专利名称：抗Benzonase单克隆抗体、其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域,具体涉及抗Benzonase单克隆抗体、其制备方法和应用。
背景技术：
Benzonase是源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)产生的核酸内切酶，能高效地降解所有形式的DNA和RNA (单链、双链、线性、环状)。结构上，该酶由两个相同的亚基通过两个二硫键连接而成，每个亚基有245个氨基酸,分子量 30kDa。Benzonase有效用于实验室重组蛋白表达纯化以及重组药物制备过程中核酸的消化、去除。目前，Benzonase的检测方法之一是利用Benzonase本身的水解活性进行间接进行,但如果Benzonase失去酶解能力就不能检测出Benzonase ;另外,可以通过ELISA方法检测Benzonase的含量,但是这种方法使用的抗体是多抗，特异性较差，不能精确定量。
发明内容
本申请的发明人通过研究发现，以Benzonase蛋白作为免疫原或将Benzonase的氨基酸肽段与载体蛋白的偶联物作为免疫原，能够获得灵敏、高效、特异的抗Benzonase单克隆抗体。本发明的第一个目的在于提供抗Benzonase单克隆抗体的制备方法。本发明的第二个目的在于提供根据所述方法制备得到的抗Benzonase单克隆抗体。本发明的第三个目的在于提供所述抗Benzonase单克隆抗体的应用。作为本发明的第一个方面，抗Benzonase单克隆抗体的制备方法，以Benzonase蛋白作为免疫原或将Benzonase的氨基酸肽段与载体蛋白的偶联物作为免疫原获得特异性的抗Benzonase单克隆抗体。进一步地，所述方法包括以下步骤A)将Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段与载体蛋白的偶联物作为免疫原免疫动物；B)将被免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞融合；C)筛选融合的杂交瘤细胞,获得特异性的抗Benzonase单克隆抗体。其中，所述Benzonase蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示,所述Benzonase的氨基酸肽段的氨基酸序列如 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQID NO :6、SEQ ID NO 7 中任一项所示。其中，所述载体蛋白选自1(1^、85八、(^八，优选为1(1^。其中，所述动物选自小鼠、大鼠、兔子，优选为小鼠。作为本发明的第二个方面，根据上述方法制备得到的抗Benzonase单克隆抗体。作为本发明的第三个方面,所述抗Benzonase单克隆抗体在检测Benzonase及其类似物中的应用。
本发明的单克隆抗体的有益效果1、以Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段作为免疫原,所制备的抗体特异地识别核酸内切酶Benzonase及其类似物，能够通过Western Blotting对Benzonase精确定量，并从分子量上作进一步地确认是否为Benzonase ；2、利用此抗体通过Western Blotting可检测出每毫升体系中低于Ing或Iunit的 Benzonase ；3、能够检测具有酶活或失活的Benzonase。因此，根据本发明的方法获得的抗Benzonase单克隆抗体特异性好、灵敏度高、适用范围广，可用于Benzonase及其类似物的检测，具有良好的应用前景。
图1为本发明筛选获得的14株单克隆抗体与Benzonase的Western Blotting反应。图2为本发明制备的单克隆抗体与Benzonase的Western Blotting反应,其中，泳道 1-8 对应的 Benzonase 浓度依次为 10ng/ml、5ng/ml、2. 5ng/ml、l. 25ng/ml、0. 625ng/ml、0. 3125ng/ml、0. 15625ng/ml、0. 078125ng/ml。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。实施例1、抗Benzonase单克隆抗体的制备1.1、免疫根据SEQ ID NO 1所示的Benzonase的氨基酸序列设计特异性的多肽，序列如表I所示。表1、设计的多肽序列
权利要求
1.抗Benzonase单克隆抗体的制备方法,其特征在于，以Benzonase蛋白作为免疫原或将Benzonase的氨基酸肽段与载体蛋白的偶联物作为免疫原获得特异性的抗Benzonase 单克隆抗体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤A)将Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段与载体蛋白的偶联物作为免疫原免疫动物；B)将被免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞融合；C)筛选融合的杂交瘤细胞，获得特异性的抗Benzonase单克隆抗体。
3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述Benzonase蛋白的氨基酸序列如 SEQ ID NO 1 所示。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述Benzonase的氨基酸肽段的氨基酸序列如 SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID NO 4, SEQID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO: 7中任一项所示。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述载体蛋白选自KLH、BSA、OVA。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述载体蛋白为KLH。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述动物选自小鼠、大鼠、兔子。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述动物为小鼠。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法制备得到的抗Benzonase单克隆抗体。
10.如权利要求9所述的抗Benzonase单克隆抗体在检测Benzonase及其类似物中的应用。
全文摘要
本发明公开了抗Benzonase单克隆抗体的制备方法，以Benzonase蛋白作为免疫原或将Benzonase的氨基酸肽段与载体蛋白的偶联物作为免疫原获得特异性的抗Benzonase单克隆抗体。本发明的方法获得的单克隆抗体特异性好、灵敏度高，可用于Benzonase及其类似物的检测。
文档编号C07K16/40GK103012591SQ20121053762
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者张涛, 尹娟 申请人:武汉吉爱生物技术有限公司