetsdisease)，类天疱疮(pemphigoid)，多动脉炎(polyarteritis)，激光放射状角膜切开术后(post-laserradialkeratotomy),^JlNIMΤiW^)(retinalneovascularization),Sogrens^☆IE(Sogrenssyndrome),MXiS}(ulcerativecolitis),##Jr(graftrejection)，肺部炎症(lunginflammation),肾病综合征(nephroticsyndrome),/K月中(edema),与恶性病相关的腹水(ascitesassociatedwithmalignancies),中风(stroke)，血管纤维瘤(angiofibroma)和新血管性青光眼(neovascularglaucoma)。在一个实施方案中，所述方法还包括向受试者施用额外的治疗剂(例如，抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂、或细胞毒性剂)。本发明的另一实施方案提供了治疗受试者中癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和抗-aJ1抗体。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂和抗-aJ1抗体同时施用。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂和抗-aJ1抗体依次施用。在一些实施方案中，所述癌症响应VEGF拮抗剂疗法。本发明的另一实施方案提供了治疗患有AMD的受试者中的年龄相关的黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration,AMD)(包括，例如、湿性年龄相关的黄斑变性(wetage-relatedmaculardegeneration))的方法，所述方法包括向受试者提供治疗有效量的VEGF拮抗剂和抗-α5βi抗体。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂和抗-α5βi抗体同时施用。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂和抗-aJ1抗体依次施用。在另一实施方案中，提供一种治疗受试者的自身免疫病的方法，包括提供同时或依次施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和Ci5^拮抗剂的步骤。在一些实施方案中，最初向欲治疗的受试者施用VEGF拮抗剂，随后向该受试者施用抗-Qj1抗体。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂和αJ1拮抗剂同时施用给受试者。在一些实施方案中，抗-α5β工抗体VEGF拮抗剂最初施用给欲治疗的受试者，并且VEGF拮抗剂随后施用给受试者。在一些实施方案中，用VEGF拮抗剂治疗受试者直至受试者对VEGF拮抗剂治疗无反应，且随后用抗-α5β工抗体治疗受试者。在一特定实施方案中，当癌症为非侵袭性或早期时，用VEGF拮抗剂治疗受试者，当癌症为侵袭性时，用抗-α5β工抗体治疗受试者。在另一实施方案中，经抗-α5β工抗体治疗的受试者的患病组织中的α5β工水平与来自未患病的受试者的组织相比或非患病组织相比升高。在此情况下，所述方法可进一步包括检测受试者中(例如用VEGF拮抗剂治疗后的患病组织中)的Cij1的步骤。根据一个实施方案，侵袭性癌症为转移癌。根据另一实施方案，早期癌症为借助辅助疗法(例如化学疗法或外科手术切除)治疗的癌症。根据本发明的一个实施方案，将用抗-α5β工抗体治疗的受试者在VEGF拮抗剂治疗后经历复发或者已变得难以用VEGF拮抗剂治疗痊愈。根据另一个实施方案，将用抗-aJ1抗体及VEGF拮抗剂治疗的受试者患转移性癌症或之前已经用辅助疗法治疗。在一个实施方案中，候选患者对化疗剂如伊立替康(irinotecan)具复发性、难治性或抗性。这些疾病的实例包括但不限于，转移性结肠直肠癌(metastaticcolorectalcancer)、复发性转移性结肠直肠癌(relapsedmetastaticcolorectalcancer)、转移性乳腺癌(metastaticbreastcancer)、复发性转移性乳腺癌(relapsedmetastaticbreastcancer)、转移性HER2+乳腺癌(metastaticHER2+breastcancer)、辅助疗法治疗的乳腺癌(adjuvantbreastcancer)、辅助疗法治疗的HER2+乳腺癌(adjuvantHER2+breastcancer)、转移性胰腺癌(metastaticpancreaticcancer)、辅助疗法治疗的结肠癌(adjuvantcoloncancer)、辅助疗法治疗的非小细胞肺癌(adjuvantnon-smallcelllungcancer)、辅助疗法治疗的直肠癌(adjuvantrectalcancer)、辅助疗法治疗的非小细胞肺癌(adjuvantnonsmallcelllungcancer)、转移性非小细胞肺癌(metastaticnonsmallcelllungcancer)、转移性卵巢癌(metastaticovariancancer)、转移性肾细胞癌(metastaticrenalcellcancer)及辅助疗法治疗的肾细胞癌(adjuvantrenalcellcancer)。根据一个实施方案，在用VEGF拮抗剂治疗疾病后向患有本文中所述的疾病的受试者施用维持疗法，其中所述维持疗法为单独施用Ci5^拮抗剂或者依次或同时施用αJ1拮抗剂和VEGF拮抗剂。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂选自抗体、免疫黏附素、肽体(ρ印tibody)、小分子以及在严格条件下杂交编码VEGF的核酸分子的核酸(例如核酶、siRNA及适配体(apatmer))0在一些实施方案中，VEGF拮抗剂为抗体(例如单克隆抗体)。根据一个实施方案，抗VEGF抗体能够被Avastin抗体竞争性抑制与人类VEGF的结合。根据另一个实施方案，抗VEGF抗体为人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。根据一个特定实施方案，抗VEGF抗体为Avastin抗体。根据另一个实施方案，抗VEGF抗体选自由Fab、Fab'、F(ab)‘2、单链Fv(ScFv)、Fv片段、双抗体(diabody)和线性抗体组成的组。根据另一实施方案，VEGF拮抗剂为结合VEGF和α5β工的双特异性抗体，并且是α5β工的拮抗剂。本发明的另一实施方案提供检测怀疑含有α5βi蛋白的样品中的α5βi蛋白的方法。所述方法包括(1)使本文中所述的抗体与样品接触；及检测抗-α5β工抗体与α5βi蛋白的复合体的形成。在一些实施方案中，样品来自经诊断患有特征为异常血管发生、异常血管通透性及/或血管渗漏疾病的患者。本发明的这些和其他实施方案进一步描述在下文的发明详述中。附图简要说明图IA和图IB描绘下列轻链可变结构域的序列比对人类λIII，仓鼠18C12，嵌合18C12.v.1.l、hl8C12.v3、hl8C12.v6、hl8C12.v6.1.Lam3、hl8C12.v6.2Lam3和hl8C12.v6.1.5。图2A和图2B描绘下列重链可变结构域的序列比对仓鼠18C12、hl8C12.v3、hl8C12.v6、hl8C12.v6.1.Lam3、hl8C12.v6.2Lam3和hl8C12.v6.1.5。图3描绘hl8C12.v3和hl8C12.v3的亲和力成熟变体hl8C12.v6、hl8C12.v7、hl8C12.v9、hl8C12.vl5、hl8C12.vl6、hl8C12.v28、hl8C12.v30、hl8C12.v51、hl8C12.v54、hl8C12.v70和hl8C12.v78的CDR序列。图4描绘展示hl8C12.v3亲本克隆和18C12亲和力成熟变体hl8C12.v6、hl8C12.v7、hl8C12.v9、hl8C12.vl5、hl8C12.vl6、hl8C12.v28、hl8C12.v30、hl8C12.v51、hl8C12.v54、hl8C12.v70和hl8C12.v78与人的Q5^1整合素结合的噬菌体竞争ELISA的结果。图5描绘hl8C12.v3亲本克隆和hl8C12.v3亲和力成熟变体hl8C12.v6、hl8C12.vl5、hl8C12.v54和hl8C12.v70与人α5β1整合素结合的BIACORE分析的结果。图6描绘嵌合18C12及hl8C12.v6.1.Lam3与人α5βi整合素结合的BIACORE分析结果。图7描绘hl8C12.ν6·1克隆hl8C12.v6.1.1、hl8C12.v6.1.2、hl8C12.v6.1.3、hl8C12.v6.1.4及hl8C12.v6.1.5结合的BIACORE分析的结果，并且列出各hl8C12.v6.1克隆在位置50a,50b,50c及50d处的CDR-L2序列。图8描绘比较嵌合18C12与hl8C12.v6.1在干扰U937细胞与纤连蛋白结合方面的能力的纤连蛋白结合分析的结果。图9描绘比较仓鼠18C12与hl8C12.v6.1.5在干扰U937细胞与纤连蛋白结合方面的能力的纤连蛋白结合分析的结果。图10描绘比较仓鼠18C12与hl8C12.v6.1.5在干扰α5βi与纤连蛋白结合方面的能力的纤连蛋白结合分析的结果。图11描绘比较嵌合18C12与hl8C12.v6.1在干扰HUVEC细胞在纤连蛋白上迁移方面的能力的HUVEC迁移分析的结果。图12描绘测定hl8C12.v6.1.5+/-抗-VEGF在增强存活方面的能力的肿瘤异种移植研究的结果。图13描绘测定hl8C12.v6.1.5+/-抗-VEGF在降低肿瘤负荷方面的能力的肿瘤异种移植研究的结果。发明详述I.前言本发明基于结合Cij1整合素的新抗体的鉴别。Ci5^抗体衍生自单克隆抗体18C12，并且可以用于多种治疗和诊断方法中。举例来说，αJ1抗体可单独使用或与其他药剂组合使用来治疗异常血管发生、瘤形成、眼疾病及自身免疫病。通过在患者中施用抗Cij1蛋白的抗体，并检测来自患者的样品(例如活体内或先体外后体内(exvivo))中的α5βi蛋白结合的抗-α5βi抗体，或者，通过使抗体与来自患者的样品接触并且定性或定量检测与α5β工蛋白结合的抗-α5β工抗体，所述抗体也可以用来检测患者或患者样品中的αι蛋白。II.定义“Alβha5betal”或“α5β1”或“a5bl”或“α5β丨”为包含两种不同蛋白质(即亚基α5禾Πβ1)的整合素。已经表明α5β1结合至纤连蛋白、Ll-CAM和纤维蛋白原。α5β1整合素也被称作极迟活化-5(VeryLateActivation-5)、VLA-5、alpha5betal、CD49e/CD29、纤连蛋白受体、FNR和GPIc-IIa。根据一个实施方案，α5β1*、α5β1。“α5”在本文中可与CD49e、α5、整合素α5亚基、VLA-5α亚基、GPIc-IIa的IC亚基及FNRα链互换使用，指的是αJ1整合素的一个亚基。α5具有四个由可变剪接产生并且其细胞质结构域不同的同工型(A-D)。人α5的同工型的氨基酸序列可分别以例如Genbank登录号Χ07979、U33879、U33882及U33880发现。β1也称作CD29、β1、血小板GPIIa、VLA-3链、β_1整合素链、0^9、卩殿8、]\0^2、VLAB,GPIIA、MSK12以及VLA5B。人β1的氨基酸序列可以以例如Genbank登录号Χ06256被发现。本文中所用的术语VEGF是指165氨基酸的人血管内皮细胞生长因子及相关121-、189-及206-氨基酸的人血管内皮细胞生长因子(如Leung等人，kience(科学)，2461306(1989)和Houck等人，Mol.Endocrin.，5=1806(1991)所述)，以及其天然存在的等位基因及其经过加工的形式。术语VEGF也指来自诸如小鼠、大鼠或灵长类动物的非人类物种的VEGF。有时来自特定物种的VEGF由诸如以下的术语表示人VEGF用hVEGF；鼠VEGF用mVEGF等。术语VEGF也用作指包含165-氨基酸人血管内皮细胞生长因子的氨基酸8至109或1至109的多肽的截短形式。在本申请中可以例如以“VEGF(8-109)”、“VEGF(1-109)”或"VEGF165”来表明对VEGF的任何此等形式的提及。“截短”天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示进行编号。比如，截短天然VEGF中的氨基酸位置17(甲硫氨酸)亦为天然VEGF中的位置17(甲硫氨酸)。截短天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR及Flt-I受体的结合亲和力。根据一实施方案，VEGF为人VEGF。"VEGF拮抗剂”是指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF活性，包括其与VEGF或一种或多种VEGF受体或编码其的核酸的结合的分子。VEGF拮抗剂优选地结合VEGF或VEGF受体。VEGF拮抗剂包括抗VEGF抗体及其抗原结合片段、结合VEGF及VEGF受体并且阻断配体-受体相互作用的多肽(例如免疫黏附素、肽体(ρ印tibody))、抗VEGF受体抗体及VEGF受体拮抗剂(如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂)、结合VEGF的适合体(apatmer)和在严格条件下杂交编码VEGF或VEGF受体的核酸序列的核酸(例如RNAi)。根据一个实施方案，VEGF拮抗剂结合至VEGF并且体外抑制VEGF诱发的内皮细胞增生。根据一个实施方案，VEGF拮抗剂，以高于对非VEGF或非VEGF受体的亲和力，结合至VEGF或VEGF受体。根据一个实施方案，VEGF拮抗剂以介于1μM与IpM之间的Kd结合至VEGF或VEGF受体。根据另一实施方案，VEGF拮抗剂以500ηΜ至IpM与VEGF或VEGF受体结合。根据一实施方案，VEGF拮抗剂选自由例如抗体、肽体、免疫黏附素、小分子或适合体(Apatmer)的多肽组成的组。在一实施方案中，抗体为抗VEGF抗体，例如AVASTIN抗体或抗VEGF受体抗体例如抗VEGFR2或抗VEGFR3抗体。VEGF拮抗剂的其他实例包括VEGF-Trap,Mucagen,ΡΤΚ787,SU11248,AG-013736,Bay439OO6(索拉非尼(sorafenib))、ZD-6474、CP632、CP-547632、AZD-2171、CDP-171、SU-14813、CHIR-258、AEE-788、SB786034、BAY579352、CDP-791、EG-3306、GW-786034、RWJ-417975/CT6758和KRN-633。“抗VEGF抗体”是以足够的亲和力和特异性结合至VEGF的抗体。优选地，本发明的抗VEGF抗体可以用作用于靶向并且干扰涉及VEGF活性的疾病或状况的治疗剂。抗mVEGF抗体通常不会结合至例如VEGF-B或VEGF-C的其他VEGF同源物，也不会结合至诸如P1GF、PDGF或bFGF的其他生长因子。抗VEGF抗体是与杂交瘤ATCCHB10709产生的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合至相同抗原表位的单克隆抗体。抗VEGF抗体更优选为根据I^resta等人(1997)CancerRes(癌症研究).57:4593-4599产生的重组人源化抗VEGF单克隆抗体，包括但不限于称作贝伐珠单抗(BV；Avastin)的抗体。根据另一实施方案，可使用的抗VEGF抗体包括但不限于W02005/012359中所揭示的抗体。根据一实施方案，抗VEGF抗体包含W02005/012359的图24、25、26、27和29中所揭示的任一抗体(例如G6、G6-23、G6-31、G6-23.1、G6-23.2、B20、B20-4和B20.4.1)的重链可变区及轻链可变区。在另一实施方案中，称作兰尼单抗(ranibizumab)的抗VEGF抗体是施用于眼疾病，例如糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy)及湿性AMD的VEGF拮抗剂。抗VEGF抗体“贝伐珠单抗(Bevacizumab，BV)”，也称作“rhuMAbVEGF”或“Avastin’’是根据I^esta等人(1997)CancerRes(癌症研究).57:4593-4599产生的重组人源化抗VEGF单克隆抗体。其包含突变的人类IgGl构架区和来自阻断人类VEGF与其受体结合的鼠抗hVEGF单克隆抗体A.4.6.1的抗原结合互补决定区。贝伐珠单抗的氨基酸序列的大约的93%，包括大部分构架区，源自人类IgGl，且序列的约7%来自鼠抗体A4.6.1。贝伐珠单抗的分子量为约149，000道尔顿(dalton)且经糖基化。其他抗VEGF抗体包括美国专利第6，884，879号和W02005/044853中所描述的抗体。抗VEGF抗体兰尼单抗(Ranibizumab)或LUCENTIS抗体或rhuFabV2是人源化的亲和力成熟的抗人VEGFFab片段。兰尼单抗通过标准重组技术方法，在细菌发酵和大肠杆菌(E.coli)表达载体中产生。兰尼单抗未经糖基化且分子质量为约48，000道尔顿。参见W098/45331及U.S.2003/0190317。可借助竞争性抑制/结合分析来鉴别特征为与靶标上的重叠或相似区域结合的分子，例如抗体。在一个实施方案中，竞争性抑制测定中使用HUVEC或其他表达Cij1的细胞，并且使用FACS来评估两种抗_α5β工抗体相对于彼此的结合位置。例如，可在锥形管中洗涤HUVEC细胞并且以IOOOrpm旋转5分钟。典型地洗涤沉淀两次。随后，可将细胞再悬浮，计数且保持于冰上直至使用。可向孔中添加100μ1第一抗-α5βi抗体(例如以1μg/ml浓度或更低浓度开始)。接着，可向每一孔中添加100μ1(例如20XIO5个细胞)细胞且于冰上孵育30分钟。接着，可向各孔中添加100μ1的结合生物素的抗-α5β工抗体(5μg/ml储备液)且于冰上孵育30分钟。随后洗涤细胞且在IOOOrpm下5分钟形成沉淀。吸出上清液。将与链霉亲和素(sti^ptavidin)(Jackson016_l10-084)缀合的R-藻红素(R-Phycoerythrin)添加至孔中(ΙΟΟμΙ，以11000)。接着，以箔包裹板且于冰上孵育30分钟。孵育后，可将沉淀洗涤且在IOOOrpm下5分钟形成沉淀。可使沉淀再悬浮并转移至微量滴定管中进行FACS分析。“血管发生因子或血管发生物”是参与刺激血管发育，例如促进血管发生、内皮细胞生长、血管稳定性及/或血小管生成等的生长因子或其受体。例如，血管发生因子包括但不限于，例如VEGF和VEGF家族成员及其受体(VEGF-B、VEGF-C,VEGF-D,VEGFRl、VEGFR2和VEGFR3)、PlGF,PDGF家族、纤维母细胞生长因子家族(fibroblastgrowthfactorfamily,FGFs)、！Ε配体(血管生成素(Angiopoietins)、ANGPTl、ANGPT2)、TIEUΤΙΕ2、蝶素(印hrins)、Bv8、Delta样配体4(DLL4)、Del_l、纤维母细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)(酸性(aFGF)和碱性(bFGF)、FGF4、FGF9、BMP9、BMP10、卵泡抑素(Follistatin)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、GM-CSF、肝细胞生长因子(HGF)/分散因子(SF)、白介素-8(IL-8)、CXCL12、瘦素(I^ptin)、中期因子(Midkine)、神经纤毛蛋白(neuropilins)、NRP1、NRP2、胎盘生长因子、血小板衍生的内皮细胞生长因子(PD-ECGF)、血小板衍生的生长因子，尤其PDGF-BB、PDGFR-α或PDGFR-β、多效生长因子(Pleiotrophin,PTN)、前颗粒蛋白(Progranulin)、增殖蛋白(Proliferin)、转化生长因子-α(TGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、Alkl、CXCR4、Notchl、Notch4、Sema3A,Sema3C,Sema3F,Robo4等。其将进一步包括促进血管发生的因子，例如ESMl和珍珠素(Perlecan)。其也将包括加速创伤愈合的因子，例如生长激素、类胰岛素生长因子-I(IGF-I)、VIGF、表皮生长因子(EGF)、EGF样结构域7(EGF-likedomain,multiple7)(EGFL7)、CTGF及其家族成员，和TGF-α及TGF-β。参见例如Klagsbrun和D‘Amore(199DAnnu.Rev.Physiol.53217-39>StreitRDetmar(2003)Oncogene(癌基因)22:3172-3179,Ferrara及Alitalo(1999)NatureMedicine(自然医学)5(12)1359-1364、Tonini等人，(2003)Oncogene(癌基因)22:6549-6556(例如列出了已知血管发生因子的表1)；和Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8:200_206。“抗血管发生剂”或“血管发生抑制剂”是指直接或间接地抑制血管发生、血小管生成或不当的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸(包括例如抑制性RNA(RNAi或siRNA))、多肽、分离的蛋白、重组蛋白、抗体或其缀合物或融合蛋白。应理解，抗血管发生剂包括结合血管发生因子或其受体并阻断其血管发生活性的那些药剂。例如，抗血管发生剂为如上所定义的血管发生剂的抗体或其他拮抗剂，例如VEGF-A或VEGF-A受体(例如KDR受体或Flt-I受体)的抗体、抗PDGFR抑制剂、阻断VEGF受体信号传导的小分子(例如PTK787/ZK2284,SU6668、SUTENT/SU11248(苹果酸舒尼替尼(sunitinibmalate))、AMG706、或例如国际专利申请W02004/113304中所描述的那些)。抗血管发生剂包括，但不限于以下药剂VEGF抑制剂(例如VEGF特异性拮抗剂)、EGF抑制剂、EGFR抑制剂、Erbitux(西妥昔单抗(cetuximab),ImCloneSystems,Inc.,Branchburg,N.J·)、Vectibix(帕尼单抗(panitumumab)，Amgen,ThousandOaks,CA)、TIE2抑制剂、IGFlR抑制剂、COX-II(环加氧酶II)抑制剂、MMP_2(基质-金属蛋白酶2)抑制剂、及MMP_9(基质-金属蛋白酶9)的抑制剂、CP-547,632(PfizerInc.，NY,USA)、阿西替尼(Axitinib)(PfizerInc.AG-013736)、ZD-6474(AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、AZD-2171、VEGFTrap(Regeneron/Aventis)、瓦他拉尼(Vatalanib)(也称作PTK_787、ZK_222584Novartis&ScheringAG)、Macugen(培力口他尼八纳(pegaptaniboctasodium)、NX-1838、EYE_001，PfizerInc./Gilead/Eyetech)、IM862(CytranInc.，Kirkland,Wash.，USA)、血管酶(angiozyme),一禾中来自Ribozyme(Boulder,Colo.)及Chiron(Emeryville,Calif.)的合成核酶，及其组合。其他血管发生抑制剂包括血小板反应蛋白iahrombospondin1)、血小板反应蛋白2、胶原蛋白IV及胶原蛋白XVIII。VEGF抑制剂披露于美国专利第6，534，524号以及第6，235，764号中，两者均出于所有目的全文并入本文中。抗血管发生剂也包括天然血管发生抑制剂，例如血管抑制素(angiostatin)、内皮抑制素(endostatin)等。参见例如Klagsbrun及D'Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53:217-39；Streit及Detmar(2003)Oncogene(癌基因)22:3172-3179(例如列出对恶性黑素瘤的抗血管发生疗法的表3)；Ferrara及Alitalo(1999)NatureMedicine(自然医学)5(12):1359-1364；Tonini等人，(200Oncogene(癌基因)22:6549-6556(例如列出已知抗血管发生因子的表2)；及Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8:200-206(例如列出临床试验中使用的抗血管发生剂的表1)。术语“抗血管发生疗法”是指适用于抑制血管发生的疗法，其包含施用抗血管发生剂。在一实施方案中，本发明的抗VEGF抗体的“Kd”或“Kd值”是通过测定Fab对VEGF的溶液结合亲和力的以下分析来测定，以抗体的Fab形式和VEGF分子进行的经放射性标记的VEGF结合测定(RIA)，或者通过在未经标记的滴度系列的VEGF存在下，使Fab与最小浓度的经(125I)标记的VEGF(109)分子平衡，随后通过抗Fab抗体包被的板捕捉结合的VEGF来测定(Chen等人，(1999)J.MolBiol293:865-881)。为确立分析条件，将微量滴定板(microtiterplates)(Dynex)以*5ug/mlWSfeifiFabJfi#(CappelLabs)^50mM5^@|钠(pH9.6)包被过夜，随后在室温(约23°C)下以含2%(w/v)的牛血清白蛋白的PBS封闭两小时至五小时。在非吸附性板(Nunc#269620)中，将IOOpM或洸pM[125I]VEGF(109)与相关Fab(例如Fab-12(Presta等人，(1997)CancerRes.(癌症研究)57:4593-4599))的连续稀释液混合。随后孵育相关Fab过夜；然而，持续孵育65小时以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板中以在室温下孵育1小时。接着去除溶液并用含0.1%Tween-20的PBS洗涤板8次。当板干燥时，添加每孔150ul闪烁体(MicroScint-20；Packard)，且以Topcountyγ计数器O^ckard)对板计数10分钟。选择提供小于或等于20%最大结合的各Fab浓度用于竞争性结合测定。根据另一实施方案，在25°C通过利用使用BIACore-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore，Inc.，Piscataway，NJ)的表面等离子共振测定，使用约10响应单位(RU)的固定靶标分子hVEGF(8-109)CM5芯片来测定Kd或Kd值。简言之，根据供货商的说明书用N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化聚葡萄糖生物感应芯片(CM5，BIAcoreInc.)0用IOmM乙酸钠(pH4.8)将人VEGF稀释至5μg/ml(约0.2μΜ)，接着以每分钟5μ1的流动速率注射，以得到大约10个响应单位(RU)的偶联蛋白。注射人VEGF后，注射IM乙醇胺以阻断未反应的基团。为进行动力学测量，在25°C下以大约25μΙ/min的流动速率将Fab的两倍连续稀释液(0.78nM至500nM)注入含有0.05%Tween20的PBS(PBST)中。使用简单的一对一朗缪耳结合模型(Langmuirbindingmodel)(BIAcore评估软件3.2版)通过同时拟合结合与解离感应图(sensorgram)来计算结合速率(k。n)及解离速率(k。ff)。以k。ff/k。n比率的形式计算平衡解离常数(Kd)。参见例如Chen，Y.等人，(1999)J.MolBiol293:865-881。若根据上文表面等离子共振测定的结合速率超过IO6M-1S-1,则结合速率可通过使用荧光淬灭技术如使用光谱仪，例如装备有终止-流动的光谱仪(AvivInstruments)或具有搅拌光析管的8000系列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)，来测定在增加浓度的人VEGF截短形式(8-109)或小鼠VEGF存在下，在25°C下20nM抗VEGF抗体(Fab形式)的PBS溶液(ρΗ7·2)的荧光发射强度(激发=295nm，发射=340nm，16nm带通)增加或减低。可进行类似结合测定来测定抗α5βIFab或使用α5β1作为靶标的抗体的Kd。本文中所用的欲治疗的受试者为哺乳动物(例如人类、非人类灵长类动物、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等)。受试者可为临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。受试者可能怀疑患有癌症、免疫疾病或具有异常血管发生的任何其他疾病，或具有患该等疾病的风险；可能经诊断患有癌症、免疫疾病或具有异常血管发生的任何其他疾病。本领域已知对于癌症、免疫疾病或表现出异常血管发生的任何其他疾病的许多诊断方法的此类疾病的临床描述。根据一实施方案，根据本发明欲治疗的受试者为人类。“异常血管发生”发生在新血管过度生长或在其他方面不当生长(例如根据医学观点，血管发生的位置、时序、程度或发生不当)时的患病状态中或使产生患病状态。在一些情况下，新血管生长存在时，过度、不受控制或在其他方面不当的血管发生发生促进患病状态恶化或造成患病状态，例如在癌症，尤其血管形成性实体肿瘤(vascularizedsolidtumors)及转移性肿瘤(metastatictumors)(包括结肠(colon)癌、肺(lung)癌(尤其小细胞月市癌(small-celllungcancer))或前列腺癌(prostatecancer))；由目艮部新血管形成(ocularneovascularisation)引起的疾病，尤其糖尿病性失明(diabeticblindness)、视网膜病变(retinopathies,)、主要是糖尿病性视网膜病变(diabeticretinopathy)或年龄才目关的黄斑变个生(age-relatedmaculardegeneration)、脉络膜新血管形成(choroidalneovascularization,CNV)、糖尿病性黄斑水月中(diabeticmacularedema)、病理性近视(pathologicalmyopia)、vonHippel-Lindau病、眼睛组织浆菌病(histoplasmosisoftheeye)>43^!!^](CentralRetinalVeinOcclusion,CRV0)、角膜新血管形成(cornealneovascularization)、视网膜新血管形成及虹膜红变(retinalneovascularizationandrubeosis)、15屑_(psoriasis)、15屑生(psoriaticarthritis)、血管母细胞瘤(haemangioblastoma)，如血管瘤(haemangioma)、炎性肾病(inflammatoryrenaldiseases),如肾小球肾炎(glomerulonephritis),尤其是肾小球膜增生性肾小球肾炎(mesangioproliferativeglomerulonephritis)、溶血性尿毒综合征(haemolyticuremicsyndrome)、糖尿病性肾病(diabeticnephropathy)或高血压肾硬化(hypertensivenephrosclerosis)、各禾中炎性疾病(imflammatorydiseases),例如关节炎(arthritis)尤其类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis)、炎性肠病(inflammatoryboweldisease)、银屑病(psorsasis)、结节病(sarcoidosis)、动脉硬化(arterialarteriosclerosis)及移植后出现的疾病、子宫内膜异位(endometriosis)或慢性哮喘(chronicasthma)及超过70种其他病状中。新血管可供养患病组织，破坏正常组织，且在癌症的情况下，新血管可允许肿瘤细胞逃逸至循环中且进驻其他器官中(肿瘤转移)。本发明涵盖治疗具有发生上述疾病的风险的那些患者。“异常血管通透性”发生在血管与血管外隔区之间的液体流、分子(例如离子和营养物质)以及细胞(例如淋巴细胞)的流动过度或在其他方面不当(例如，根据医学观点血管通透性位置、时序、程度或发作不当)时的患病状态中或使产生患病状态。异常血管通透性可导致离子、水、营养物质或细胞通过血管结构的“渗漏”过度或在其他方面不当。在一些情况下，过度、不受控制或在其他方面不当的血管通透性或血管渗漏加剧或诱发疾病状态，包括例如与肿瘤相关的水肿，包括例如脑肿瘤、与恶性疾病相关的腹水、梅格斯综合征(Meigs'syndrome)、肺部炎症、肾病综合征、心包积液、肋膜积液；与心血管疾病相关的通透性，例如心肌梗塞及中风后的病状及其类似疾病。本发明涵盖治疗已发生与异常血管通透性或渗漏相关的疾病及病症或具有患所述疾病及病症的风险的那些患者。作为接受本发明的抗体或多肽的候选者的其他患者患有以下疾病或具有患以下疾病的风险纤维血管组织异常增生(fibrovasculartissue)、红斑痤疮(acnerosacea)、获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunedeficiencysyndrome)、动脉阻塞(arteryocclusionbacterialulcers)、异位性角膜炎(atopickeratitis)、细菌性馈荡(Bechetsdisease)、白塞病(Bechetsdisease)、血源性月中瘤(bloodbornetumors)、颈动脉阻塞性疾病(carotidobstructivedisease)、脉络膜新血管形成(choroidalneovascularization)、慢性炎症(chronicinflammation)、慢性视网膜脱落(chronicretinaldetachment)、f#个生1_HI(chronicuveitis)、f#个生^iMWM.(chronicvitritis)、接角虫镜过度磨损(contactlensoverwear)、角膜移植排斥(cornealgraftrejection)、角膜新血管形成(cornealneovascularization)、角膜移植新血管形成(cornealgraftneovascularization)>jioPS[Hi1iit(Crohn'sdisease)、·尔Jff_(Ealesdisease)、流行性角膜结膜炎Epidemickeratoconjunctivitis)、真菌性溃疡(fungalulcers)(Herpessimplexinfections)^!^^^(Herpeszosterinfections)、高粘度综合征(hyperviscositysyndrome)、卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、白血病(leukemia)、月旨质变性(lipiddegeneration)、莱姆病(Lyme‘sdisease)、边缘性角质层分离(marginalkeratolysis)、蚕食性角膜溃疡(Moorenulcer)、除麻风病外的分枝杆菌(Mycobacteria)感染、近视(myopia)、眼部新血管性疾病(ocularneovasculardisease)、视窝(opticpits)、奥斯勒韦·{白综合征(Osier—Webersyndrome)>(Osler-ffeber-Rendu>#^Tii^(osteoarthritis)>(Pagetsdisease)>Jro5F$[5状体炎(parsplanitis)、类天疱疫(pemphigoid)、疱性角结膜病(phylectenulosis)、多动脉炎(polyarteritis)、激光后并发症(post-lasercomplications)、原生动物感^(protozoaninfections)>(pseudoxanthomaelasticum)>S^Wl^(pterygium)、干性角膜炎(keratitissicca)、放身寸状角膜切开术(radialkeratotomy)、视网膜新血管形成(retinalneovascularization)、早产儿视网膜病变(retinopathyofprematurity)>m^XW^^f^^P^^.(retrolentalfibroplasias)(sarcoid)>巩膜炎(scleritis)、镰状细胞贫血症(sicklecellanemia)、舍格伦综合征(Sogrenssyndrome)、实体肿瘤(solidtumors)、斯特格氏病(Stargartsdisease)、史蒂芬强生病(Steven‘sJohnsondisease)、上边缘角膜炎(superiorlimbickeratitis)、梅毒(syphilis)、系统性红斑狼疮(systemiclupus)、特荷安氏角膜边缘变性(Terrien'smarginaldegeneration)、弓形体病(toxoplasmosis)、夕卜伤(trauma)、尤文肉瘤(tumorsofEwingsarcoma)、神经母细胞瘤(tumorsofneuroblastoma)、骨肉瘤(tumorsofosteosarcoma)、视网膜母细胞瘤(tumorsofretinoblastoma)、横纹肌肉瘤(tumorsofrhabdomyosarcoma)、馈荡性结肠炎(ulcerativecolitis)、静脉阻塞(veinocclusion)、维生素A缺乏(VitaminAdeficiency)及韦格纳结节病(ffegenerssarcoidosis)、与糖尿病相关的不良血管发生(undesiredangiogenesisassociatedwithdiabetes)、寄生虫病(parasiticdiseases)、异常创伤愈合(abnormalwoundhealing)、夕卜科手术后月巴大(hypertrophyfollowingsurgery)、损伤或夕卜伤(injury或trauma)、毛发生长抑制、排卵及黄体形成抑制、植入抑制及子宫内胚胎发育抑制。抗血管发生疗法适用于下述各项的一般治疗移植排斥反应(graftrejection)、肺部炎症(lunginflammation)、肾病综合征(nephroticsyndrome)、子痫前症(preeclampsia)、心包积液(pericardialeffusion)例如与心包炎相关的心包积液、肋膜积液、特征为不良血管通透性或渗漏的疾病及病症，例如与包括例如脑肿瘤的肿瘤相关的水肿、与恶性疾病相关的腹水、梅格斯综合征(Meigs'syndrome)、肺部炎症(lunginflammation)、肾病综合征(nephroticsyndrome)、心包禾只液(pericardialeffusion)禾口肋膜积液(pleuraleffusion)、与心血管疾病例如心肌梗塞及中风后病状及其类似疾病相关的通透性。根据本发明的其他血管发生相关性疾病包括血管纤维瘤(angiofibroma)(易于出血的异常血管)、新血管性青光眼(neovascularglaucoma)(眼中血管生长)、动静脉畸形(arteriovenousmalformations)(动脉与静脉之间异常连通)、不愈合骨折(nonunionfractures)(不会愈合的骨折)、动脉粥样硬化斑(atheroscleroticplaques)(动脉硬化)、化脓性肉芽肿(pyogenicgranuloma)(由血管构成的常见皮肤病变)、硬皮病(scleroderma)(结缔组织疾病的一种形式)、血管瘤(hemangioma)(由血管构成的肿瘤)、沙眼(trachoma)(第三世界中失明的主要诱因)、血友病性关节(hemophilicjoints)、血管黍占着及月巴厚性症痕(vascularadhesionsandhypertrophicscars)(异常症痕形成)。本文中所用的“治疗”(及其语法变形如“treat”或“treating”)是指施用化合物或药物组合物用于预防及/或治疗目的。“治疗疾病”或用于“治疗性处理”是指向已患疾病的受试者施用治疗以改善受试者的病状。理想的治疗效果包括但不限于，预防疾病再发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接病理性后果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或减缓疾病状态，及症状缓解或预后改良。在一些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。优选地，基于对下文所述任何特征性症状的鉴别或使用本文中所述的诊断方法，诊断受试者患具有异常血管发生的疾病。“预防疾病”是指对于尚未生病、但易患特定疾病或具有患特定疾病风险的受试者的预防性处理。优选地，使用本文中所述的诊断方法，确定受试者具有患具有异常血管发生的疾病的风险。“治疗或改善”意指在病状发作前或后改善病状或病状的症状。如由任何标准技术所测定，比较等同的未经治疗的对照者，所述改善或治疗程度为至少s^uo^do^do^、40%,50%,60%,70%,80%,90%,95%^；100%。术语“再发”、“复发”或“复发性”是指癌症或疾病在临床评定疾病消失后重现。远处转移或局部再发的诊断可视作复发。“难治性”是指疾病或病状对于治疗有抗性或无反应(例如新生性浆细胞的数目即使在给予治疗后也增加)。在某些实施方案中，术语“难治性”是指对于任何先前治疗，包括但不限于，VEGF拮抗剂、抗血管发生剂及化学疗法治疗有抗性或无反应。在某些实施方案中，术语“难治性”是指疾病或病状对于任何先前治疗，包含VEGF拮抗剂、抗血管发生剂及/或化学疗法治疗固有地无反应。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂为抗VEGF抗体。“复发性”是指患者的疾病回归至其先前患病状态，尤其为在明显恢复或部分恢复后的症状重现。在某些实施方案中，复发性状态是指在先前治疗，包括但不限于VEGF拮抗剂、抗血管发生剂及/或化学疗法治疗之前重现疾病的过程或重现疾病。在某些实施方案中，复发状态是指在对癌症疗法，包含VEGF拮抗剂、抗血管发生剂及/或化学疗法治疗的初始强烈反应的后重现疾病的过程或重现疾病。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂为抗VEGF抗体。术语“辅助疗法”是指在主要疗法，通常外科手术，后给予治疗。癌症或疾病的辅助疗法可包括免疫疗法、化学疗法、放射疗法或激素疗法。术语“维持疗法”是指给予的帮助维持先前治疗效果的定期再治疗。通常给予维持疗法以帮助保持癌症消退或延长对特定疗法的反应，无论疾病是否进展。术语“侵袭性癌症”是指扩散至组织层以外开始进入正常周围组织中的癌症。侵袭性癌症可以是或也可以不是转移性的。术语“非侵袭性癌症”是指极早期癌症或未扩散至起源组织以外的癌症。肿瘤学中的术语“无进展存活”是指在治疗期间及治疗后，癌不生长的时间长度。无进展存活包括患者经历完全反应或部分反应的时间量，以及患者经历稳定疾病的时间量。肿瘤学中的术语“进展性疾病”可指自治疗开始起由于肿瘤质量增加或肿瘤中的扩散，肿瘤生长超过20%。“病症”是将受益于使用抗体治疗的任何状况。例如，哺乳动物患有或需要预防异常血管发生(过度、不当或不受控制的血管发生)或异常血管通透性或渗漏。包括慢性及急性病症或疾病，包括使哺乳动物易患所述病症的那些病理性状况。本文中欲治疗的病症的非限制性实例包括但不限于恶性及良性肿瘤、非白血病及淋巴恶性疾病、神经元、神经胶质、星形细胞、下丘脑及其他腺体、巨噬细胞、上皮、基质及囊胚腔病症；以及炎性、血管发生及免疫病症。术语“癌症”和“癌性”是指或描述特征通常为不受调节的细胞生长的哺乳动物生理学病状。癌症的实例包括但不限于，癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤(lymphoma)、母细胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)和白血病(leukemia)。这些癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(squamouscellcancer)、成胶质细胞瘤(glioblastoma)、子宫颈癌(cervicalcancer)、卵巢癌(ovariancancer)、月干癌(livercancer)、膀月光癌(bladdercancer)、肝细胞瘤(hepatoma)、乳腺癌(breastcancer)、结肠癌(coloncancer)、结肠直肠癌(colorectalcancer)、子宫内膜癌(endometrialcarcinoma)、唾液腺癌(salivaryglandcarcinoma)、肾癌(kidneycancer)、肾脏癌(renalcancer)、前列腺癌(prostatecancer)、阴(vulvalcancer)、(thyroidcancer)、月干|§(hepaticcarcinoma)、头颈部癌(headandneckcancer)、直肠癌(rectalcancer)、结肠直肠癌(colorectalcancer)、月市·(lungcancer)^llf舌小细Ifi月市·(small-celllungcancer)>非小细胞月市癌(non—smallcelllungcancer)、月市腺癌(adenocarcinomaofthelung)及月市麟状癌(squamouscarcinomaofthelung)、麟状细胞癌(squamouscellcancer)(例如上皮鳞状细胞癌(印ithelialsquamouscellcancer))、前列腺癌(prostatecancer)、月复月莫癌(canceroftheperitoneum)、月干细癌(hepatocellularcancer)、胃癌(gastricorstomachcancer)^llf舌胃1(gastrointestinalcancer)、月夷1I(pancreaticcancer)、成胶质细胞瘤(glioblastoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、星形细胞瘤(astrocytoma)、卵泡膜细胞瘤(thecomas)、卵巢男胚瘤(arrhenoblastoma)、月干细胞瘤(h印atoma)、血液科恶性疾病(hematologicmalignancies)包括非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma,NHL)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)及急性血液禾斗恶性疾病(acutehematologicmalignancies)、子宫内膜癌(endometrial)或子宫癌(uterinecarcinoma)、子宫内膜异位(endometriosis)、纤维肉瘤(fibrosarcomas)>绒膜癌(choriocarcinoma)、唾液腺癌(salivaryglandcarcinoma)、阴门癌(vulvalcancer)、￥^1/IS(thyroidcancer)>3IS(esophagealcarcinomas)、月干(hepaticcarcinoma)、肛门癌(analcarcinoma)、阴莲癌(penilecarcinoma)、鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma)、喉癌(laryngealcarcinomas)、卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、黑素瘤(melanoma)、皮肤癌(skincarcinomas)、神经鞘瘤(Schwannoma)、少枝胶质瘤(oligodendroglioma)、神经母细胞瘤(neuroblastomas)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、骨肉瘤(osteogenicsarcoma)、平滑月JL肉瘤(leiomyosarcomas)>尿道癌(urinarytractcarcinomas)、甲状腺癌(thyroidcarcinomas)、威尔姆其jf月中瘤(WiIm'stumor)，以及B细胞淋巴瘤(B-celllymphoma))(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(lowgrade/follicularnon-Hodgkin‘slymphoma,NHL)、小淋巴球性(smalllymphocytic,SL)NHL、中级/滤泡个生(intermediategrade/follicular)NHL、中级弥漫(intermediategradediffuse)NHL、高级免疫母细(highgradeimmunoblastic)NHL、高级淋巴母细胞(highgradeimmunoblastic)NHL、高级小型无裂细胞(highgradesmallnon-cleavedcell)NHL、巨大肿瘤(bulkydisease)NHL、套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)、AIDS相关淋巴瘤和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'sMacroglobulinemia))、f#EitS(chroniclymphocyticleukemiaCLL)、急性淋巴母细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)、毛细胞白血病(Hairycellleukemia)、慢性骨髓母细胞白血病(chronicmyeloblasticleukemia)和移植后淋巴组织增生病症(post-transplantlymphoproliferativedisorder,PTLD)，以及与母斑细胞病相关的异常血管增生(abnormalvascularproliferationassociatedwithphakomatoses),及梅格其jf综合征(Meigs'syndrome)。本文中所使用的“肿瘤”是指恶性或良性的所有新生性细胞生长及增生，以及所有癌前及癌性细胞及组织。术语“抗肿瘤组合物(anti-neoplasticcomposition)”或“抗肿瘤剂(anti-neoplasticagent)”是指适用于治疗癌症的包含至少一种活性治疗剂，例如“抗癌剂”的组合物。治疗剂(抗癌剂)的实例包括但不限于，例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒性剂、放射疗法中使用的药剂、抗血管发生剂、细胞凋亡剂、抗微管蛋白剂、及治疗癌症的其他药剂，例如抗HER-2抗体、抗CD20抗体、表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)、HER1/EGFR抑制剂(例如厄洛替尼(erlotinib)(Tarceva))、血小板衍生的生长因子抑制剂(例如GleevecTM(甲磺酸伊马替尼(ImatinibMesylate)))、C0X-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib))、干扰素、细胞激素、与一个或多个以下靶标ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BAFF、BR3、APRIL、BCMA或VEGF受体结合的拮抗剂(例如中和抗体)、TRAIL/Apo2及其他生物活性及有机化学剂等。本发明中也涵盖其组合。本文中使用的“生长抑制剂”是指体外和/或体内抑制细胞生长或增生的化合物或组合物。因此，生长抑制剂可以是显著减少S期细胞百分比的药剂。生长抑制剂的实例包括阻断细胞周期进程(S期外的其他时期)的药剂，例如诱导Gl停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春花属(vincas)(长春新碱(vincristine)及长春碱(vinblastine))、TAXOL和topoII抑制剂例如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(印irubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)及博来霉素(bleomycin)。使Gl停滞的药剂也连带引起S期停滞，例如DNA烷化剂，比如他莫昔芬(tamoxifen)、拨尼松(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、氮芥(mechlorethamine)、顺钼(cisplatin)、甲氨蝶呤(metho-trexate)、5_氟尿嘧啶及ara_C。其他信息可见于TheMolecularBasisofCancer，Mendelsohn禾口Israel编，第1章，标题"Cellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs",Murakami等人’(WBSaundersPhiladelphia,1995)，尤其第13页。本文中所用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意欲包括放射性同位素(例如I131、I125、Y9°及Re186)生长抑制剂、化疗剂和毒素例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段。“化疗剂”是适用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括适用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括烷化剂，例如塞替哌(thiot印a)和CYTOXAN环磷酰胺(cyclosphosphamide)，烷基磺酸酯(alkylsulfonates)如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；吖丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙烯硫代憐酸胺(triethylenethiophosphoramide)禾口三轻甲蜜胺(trimethylomelamine)；acetogenins(尤其是布拉他辛(bullatacin)禾口布拉他辛酮(bulIatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin;CC_1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)及比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycin)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189及CB1-TM1)；艾槽素(eleutherobin)；pancratistatin；匍枝珊瑚酉享(sarcodictyin)；海绵素(spongistatin)；氮芥(nitrogenmustards)例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酉先胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法仓(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆留酉享(phenesterine)、拨尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿啼唆氮芥(uracilmustard)；亚硝基脲类(nitrosoureas)例如卡莫司汀(carmustine)、氣月尿菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，例如烯二炔类(enediyne)抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素YII和加利车霉素ωIl(参见例如Agnew，ChemIntl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；烯二炔蒽环类抗生素(dynemicin)，包括烯二炔蒽环类抗生素AWynemicinΑ)；二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色团和相关色素蛋白烯二炔类抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、方文线菌素(actinomycin)、蒽霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霄素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6—重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、ADRIAMYCIN多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基吗啉代多柔比星(cyanomorpho1ino-doxorubicin)、2_口比口各琳-多柔比星(2-pyrro1ino-doxorubicin)和脱氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、马塞罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、麦考酚酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)>培洛霉素(ρ印lomycin)、紫菜霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(str印tonigrin)、链佐M(streptozocin),^^tMMM(tubercidin)、^；$_目(ubenimex)>W]ftkT(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨喋呤(methotrexate)和5_氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨喋呤(methotrexate)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(印itiostanol)、美雄烷(m印itiostane)、睾内酉旨(testolactone)；抗肾上腺药(anti-adrenals)，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补偿剂，诸如亚叶酸(frolinicacid)；醋葡醛内酯(aceglatone)、aldophosphamideglycoside、5_氨基酮戊酸(aminolevulinicacid)；恩尿啼唆(eniluracil)；安口丫唆(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗尼辛(elfornithine)；依利醋铵(elliptiniumacetate)；印othilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(galliumnitrate)；轻基脲(hydroxyurea)；香多糖(Ientinan)；氯尼达明(Ionidainine)；美坦生类化合物(maytansinoids)，诸如美坦生(maytansine)禾口安丝菌素(ansamitocins)；米托月瓜月宗(mitoguazone)；米托惠酉昆(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；尼曲吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；异丙嗪(phenamet)；批柔比星(pirarubicin)；洛索蒽酉昆(Iosoxantrone)；鬼白酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰胼Q-ethylhydrazide)；丙卡巴胼(procartazine)；PSK多糖复合物(JHS天然产物，Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺酉昆(triaziquone)；2，2‘，2〃-三氯三乙胺(2,2,2"-trichlorotriethylamine)；单端孢霉烯族毒素(trichothecenes)(尤其T-2毒素、韦拉库林A(verracurinΑ)、杆孢菌素A(roridinΑ)及anguidine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露酉享(mitobronitol)；二溴卫矛酉享(mitolactol)；喊泊漠烧(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞昔(arabinoside)(“Ara-C")；环磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替哌(thiotepa)；紫杉烷类化合物(taxoids),例如TAXOL紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N.J.)、无克列莫佛(Cremophor)的ABRAXANETM、紫杉醇的白蛋白改造的纳米颗粒制剂(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois)、及TAXOTERE多西他赛(doxetaxel)(Rhone-PoulencRorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；GEMZAR吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；口票吟(mercaptopurine)；甲氛蝶吟(methotrexate)；怕类^以物，例如顺钼和卡钼(carboplatin)；长春碱；钼；依托泊苷(etoposide，VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托惠酉昆(mitoxantrone)；长春新喊(vincristine)；NAVELBINE长春瑞滨(vinorelbine)；诺安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；胺基口票呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(Camptosar，CPT-11)(包括伊立替康与5-FU及亚叶酸(leucovorin)的治疗方案)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸(difluorometlhylornithine)(DMFO)；维甲类(retinoids)如视黄酸(retinoicacid)、卡培他滨(capecitabine)、考布他汀(combretastatin)、亚叶酸(LV)；奥沙利钼(oxaliplatin)，包括奥沙利钼治疗方案(FOLFOX)；降低细胞增生的I3KC-α、Raf、H-Ras和EGFR的抑制剂(例如厄洛替尼(TarcevaTM))及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。化疗剂也包括用以调控或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，例如抗雌激素及选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，包括例如他莫昔芬(包括NOLVADEX他莫昔芬)、雷诺昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4_羟基他莫昔芬G-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、keoxifene、LY117018、奥那司酮(onapristone)和法乐通·托瑞米芬(FARESTON.toremifene)抑制调控肾上腺中的雌激素产生的芳香酶的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、MEGASE醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN依西美坦(exemestane)、福美坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR伏氯唑(vorozole)、FEMARA来曲唑(Ietrozole)及ARIMIDEX阿那曲唑(anastrozole)及抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙立德(Ieuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他滨(troxacitabine)(1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，尤其那些抑制异常细胞增生所涉及的信号传导路径中的基因表达的，例如PKC-α、Iaf及Mas核酶，例如VEGF表达抑制剂(例如ANGIOZYME核酶)及HER2表达抑制剂；疫苗，例如基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗；LEUVECTIN疫苗及VAXID疫苗；PROLEUKINrIL-2；LURTOTECAN拓扑异构酶1抑制齐U;ABARELIXrmRH；长春瑞滨(Vinorelbine)及Esperamicins(参见美国专利第4，675，187号)；及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。本申请中所使用的术语“前药”指药物活性物质的前体或衍生物形式(例如小分子)，该形式比起母体药物对患病细胞的细胞毒性小，且能够酶促活化或转化成更具活性的母体形式。参见例如WiIman,“ProdrugsinCancerChemotherapy"BiochemicalSocietyTransactions，14，第375-382页，615thMeetingBelfast(1986)及Stella等人，"Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery,，，DirectedDrugDelivery,Borchardt等人(编)，第M7-267页，HumanaPress(1985)本发明的前药包括但不限于，含磷酸酯基的前药、含硫代磷酸酯基的前药、含硫酸酯基的前药、含肽的前药、D-氨基酸修饰的前药、糖基化前药、含内酯胺的前药、含视情况经取代的苯氧基乙酰胺的前药或含视情况经取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶及其他5-氟尿苷前药，其可转化成更具活性的无细胞毒性药物。可衍生成用于本发明的前药形式的细胞毒性药物的实例，包括但不限于，上文所述的那些化疗剂。“分离的”在用于描述本文中所披露的各种多肽时意指多肽已经鉴别且从表达其的细胞或细胞培养物中分离和/或回收。其天然环境的污染组分是通常会干扰多肽的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素及其他蛋白质或非蛋白质溶质。在实施方案中，多肽应纯化至(1)足以通过使用旋转杯测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(使用考马斯亮蓝(Coomassieblue)，或优选地，银染色剂在非还原或还原条件下通过SDS-PAGE获得均一性。由于多肽天然环境的至少一种组份将不存在，所以经分离的多肽包括重组细胞内的原位多肽。然而，通常经分离多肽将由至少一个纯化步骤来制备。“分离”的编码多肽的核酸或其他编码多肽的核酸是经过鉴别并且自至少一种污染核酸分子分离的核酸分子，其在编码多肽的核酸的天然来源中通常与污染核酸分子相缔合。经分离的编码多肽的核酸分子不同于自然界中所见的形式或定位。因此将经分离的编码多肽的核酸分子与天然细胞中所存在的特定的编码多肽的核酸分子相区分。然而，经分离的编码多肽的核酸分子包括包含在通常表达多肽的细胞中的编码多肽的核酸分子，其中例如核酸分子位于不同于天然细胞中的染色体位置的位置。术语“控制序列”是指在特定宿主生物体内表达的可操作地连接的编码序列所需的DNA序列。适于原核生物的控制序列例如包括启动子、视情况存在的操纵序列和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、聚腺苷酸化信号及增强子。当核酸与另一核酸序列功能相关时，其即经是“可操作地连接”。比如，若前序列或分泌性前导序列的DNA表达为参与多肽分泌的前体蛋白，则其与所述多肽的DNA可操作地连接；若启动子或强化子影响编码序列的转录，则其与该序列可操作地连接；或若核糖体结合位点为了便于翻译而定位，则其与编码序列可操作地连接。一般而言，“可操作地连接”指所连接的DNA序列为相邻的，且在分泌性前导序列的情况下为相邻的且处于阅读框中。然而，增强子不必须是相邻的。连接通过在合适限制性位点处的连接来实现。若这些位点不存在，则根据常规操作使用合成寡核苷酸衔接子(adaptors)或接头(linkers)。本文中所定义的“严格条件”或“高严格条件”可由以下来鉴别(1)采用低离子强度及高温进行洗涤，例如在50°C下，0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1%十二烷基硫酸钠；(在杂交期间采用例如甲酰胺的变性剂，例如在42°C下，50%(ν/ν)含有0.牛血清白蛋白的甲酰胺/0.Ficoll/0.聚乙烯吡咯啶酮/含有750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠的50mM磷酸钠缓冲液(pH6.5)；或(3)在42°C下在采用50%甲酰胺、5XSSC(0.75MNaCl、0.075M柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH6.8),0.焦磷酸钠、5X丹哈特氏溶液(Denhardt'ssolution)、声波处理的鲑鱼精DNA(50μg/ml)、0.1%SDS及10%硫酸聚葡萄糖的溶液中杂交过夜，其中在42°C下于0.2XSSC(氯化钠/柠檬酸钠)中洗涤10分钟，接着在下由含有EDTA的0.IXSSC组成的洗涤液中高严格洗涤10分钟。除非另有说明，否则本文中所述的氨基酸序列为相邻氨基酸序列。本文中所用的术语“免疫黏附素”表示具有异源蛋白(一种“黏附素”)的结合特异性与免疫球蛋白恒定结构域的效应子功能的抗体样分子。在结构上，免疫黏附素包含具有所需结合特异性的不被抗体的抗原识别及结合位点的(也即为“异源”)氨基酸序列与免疫球蛋白恒定结构域序列的融合。免疫黏附素分子的黏附部分通常是至少包含受体或配体(例如VEGFR或纤连蛋白配体)的结合位点的相邻氨基酸序列。免疫黏附素中的免疫球蛋白恒定结构域序列可获自任何免疫球蛋白，例如IgG-l、IgG-2、IgG-3或IgG-4亚型、IgA(包括IgA-I及IgA-2)、IgE、IgD或IgM。通常，包含衍生自与免疫球蛋白的Fc部分融合的进行噬菌体展示选择所获得的特异结合靶标的序列的肽体，可被看作是本文中的免疫黏附素。术语“抗体”是以其最广义使用，且特定涵盖例如单一的单克隆抗体(包括激动剂、拮抗剂及中和抗体)、具有多抗原表位特异性的抗体组合物、多克隆抗体、单链抗抗体、及抗体片段(参见下文)，只要其特异性结合天然多肽和/或表现本发明的生物活性或免疫学活性即可。根据一个实施方案，抗体结合至靶蛋白的寡聚形式，例如三聚形式。根据另一实施方案，抗体特异性结合蛋白质，该结合可由本发明的单克隆抗体(例如本发明的保藏抗体等)抑制。短语抗体的“功能性片段或类似物”是具有与所提及抗体相同的定性生物活性的化合物。比如，本发明的抗体的功能性片段或类似物可以是可特异性结合至VEGF或α5β1的。在一个实施方案中，抗体可阻止或基本上降低VEGF诱导细胞增生的能力。“经分离抗体”为已经鉴别并且从其天然环境的组份分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组份是会干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，且可包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。在实施方案中，抗体应纯化至(1)如通过Lowry法测定，以重量计大于95%的抗体，且优选以重量计大于99%;(幻足以通过使用旋转杯测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或C3)使用考马斯亮蓝或优选地银染色剂在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE获得均一性。由于抗体的天然环境的至少一种组份将不存在，所以经分离抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，经分离抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。基本4链抗体单元是由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链组成的异四聚体糖蛋白(IgM抗体由5个基本异四聚体单元和被称为J链的另一多肽组成，因此含有10个抗原结合位点，而分泌型IgA抗体可聚合形成包含2-5个基本4链单元以及J链的多价集合体)。对于IgGs，4链单元通常为约150，000道尔顿。各L链通过一个共价二硫键连接至H链，而根据H链同种型不同，两条H链通过一或多个二硫键彼此连接。各H链及L链也具有规则间隔的链内二硫键。各H链在N端具有可变结构域(Vh)，其后为各α链及γ链的三个恒定结构域(Ch)及μ和ε同型的四个Ch结构域。各L链在N端具有可变结构域(\)，其后是位于其另一端的恒定结构域(CJ。八与Vh比对且Q与重链的第一恒定结构域(ChI)比对。认为特定氨基酸残基在轻链与重链可变结构域之间形成界面。Vh与\的配对共同形成单一抗原结合位点。关于不同种类抗体的结构及特性，参见例如BASICANDCLINICALIMMUNOLOGY(基础和临床免疫学)，第8版，DanielP.Stites,AbbaI.Terr和TristramGParslow(编)，Appleton&Lange，Norwalk，CT，1994，第71页及第6章。来自任何脊椎动物物种的L链可基于其恒定结构域的氨基酸序列归为被称作κ及λ的两个明显不同类型之一。根据重链恒定结构域(Ch)的氨基酸序列不同，免疫球蛋白可归于不同种类或同型。存在五种免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG及IgM分别具有称为α，δ，Y，ε和μ的重链。基于Ch序列及功能的相对较小的差异，将Y及α类进一步分成亚类，例如人类呈现以下亚类IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2。术语“可变”是指在抗体中某些可变结构域区段在序列上极其不同。V结构域介导抗原结合，并且界定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性并非均勻分布在可变结构域的Iio个氨基酸范围上。而是V区由15-30个氨基酸的相对不变段(称作构架区(FRs))由长度各为9-12个氨基酸的具有极大可变性的较短区域(称作“高变区”)间隔组成。天然重链合轻链的可变结构域各包含四个FRs，主要采用β桶构象，由三个高变区连接，其形成环连接，且在一些情况下形成β折叠结构的一部分。各链中的高变区通过FRs紧密保持在一起，并且与其他链的高变区一起促进抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人，SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST(免疫学目的的蛋白质序列)，第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。虽然恒定结构域并不直接涉及于抗体与抗原的结合，但其展现各种效应子功能，例如使抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。本文中所使用的术语“高变区”是指负责抗原结合的抗体氨基酸残基。高变区一般包含来自“互补决定区”或“⑶R”的氨基酸残基(例如Vl中大约残基M_34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)中大约残基31-35B(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)(在一实施方案中，Hl为大约31-35)；Kabat等人，同上)和/或来自“高变环”的那些残基(例如八中的残基^-32(L1)、50-52(L2及91-96(L3)及Vh中的残基洸-32(HI)、53_55(H2)及96-101(H3)；Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)196:901-917(1987))。在本说明书及权利要求范围内，当提及可变结构域中的残基时，一般使用Kabat编号系统(大约轻链中的残基1-107及重链中的残基1-113)(例如Kabat等人，同上(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，一般使用“EU编号系统“或”EU指数“(例如Kabat等人，同上(1991)中所报道的EU指数，该文献以引用的方式明确并入本文中)。除非本文中另有说明，否则提及抗体可变结构域中的残基编号意思是通过Kabat编号系统的残基编号。除非本文中另有说明，否则提及抗体恒定结构域中的残基编号意谓通过EU编号系统的残基编号。本文中所用的术语“单克隆抗体”是指自实质上均一的抗体群落获得的抗体，也即23构成所述群体的个别抗体除可少量存在的可能天然存在的突变外是相同的。单克隆抗体具有高特异性，是针对单一抗原位点。此外，与包括针对不同决定簇(抗原表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，各单克隆抗体是针对抗原上的单一决定簇。除特异性之外，单克隆抗体的优势还在于其可在不受其他抗体污染的情况下合成。修饰语“单克隆”不应理解为需要通过任何特定方法制造抗体。举例来说，适用于本发明中的单克隆抗体可通过首先由Kohler等人，Nature(自然)，256=495(1975)描述的杂交瘤方法来制备，或可使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制得(参见例如美国专利第4，816，567号)。也可以使用Clackson等人，Nature(自然)，352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)，222:581-597(1991)中所述的技术或使用下文实施例中所描述的方法由噬菌体抗体文库分离“单克隆抗体”。本文中的单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或同源，而所述链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或同源；以及这些抗体的片段，只要其表现出本发明的生物活性即可(参见美国专利第4，816，567号；和Morrison等人，PNASUSA，81:6851-6855(1984))。本文中的相关嵌合抗体包括“灵长类动物化”抗体，其包含源自非人类灵长类动物(例如旧世界猴(OldWorldMonkey)、猿等)的可变结构域抗原结合序列，和人类恒定区序列。“亲和力成熟”抗体是在一或多个CDR中具有一或多种变化的抗体，与不具有那些变化的亲本抗体相比，那些变化使得抗体对抗原的亲和力改善。优选亲和力成熟抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔亲和力。亲和力成熟抗体是由本领域中已知的程序制备。Marks等人，Bio/technologylO:779-783(1992)描述通过VH及VL结构域改组(shuffling)获得的亲和力成熟。CDR和/或构架区残基的随机突变于下列文献中描述=Barbas等人，PNASUSA91:3809-3813(1994)；Schier等人，Gene(基因)169147-155(1995)；Yelton等人，J.Immunol.(免疫学杂志)155:1994-2004(1995)，Jackson等人，J.Immunol.(免疫学杂志)154(7)=3310-9(1995)；及Hawkins等人，J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)2:889-896(1992)。“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体是抑制或降低所结合抗原的生物活性的抗体。举例来说，阻断型或拮抗剂抗-α5β1抗体通过结合α5β1而部分或完全地抑制血管发生。“激动性”抗体是增强或增加所结合抗原的生物活性的抗体。举例来说，激动剂抗体抗-α5β1抗体通过结合α5β1而增强血管发生。“完整”抗体是包含抗原结合位点以及Q及至少重链恒定结构域Ch1、Ch2及Ch3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如人类天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。完整抗体优选具有一或多种效应子功能。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选是完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利第5，641，870号，实施例2;Zapata等人，ProteinEng.8(10)1057-1062[1995])；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。表述“线性抗体”一般是指Zapata等人，ProteinEng.，8(10):1057-1062(1995)中所述的抗体。简言之，这些抗体包含一对串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，其与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性或单特异性的。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个称为“Fab”片段的相同抗原结合片段；和一个残余“Fe”片段，该命名反映的容易结晶的能力。Fab片段由完整L链连同H链的可变区域(Vh)及一个重链的第一恒定结构域(Ch1)组成。各Fab片段对于抗原结合来说是单价的，也即其具有单一抗原结合位点。用胃蛋白酶处理抗体产生单一的大F(ab')2片段，其大致对应于具有二价抗原结合活性的两个二硫键连接的Fab片段并且仍能够与抗原交联。Fab'片段不同于Fab片段之处在于，其在Ch1结构域的羧基端具有包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸的数个额外残基。Fab'-SH在本文中指代恒定结构域半胱氨酸残基带有游离硫醇基的Fab'。F(ab')2片段最初是中间具有铰链半胱氨酸的Fab‘片段对的形式产生的。也已经知道抗体片段的其他的化学偶合。Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两个H链的羧基端部分。抗体的效应子功能是由Fc区中的序列决定的，该区也是在某些类型细胞上发现的Fc受体(FcR)识别的部分。“变异Fc区”包含由于至少一种如本文中所定义的“氨基酸修饰”而与天然序列Fc区的序列不同的氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比较，变异Fc区具有至少一个氨基酸置换，例如天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中约1至约10个氨基酸置换且优选约1至约5个氨基酸置换。在一个实施方案中，本文中的变异Fc区将与天然序列Fc区至少约80%同源、至少约85%同源、至少约90%同源、至少约95%同源、或至少约99%同源。根据另一实施方案，本文中的变异Fc区将与亲本多肽的Fc区至少约80%同源、至少约85%同源、至少约90%同源、至少约95%同源或至少约99%同源。术语“包含Fc区的多肽”是指例如抗体或免疫黏附素，包含Fc区的多肽(参见下文定义)。例如，在纯化多肽期间或通过重组工程改造编码多肽的核酸来移除Fc区的C端赖氨酸(根据EU编号系统残基447)。因此，包含本发明的具有Fc区的多肽(包括抗体)的组合物可包含移除所有K447残基的多肽群体、未移除K447残基的多肽群体或包含有K447残基与无K447残基的多肽的混合物的多肽群体。“Fv”是含有完整抗原识别位点及抗原结合位点的最小抗体片段。该片段由一个重链可变区域与一个轻链可变区域紧密、非共价缔合的二聚体组成。由者这两个结构域的折叠产生6个高变环(H链及L链各产生3个环)，所述高变环促进了氨基酸残基用于抗原结合并且赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使单一可变结构域(或仅包含三个对抗原特异的CDR的半个Fv)也具有识别及结合抗原的能力，但其亲和力比完整结合位点低。“单链Fv”(也缩写为“sFv”或“scFv”)是包含连接成单一多肽链的Vh及Vl抗体结构域的抗体片段。sFv多肽优选在Vh与\结构域之间进一步包含多肽连接子，使得sFv能够形成抗原结合所需的结构。关于sFv的评述，参见Pluckthun，ThePharmacoloRYofMonoclonalAntibodies(单克隆抗体药学)，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，NewYork，第269-315页(1994)；Borrebaeck1995，同下。术语“双抗体”是指通过在Vh结构域与\结构域之间使用短连接子(约5-10个残基)建构sFv片段(参见先前段落)以使得V结构域链之间而不是链内配对从而产生二价片段，也即具有两个抗原结合位点的片段，而制得的小抗体片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两个抗体的Vh及\结构域存在于不同多肽链上。双抗体于例如EP404，097；WO93/11161及Hollinger等人，PNASUSA,90:6444-6448(1993)中有更详尽地描述。“人源化”抗体是非人类(例如啮齿动物)抗体形式，其是含有源自非人类抗体的最小序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体是来自接受者的高变区的残基经由具有所需抗体特异性、亲和力和能力的来自例如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物的非人类物种(供体抗体)的高变区的残基置换的人类免疫球蛋白(接受者抗体)。在一些情况下，人类免疫球蛋白的构架区(FR)残基经相应的非人类残基置换。此外，人源化抗体可以包含接受者抗体或供体抗体中未发现的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体效能。一般而言，人源化抗体将包含实质上所有的至少一个且通常两个可变结构域，其中所有的或者实质上所有的高变环对应于非人类免疫球蛋白的高变环，并且所有的或实质上所有的FR是人类免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体视情况也将包含免疫球蛋白恒定区(Fe)的至少一部分，通常人类免疫球蛋白恒定区的至少一部分。关于其他细节，参见Jones等人，Nature(自然)321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature(自然)332:323-329(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。“物种依赖性抗体”是对来自第一哺乳动物物种的抗原的结合亲和力比其对与其同源物——来自第二哺乳动物物种的结合亲和力强的抗体。通常，物种依赖性抗体“特异性结合”至人类抗原(也即，结合亲和力(Kd)值不超过约1\10_、、不超过约1\10、或不超过约1X10_9M)，但对来自第二非人类哺乳动物物种的该抗原同源物的结合亲和力比其对人类抗原的结合亲和力弱至少约50倍或至少约500倍或至少约1000倍。物种依赖性抗体可以是如上定义的各种类型抗体中的任一种，但优选是人源化或人类抗体。在这些实施方案中，如由流式细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIA)测定，多肽、抗体、拮抗剂或组合物与“非靶”蛋白的结合程度将比多肽、抗体、拮抗剂或组合物与其特定靶蛋白的结合程度小约10%。关于多肽、抗体、拮抗剂或组合物与靶分子的结合，术语“特异性结合”或“特异性结合至”特定多肽或特定多肽靶标上的抗原表位或者对特定多肽或特定多肽靶标上的抗原表位“具特异性”是指结合与非特异性相互作用具有可测量程度的差异。可以例如，通过与对照分子，一般是不具有结合活性的类似结构的分子的结合的比较，来测定分子的结合进而测量特异性结合。举例来说，可通过与类似于靶标的对照分子(例如过量的未经标记靶标)竞争来测定特异性结合。在此情况下，若经标记靶标与探针的结合由过量未经标记靶标竞争性抑制，则指示特异性结合。如本文中所用的术语“特异性结合”或“特异性结合至”特定多肽或特定多肽靶标上的抗原表位或对特定多肽或特定多肽靶标上的抗原表位“其特异性”可由例如分子对靶标的Kd是至少约10_4M、至少约10_5M、至少约1(Γ6Μ、至少约10〃Μ、至少约1(Γ8Μ、至少约1(Γ9Μ、或者至少约1(T1CIM、至少约1(Γ"Μ、至少约10-1或更高来表现。在一实施方案中，术语“特异性结合”是指分子结合至特定多肽或特定多肽上的抗原表位而实质上不结合至任何其他多肽或多肽抗原表位的结合。抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变异Fc区)的那些生物活性，且其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的实例包括Clq结合及补体依赖性细胞毒性Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体的下调；及B细胞活化。“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列一致的氨基酸序列。Fc序列的实例于例如，但不限于，Kabat等人，同上(1991)中描述。关于本文中所鉴别的多肽及抗体序列的“氨基酸序列一致性百分比(％)”或“同源性”定义是在将任何保守性置换视作序列一致性的一部分对序列进行比对之后，候选序列中与经比较的多肽的氨基酸残基一致的氨基酸残基百分比。为测定氨基酸序列一致性百分比而进行的比对可以用本领域中的多种方式达成，例如使用可公开获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适合参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，为达成本文的目的，氨基酸序列一致性百分比值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生。ALIGN-2序列比较计算机程序是由Genentech，Inc.编写且源代码已经与使用者文件一起归档于美国版权办公室(U.S.CopyrightOffice,WashingtonD.C.，20559)，在其中其是以美国版权登记号第TXU510087号登记。ALIGN-2程序可以通过Genentech，he.(SouthSanFrancisco,California)公开获得。ALIGN-2程序应经编译以用于UNIX操作系统，优选数字UNIXV4.0D。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不改变。术语“Fe受体”或“FcR”是用于描述与抗体的Fc区结合的受体。在一个实施方案中，本发明的FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)并且包括!7CγRI、FcYRII及FcyRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体及可变剪接形式。FcyRII受体包括FcyRIIA(“活化受体”)及FcyRIIB(“抑制受体”)，其主要差异在其细胞质结构域的相似氨基酸序列。活化受体FcYRIIA的细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基兀(immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif,ITAM)。抑制受体FcγRIIB的细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基元(immunoreceptortyrosine-basedinhibitionmotif,ITIM)(参见评述Μ·inDaeron,Annu.Rev.Immunol.(免疫学年度综述)15:203-234(1997))ο该术语包括异型，例如FcyRIIIA异型FcyRIIIA-Phe158,FcyRIIIA-Vall58、FcyRIIA-R131禾Π/或FcγRIIA-H131。FcR于Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol(免疫学年度综述)9:457-92(1991)；Capel等人，Immunomethods(免疫方法)4:25-34(1994)JPdeHaas等人，J.Lab.Clin.Medd.126:330-41(1995)中评述。本文中的术语“FcR”涵盖其他FcR包括将来鉴别的那些FcR。该术语也包括新生儿受体i^cto，其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等人，J.Immunol.(免疫学杂志)117:587(1976)及Kim等人，J.Immunol.(免疫学杂志)24:249(1994))。术语”FcRn"是指新生儿Fc受体(Fcfoi)。Fcfoi在结构上与主要组织相容性复合物(MHC)类似且由非共价结合至β2_微球蛋白的α链组成。新生儿Fc受体Fcfoi的多种功能于Ghetie及Ward(2000)Annu.Rev.Immunol.(免疫学年度综述)18，739-766中评述。Fcfoi在免疫球蛋白IgG自母体至幼体的被动传递及血清IgG水平的调控中发挥作用。Fcfoi可充当救助受体，以完整形式结合并转运在细胞内以及横跨细胞的胞饮IgG，且通过默认的降解途径将其援救。W000/42072(Presta)和Shields等人，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)9)6591-6604(2001)描述与FcR的结合改善或减少的抗体变体。那些公开的内容特定地以引用的方式并入本文中。人类IgGFc区的“CH1结构域”(也称作“HI”结构域的“Cl”)通常从约氨基酸118延伸至约氨基酸215(EU编号系统)。“铰链区”一般定义是从人类IgGl的Glu216延伸至ftx)230(Burton,Molec.Immunol.(分子免疫学)22=161-206(1985))0通过将形成重链间S-S键的第一个和最后一个的半胱氨酸残基置于相同位置可使其他IgG同种型的铰链区与IgGl序列比对。Fc区的“下部铰链区”通常定义为与铰链区的C端紧邻的残基段，也即Fc区的残基233至239。在先前的报道中，FcR结合一般是由于IgGFc区下部铰链区中的氨基酸残基。人类IgGFc区的“CH2结构域”(也称作“H2”结构域的“C2”)通常自约氨基酸231延伸至约氨基酸340。CH2结构域的独特之处在于其并不与另一结构域紧密配对。而是两个N连接的分支糖链插入完整的天然IgG分子的两个CH2结构域之间。已推测糖类可提供结构域-结构域配对的替代并且帮助稳定CH2结构域。Burton，Molec.Immunol.(分子免疫学)22:161-206(1985)。"CH3结构域”(也称作“C2”或“H3”结构域)包含Fc区中CH2结构域C端的残基段(也即约氨基酸残基341至抗体序列的C端，通常在IgG的氨基酸残基446或447处)。“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的效应子功能”。示例性的“效应子功能”包括Clq结合；补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调等。这些效应子功能一般需要Fc区与结合结构域(例如抗体可变结构域)组合并且可以例如使用如本文中所揭示的各种测定来评定。“Clq”是包括免疫球蛋白的Fc区的结合位点的多肽。Clq与两种丝氨酸蛋白酶Clr及Cls—起形成复合物Cl，其是补体依赖性细胞毒性(⑶C)途径的第一组份。人类Clq可购自例如Quidel，SanDiego,CA。术语“结合结构域”是指结合至另一分子的多肽区域。在FcR的情况下，结合结构域可包含负责结合Fc区的其多肽链(例如其α链)的一部分。一种有用的结合结构域是FcRa链的细胞外结构域。具有拥有“改变”的FcR结合亲和力或ADCC活性的变异IgGFc的抗体或肽体是与亲本多肽或包含天然序列Fc区的多肽相比，具有增强或减低的FcR结合活性(例如FcyR或Fcfoi)和/或ADCC活性的抗体或肽体。“表现增加的结合”至FcR的变体的Fc以高于亲本多肽或天然序列IgGFc的亲和力(例如表观Kd或IC50值较低)结合至少一种FcR。根据一些实施方案，与亲本多肽相比，结合提高约3倍，优选约5倍、10倍、25倍、50倍、60倍、100倍、150倍、200倍、250倍、300倍、350倍、400倍、450倍或500倍，或结合提高约25%至1000%。“表现减少的结合”至FcR的多肽变体以低于亲本多肽的亲和力(例如表观Kd或IC50值较高)结合至少一种FcR。与亲本多肽相比，结合减少可以是约5^UOW、20%、30%、40%、50%、60%或更多的结合减少。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指一种细胞毒性形式，其中分泌Ig与存在于某些细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞及巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)结合，使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合至带有抗原的靶细胞，并且随后以细胞毒素杀死靶细胞。抗体“配备”细胞毒性细胞且绝对是该杀伤所需的。用于介导ADCC的初级细胞、NK细胞仅表达FcyRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血细胞上的表达总结于Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immuno1(免疫学年度综述)9=457-92(1991)第464页上的表3中。为评价相关分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定，例如美国专利第5，500,362号或第5，821，337号或下文实施例中所述的测定。适用于这些测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)及自然杀伤(NK)细胞。或者，或另外，可体内，例如在例如Clynes等人，PNAS(USA)95:652-656(1998)中所揭示的动物模型中评价相关分子的ADCC活性。当测定中具有变异Fc区的多肽与具有野生型Fc区的多肽(或亲本多肽)的量基本上相同时，与具有野生型IgGFc的多肽或亲本多肽相比，在人类效应细胞存在下“表现增加的ADCC”或更有效介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的包含变异Fc区的多肽，是体外或体内实质上更有效介导ADCC的多肽。一般而言，这些变体将使用如本文中所揭示的体外ADCC测定来鉴别，但涵盖例如在动物模型等中测定ADCC活性的其他测定或方法。在一个实施方案中，优选变体在介导ADCC方面比野生型Fc(或亲本多肽)有效约5倍至约100倍，例如约25倍至约50倍。“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指在补体存在下溶解靶细胞。经典补体活化途径是通过补体系统的第一组份(Clq)结合至与其同源抗原结合的(适当亚类的)抗体起始。为评定补体活化，可进行⑶C测定，例如如feizzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods(免疫学方法杂志)202:163(1996)中所述。具有已变化的Fc区氨基酸序列和增加或降低的Clq结合能力的多肽变体描述于美国专利第6，194，551号及WO99/51642中。那些专利公开的内容特定地以引用的方式并入本文中。也参见Idusogie等人，J.Immunol.(免疫学杂志)164=4178-4184(2000)。“人类效应细胞”是表达一个或多个FcR且执行效应子功能的白细胞。根据一个实施方案，所述细胞至少表达FcγRIII，并且执行ADCC效应子功能。介导ADCC的人类白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞及嗜中性粒细胞；其中PBMC及NK细胞较佳。效应细胞可自其天然来源分离，例如自如本文中所述的血液或PBMC分离。测量与Fcfoi的结合的方法是已知的(参见例如(ihetie1997，Hinton2004)。人类Fcfoi高亲和力结合多肽与人类Fcfoi的体内结合以及血清半衰期，可例如在表达人类Fcfoi的转基因小鼠或转染人类细胞系中测定，或在经施用Fc变异多肽的灵长类动物中测定。在一个实施方案中，特定的具有变异IgGFc的本发明抗-α5β1抗体，与具有野生型IgGFc的多肽相比，表现出对人类Fcfoi的结合亲和力增加至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少100倍、至少125倍、至少150倍。在一特定实施方案中，对人类Fcfoi的结合亲和力增加约170倍。在一个实施方案中，关于对Fcfoi的结合亲和力，多肽的EC50或表观Kd(在ρΗ6.0)小于ΙμΜ，优选地小于或等于ΙΟΟηΜ，更优选小于或等于ΙΟηΜ。在一实施方案中，关于对FcγRIII(F158，也即低亲和力同种型)增加的结合亲和力，EC50或表观Kd小于或等于IOnM且对于FcγRIII(V158；高亲和力同种型)，EC50或表观Kd小于或等于3nM。根据另一实施方案，若测试抗体与对照抗体结合曲线的中点处吸光值的比率(例如A45(lnm(tt#)/A450nm(对照_))小于或等于40%，则相对于对照抗体(例如Herceptin抗体)，抗体与！^受体结合的降低可看作相对于对照抗体显著。根据另一实施方案，若测试抗体与对照抗体结合曲线的中点处吸光值的比率(例如A45tlIim(抗体)/A45(1nm(·抗体))大于或等于125%，则相对于对照抗体(例如Herceptin抗体)，抗体与Fc受体结合的增加可视作相对于对照抗体显29者。“亲本多肽”或“亲本抗体”是包含满足以下的氨基酸序列的多肽或抗体自该氨基酸序列产生的变异多肽或抗体，并且针对该氨基酸序列对变异多肽或抗体进行比较。通常亲本多肽或亲本抗体缺乏一个或多个本文中所揭示的Fc区修饰，且与本文中所揭示的多肽变体效应子功能不同。亲本多肽可包含天然序列Fc区或具有预先存在的氨基酸序列修饰(例如添加、缺失和/或置换)的Fc区。本发明抗体可源自噬菌体展示。本文中所用“文库”是指复数个抗体或抗体片段序列，或编码这些序列的核酸，所述序列在根据本发明方法引入这些序列中的变异氨基酸的组合方面不同。“噬菌体展示”是使变异多肽以与衣壳蛋白的至少一部分以融合蛋白的形式展示于噬菌体(例如丝状噬菌体)颗粒表面上的技术。噬菌体展示的效用在于可从随机化蛋白质变体的庞大文库中快速且有效地分选那些以高亲和力结合至靶抗原的序列。在噬菌体上的展示肽和蛋白质文库已经用来在数百万多肽中筛选具有特异性结合性质的多肽。多价噬菌体展示方法已用于通过与丝状噬菌体的基因III或基因VIII融合来展示小随机肽和小蛋白质。Wells及Lowman，Curr.Opin.Struct.Biol.(当前结构生物学观点)3355-362(1992)及其中所引用的参考文献。在单价噬菌体展示中，使蛋白质或肽文库融合至基因III或其一部分，在野生型基因III蛋白质存在下，以低程度表达，使得噬菌体颗粒展示融合蛋白的一个拷贝或不展示。相对于多价噬菌体而言，亲和力作用降低，因此分选基于固有配体亲和力，并且使用简化了DNA操作的噬菌粒载体。Lowman及狗11MethodsAcompamontoMethodsinEnzymology(方法酶学方法手册)，3:205-0216(1991)。“噬菌粒”是具有例如ColEl的细菌复制起点及噬菌体的基因区拷贝的质粒载体。噬菌粒可用于任何已知的噬菌体，包括丝状噬菌体和人字形噬菌体。质粒一般也将含有抗生素抗性的可筛选标志。克隆至这些载体中的DNA区段可以以质粒复制。当含有这些载体的细胞具有产生噬菌体颗粒所需的所有基因时，质粒的复制模式变为滚环复制(rollingcirclereplication)以产生质粒DNA的一条链的拷贝，且包装噬菌体颗粒。噬菌粒可形成感染性或非感染性噬菌体颗粒。该术语包括含有噬菌体衣壳蛋白基因或其片段的连接至异源多肽基因形成融合体，以使得所述异源多肽展示于噬菌体颗粒表面上的噬菌粒。术语“噬菌体载体”是指含有异源基因并且能够复制的噬菌体的双链复制形式。噬菌体载体具有允许噬菌体复制及噬菌体颗粒形成的噬菌体复制起点。噬菌体优选是丝状噬菌体，例如M13、fl、fd、Pf3噬菌体或其衍生物；或λ形噬菌体，例如λ、21、phi80、phi81、82、似4、4；34等或其衍生物。多肽，例如肽体、免疫黏附素、抗体和短肽，的共价修饰包括在本发明的范围内。共价修饰的一种类型包括使多肽的靶向氨基酸残基与有机衍生物反应，该有机衍生物能够与多肽的所选的侧链或N端或C端残基反应。以双功能剂衍生适用于，例如将多肽和用于纯化抗体的方法中的水不溶性持基质或表面交联，并且反之亦然。常用交联剂包括例如1，1_双(重氮乙酰基)-2-苯基乙烷、戊二醛、N-羟基-琥珀酰亚胺酯，例如与4-叠氮基水杨酸形成的酯)、同质双官能酰亚胺酯，包括二琥珀酰亚胺基酯，例如3，3'-二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)、双官能顺丁烯二酰亚胺，例如双-N-顺丁二烯二酰亚胺基-1，8-辛烷)及例如甲基-3-[(对叠氮基苯基)二硫基]丙酰亚胺酯的试剂。其他修饰包括谷氨酰胺酰基及天冬酰胺酰基残基分别脱酰胺化成相应谷氨酰基及天冬氨酰基残基；脯氨酸及赖氨酸的羟化；丝氨酰基或苏氨酰基残基的经基的磷酸化；赖氨酸、精氨酸及组氨酸侧链的α-氨基的甲基化[Τ.Ε.Creighton，ProteinsStructureandMolecularProperties(蛋白质结构和分子特件),W.H.Freeman&Co.，SanFrancisco，第79-86页(1983)]；N端氨的乙酰化；及任何C端羧基的酰胺化。其他修饰包括毒素与拮抗剂缀合，例如美坦生及美坦生类化合物、加利车霉素及其他细胞毒性剂。多肽的共价修饰的另一类型包含以美国专利第4，640，835号、第4，496，689号、第4，301，144号、第4，670，417号、第4，791，192号或第4，179，337号中所述的方式使多肽连接至多种非蛋白质聚合物，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚环氧烷之一。如果有利，也可以形成包含与另一异源多肽或氨基酸序列(例如免疫黏附素或肽体)融合的多肽的嵌合分子的方式来修饰本发明多肽。在一个实施方案中，该嵌合分子包含多肽与蛋白质转导结构域的融合体，其使用例如人类免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白质转导结构域靶向多肽以传递至多个组织，并且更特定的穿过脑血障壁(Schwarze等人，1999，Science(科学)285:1569-72)。在另一实施方案中，该嵌合分子包含多肽与标签多肽的融合体，标签多肽提供了抗标签抗体能够选择性结合的抗原表位。一般将抗原表位标签置于多肽的氨基端或羧基端。可使用针对标签多肽的抗体检测多肽的这些表位标签形式的存在。又，提供抗原表位标签使得多肽能够轻易地使用抗标签抗体或另一类型的结合至抗原表位标签的亲和力基质通过亲和纯化纯化。本领域中已知多种标签多肽及其相应抗体。实例包括聚-组氨酸(poly-His)或聚-组氨酸-甘氨酸(poly-His-gly)；fluHA标签多肽及其抗体12CA5[Field等人，Mol.Cell.Biol.(分子和细胞生物学)，8:2159-2165(1988)]；c-myc标签及其8F9、3C7、6E10、G4、B7及9E10抗体[Evan等人，MolecularandCellularBiology(分子和细胞生物学)，5:3610-3616(1985)]；及单纯性疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体[Paborsky等人，ftOteinEngineering(蛋白质工程)，3(6)=547-553(1990)]。其他标签多肽包括Flag-肽[Hopp等人，BioTechnology(生物技术)，6:1204-1210(1988)]；KT3抗原表位肽[Martin等人，Science(科学)，255192-194(1992)]；α-微管蛋白抗原表位肽[Skinner等人，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)J66:15163-15166(1991)]；及T7基因10蛋白肽标签[Lutz-Freyermuth等人，PNASUSA,87:6393-6397(1990)]。在一替代实施方案中，嵌合分子可包含多肽与免疫球蛋白或免疫球蛋白的特定区域的融合体。对于嵌合分子(例如“免疫黏附素”)的二价形式而言，该融合体可以是与IgG分子的Fc区的融合体。本发明的Ig融合体包括包含大约或仅人类残基94-243、残基33-53或残基33-52替代Ig分子内的至少一个可变区的多肽。在一特定实施方案中，免疫球蛋白融合体包括IgGl分子的铰链、CH2及CH3区，或铰链、CHI、CH2及CH3区。关于免疫球蛋白融合体的制备，也参见美国专利第5，428，130号。本发明提供抑制或预防复发性肿瘤生长或复发性癌细胞生长的方法及组合物。在各种实施方案中，癌症是复发性肿瘤生长或复发性癌细胞生长，其中癌细胞数目未显著减少或已增多，或肿瘤尺寸未显著减小或已增大，或癌细胞尺寸未能有任何进一步减小或癌细胞数目未能有任何进一步减少。可通过本领域中已知用于测定对癌细胞治疗的有效性的任何方法体内或体外确定癌细胞是否是复发性肿瘤生长或复发性癌细胞生长。对抗-VEGF治疗有抗性的肿瘤是复发性肿瘤生长的例子。本文中所揭示的多肽、抗体、拮抗剂或者组合物的“有效量”是足以实施特定的声称的目的的量。“有效量”可根据经验及通过关于所述目的的已知方法确定。术语“治疗有效量”是指本发明的抗体、多肽或拮抗剂可有效“治疗”哺乳动物(aka患者)的疾病或病症的量。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可减少癌细胞的数目减小肿瘤尺寸或重量；抑制(也即，在一定程度上减缓且优选终止)癌细胞浸润至周边器官中；抑制(也即，在一定程度上减缓且优选终止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一或多种症状。对于药物可防止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，药物可以是细胞生长抑制剂和/或细胞毒性剂。在一实施方案中，治疗有效量是生长抑制量。在另一实施方案中，治疗有效量是延长患者存活期的量。在另一实施例中，治疗有效量是改善患者的无进展存活的量。在创伤愈合的情况下，术语“有效量”或“治疗有效量”是指可以有效加速或改善受试者创伤愈合的药物量。治疗剂量是对患者表现治疗作用的剂量，并且低于治疗剂量(sub-therapeuticdose)是对所治疗患者不表现治疗作用的剂量。“慢性创伤”是指不愈合的创伤。参见例如Lazarus等人，Definitionsandguidelinesforassessmentofwoundsandevaluationofhealing(评估创伤禾口评价愈合的定义和指南)，Arch.Dermatol.130:489-93(1994)。慢性创伤包括，但不限于，例如动脉溃疡(arterialulcers)、糖尿病性溃疡(diabeticulcers)、压力性溃疡(pressureulcers)、静脉溃疡(venousulcers)等。急性创伤可发展成慢性创伤。急性创伤包括，但不限于，由例如热损伤、外伤、外科手术、大范围皮肤癌切除、深度真菌及细菌感染、血管炎(vasculitis)、硬皮病(scleroderma)、天疱疮(pemphigus)、中毒性表皮坏死溶解(toxicepidermalnecrolysis)等弓I起的仓1J伤。参见例如Buford，WoundHealingandPressureSores(创伤愈合和压力性疼痛)，Healingffell.com,出版于2001年10月M日。“普通创伤”是指经历普通创伤愈合修复的创伤。本发明多肽、抗体、拮抗剂或是组合物的“生长抑制量”是能够体外或体内抑制细胞，尤其肿瘤，例如癌细胞生长的量。可根据经验及通过已知方法或通过本文中所提供的实例来确定为抑制新生性细胞生长的本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物的“生长抑制量”。本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物的“细胞毒性量”是能够体外或体内引起细胞、尤其肿瘤例如癌细胞破坏的量。可根据经验及通过本领域中已知的方法来确定为抑制新生性细胞生长的本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物的“细胞毒性量”。本文中的“自身免疫病”是由受试者自身组织产生且针对受试者自身组织的疾病或病症，或其共分离(co-segregate)或表现形式或由其产生的病状。自身免疫病或病症的例子包括，但不限于关节炎(arthritis)(类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis)，例如急性关节炎(acutearthritis)、慢性类风湿性关节炎(chronicrheumatoidarthritis)、痛风性关节炎(goutyarthritis)、急性痛风性关节炎(acutegoutyarthritis)、慢性炎性关节炎(chronicinflammatoryarthritis)、退行性关节炎(degenerativearthritis)、感染性关节炎(infectiousarthritis)、莱姆关节炎(Lymearthritis)、增生性关节炎(proliferativearthritis)、银屑病性关节炎(psoriaticarthritis)、椎骨关节炎(vertebralarthritis)、及青少年发作型类风湿性关节炎(juvenile-onsetrheumatoidarthritis)、骨关节炎(osteoarthritis)、f曼t生渐t生关节炎(arthritischronicaprogrediente)、变形t生关节炎(arthritisdeformans)、|曼1生原发性多发性关节炎(polyarthritischronicaprimaria)、反应性关节炎(reactivearthritis)、及僵直性脊椎炎(ankylosingspondylitis)、炎性过增生性皮肤疾病(inflammatoryhyperproliferativeskindiseases)、银屑病(psoriasis)例如斑块银屑病(plaquepsoriasis)、滴状银屑病(gutattepsoriasis)、脓疱性银屑病(pustularpsoriasis)、及指甲银屑病(psoriasisofthenails)、皮炎(dermatitis)包括接触性皮炎(contactdermatitis)、慢性接触性皮炎(chroniccontactdermatitis)、变应性皮炎(allergicdermatitis)、变应性接触性皮炎(allergiccontactdermatitis)、疱疫样皮炎(dermatitisherpetiformis)及特应性皮炎(atopicdermatitis)、χ连锁高IgM综合征(x-linkedhyperIgMsyndrome)、荨麻疹(urticaria)例如慢性特发性荨麻疹(chronicidiopathicurticaria)，包f舌f曼t生自身；^iSt生尊)*(chronicautoimmuneurticaria)、多发性肌炎(polymyositis)/皮肌炎(dermatomyositis)、青少年皮肌炎(juveniledermatomyositis)、中毒性表皮坏死松角军症(toxicepidermalnecrolysis)>硬皮病(scleroderma)包括系统性硬皮病(systemicscleroderma)、硬化症(sclerosis)例如系统性硬化症(systemicsclerosis)、多发性硬化症(multiplesclerosis)(MS)例如脊髓-视觉(spino-opticaDMS、原发性进行性(primaryprogressive)MS及复发缓解型(relapsingremitting)MS、进行性系统性硬化症(progressivesystemicsclerosis)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、动脉硬化(arteriosclerosis)、播散性硬化症(sclerosisdisseminata)及共济失调性硬化症(ataxicsclerosis)、炎性肠病(inflammatoryboweldisease)(IBD)(例如局限性回肠炎(Crohn'sdisease)、结肠炎(colitis)例如溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis),溃疡性结肠炎(colitisulcerosa)、微观结肠炎(microscopiccolitis)、胶原性结肠炎(collagenouscolitis)、息肉状结肠炎(colitispolyposa)、坏死性小肠结肠炎(necrotizingenterocolitis)及透壁性结肠炎(transmuralcolitis)、及自身免疫性炎性肠病(autoimmuneinflammatoryboweldisease))、坏疽性胺皮病(pyodermagangrenosum)、结节性红斑(erythemanodosum)、原发性硬化性胆管炎(primarysclerosingcholangitis)、巩膜外层炎(印iscleritis)、呼吸窘迫综合征(respiratorydistresssyndrome)包括成人或急性呼吸窘迫综合征(adultoracuterespiratorydistresssyndrome)(ARDS)、脑膜炎(meningitis)、葡萄膜全部或部分发炎(inflammationofallorpartoftheuvea)、虹膜炎(iritis)、脉络膜炎(choroiditis)、自身免疫性血液病症(autoimmunehematologicaldisorder)、类风湿性脊椎炎(rheumatoidspondylitis)、突发性听力损失(suddenhearingloss)、IgE介导的疾病，例如过敏反应(anaphylaxis)及变应性和特异性鼻炎(allergicandatopicrhinitis)、脑炎(enc印halitis)，例如拉斯穆森氏脑炎(Rasmussen‘sencephalitis)及边缘叶禾口/或脑干脑炎(limbicand/orbrainstemencephalitis)、葡萄膜炎(uveitis)，例如前葡萄膜炎(anterioruveitis)、急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis)、肉芽月中性葡萄膜炎(granulomatousuveitis)、非肉芽月中性葡萄H炎(nongranulomatousuveitis)、晶##原t生葡萄月莫炎(phacoantigenicuveitis)、后葡萄膜炎(posterioruveitis)或自身免疫性葡萄膜炎(autoimmuneuveitis)、伴有及不伴有肾病综合征的肾小球肾炎(glomeru1onephritis(GN)withandwithoutnephroticsyndrome),例如慢性或急性肾小球肾炎(chronicoracuteglomerulon印hritis)，例如原发性(primary)GN、免疫介导的(immune-mediated)GN、膜性(membranous)GN(膜性肾病)(membranousnephropathy)、特发性膜性(idiopathicmembranous)GN、膜性增生性(membranousproliferative)GN(MPGN)(包括I型及11型)及快速进行性(rapidlyprogressive)GN)、过敏性病状(allergicconditions)、过敏反应(allergicreaction)、湿疹(eczema)，包括过敏性或异位性湿疹(allergicoratopiceczema)、哮喘(asthma)，例如支气管哮喘(asthmabronchiale,bronchialasthma)及自身免疫性哮喘(auto-immuneasthma)、涉及T细胞浸润及慢性发炎反应的病状、慢性肺部发炎疾病(chronicpulmonaryinflammatorydisease)、自身免疫性心肌炎(autoimmunemyocarditis)、白细胞黏附缺乏(leukocyteadhesiondeficiency)、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus(SLE)orsystemiclupuserythematodes)(SLE)，例如皮月夫(cutaneous)SLE>M急t生皮月夫红斑良^(subacutecutaneouslupuserythematosus)、新生儿狼疮综合征(neonatallupussyndrome)(NLE)、播散性红斑狼疮(lupuserythematosusdisseminatus)、狼疫(lupus)(包括肾炎性(nephritis)、大脑炎性(cerebritis)、儿童性(pediatric)、非肾脏性(non-renal)、圆盘状(discoid)、脱发性(alopecia))、青少年发作型(juvenileonset)(I型)糖尿病(diabetesmellitus)，包括儿童胰岛素依赖性糖尿病(pediatricinsulin-dependentdiabetesmellitus)(IDDM))、成人发作型糖尿病(adultonsetdiabetesmellitus)(II型糖尿病)、自身免疫性糖尿病(autoimmunediabetes)、特发性尿崩症(idiopathicdiabetesinsipidus)、与由细胞激素及T淋巴细胞介导的急性及迟发超敏性相关的免疫应答(immuneresponsesassociatedwithacuteanddelayedhypersensitivitymediatedbycytokinesandT-lymphocytes)、结核病(tuberculosis)、结节病(sarcoidosis)、肉芽月中病(granulomatosis)，包括淋巴瘤样肉芽月中病(lymphomatoidgranulomatosis)、韦格纳氏肉芽月中(Wegener，sgranulomatosis)、颗粒性白细胞缺乏症(agranulocytosis)、血管病(vasculitides)，包括血管炎(vasculitis)，包括大血管血管炎(largevesselvasculitis)^MMft^lil^^Siffllfi(polymyalgiarheumaticaandgiantcell)(,安(Takayasu's))动脉炎)、中等血管血管炎(mediumvesselvasculitis)(包括川崎病(Kawasaki‘sdisease)及结节性多动脉炎(polyarteritisnodosa)、微观多动脉炎(microscopicpolyarteritis)、CNS血管炎(vasculitis)、坏死性血管炎(necrotizing)、皮肤血管炎(cutaneous)或超敏性血管炎(hypersensitivityvasculitis)、系统性坏死性血管炎(systemicnecrotizingvasculitis)及ANCA相关血管炎(ANCA-associatedvasculitis),例如丘-施(Churg-Strauss)血管炎或综合征(Churg-Straussvasculitisorsyndrome)(CSS))、最页动脉炎(temporalarteritis)、再生障碍性贫血(aplasticanemia)、自身免疫性再生障碍性贫血(autoimmuneaplasticanemia)、Coombs阳性贫血(Coombspositiveanemia)、戴-布贫血(DiamondBlackfananemia)、溶血性贫血(hemolyticanemia)或免疫溶血性贫血(immunehemolyticanemia)(包括自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehemolyticanemia)(AIHA)、恶性贫血(perniciousanemia(anemiaperniciosa))、艾迪生病(Addison'sdisease)、单纯红细胞性贫血(pureredcellanemia)或发育不全(aplasia)(PRCA))、因子VIII缺乏(FactorVIIIdeficiency)、A型血友病(hemophiliaA)、自身免疫性嗜中性粒细胞减少症(autoimmuneneutropenia)、全血球减少症(pancytopenia)、白细胞减少症(leukopenia)、涉及白细胞渗出(leukocytediapedesis)的疾病、CNS炎性病症(inflammatorydisorders)、多器官损伤综合征(multipleorganinjurysyndrome)例如因败血病(s印ticemia)、外伤或出血(traumaorhemorrhage)继发的多器官损伤综合征、抗原-抗体复合物介导的疾病、抗肾小球基底膜疾病(anti-glomerularbasementmembranedisease)、抗磷脂抗体综合征(anti-phospholipidantibodysyndrome)、变应性神经炎(allergicneuritis)、白塞病(Bechet's/Behcet‘sdisease)、卡其jf尔曼综合征(Castleman'ssyndrome)、古德中白斯丘综合征(Goodpasture‘ssyndrome)>Reynaud's综合征(Reynaud'ssyndrome)、舍格伦综合征(Sjogren'ssyndrome)、斯-约二氏综合征Gtevens-Johnsonsyndrome)、类天疱疮(pemphigoid)，例如大疱性类天疱疮(pemphigoidbullous)及皮肤类天疱疫(skinpemphigoid)、天疱疫(pemphigus)(包括寻常型天疱疮(pemphigusvulgaris)、落叶型天疱疮(pemphigusfoliaceus)、黏膜类天疱疮(pemphigusmucus-membranepemphigoid)及红斑性天疱疫(pemphiguserythematosus))>自身免疫性多内分泌病(autoimmunepolyendocrinopathies)、莱特尔(Reiter's)疾病或综合征、免疫复合物肾炎(immunecomplexη印hritis)、抗体介导性肾炎(antibody-mediatedη印hritis)、慢性神经病(chronicneuropathy),例如IgM多发个生神经病(IgMpolyneuropathies)或IgM介导性神经病(IgM-mediatedneuropathy)、血小板减少症(thrombocytopenia)(例如由心肌梗塞(myocardialinfarction)患者发展而(1]^.]^.^^(thromboticthrombocytopenicpurpura)(TTP)RU身免疫或免疫介导性血小板减少症(autoimmuneorimmune-mediatedthrombocytopenia),例如特发性血小板减少性紫癒(diopathicthrombocytopenicpurpura)(ITP)(包括慢性或急性ITP))、睾丸及卵巢的自身免疫病，包括自身免疫性睾丸炎及卵巢炎(autoimuneorchitisandoophoritis)、原发性甲状腺功能低下(primaryhypothyroidism)、副甲状腺低能症(hypoparathyroidism)、自身免疫性内分泌疾病，包括甲状腺炎(thyroiditis)例如自身免疫性甲状腺炎(autoimmunethyroiditis)、桥本病(Hashimoto‘sdisease)、慢性甲状腺炎(chronicthyroiditis)(桥本甲状腺炎(Hashimoto'sthyroiditis))、或亚急性甲状腺炎(subacutethyroiditis)、自身免疫性甲状腺疾病(autoimmunethyroiddisease)、特发性甲状腺功能低下(idiopathichypothyroidism)、格雷夫斯病(Grave‘sdisease)、多腺体综合征(polyglandularsyndromes)例如自身免疫性多腺体综合征(或多腺体内分泌病综合征)、副肿瘤综合征(paraneoplasticsyndromes)，包括神经性副月中瘤综合征(neurologicparaneoplasticsyndromes)，例如兰伯特-伊顿肌无力综合征(Lambert-Eatonmyasthenicsyndrome)或伊顿-兰伯特综合征(Eaton-Lambertsyndrome))、僵人综合征(stiff-manorstiff-personsyndrome)、脑脊髓炎(encephalomyelitis)，例如变应性脑脊髓炎(allergicencephalomyelitisorencephalomyelitisallergica)及实验性变应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis)(EAE)、重症肌无力(myastheniagravis)、小脑变性(cerebellardegeneration)、神经性肌强直(neuromyotonia)、目艮阵挛-肌阵挛综合征(opsoclonusoropsoclonusmyoclonussyndrome)(OMS),及感觉神经病(sensoryneuropathy)、希恩综合征(Sheehan‘ssyndrome)、自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis)、慢性月干炎(chronichepatitis)、狼疫状月干炎(lupoidhepatitis)、巨细胞肝炎(giantcellh印atitis)、慢性活动性肝炎(chronicactivehepatitis)g^'!!]^^(autoimmunechronicactivehepatitis)巴间质肺炎(lymphoidinterstitialpneumonitis)、阻塞性细支气管炎(非移植)对NSIP(bronchiolitisobliterans(non-transplant)vsNSIP)、吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barr6syndrome)、贝格尔病(Berger'sdisease)(IgA肾病)、特发性IgA肾病(idiopathicIgAη印hropathy)、线性IgA皮肤病(linearIgAdermatosis)、原发性胆汁性月干硬化(primarybiliarycirrhosis)、肺硬变(pneumonocirrhosis)、自身免疫性肠病综合征(autoimmuneenteropathysyndrome)>Mf^(Celiacdisease)、月复月空双病(Coeliacdisease)(^!^!)(celiacsprue(glutenenteropathy))>Xf口炎性腹泻(refractorysprue)、特发性口炎性腹泻(idiopathicsprue)、冷球蛋白血症(cryoglobulinemia)、肌萎缩性侧索硬化(amylotrophiclateralsclerosis)(ALS；卢盖里格病(LouGehrig'sdisease))、冠状动脉疾病(coronaryarterydisease)>[=|身免疫性内耳疾病(autoimmuneinnereardisease)(AIED)、或自身免疫性听力损失(autoimmunehearingloss)、目艮阵擎肌阵擎综合征(opsoclonusmyoclonussyndrome)(OMS)、多软骨炎(polychondritis)，例如难治性或复发性多软骨炎、肺泡蛋白沉积症(pulmonaryalveolarproteinosis)、淀粉样变性(amyloidosis)、巩膜炎(scleritis)、非癌性淋巴细胞增多症(non-cancerouslymphocytosis)、原发性淋巴细胞增多症(primarylymphocytosis)，其包括单克隆B细胞淋巴细胞增多症(monoclonalBcelllymphocytosis)(例如良性单克隆丙种球蛋白病(benignmonoclonalgammopathy)禾口意义未明的单克隆丙禾中球蛋白病(monoclonalgarnmopathyofundeterminedsignificance)(MGUS))、夕卜周神经病(peripheralneuropathy)、副月中瘤综合征(paraneoplasticsyndrome)、离子通道病(channelopathies)，例如症痛症(epilepsy)、偏头痛(migraine)、心律不齐(arrhythmia)、肌肉病症(musculardisorders)、耳毫(deafness)、失明(blindness)、周期性麻痹(periodicparalysi)及CNS离子通道病(channelopathies)、自闭症(autism)、炎性肌病(inflammatorymyopathy)、局部区段性肾小球硬化(focalsegmentalglomerulosclerosis)(FSGS)、内分泌目艮病(endocrineophthalmopathy),葡萄膜视网膜炎(uveoretinitis)、脉络膜视网膜炎(chorioretinitis)、自身免疫性月干脏禾斗病症(autoimmunehepatologicaldisorder)、肌肉纤维疼痛(fibromyalgia)、多发性内分泌衰竭(multipleendocrinefailure)、施密特综合征(Schmidt'ssyndrome)、肾上腺炎(adrenalitis)、胃萎缩(gastricatrophy)、初老期痴呆(preseniledementia)、脱髓鞘病(demyelinatingdiseases)，例如自身免疫性脱髓鞘病(autoimmunedemyelinatingdiseases)、糖尿病性肾病(diabeticnephropathy)>^ξ^Π:(Dressier'ssyndrome)>3^(alopeciaareata)>CREST综合征(钙质沉着症(calcinosis)、雷诺现象(Raynaud'sphenomenon)、食道蠕动异常(esophagealdysmotility)、指端硬化(sclerodactyly)及毛细管扩张(telangiectasia))、胃个生个生g^^^^E(maleandfemaleautoimmuneinfertility)、混合结缔组织疾病(mixedconnectivetissuedisease)、恰力口斯病(Chagas'disease)>MM^i(rheumaticfever)、反复、流产(recurrentabortion)、ijk民肺(farmer‘slung)、多形性红斑(erythemamultiforme)、心切开术后综合征(post-cardiotomysyndrome)、库斤文综合征(Cushing‘ssyndrome)、鸟爱好者月市(bird-fancier'slung)、变应性肉芽月中性血管炎(allergicgranulomatousangiitis)、良性淋巴细胞血管炎(benignlymphocyticangiitis)、奥尔波特综合征(Alport‘ssyndrome)、肺泡炎(alveolitis)，例如过敏性肺泡炎(allergicalveolitis)及纤维化肺泡炎(fibrosingalveolitis)、间质肺病(interstitiallungdisease)、输血反应(transfusionreaction)、麻风病(leprosy)、痢疾(malaria)、禾丨J什曼体病(leishmaniasis)、维虫病(kypanosomiasis)、血吸虫病(schistosomiasis)、虫回虫病(ascariasis)、曲霉病(aspergillosis)、萨姆普特氏综合征(Sampter‘ssyndrome)、卡布兰综合征(Caplan'ssyndrome)、登革热(dengue)、心内膜炎(endocarditis)、心内膜心肌纤维化(endomyocardialfibrosis)、弥漫性间质性肺纤维化(diffuseinterstitialpulmonaryfibrosis)、间质性肺纤维化(interstitiallungfibrosis)、特发性肺纤维化(idiopathicpulmonaryfibrosis)>囊月中性纤维化(cysticfibrosis)>目艮内炎(endophthalmitis)、持久性隆起性红斑(erythemaelevatumetdiutinum)、胎儿红血球母细胞增多症(erythroblastosisfetalis)、嗜酸性筋膜炎(eosinophilicfaciitis)、舒尔曼综合征(Shulman'ssyndrome)、费尔蒂氏综合征(Felty‘ssyndrome)、丝虫病(flariasis)、睫状体炎(cyclitis)，例如慢性睫状体炎(chroniccyclitis)、异时性睫状体炎(heterochroniccyclitis)、虹膜睫状体炎(iridocyclitis)或富克斯睫状体炎(Fuch'scyclitis)、亨诺赫-舍恩莱茵紫癜(Henochlchonleinpurpura)、人类免疫缺乏病毒(HIV)感染、艾柯病毒感染(echovirusinfection)、心肌病(cardiomyopathy)、阿(Alzheimer'sdisease)(parvovirusinfection)染(rubellavirusinfection)、疫苗接种后综合征(post-vaccinationsyndromes)、先天个生风疫感染(congenitalrubellainfection)、埃巴病毒感染(Epstein—Barrvirusinfection)、流行性腮炎(mumps)、埃文斯综合征(Evan'ssyndrome)、自身免疫性性腺衰竭(autoimmunegonadalfailure)、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham'schorea)、链球菌感^JnW^t(post-streptococcalnephritis)、PlSifil^ifiliW^(thromboangitisubiterans)、甲状腺中毒症(thyrotoxicosis)、脊髓痨(tabesdorsalis)、脉络膜炎(chorioiditis)、巨细胞多肌痛(giantcellpolymyalgia)、内分泌目艮病(endocrineophthamopathy)、个曼性过敏性月市炎(chronichypersensitivitypneumonitis)、干燥性角IIπIIiit(keratoconjunctivitissicca)>M1^f^IIπIIiit(epidemickeratoconjunctivitis)、特发性肾脏综合征(idiopathicnephriticsyndrome)、微小肾病变(minimalchangenephropathy),良性家族性及局部缺血再灌注损伤(benignfamilialandischemia-reperfusioninjury)>!网月莫自身；fet生(retinalautoimmunity)、关节炎症(jointinflammation)、支气管炎(bronchitis)、慢性阻塞性气管疾病(chronicobstructiveairwaydisease)、娃肺(silicosis)、口疫(aphthae)、阿37弗他性口腔炎(aphthousstomatitis)、动脉硬化病症(arterioscleroticdisorders)、无精子产生症(aspermiogenese)、自身免疫性溶血(autoimmunehemolysis)、结节病(Boeck'sdisease)、7令球蛋白血症(cryoglobulinemia)、迪皮特朗擎缩(Dupuytren'scontracture)、晶&体过_个生目艮内炎(endophthalmiaphacoanaphylactica)、过_个生肠炎(enteritisallergica)、麻风结节性红斑(erythemanodosum1印rosum)、特发性面神经麻搏(idiopathicfacialparalysis)、个曼'性疲劳综合征(chronicfatiguesyndrome)、风湿热(febrisrheumatica)、哈-里综合征(Hamman-Rich'sdisease)、感觉神经性听力损(sensoneuralhearingloss)>(haemoglobinuriaparoxysmatica)腺低能症(hypogonadism)、区域性回肠炎(ileitisregionalis)、白细胞减少症(Ieucopenia)、传染性单核细胞增多症(mononucleosisinfectiosa)、横断性脊髓炎(traversemyelitis)、原发性特发性黍占液水月中(primaryidiopathicmyxedema)、肾病(nephrosis)、交感性目艮炎(ophthalmiasymphatica)、肉芽月中性辜丸炎(orchitisgranulomatosa)、姨腺炎(pancreatitis)、急性多神经根炎(polyradiculitisacuta)、坏疽性膜皮病(pyodermagangrenosum)、奎汉氏甲状腺炎(Quervain'sthyreoiditis)、后天性脾萎缩(acquiredspenicatrophy)、归因于抗精子抗体的不孕症(infertilityduetoantispermatozoanantobodies)>^!1/^(non-malignantthymoma)>[=|3(vitiligo)、SCID及埃巴病毒相关疾病(SCIDandEpstein-Barrvirus-associateddiseases)、获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunedeficiencysyndrome)(AIDS)、寄生虫疾病(parasiticdiseases)，例如利什曼原虫病(Lesihmania)、中毒性休克综合征(toxic-shocksyndrome)、食物中毒(foodpoisoning)、涉及T细胞浸润的病状(conditionsinvolvinginfiltrationofTcells)、白细胞黍占附缺乏(leukocyte-adhesiondeficiency)、与由细胞因子及T淋巴细胞介导的急性及迟发过敏性相关的免疫反应、涉及白细胞渗出(leukocytediapedesis)的疾病、多器官损伤综合征(multipleorganinjurysyndrome)、抗原-抗体复合物介导的疾病、抗肾小球基底膜疾病(antiglomerularbasementmembranedisease)、变应性神经炎(allergicneuritis)、自身免疫性多内分泌病(autoimmunepolyendocrinopathies)、卵巢炎(oophoritis)、原发性黏液水肿(primarymyxedema)、自身免疫性萎缩性胃炎(autoimmuneatrophicgastritis)、交感性目艮炎(sympatheticophthalmia)、风湿病(rheumaticdiseases)、混合结缔组织疾病(mixedconnectivetissuedisease)、肾病综合征(nephroticsyndrome)>胰岛炎(insulitis)、多发性内分泌衰竭(polyendocrinefailure)、外周神经病(peripheralneuropathy)、IM自身；fet生多1胃☆IE(autoimmunepolyglandularsyndrometypeI)、成人发作型特发性副甲状腺低能症(adult-onsetidiopathichypoparathyroidism)(AOIH)、全头秃(alopeciatotalis)、扩张型心肌病(dilatedcardiomyopathy)、后天性表皮分解性水疱症(epidermolisisbullosaacquisita)(EBA)、ifilfeS^SE(hemochromatosis)、月Jl^(myocarditis)、W^π*S(nephroticsyndrome)、原发性硬化性胆管炎(primarysclerosingcholangitis)、化脓性或非化脓性窦炎(purulentornonpurulentsinusitis)、急性或慢性窦炎(acuteorchronicsinusitis)、ff_、客)、上1或蝶_白勺_炎(ethmoid>frontal>maxilIary>orsphenoidsinusitis)、嗜酸性粒细胞相关病症(eosinophil-relateddisorder)，例如嗜酸性细胞增多症(eosinophilia)、肺浸润嗜酸细胞增多症(pulmonaryinfiltrationeosinophilia)、嗜酸细胞增多-肌痛综合征(eosinophilia-myalgiasyndrome)、吕弗勒综合征(Loffler'ssyndrome)、个曼性嗜酸细胞性月市炎(chroniceosinophilicpneumonia)、热带肺部嗜酸细胞增多症(tropicalpulmonaryeosinophilia)、支气管肺炎曲霉病(bronchopneumonicaspergillosis)、曲霄月中(aspergilloma)或含有嗜酸粒细胞的肉芽月中(granulomascontainingeosinophils)(anaphylaxis)^ifiiyHJx1^1WHi关节病(seronegativespondyloarthritides)、多发性内分泌自身免疫病(polyendocrineautoimmunedisease)、硬化性胆管炎(sclerosingcholangitis)、巩膜、巩膜外层、慢性粘膜皮肤念珠菌病(sclera,episclera,chronicmucocutaneouscandidiasis)、布鲁顿综合征(Bruton‘ssyndrome)、婴儿期暂时性低丙种球蛋白血症(transienthypogammaglobulinemiaofinfancy)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(Wiskott-Aldrichsyndrome)、共济失调毛细管扩张症(ataxiatelangiectasia)、与胶原病有关的自身免疫性病症、风湿(rheumatism)、神经性疾病(neurologicaldisease)、局部缺血性再灌注病症(ischemicre-perfusiondisorder)、血压降低反应(reductioninbloodpressureresponse)、血管功能障石导(vasculardysfunction)、血管扩张(antgiectasis)、组织损伤(tissueinjury)iW^iil(cardiovascularischemia)(hyperalgesia)、大脑缺血(cerebralischemia)、及伴随有血管形成的疾病(diseaseaccompanyingvascularization)、过敏f生病症(allergichypersensitivitydisorders)、i^l/J、球i^l炎(glomerulonephritides)、再灌注损伤(!^perfusioninjury)、心肌或其他组织的再灌注损伤(reperfusioninjuryofmyocardialorothertissues)、具有急性发炎成分的皮肤病(dermatoseswithacuteinflammatorycomponents)、急性化月农性脑膜炎(acutepurulentmeningitis)或其他中枢神经系统炎性病症(centralnervoussysteminflammatorydisorders)、f立细Ifif^ilt匿(granulocytetransfusion-associatedsyndromes)、细胞因子诱发的毒性(cytokine-inducedtoxicity)、急性重度炎症(acuteseriousinflammation)、慢性难治性炎症(chronicintractableinflammation)、肾孟炎(pyelitis)、肺硬变(pneumonocirrhosis)、糖尿病性视网膜病变(diabeticretinopathy)、糖尿病个生大云力脉病症(diabeticlarge-arterydisorder)、云力脉内±曾生(endarterialhyperplasia)、消化性溃疡(ρ印ticulcer)、瓣膜炎(valvulitis)及子宫内膜异位症(endometriosis)。术语“检测”意欲包括测定物质的存在与否或对物质的量进行定量。因此该术语是指使用本发明的材料、组合物及方法来进行定性和定量测定。一般来说，用于检测的特定技术对于本发明的实施并不关键。举例来说，根据本发明“检测”可包括观察α5基因产物、β1基因产物(例如mRNA分子)，或“α5”或“α5β1”多肽存在与否；“α5”或“α5β1”多肽水平或与靶标结合量的变化；α5或α5β1多肽生物功能/活性的变化。在一些实施方案中，“检测”可包括检测野生型α5或α5β1水平(例如mRNA或多肽水平)。检测可以包括定量任何值与对照相比较时至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%或更多的变化(例如增加或降低)。检测可包括定量任何值的至少约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更高，例如20倍、30倍、4-倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍或更高的变化。本文中所使用的“标记物”是指直接或间接结合至抗体的可检测化合物或组合物。标记物自身可通过其自身检测(例如放射性同位素标记物或荧光标记物)，或在酶促标记物的情况下，可以催化底物化合物或组合物的可检测的化学变化。III.抗_α5β1抗体本文中提供可结合人类α5β1且竞争性抑制抗α5β118C12抗体与人类α5β1的结合的抗体。因此，本发明的一个实施方案提供了包含SEQIDN0S:2、3、4、5、6、7或8中任一个可变轻链(VL)序列和SEQIDNOS:9、10、11、12、13或14中任一个可变重链(VH)序列的抗体。也涵盖本文中所述抗_α5β1抗体的人类或嵌合(包括例如人源化)形式抗体。根据一个实施方案，抗体以介于500ηΜ与IpM之间的Kd结合人类α5β1。在某些实施方案中，本文中所提供的抗体具有彡1μΜ、<IOOnM,^10ηΜ、<InM、<0.InM、彡0.OlnM或彡0.OOlnM(例如10—M或以下，例如10、至1(Γ13Μ，例如10、至I(T13M)的解离常数(Kd)。根据另一实施方案，抗体不结合ανβ3或ανβ5或ανβ。根据另一实施方案，抗体包含人类IgG，例如人类IgGl或人类IgG4的Fc序列。在另一实施方案中，Fc序列已经改变或变化以使得其缺乏抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应子功能，其通常与其与Fc受体(FcRs)的结合有关。存在许多可以改变效应子功能的Fc序列变化或突变的实例。举例来说，WO00/42072及Shields等人，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)9):6591-6604(2001)描述与FcR的结合提高或降低的抗体变体。那些公开的内容特定地以引用的方式并入本文中。抗体可以是Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段，以及双抗体和线性抗体形式。又，抗体可以结合至α5β1且是α5β1拮抗剂，但也结合一种或多种其他靶标并抑制其功能(例如VEGF)的多特异性抗体，或是结合至α5β1上的两个或两个以上不同位点的多特异性抗体。抗体可偶联治疗剂(例如细胞毒性剂、放射性同位素及化疗剂)或结合通过成像检测患者样品中或体内的α5β1的标记物(例如放射性同位素、荧光染料和酶)。也涵盖编码抗-α5β1抗体的核酸分子、包含编码一个或两个可变结构域的核酸分子的表达载体和包含所述核酸分子的细胞。这些抗体可用于本文中所述的疗法中并且用以检测患者样品中(例如使用FACS、免疫组织化学(IHC)、ELISA测定)或患者体内的α5β1蛋白。Α.单克隆抗体单克隆抗体可例如使用杂交瘤方法(例如Kohler及Milstein，Nature(自然)，256=495(1975)所述的方法)制备，或可通过重组DNA方法(美国专利第4，816，567号)制得，或可通过下文实例中的本文所述方法产生。在杂交瘤方法中，仓鼠、小鼠或其他适当宿主动物通常经免疫剂(例如单独或与适合载体组合的α5、β1或α5β1多肽)免疫以引出产生或能够产生将特异性结合至该免疫剂的抗体的淋巴细胞。或者，淋巴细胞可经体外免疫。免疫剂典型地包括相关蛋白质的多肽或融合蛋白或包含该蛋白质的组合物。一般而言，若需要人类来源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(“PBLs”)；或若需要非人类哺乳动物来源，则使用脾细胞或淋巴细胞。随后使用合适的融合剂，例如聚乙二醇，将淋巴细胞与永生细胞系融合以形成杂交瘤细胞。Goding，MONOCLONALANTIBODIESPRINCIPLESANDPRACTICE(单克隆抗体原理和实践)(NewYork=AcademicPress，1986)，第59-103页。永生细胞系通常是经转化的哺乳动物细胞，尤其是啮齿动物、牛及人类来源的骨髓瘤细胞。通常采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。可将杂交瘤细胞在合适的培养基中培养，其优选含有一种或多种抑制未融合的永生细胞生长或存活的物质。举例来说，若亲本细胞缺乏酶——次黄嘌呤鸟嘌呤焦磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤及胸苷(“HAT培养基”)，该物质阻止HGPRT缺陷细胞的生长。优选的永生细胞系是有效融合、支持通过所选择的抗体产生细胞稳定地高水平表达抗体，并且对例如HAT培养基的培养基敏感的细胞系。更优选的永生细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，其可获自例如SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California&_IS胃禾中1#中(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,Virginia)0用于产生人类单克隆抗体的人类骨髓瘤及小鼠-人类融合骨髓瘤细胞系也已经被描述。Kozber,J.Immunol.(免疫学杂志)，133:3001(1984)；Brodeur等人MONOCLONALANTIBODYPRODUCTIONTECHNIQUESANDAPPLICATIONS(单克隆抗体产生技术和应用)(MarcelDekker,Inc.:NewYork，1987)，第51-63页。随后可在培养杂交瘤细胞的培养基中测定针对多肽的单克隆抗体的存在。可通过免疫沉淀或通过体外结合测定，例如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)测定由杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体的结合特异性。本领域中这些技术和测定是已知的。可例如通过Munson及Pollard，Anal.Biochem.，107:220(1980)的katchard分析来测定单克隆抗体的结合亲和力。在鉴别出所需杂交瘤细胞之后，可通过有限稀释法使克隆形成亚克隆并通过标准方法使其生长。Goding，同上。适合于实现此目的的培养基包括例如杜贝卡氏改良依格尔培养基(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)和RPMI-1640培养基。或者，可使杂交瘤细胞在哺乳动物体内以腹水形式进行体内生长。由亚克隆分泌的单克隆抗体可通过例如蛋白A-琼脂糖、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等常规免疫球蛋白纯化程序自培养基或腹水中分离或纯化。也可通过例如美国专利第4，816，567号中描述的重组DNA方法制得单克隆抗体。可使用常规程序(例如通过使用能够与编码鼠类抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)轻易地分离并测序编码本发明单克隆抗体的DNA。本发明的杂交瘤细胞作为该DNA的优选来源。经分离后，可将DNA置于表达载体中，随后将表达载体转染至不另外产生免疫球蛋白的宿主细胞(例如猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)中，以在重组宿主细胞内获得单克隆抗体的合成。也可以例如通过以人类重链和轻链恒定结构域的编码序列替代同源鼠序列(美国专利第4，816，567号；Morrison等人，同上)，或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价结合至免疫球蛋白编码序列来修饰DNA。该非免疫球蛋白多肽可替代本发明抗体的恒定结构域，或可替代本发明抗体的一个抗原结合位点的可变结构域以产生嵌合二价抗体。抗体可以是单价抗体。本领域中已经知晓制备单价抗体的方法。举例来说，一种方法涉及免疫球蛋白轻链和经修饰重链的重组表达。一般重链在Fc区中的任一点截短以防止重链交联。或者，相关半胱氨酸残基经另一氨基酸残基置换或缺失以防止交联。体外方法也适于制备单价抗体。可使用但不限于，本领域中已知的技术来实现抗体的消化来制备其片段，尤其Fab片段。B.人类抗体在某些实施方案中，本文中所提供的抗体是人类抗体。可使用本领域中已知的各种技术来制备人类抗体。人类抗体一般描述于vanDijk和vandeWinkel,Curr.Opin.Pharmacol.(当前药学观点)5:368-74(2001)以及Lonberg，Curr.Opin.Immunol.(当前免疫学观点)20=450-459(2008)。可通过向已经经过修饰因而对于抗原攻击刺激产生完整人类抗体或具有人类可变区的完整抗体的转基因动物施用免疫原，来制备人类抗体。这些动物通常含有全部或一部分人类免疫球蛋白基因座，其替代了内源免疫球蛋白基因座，或存在于染色体外或随机整合于动物染色体内。在这些转基因小鼠中，内源免疫球蛋白基因座一般已经不活化。关于从转基因动物获得人类抗体的方法的综述，参见Lonberg，Nat.Biotech.(自然生物技术)23:1117-1125(2005)。也参见例如描述XEN0M0USE技术的美国专利第6，075，181号及第6，150，584号；描述HUMAB技术的美国专利第5，770，429号；描述K-MMOUSE技术的美国专利第7，041，870号；及描述VELOCIMOUSE技术的美国专利申请公开文本第US2007/0061900号。这些动物产生的完整抗体的人类可变区可进一步修饰，例如通过与不同人类恒定区组合。人类抗体也可通过基于杂交瘤的方法制得。用于产生人类单克隆抗体的人类骨髓瘤及小鼠-人类融合骨髓瘤细胞系已经描述。(参见例如KozborJ.Immunol.(免疫学^lU),1333001(1984)BrodeurφA,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications(单克隆抗体产生技术及应用)，第51-63页(MarcelDekker,Inc.，NewYork,1987)；和Boerner等人，J.Immunol.(免疫学杂志)，147:86(1991))通过人类B细胞杂交瘤技术产生的人类抗体也在Li等人，PNAS.USA,103=3557-3562(2006)中描述。其他方法包括例如美国专利第7，189，826号(描述由杂交瘤细胞系产生单克隆人类IgM抗体)及Ni，XiandaiMianyixue,26(4):265-268Q006)(描述人类-人类杂交瘤)中所述的那些方法。人类杂交瘤技术(Trioma技术)也于Vollmers和Brandlein，HistologyandHistopathology(组织学和组织病理学)，20(3):927-937(2005)；及Vollmers和Brandlein,MethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology(实验和临床药学方法和发现)，27(3)=185-91(2005)中描述。也可通过分离选自源自人类噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列产生人类抗体。随后可将这些可变结构域序列与所需人类恒定结构域组合。下文描述自抗体文库选择人类抗体的技术。C.源自文库的抗体。可通过在组合文库中筛选具有所需活性的抗体来分离本发明抗体。举例来说，本领域中已知多种用于产生噬菌体展示文库并且在这些文库中筛选具有所需结合特征的抗体的方法。这些方法于例如Hoogenboom等人，MethodsinMolecularBiology(分子生物学方法)178:1-37(0'Brien等人编，HumanPress,Totowa,NJ,2001)中评述，并且进一步于例如McCafferty等人，Nature(自然)348:552-554；Clackso等人，Nature(自然)352624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)222:581-597(1992)；Marks及Bradbury，MethodsinMolecularBiology(分子生物学方法)248:161-175(Lo编，HumanPress,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)338O)299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,PNASUSA101(34):12467-12472(2004)和Lee等人，J.Immunol.Methods(免疫学方法杂志)284(1-2):119-132(2004)中描述。在某些噬菌体展示方法中，VH及VL基因库(I^pertOire)是通过聚合酶链式反应(PCR)分别克隆并且随机重组于噬菌体文库中，随后可如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.(免疫学年度综述)，12:433-455(1994)中所述在其中筛选抗原结合噬菌体。噬菌体通常呈现单链Fv(SCFV)片段或Fab片段形式的抗体片段。来自免疫来源的文库无需构建杂交瘤即可提供免疫原的高亲和力抗体。或者，天然库可经克隆(例如自人类)以在无任何免疫的情况下提供针对多种非自体抗原以及自体抗原的抗体单一来源，如Griffiths等人，EMBOJ，12:725-734(1993)所述。最后，也可以通过从干细胞克隆未重排的V基因区段，并且使用含有随机序列的PCR引物来编码高变性CDR3区，并且实现体外重排来合成制得天然文库，如Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.(分子生物学杂志)，227:381-388(1992)所述。描述人类抗体噬菌体文库的专利公开物包括例如美国专利第5，750，373号，及美国专利公开第2005/0079574号、第2005/0119455号、第2005/0266000号、第2007/0117126号、第2007/0160598号、第2007/0237764号、第2007/0292936号和第2009/0002360号。从人类抗体文库分离的抗体或抗体片段被视为本文的人类抗体或人类抗体片段。D.嵌合及人源化抗体在某些实施方案中，本文中所提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体于例如美国专利第4，816，567号；及Morrison等人，PNASUSA,81:6851-6855(1984)中描述。在一个实例中，嵌合抗体包含非人类可变区(例如源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或例如猴的非人类灵长类动物的可变区)及人类恒定区。在另一实例中，嵌合抗体是种类或亚类已经自亲本抗体的种类或亚类发生变化的“种类转变”抗体。嵌合抗体包括其抗原结合片段。在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，非人类抗体经人源化以降低对人类的免疫原性，同时保持亲本非人类抗体的特异性及亲和力。一般而言，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVRs，例如CDRs(或其部分)源自非人类抗体，且FRs(或其部分)是源自人类抗体序列。人源化抗体视情况也将包含人类恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基经来自非人类抗体(例如HVR残基所源自的抗体)的相应残基置换，例如以恢复或提高抗体特异性或亲和力。人源化抗体及其制备方法于例如Almagro和Fransson，Front.Biosci.131619-1633(2008)中评述，且进一步于例如Riechmann等人，Nature(自然)332323-329(1988)；Queen等人，PNASUSA86:10029-10033(1989)美国专利第5，821，337号、第7，527，791号、第6，982，321号和第7，087，409号；Kashmiri等人，Methods(方法)36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)Padlan，Mol.Immunol.(分子免疫学)28489-498(1991)(描述“表面重整”)；Dall'Acqua等人，Methods36:43_6(K2005)(描述"FR重组(shuffling)")及Osboum等人，Methods(方法)36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer(英国癌症杂志)，83=252-260(2000)(描述FR重组(shuffling)的“导向选择”方法)中描述。可用于人源化的人类构架区包括，但不限于，使用“最佳拟合”法选择的构架区(参见例如Sims等人，J.Immunol.(免疫学杂志)151:2296(1993))；源自特定亚群的轻链或重链可变区的人类抗体共同序列的构架区(参见例如Carter等人，PNASUSA,894285(1992)及I^resta等人，J.Immunol.(免疫学杂志)，151:2623(1993))；人类成熟(体细胞突变)构架区或人类生殖系构架区(参见例如Almagro及Fransson，Front.Biosci.131619-1633(2008))；及源自筛选FR文库的构架区(参见例如Baca等人，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)272:10678-10684(1997)及Rosok等人，J.Biol.Chem.(生物化学杂志)27122611-22618(1996))。E.多特异性抗体在某些实施方案中，本文中所提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，一种结合特异性是针对α5β1而另一种是针对任何其他抗原(例如VEGF)。在某些实施方案中，双特异性抗体可结合至α5β1的两个不同抗原表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位于表达α5β1的细胞。双特异性抗体可制成全长抗体或抗体片段形式。制造多特异性抗体的技术包括，但不限于，具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein及Cuello，Nature(自然)305:537(1983)；WO93/08829；及Traunecker等人，EMBOJ.10:3655(1991)),及“凸起-入-孔洞(knob-in-hole)”工程改造(参见例如美国专利第5，731，168号)。也可通过以下方法制得多特异性抗体工程改造用于制备抗体Fc-异二聚体的静电导引作用(W02009/089004A1)；将两种或两种以上抗体或片段交联(参见例如美国专利第4，676，980号，及Brennan等人Science(科学)，22981(1985))；使用亮氨酸拉链来产生双特异性抗体(参见例如Kostelny等人，J.Immunol.(免疫学杂志)，148(5):1547-1553(1992))；使用“双抗体”技术来制得双特异性抗体片段(参见例如Hollinger等人，PNASUSA,906444-6448(1993))；及使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber等人，J.Immunol.(免疫学杂志)，1525368(1994))及如例如Tutt等人，J.Immunol.(免疫学杂志)14760(1991)中所述制备三特异性抗体。本文中也包括具有三个或三个以上功能性抗原结合位点的经工程改造抗体，包括“章鱼抗体(Octopusantibodies)”(参见例如US2006/0025576A1)。本文中的抗体或片段也包括包含结合至α5β1以及另一不同抗原的抗原结合位点的“双重作用FAb或“DAF”(例如参见US2008/0069820)。F.抗体变体在某些实施方案中，涵盖本文中所提供抗体的氨基酸序列变体。举例来说，可能需要其来提高抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。可通过在编码抗体的核苷酸序列中引入适当修饰或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。这些修饰包括例如抗体氨基酸序列内的残基缺失和/或插入其中和/或对其进行置换。可进行缺失、插入和置换的任何组合以获得最终构建体，其限制条件是最终构建体具有所需特征，例如抗原结合。1.置换、插入和缺失变体在某些实施方案中，提供具有一个或多个氨基酸置换的抗体变体。用于置换性诱变的相关位点包括HVRs和FRs的保守性置换列于表1中的“保守性置换”的标题下。更多实质性变化于表1中的“示例性置换”的标题下提供且如下文关于氨基酸侧链种类进一步描述。可将氨基酸置换引入相关抗体中并筛选具有所需活性，例如保持/提高的抗原结合、降低的免疫原性、或提高的ADCC或CDC的产物。表权利要求1.一种抗抗体，其含有包含CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3的VL结构域，和包含CDH-Hl、CDR_H2、CDR-Hl的VH结构域，所述CDR-Ll含有TL-S/T-S/P/T-Q/N-H-F/S-T/I-Y-K/T-I-G/D/S(SEQIDNO:15)；所述CDR-L2含有L/1-N/T-S-D/H/S-G/S-S/L/T-H/Y-N/K/Q/1-K/T-G/A-D/S/V(SEQIDNO16)；所述CDR-L3含有G/A-S/A/Y-S/Y-Y-S/A/Y-S/Y/T-GY-V/I(SEQIDNO17)；禾口所述CDH-Hl含有GFTFS-N/A-RW-I/V-Y(SEQIDNO:18)；所述CDR-H2含有GIKTKP-N/A/T-I/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19)；禾口所述CDR-Hl含有L/V-TG-M/K-R/K-YFDY(SEQIDNO20)。2.权利要求1所述的抗体，其中所述VL结构域包含⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3，其各自包含图3所示的序列，和所述VH结构域包含⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其各自包含图3所示的序列。3.权利要求1所述的抗-Ci5^1抗体，其中所述VL结构域包含SEQIDNOS:3_8中的任一个，和所述VH结构域包含SEQIDNOS:11-14中的任一个。4.权利要求1所述的抗体，其中所述VL结构域包含SEQIDNO:8，和所述VH结构域包含SEQIDNO:14。5.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。6.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其是与α5β1结合的抗体片段。7.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其是全长IgGl抗体。8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述抗体含有包含置换的Fc部分。9.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-8中任一项所述的抗体。10.一种宿主细胞，其包含权利要求9所述的核酸。11.一种产生抗_α5β1抗体的方法，其包括培养权利要求10所述的宿主细胞从而产生所述的抗体。12.一种免疫缀合物，其包含权利要求1-4中任一项所述的抗体和细胞毒性剂。13.一种药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。14.权利要求13所述的药物组合物，其还包含VEGF拮抗剂。15.权利要求14所述的药物组合物，其中所述的VEGF拮抗剂是抗-VEGF抗体。16.权利要求15所述的药物组合物，其中所述抗-VEGF抗体为贝伐珠单抗。17.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其还包含可检测标记。18.权利要求17所述的抗体，其中所述可检测标记是选自由放射性同位素、荧光染料和酶组成的组的成员。19.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其用作药物。20.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其用于治疗涉及异常血管发生和/或血管通透性或渗漏的疾病或病症。21.权利要求20所述的抗体，其中所述疾病是选自由癌症、眼病、自身免疫病组成的组的成员。22.权利要求1-4中任一项所述的抗体，其用于抑制血管发生。23.一种检测怀疑含有α5β1蛋白质的样品中α5β1蛋白质的方法，所述方法包括(a)使权利要求17-18中任一项所述的抗体与所述样品接触；和(b)检测抗-α5β1抗体与所述α5β1蛋白质之间的复合体的形成。24.权利要求23所述的方法，其中所述样品来自诊断患有涉及异常血管发生、异常血管通透性和/或血管渗漏的疾病的患者。25.一种治疗患有涉及异常血管发生和/或血管通透性或渗漏的疾病或病症的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的权利要求1-4中任一项的抗体。26.权利要求25所述的方法，其中所述疾病或病症是选自由癌症、眼病和自身免疫病组成的组的成员。27.权利要求沈所述的方法，其中所述癌症选自由结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、肾细胞癌和成胶质细胞瘤组成的组。28.权利要求25所述的方法，其中所述疾病或病症是选自由视网膜病变、年龄相关的黄斑变性、角膜新血管形成、角膜移植新血管形成、视网膜新血管形成和新血管性青光眼组成的组的成员。29.权利要求25所述的方法，还包括向所述个体施用有效量的VEGF拮抗剂。30.权利要求四所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂是抗-VEGF抗体。31.权利要求30所述的方法，其中所述抗-VEGF抗体是贝伐珠单抗。32.权利要求四所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂在抗-α5β1抗体之前施用。33.权利要求四所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂与抗-α5β1抗体同时施用。34.权利要求四所述的方法，其中受试者先用所述VEGF拮抗剂治疗直至所述受试者对VEGF拮抗剂治疗无反应，然后所述受试者用抗-α5β1抗体治疗。35.权利要求四所述的方法，还包括施用选自由抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒性剂组成的组的治疗剂。36.一种用于检测已经用VEGF拮抗剂治疗的受试者中的α5β1的试剂盒，所述试剂盒包含(a)权利要求1-4中任一项所述的抗-α5β1抗体；和(b)使用说明书。全文摘要本发明提供新型抗-α5β1抗体，包括所述抗体的组合物和试剂盒，以及制备和使用所述抗体的方法。文档编号C07K16/28GK102365297SQ201080013817公开日2012年2月29日申请日期2010年3月23日优先权日2009年3月25日发明者叶蔚蓝,吴岩,格雷戈里·D·普洛曼,梁伟庆申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司