专利名称：凝血酶直接抑制剂多肽水合盐及合成方法
技术领域：
本发明涉及药品领域，是凝血酶直接抑制剂的多肽水合盐及合成方法。
背景技术：
凝血酶直接抑制剂的多肽部分已有相关的报道(美国专利号为M33940)，但对其水合盐类并没有提及。在实际合成过程中，如果产物最后的精制过程是以水合盐的形式存在，由于多肽水合盐易溶于水，且比较稳定，尤其是盐酸、醋酸盐和三氟醋酸盐在临床应用过程中，没有毒副作用，是多肽产物最佳存在形式，因此对该化合物水合盐类的研究是必要的。相关类型化合物的合成方法国外有文献报道是利用叔丁氧羰基(t-Boc)氨基酸保护策略的固相合成方法(MaraganoreJM.，1989)，该方法的缺点是所使用的裂解剂是HF，由于它的强挥发性，对人体有强腐蚀性，对环境的破坏也很大，而且在化合物中引进了氟化物，在临床应用中需严格控制氟的含量，因此后处理很困难，加大了合成成本。
发明内容
本发明的一个目的是为解决上述现有技术中没有凝血酶直接抑制剂多肽水合盐、相关类型化合物合成方法处理困难、污染和毒性比较大的问题，提供一种可用于临床的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，以及一种简单、方便且对环境没有污染的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的合成方法。为实现上述目的，本发明的一个技术方案提供了一种凝血酶直接抑制剂多肽水合盐H-D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH，其多肽水合盐的通式为 C98H138N24C^3 · mX · ηΗ20。X为醋酸、盐酸或三氟醋酸。m的取值范围为1≤m≤4。η的取值范围为2≤η≤12。m的优选取值范围为2≤m≤3η的优选取值范围为4≤η≤8。本发明的另一个技术方案提供了一种凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的合成方法，该方法为Fmoc保护氨基酸的多肽固相合成方法；合成过程包括单个氨基酸偶联和多肽片段偶联。合成方法以单个氨基酸偶联或多肽片段的形式偶联1)根据Fmoc多肽固相合成方法合成多肽片段；2)将这些不同片段偶联；
3)重复上述4、5和6步骤，直至得到产品。合成方法为下述步骤1、C端第1个氨基酸Fmoc-Leu-Wang树脂的脱保护；2、〔端第2个氨基酸
权利要求
1.凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，其特征在于，通式为C98H138N24O33· mX · IiH2O ；X为醋酸、盐酸或三氟醋酸，m的取值范围为1≤m≤4，η的取值范围为2≤η≤12。
2.根据权利要求1所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，其特征在于，m的优选取值范围为2≤m≤3 ;n的优选取值范围为4≤η≤8。
3.根据权利要求1所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，其特征在于，原料选自D-苯丙氨酸(D-Phe)、脯氨酸(Pro)、精氨酸(Arg)、甘氨酸(Gly)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酸(Glu)、异亮氨酸(He)、酪氨酸(Tyr)和亮氨酸(Leu) 0
4.根据权利要求1所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，其特征在于，凝血酶直接抑制剂为 H-D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH的多肽水合盐。
5.根据权利要求1或4所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，其特征在于，氨基酸的氨基端为没有保护和芴甲氧羰基(Fmoc)保护；氨基酸的羧基端为没有保护、苄酯(OBzl)保护、甲酯(OMe)保护或乙酯(OEt)保护中的任意一种或多种。
6.根据权利要求1所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的制备方法，其特征在于，合成方法以单个氨基酸偶联或多肽片段的形式偶联，合成方法为下述步骤1)根据Fmoc多肽固相合成方法合成不同长度的多肽片段；2)将这些不同片段偶联；3)将多肽从树脂上裂解下来，纯化直至得到产品。
7.根据权利要求6所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的制备方法，其特征在于，合成方法为下述步骤1)C端第1个氨基酸对-烷氧基苯甲醇(Fmoc-Leu-Wang)树脂的脱保护； 2)C端第2个氨基酸
8.根据权利要求7所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的制备方法，其特征在于，脱氨基保护的试剂为1-50%的哌啶/溶剂(体积比)，优选体积比15-25%的哌啶/溶剂；溶剂为N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)；最终产物从树脂上裂解的裂解剂为95%三氟醋酸(TFA) 2.5% Y :2. 5% H2O0
9.根据权利要求8所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的制备方法，其特征在于，所述Y为三异丙基硅烷(TIS)、苯甲醚(Anisol)、苯甲硫醚；合成反应的活化剂为N，N’_ 二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N，- 二异丙基碳二酰亚胺(DIC)、苯并三氮唑-N，N，N，，N，-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、7-氮杂苯并唑-1-基-氧-(三-(二甲胺基)膦)六氟磷酸盐(B0P)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷酸盐(PyPOP)中任意一种或多种，或者，上述活化剂中的一种或一种以上的物质和HOBt同时使用。
10.根据权利要求7所述的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐的制备方法，其特征在于，合成方法为下述步骤1)C端第1个氨基酸对-烷氧基苯甲醇(Fmoc-Leu-Wang)树脂的脱保护(a)称取Fmoc-Leu-Wang树脂置于硅烷化的玻璃反应器中，每IOmg树脂加DMFl-IOml，优选3-7ml，使树脂完全浸入其中，溶胀25-60min ；(b)抽滤掉DMF，在树脂中加入I-IOml浓度为1_50%哌啶/溶剂，优选3_7ml浓度为15-25%哌啶/溶剂，轻微震荡下反应3-lOmin，抽滤掉反应液后，再加入I-IOml浓度为1-50%哌啶/溶剂，优选3-7ml浓度为15-25%哌啶/溶剂，轻微震荡下反应10-20min，抽去反应液；(c)用DMFx2、Me0Hx2、DMFx2洗涤树脂，取出0.Img树脂放入小玻璃试管中，加入茚三酮检测试剂各一滴，100-110°C下反应4-6min，溶液和树脂呈深兰色，说明脱除Fmoc完全；Fraoc-Tyr-OH2)C端第2个氨基酸
全文摘要
本发明涉及药品领域，是一种凝血酶直接抑制剂多肽水合盐及合成方法，解决了现有技术中没有凝血酶直接抑制剂多肽水合盐、相关类型化合物的合成方法以及后处理困难、对环境存在污染和对人体毒害比较大的问题，提供一种简单方便、有效的凝血酶直接抑制剂多肽水合盐，通式为C98H138N24O33·mX·nH2O，及其合成方法；合成方法以单个氨基酸偶联或多肽片段的形式偶联，详细内容见说明书；本发明方法操作过程简单，反应条件稳定，重复性好，可采用合成仪自动合成，整个反应过程均在一个反应器中进行，从而避免了由于中间体的转移而使产物损失，大大节省了人力物力；反应过程所使用的试剂对环境污染小，对操作人员的健康危害小。
文档编号C07K7/08GK102558305SQ201110419630
公开日2012年7月11日 申请日期2008年2月13日 优先权日2007年2月8日
发明者梅世昌, 范业梅 申请人:深圳信立泰药业股份有限公司