专利名称：柠檬苦素类似物及其分离纯化方法
技术领域：
本发明属于天然药物提取领域，具体涉及以橘核、柚核、橙核、枳实、陈皮、枳壳等芸香科柑橘属植物药材为原料，从中得到柠檬苦素类似物的分离纯化方法。
背景技术：
柠檬苦素类似物是ー类具有高度氧化的四环三萜类植物次生代谢物，广泛存在于芸香科和楝科植物中。柠檬苦素类似物中以柠檬苦素、诺米林的含量较高，具有抗癌、镇痛、、消炎、抗焦虑、防止动脉粥样化形成、增强抗氧化能力以及抗菌等作用。橘核为芸香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培变种的干燥成熟种子，柠檬苦素类似物为橘核的主要有效组分，主要存在于橘核的醇溶性提取部位。目前，关于橘核中柠檬苦素类似物纯化路线方面的研究较少。大孔树脂吸附纯化法具有エ艺简单、再生方便、成本低廉等优点，近年来，它已成为分离纯化柠檬苦素类似物常用有效的手段。但不同的树脂类型，吸附条件、解吸条件均对柠檬苦素类似物的分离纯化有重大影响，故发明人针对橘核中柠檬苦素类似物大孔树脂纯化工艺进行了详尽的研究，以期寻找到有效分离纯化柠檬苦素类似物的方法。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种全新的从橘核、柚核、橙核、枳实、陈皮、枳壳等芸香科柑橘属植物药材中分离纯化柠檬苦素类似物的方法。解决本发明技术问题是通过以下技术方案实现的提取纯化步骤为I)取芸香科柑橘属植物药材，粉碎后先用石油醚(沸点60°C 90°C)脱脂，弃去石油醚，再以40 50%こ醇为溶剂(优选在5(T60°C的温度条件下提取)提取，过滤得提取液；2)提取液采用大孔树脂柱层析法经上样、吸附、洗脱三个步骤进行纯化，收集洗脱液干燥即得纯化后样品。上述制备方法中步骤I)中石油醚脱脂条件为粉碎芸香科柑橘属植物药材(为便于粉碎，可先干燥)，加石油醚(沸点60°C 90°C )回流脱脂，水浴温度为50 60°C，脱脂时间为4 6h ;回流条件为40 50%こ醇为芸香科柑橘属植物药材重量的6 10倍，提取温度5(T60°C，提取时间I 2h。步骤2)中，所述大孔树脂型号为HPD-722型；上样提取液配制成浓度为3. 5mg/mL 5. 5mg/mL的样品溶液，样品溶液pH控制在6. O 7. O的范围内，以I. O 2. OBV/h的流速上样；吸附上样后静置吸附30min以上，用O. 5-1. 2BV(1. 0BV)的蒸馏水溶液清洗；洗脱清洗后用6. O 7. 0BV、pH值在7. O 8. O范围内的80 90%こ醇溶液以I. 5 2. OBV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，干燥即得大孔树脂纯化固形物(即柠檬苦素类似物)。在本发明的制备方法的优选实施方式中，各步骤中こ醇的浓度均采用酒精计测定。
本发明分离纯化方法简单易行，可得到柠檬苦素类似物纯度较高的固形物固形物中柠檬苦素类似物含量> 30%，柠檬苦素含量> 9%，诺米林含量> 10%的固形物；因原料不同，所得固形物柠檬苦素类似物含量可> 80%，柠檬苦素含量可> 20%，诺米林含量可>40%。
图1HPD-722大孔树脂泄露曲线图2清洗剂用量对柠檬苦素类似物回收率的影响图3上样浓度对动态吸附率及解吸率的影响
图4上样流速对动态吸附率及解吸率的影响图5pH值对动态吸附率及解吸率的影响图6洗脱剂浓度对动态解吸率的影响图7洗脱速率对动态解吸率的影响
图8洗脱剂pH值对动态解吸率的影响图9洗脱剂用量对动态解吸的影响
具体实施例方式以下通过对本发明具体实施方式
的描述说明但不限制本发明。本发明分离纯化工艺是经过对大孔树脂分离纯化工艺中的关键參数上样条件、清洗条件、洗脱条件进行考察，最終得到了本发明柠檬苦素类似物的最佳分离纯化方法，提高了固形物中柠檬苦素类似物及柠檬苦素、诺米林的含量。I.样品溶液的制备方法一称取一定量的橘核粉末,加石油醚(沸点60。。 90°C)于50 60°C水浴下回流脱脂4 6h,弃去石油醚后，按1:6 1:10的料液比加入40 50%的こ醇于50 60°C水浴下回流提取I 2h，抽滤，滤液浓缩，备用。方法ニ 称取一定量的陈皮粉末，按1:6 1:10的料液比加入40 50%的こ醇，超声提取I 2h，抽滤，滤液浓缩，备用。方法一主要针对芸香科柑橘属植物种子类如橘核、柚核等脂肪油含量较高的药材；方法ニ则主要针对芸香科柑橘属植物其他部位如陈皮、枳实等脂肪油含量较低的药材，可省去石油醚脱脂的环节。因此，本发明分离纯化方法中步骤I)若原料为芸香科柑橘属植物药材种子类，则粉碎原料后先用石油醚(沸点60°C 90°C)脱脂，弃去石油醚，再以40 50%こ醇为溶剂(优选在5(T60°C的温度条件下提取)提取，过滤得提取液。若原料为芸香科柑橘属植物药材果实或果皮类，则粉碎原料后以40 50%こ醇为溶剂(优选在5(T60°C的温度条件下提取)提取，过滤得提取液。芸香科柑橘属植物药材种子类主要有橘核、柚核、橙核等。芸香科柑橘属植物药材果实或果皮类主要有枳实、陈皮、枳壳等。2.不同大孔吸附树脂吸附性能的比较
将16种不同型号的树脂分别置于相同的容器中，加入高于树脂层IOcm的95%乙醇浸泡24h，放出浸液，用95%乙醇洗涤至洗涤液I份于5份水中不呈白色浑浊状时即可，水洗至无醇味，备用。精密称取16种树脂各2. 0g，各两份，置具塞锥形瓶中，分别加入20mL由“方法一”制备的样品溶液，置于120r/min的摇床中振摇24h,过滤,抽干，并用IOOmL蒸懼水清洗树月旨，合并滤液，稀释测其吸光度。清洗后的大孔吸附树脂置具塞锥形瓶中，分别加入80%乙醇溶液40mL，于120r/min的摇床中振荡解吸24h，取解吸液稀释测其吸光度。计算比吸附量、吸附率、比解吸量和解吸率，结果见表I。比吸附量(比解吸量)为平均每克大孔吸附树脂吸附(解吸)的柠檬苦素类似物的量。表116种大孔吸附树脂吸附性能比较表
权利要求
1.一种柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于提取纯化步骤为 1)以芸香科柑橘属植物药材为原料 当芸香科柑橘属植物药材为种子类时，粉碎原料后，先用沸点60°c 90°C的石油醚脱月旨，弃去石油醚，再用40 50%v/v乙醇回流提取，过滤得提取液；或 当芸香科柑橘属植物药材为果皮类或果实类时，粉碎原料后，用40 50%v/v乙醇回流提取，过滤得提取液； 2)提取液采用大孔树脂柱层析法经上样、吸附、洗脱三个步骤进行纯化，收集洗脱液干燥，即得柠檬苦素类似物。
2.根据权利要求I所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于所述步骤1)，沸点60°C 90°C的石油醚脱脂条件为水浴温度为50 60°C，保持其微沸，脱脂时间为4 6h0
3.根据权利要求I所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于所述步骤I)40 50%v/v乙醇回流提取条件为40 50%v/v乙醇为芸香科柑橘属植物药材粉末重量的6 10倍，提取温度为5(T60°C，提取时间I 2h。
4.根据权利要求I所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于步骤2)所述大孔树脂型号为HPD-722型。
5.根据权利要求I所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于步骤2)所述提取液上样前配置成浓度为3. 5mg/mL 5. 5mg/mL的样品溶液，pH控制在6. O 7. O的范围内，样品溶液以I. O 2. OBV/h的流速上样。
6.根据权利要求I所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于步骤2)所述吸附是指上样后静置吸附30min以上，用O. 5-1. 2BV的水溶液清洗。
7.根据权利要求6所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于步骤2)所述吸附用I. OBV的水溶液清洗。
8.根据权利要求I所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于步骤2)所述洗脱清洗后用6. O 7. 0BV、pH值在7. O 8. O范围内的80 90%v/v乙醇溶液以I. 5 2.OBV/h的流速进行洗脱。
9.根据权利要求1-8任一项所述的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，其特征在于当芸香科柑橘属植物药材为种子类时，所述芸香科柑橘属植物药材为橘核、橙核或柚核；当芸香科柑橘属植物药材为果皮类或果实类时，所述芸香科柑橘属植物药材为枳实、陈皮或枳壳。
10.权利要求1-9任一项所述的分离纯化方法制备而得的柠檬苦素类似物。
全文摘要
本发明属于天然药物提取领域，具体涉及柠檬苦素类似物及其分离纯化方法。本发明所解决的技术问题是提供一种全新的柠檬苦素类似物的分离纯化方法，。本发明分离纯化方法是以橘核、柚核、枳实、陈皮等芸香科柑橘属植物药材为原料，以40～50%乙醇为溶剂提取，提取物采用HPD-722型大孔树脂进行分离纯化，所得固形物中柠檬苦素类似物含量＞80%，柠檬苦素的含量＞20%，诺米林的含量＞40%。本方法提取效率高，操作简单，试剂消耗少，污染少。
文档编号C07J73/00GK102659914SQ20121015384
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月17日 优先权日2012年5月17日
发明者万德光, 何中燕, 周明眉, 莫书蓉, 裴瑾 申请人:成都中医药大学