专利名称：一种五味子酚的分离纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种中药活性成分的分离纯化方法，具体涉及从五味子中提取一种木脂素即五味子酚的方法，属于中药分离纯化技术领域。
背景技术：
五味子酌·英文名schisanhenol, schizanhenol, CAS :69363-14-0,分子式为C23H3tlO6,分子量为402. 20，结构式如下
基
-1
五味子作为传统常用中药，有敛肺生津、补肾养心、收敛固涩之功效，主治肺虚喘咳、津亏口渴、自汗盗汗、梦遗滑精、久泻久痢、失眠健忘、心悸怔忡，是常用中药之一。近年发现它除了具保肝降酶作用外，还具有抗癌、抗艾滋病毒(HIV)、拮抗血小板活化因子(PAF)和抑制醛糖还原酶等多种活性。五味子含有多种木脂素类化合物，其中的五味子酚为主要的特征性成分。由于五味子酚对中枢神经系统有镇静、催眠、抗惊厥的作用，因而对于保护脑神经细胞，促进脑内蛋白质合成和改善智力、体力有一定功效。同时，对多种实验动物还有明显的呼吸兴奋作用，使呼吸加深、加快，并能对抗吗啡的呼吸抑制作用。五味子酚可以降低肝炎患者血清中的谷丙转氨酶，主要的降酶机制是促进肝细胞修复或抑制肝细胞病变，使细胞膜通透性降低，从而减少漏入血浆中的转氨酶，临床上用于治疗肝炎。五味子酚能促进肝糖原合成，力口强糖代谢，和增加肝细胞蛋白质的合成；同时有促进淋巴细胞DNA合成的作用，增加淋巴母细胞生成，促进脾免疫功能。因此，从原植物中分离得到该化合物，对质量控制指标、阐明其药理作用以及为新药开发寻找先导化合物具有重要的意义。中国专利CN200910242188. X公开了一种五味子单体成分的分离制备方法，将五味子乙醇提取物用石油醚萃取，将石油醚萃取物采用硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯洗脱，HPLC监测，收集洗脱流分粗提物A，粗提物B ;洗脱剂石油醚-乙酸乙酯体积比为
3-5 1 ;粗提物A和粗提物B分别应用高速逆流色谱进行分离，得到五味子酚、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙和五味子酯乙单体，纯度均高于98%。该方法制备复杂，步骤多，制备成本高，且不适用于大量制备或者工业化生产。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的缺陷，提供一种快速简便、成本低廉、可适用于大量制备或工业化生产的五味子酚的分离纯化方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。—种五味子酚的分离纯化方法，其特征在于以五味子为原料通过提取、萃取、结晶得到五味子酚单体，具体包括如下工艺步骤
A、提取
将五味子粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，回流提取
3-5次，每次1. 5-3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得50°C下相对密度为1.30-1. 40的浓浸膏；
所述乙醇溶液的加入量为五味子乙醇溶液=IKg: (8 12)L。 B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏按体积比加入10量的水进行分散，用正己烷萃取3-5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4-6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品；
C、结晶
按照黄绿色固体物甲醇=Ig: (10-1000) ml计算，将步骤B得到的五味子酚粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入2-5倍量体积的蒸馏水，在2-4°C中冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2 3次，直至纯度彡98%，于100°C干燥后即可得到五味子酚单体产品。步骤C所述甲醇可以用乙醇或丙酮替代。本发明的优点在于1、本发明通过步骤A的提前，确保了提取物中小极性杂质的有效去除。2、本发明通过步骤B的萃取，使五味子酚达到了很好的富集效果。3、本发明通过步骤C的结晶，进一步纯化了五味子酚，有效保证了五味子酚的纯度。4、本发明通过步骤A、B、C的顺序搭配，以及适当的参数组合，有效分离出了五味子酚单体；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，适合工业化生产，且分离效率高、产品纯度高达98%以上。
图1是本发明实施例1五味子酚单体产品的HPLC图谱。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明的范围仅限于下述实施例。下述各实施例中，终产品五味子酚单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)法，色谱条件如下
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈水V/V=60:40为流动相；柱温30°C;流速1.Oml/min ;检测波长为 254 nm。实施例1一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤
A、提取
将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1. 6L，回流提取3次，每次1. 5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得相对密度为1. 32的浓浸膏150ml ；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1. 5L水分散，用正己烷萃取3次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1. Sg ；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在4°C中冷藏结晶，重复结晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 2g,纯度 >98%。实施例2
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤
A、提取
将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1. 35 (50°C)，体积 120ml ；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1. 2L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品2.1g ；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用21ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在2 V中冷藏结晶，重复结晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 6g，纯度 >98%。实施例3
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤
A、提取
将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2. 4L，回流提取5次，每次3小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1. 30 (50°C)，体积 160ml。B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1. 6L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1. 5g ；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用1500ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入25ml蒸馏水，在，3°C中冷藏结晶，重复结晶3次，在100°C干燥得到五味子酚l.Og，纯度 >98%。实施例4一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤
A、提取
将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1. 8L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1. 33 (50°C)，体积 145ml。B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1. 45L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品I· 4g ； C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用140ml乙醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入15ml蒸馏水，在4°C冷藏结晶，重复结晶3次，在100°C干燥得到五味子酚1. 2g，纯度>98% ο实施例5
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤
A、提取
将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2. 2L，回流提取4次，每次2. 5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1. 35 (50°C)，体积120ml。B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1. 2L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1. 35g ；C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用200ml丙酮完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在3°C冷藏结晶，重复结晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 18g，纯度 >98%。
权利要求
1.一种五味子酚的分离纯化方法，其特征在于以五味子为原料通过提取、萃取、结晶得到五味子酚单体，具体包括如下工艺步骤 A、提取 将五味子粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，回流提取3-5次，每次1. 5-3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得50°C下相对密度为1.30-1. 40的浓浸膏； B、萃取 将步骤A所得的浓浸膏按体积比加入10量的水进行分散，用正己烷萃取3-5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4-6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品； C、结晶 按照黄绿色固体物甲醇=Ig: (10-1000) ml计算，将步骤B得到的五味子酚粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入2-5倍量体积的蒸馏水，在2-4°C中冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2 3次，直至纯度> 98%，于100°C干燥后即可得到五味子酚单体产品。
2.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于步骤A所述乙醇溶液的加入量为五味子乙醇溶液=IKg: (8 12)L。
3.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于步骤C所述甲醇可以用乙醇或丙酮替代。
4.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤 A、提取 将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1. 6L，回流提取3次，每次1. 5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得相对密度为1. 32的浓浸膏150ml ； B、萃取 将步骤A所得的浓浸膏加1. 5L水分散，用正己烷萃取3次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1. Sg ； C、结晶 将步骤B得到的黄绿色固体用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在4°C中冷藏结晶，重复结晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 2g,纯度 >98%。
5.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤 A、提取 将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1. 35，体积120ml ； B、萃取 将步骤A所得的浓浸膏加1. 2L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品2.1g ；C、结晶 将步骤B得到的黄绿色固体用21ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在2 V中冷藏结晶，重复结晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 6g，纯度 >98%。
6.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤 A、提取 将五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2. 4L，回流提取5次，每次3小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1. 30，体积160ml ； B、萃取 将步骤A所得的浓浸膏加1. 6L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1. 5g ； C、结晶 将步骤B得到的黄绿色固体用1500ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入25ml蒸馏水，在3°C中冷藏结晶，重复结晶3次，在100°C干燥得到五味子酚1. Og,纯度>98%。
全文摘要
本发明公开了一种五味子酚单体的分离纯化方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。本发明是以五味子为原料，通过乙醇回流提取、正己烷及乙酸乙酯萃取、溶解结晶得到五味子酚单体。本发明通过最适宜的工艺及参数条件，使产品中五味子酚的含量达到98%以上；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，适合工业化生产，且分离效率高、产品纯度高，即可大量实现五味子酚单体的高纯度分离制备。
文档编号C07C43/23GK103012084SQ20121057780
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月27日 优先权日2012年12月27日
发明者李启发, 夏柯, 文焕松, 郭建华, 刘丁 申请人:成都普思生物科技有限公司