专利名称：一种合成阿拉泊韦的方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽的化学合成方法，尤其涉及合成阿拉泊韦的方法。
背景技术：
目前，感染丙型肝炎(HCV)的人全世界约有1.7亿。最初的感染过程通常是缓和的，然而免疫系统常常无法清除病毒，持续感染的人群处于肝硬化和肝细胞癌的高风险中(参见Poynard等，Lancet349，(1997)，825-832)。尚没有有效的的疫苗预防HCV(参见Manns 等，India J.Gastroenterol.20 (Suppl.1), (2001)，C47-51; Tan 等，Nat.Rev.DrugDiscov.1, (2002), 867-881)。最近，通过临床观察资料描述了一种新的使用环孢菌素治疗HCV感染的方法(参见 Teraoka 等，Transplant Proc, 1988, 20 (3suppl.3), 868-876; Inoue 等，J.Gastroenterol，2003, 38，567-572)。研究显示环孢菌素A (CsA)以临床上能达到的药物浓度抑制HCV亚基因组复制子在体外细胞内的复制(参见Watashi等，Hepatology38, 2003, 1282-1288;Nakagawa 等，BBRC313, 2004，42-47)。Ko 等的专利申请 EP04840281 中报道了 NIM811 和其他9种环孢菌素A衍生物的非免疫抑制性，认为在HIV感染治疗和AIDS预防中可能有用。那些衍生物的设计包括环孢菌素A的4-和/5-位氨基酸上的修饰。
通过修饰环孢菌素A的2-和/或6-位氨基酸，Sigal等合成了总计61种的环孢菌素类似物，并观察到这样的化学修饰诱导了免疫抑制活性的减少(参见Sigal等，J.Exp.Med., 173, 1991, 619-628)。Barriere等描述了修饰环孢菌素A的3-位氨基酸的进一步尝试(参见 W098/28328、W098/28329 和 W098/28330)。Debio公司开发的DEB025 (阿拉泊韦，Alisporivir)就是这些修饰的环孢菌素类似物中，生物活性比较好的一个。DEB025除了其非免疫抑制性之外，其对亲环蛋白具有显著增加的亲和力，所增加的亲和力与提高的抑制HCV复制的功效相关(参见W02006038088)。Wenger 等在 W000/01715 中已报道了 DEB025 的结构，其 CAS 登记号为 254435-95-5。DEB025是一种下列分子式所描述的环状十一氨基酸多肽:-MeBmt- a Abu-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-I 2 3456789 10 11其中MeBmt 是 N-甲基-(4R)-4-丁 _2E_ 烯-1-基 _4_ 甲基-(L)苏氨酸，a Abu 是L- a -氨基丁酸，D-MeAla是N-甲基-D丙氨酸，EtVal是N-乙基-L-缬氨酸，Val是L-缬氨酸，MeLeu是N-甲基-L-亮氨酸，Ala是L-丙氨酸，(D)Ala是D-丙氨酸，以及MeVal是N-甲基-L-缬氨酸，也有称之为[D-MeAla] 3_[EtVal]4-CsA。现有技术W02006038088 公开了一种由 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-D-Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-Abu-OH制备DEB025的方法，其包括在惰性气氛下,将溶于50ml二氯甲烧的 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-D-Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-Abu-OH(
0.162mmol ；200mg)和均三甲基吡啶(1.78mmol ；0.24ml)的溶液逐滴添加到溶于3.2升二氯甲烷的(7-氮杂苯并三唑-1-基羟基)三吡咯烷鱗六氟代磷酸酯(0.486mmol ；254mg)溶液中。72小时后，通过添加10% Na2CO3溶液水解反应混合物。蒸发二氯甲烷，并用乙酸乙酯吸收残留物。有机相依次用0.1N HCl溶液和NaCl饱和溶液洗涤，在无水Na2SO4上干燥并浓缩。在硅胶上纯化粗制品，获得I IOmg (59%) DEB025。为解决现有技术制备方法存在收率低的难题，还需对阿拉泊韦的合成工艺进行进一步的研究。
发明内容
本发明提出了一种合成阿拉泊韦的方法，大幅提高该产品的收率，以达到产业化要求。为实现上述目的，综合考虑阿拉泊韦本身的性质，本发明提供的一种合成阿拉泊韦的方法包括:在惰性气体的保护下，将溶解于有机溶剂的三光气的溶液A，滴加到有机溶剂溶解H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-a Abu-OH> HOAt 和
DIC的溶液B中，滴加完毕后，反应16到48小时，加入碱性溶液C调节pH7到11，进一步纯化得到阿拉泊韦。所述溶液A的有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、1，4- 二氧六环、乙酸乙酯、甲苯、乙腈或其混合溶剂，溶液A中三光气的浓度优选为lg/3mL，即3mL溶剂中含有Ig三光气。所述溶液B的有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、1，4- 二氧六环、乙酸乙酯、甲苯、乙臆或其混合溶剂，溶液 B 中 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt- a Abu-OH 的浓度为 lg/500mL,该浓度是指溶质 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-a Abu-OH 的重量(g)与溶剂的体积(ml,)之比。
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所述溶液C为重量比浓度为8%到25%的碱性的水溶液,所述碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、氢氧化钠或氢氧化钾。所述H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala- (D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt- a Abu-0H、H0At 和 DIC 摩尔比为 1:2-10:2-10，优选 I:5:5。所述惰性气体是指氮气，氩气或氦气等。所述三光气是指二(三氯甲基)碳酸酯，英文名Triphosgene，CAS号32315-10-9。上述合成方法，可以较现有技术大幅提高阿拉泊韦的产品收率，收率达到80%以上，纯度在95%以上。为进一步提高合成方法的收率，在滴加三光气的溶液A前，往溶液B中加入一定量的催化剂，催化剂优选活性炭、三乙胺或吡啶等，催化剂的用量是三光气用量的0.05wt%。在加入上述催化剂后，产品的收率进一步提高，收率进一步提高5% —10%以上，更易于该产品的产业化。所述进一步纯化是指去除溶液中的有机溶剂，采用乙酸乙酯萃取三次，有机相合并后依次用0.1M盐酸、保护碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，并浓缩，过柱提纯，得到。所述过柱纯化是指硅胶柱色谱分离。本发明的发明要点在于使用三光气合环制备阿拉泊韦的方法，可以大幅提高了产品的收率和质量，反应条件温和，更易于该产品的产业化生产。
本发明使用化学缩写的对照情况如下表:
权利要求
1.一种合成阿拉泊韦的方法，包括在惰性气体的保护下，将溶解于有机溶剂的三光气的溶液 A，滴加到有机溶剂溶解 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala- (D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-a Abu-OH、HOAt和DIC的溶液B中，滴加完毕后，反应16到48小时，加入碱性溶液C调节pH7到11，进一步纯化得到阿拉泊韦。
2.根据权利要求1所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:所述溶液A的有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、1，4- 二氧六环、乙酸乙酯、甲苯、乙腈或其混合溶剂，溶液A中三光气的浓度为lg/3mL。
3.根据权利要求1所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:所述溶液B的有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、1，4- 二氧六环、乙酸乙酯、甲苯、乙腈或其混合溶剂，溶液B中 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-a Abu-OH 的浓度为 lg/500mL。
4.根据权利要求1所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:所述碱性溶液C为重量比浓度为8%到25%的碱的水溶液,所述碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、氢氧化钠或氢氧化钾。
5.根据权利要求1所述 的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:所述惰性气体是指氮气，氩气或氦气。
6.根据权利要求1至5任一权利要求所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:所述 H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-a Abu-OH、HOAt 和 DIC 摩尔比为 1:2-10:2-10。
7.根据权利要求6所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:所述H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-a Abu-OH、HOAt 和 DIC 摩尔比为I:5:50
8.根据权利要求1至5任一权利要求所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:在滴加三光气的溶液A前，往溶液B中加入一定量的催化剂，催化剂为活性炭、三乙胺或吡啶，催化剂的用量是三光气用量的0.05wt%o
9.根据权利要求6所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:在滴加三光气的溶液A前，往溶液B中加入一定量的催化剂，催化剂为活性炭、三乙胺或吡啶，催化剂的用量是三光气用量的0.05wt%。
10.根据权利要求7所述的一种合成阿拉泊韦的方法，其特征在于:在滴加三光气的溶液A前，往溶液B中加入一定量的催化剂，催化剂为活性炭、三乙胺或吡啶，催化剂的用量是三光气用量的0.05wt%。
全文摘要
本发明提供了一种合成阿拉泊韦的方法，包括以下步骤在惰性气体的保护下，将溶解有三光气的溶液滴加到有机溶剂溶解H-D-MeAla-EtVal-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-MeBmt-αAbu-OH、HOAt和DIC的溶液中，滴加完毕后，反应数小时，加入碱性溶液调节pH至碱性，进一步纯化得到阿拉泊韦。本发明提供了一种操作简单、高收率、纯度高、有利于实现产业化的合成阿拉泊韦的方法。
文档编号C07K7/64GK103145811SQ20131008411
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月15日 优先权日2013年3月15日
发明者李国弢, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司