Iap抑制剂的制作方法
【专利摘要】可用作治疗恶性肿瘤的治疗剂且具有通式(I)的新IAP抑制剂：其中R1、R2、R3、R4、R5和R6如本文所述。
【专利说明】IAP抑制剂
[0001] 本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，并且特别涉及可用 于治疗癌症的IAP蛋白抑制剂。
[0002] 细胞凋亡或程序性细胞死亡是在基因和生物化学方面受调节的机制，其在无脊椎 动物及脊椎动物的发育和体内平衡方面发挥重要作用。已将导致过早细胞死亡的细胞凋亡 异常与多种发育障碍关联起来。导致细胞死亡缺乏的细胞凋亡缺陷已与癌症和慢性病毒感 染关联起来（Thompson 等，（1995) Science 267, 1456-1462)。
[0003] 细胞凋亡的关键效应器分子之一是胱天蛋白酶（含半胱氨酸的天冬氨酸特异性 蛋白酶）。胱天蛋白酶是强蛋白酶，在天冬氨酸残基之后裂解，且一旦激活，从细胞内部消化 关键的细胞蛋白。因为胱天蛋白酶是此类强蛋白酶，对该家族的蛋白的紧密控制对于防止 过早细胞死亡是必要的。通常，胱天蛋白酶被合成为大部分失活的酶原，其需要蛋白水解处 理以变得有活性。这种蛋白水解处理仅是胱天蛋白酶被调节的方式之一。另一机制是通过 结合并抑制胱天蛋白酶的蛋白家族。
[0004] 抑制胱天蛋白酶的分子家族是细胞凋亡抑制因子（IAP) (Deveraux等，J Clin Immunol (1999)，19:388-398)。IAP最初在杆状病毒中由于其替代P35蛋白、即抗细胞凋亡 基因的功能性能力而被发现（Crook等，（1993)J Virology 67,2168-2174)。已描述IAP 在果蝇至人类范围内的生物体中。不管其来源如何，在结构上，IAP包含一至三个杆状病 毒IAP重复（BIR)域，并且它们中的大部分还具有羧基端RING指基序。BIR域自身为约 70个残基的锌结合域，包括4个α -螺旋和3个β链，具有配位锌离子的半胱氨酸和组氨 酸残基（Hinds等，（1999)Nat. Struct. Biol. 6, 648-651)。BIR域被认为通过抑制胱天蛋 白酶并由此抑制细胞凋亡而导致抗细胞凋亡作用。例如，人X-染色体连接的IAP(XIAP) 抑制胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶7和Apaf-1-细胞色素 C介导的胱天蛋白酶9的激活 (Deveraux 等，（1998)EMB0 17, 2215-2223)。胱天蛋白酶 3 和 7 被 XIAP 的 BIR2 域抑 制，而XIAP的BIR3域负责抑制胱天蛋白酶9的活性。XIAP在大部分成人和胎儿组织中普 遍表达（Liston 等，Nature, 1996, 379 (6563) : 349)，并且在 NCI 60 细胞系组（cell line panel)的许多肿瘤细胞系中过表达（Fong 等，Genomics, 2000, 70:113 ;Tamm 等，(31;[11· Cancer Res. 2000, 6 (5): 1796)。已证明XIAP在肿瘤细胞中的过表达给予对多种促细胞 凋亡刺激的保护并促进对化学治疗的抗性（LaCasse等，Oncogene, 1998, 17(25) :3247)。 与此相符的是，对于患有急性髓性白血病的患者，已证明了 XIAP蛋白水平与存活之 间的强相关性（Tamm等，同上）。已表明由反义寡核苷酸下调XIAP表达使肿瘤细 胞在体外和体内对由广泛的促细胞凋亡试剂诱导的死亡敏感（Sasaki等，Cancer Res. ,2000,60(20):5659 ;Lin 等，Biochem J·，2001，353:299 ;Hu 等，Clin. Cancer Res. ,2003,9(7) :2826)。还已证明Smac/DIABLO衍生的肽使多种不同的肿瘤细胞系对由 多种促细胞凋亡药物诱导的细胞凋亡敏感（Arnt等，J. Biol. Chem.，2002, 277 (46) :44236 ; Fulda 等，Nature Med.，2002, 8 (8) : 808 ;Guo 等，Blood, 2002, 99 (9) : 3419 ;Vucic 等，工 Biol. Chem.，2002, 277 (14) : 12275 ;Yang 等，Cancer Res.，2003, 63 (4) : 831)。
[0005] 黑素瘤IAP(ML-IAP)是在大部分正常成人组织中检测不到但在黑素瘤中强烈上 调的 IAP(Vucic 等人，（2000)Current Bio 10:1359-1366)。蛋白结构的确定表明 ML-IAP BIR和RING指域与在人XIAP、C-IAP1和C-IAP2中存在的相应域的显著同源性。ML-IAP的 BIR域可能具有与XIAPX-IAP1和C-IAP2的BIR2和BIR3的大部分相似性，并且可能负责 抑制细胞凋亡，如删除分析所测定的。此外，Vucic等证明了 ML-IAP可抑制化学治疗剂诱导 的细胞凋亡。在过表达ML-IAP的黑素瘤的细胞培养系统中测试了诸如阿霉素和4-叔丁基 苯酚（4-TBP)的药剂，当与正常黑素细胞对照相比时，化学治疗剂在杀灭细胞方面的效力 明显更低。ML-IAP产生抗细胞凋亡活性的机制是部分通过抑制胱天蛋白酶3和9。ML-IAP 不有效抑制胱天蛋白酶1、2、6或8。
[0006] 因为细胞凋亡是具有多种相互作用的因子的严格受控途径，所以IAP自身调节的 发现是不寻常的。在果妮中，Reaper(rpr)、Head Involution Defective(hid)和 GRIM 蛋 白与果蝇家族的IAP物理地相互作用并抑制其的抗细胞凋亡活性。在哺乳动物中，蛋白 SMAC/DIABL0起到阻断IAP的作用并使细胞凋亡进行。已表明，在正常细胞凋亡期间，SMAC 被加工成活性形式，并且其从线粒体释放入细胞质，在那里其与IAP物理地结合并抑制IAP 与胱天蛋白酶结合。这种IAP抑制使胱天蛋白酶保持活性，由此进行细胞凋亡。有趣的是， IAP抑制剂之间的序列同源性表明，在经加工的活性蛋白的N-端中存在四种氨基酸基序。 这种四肽可以结合到BIR域的疏水性口袋中，并且扰乱BIR域与胱天蛋白酶的结合（Chai 等，（2000)Nature 406:855-862, Liu 等，（2000)Nature 408:1004-1008, Wu 等，（2000) Nature 4081008-1012)。
[0007] 发明概述
[0008] 在本发明的一方面，提供新的IAP蛋白抑制剂或其药学可接受的盐，所述化合物 具有通式（I)
[0009]
【权利要求】
1. 式I的化合物或其药学可接受的盐，
其中 Ph是苯基； R1是C3_7环烧基； R2、R3、R4、R5和R6在每次出现时各自独立地为Η或(^_ 6烷基。
2. 如权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，所述化合物为（S)-l-[(S)-2-环 己基-2-((S)-2-甲基氨基丙酰基氨基）乙酰基]吡咯烷-2-羧酸（2-噁唑-2-基-4-苯 基噻唑-5-基）酰胺（la)。
3. 如权利要求1所述的化合物，其中R2 - R6各自独立地为Η或甲基。
4. 如权利要求1所述的化合物，其中R1为环己基。
5. 如权利要求3所述的化合物，其中R1为环己基。
6. 如权利要求3所述的化合物，其中R2和R3之一为Η且另一个为甲基；或R4为甲基； 或R 5和R6各自为Η。
7. 用于抑制ΙΑΡ蛋白与胱天蛋白酶蛋白结合的方法，其包括使所述ΙΑΡ蛋白与权利要 求1所述的化合物接触。
8. 用于治疗哺乳动物中与ΙΑΡ过表达相关的疾病或病症的方法，其包括向所述哺乳动 物给药有效量的权利要求1所述的化合物。
9. 在细胞中诱导细胞凋亡的方法，其包括向所述细胞引入权利要求1所述的化合物。
10. 使细胞对细胞凋亡信号敏感的方法，其包括向所述细胞引入权利要求1所述的化 合物。
11. 如权利要求10所述的方法，其中通过使所述细胞与选自以下的化合物接触而诱导 所述细胞凋亡信号：阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟-2'-脱氧尿苷、吉西他滨、甲氨喋呤、博来霉 素、顺钼、环磷酰胺、阿霉素（多柔比星）、米托蒽醌、喜树碱、拓扑替康、秋水仙酰胺、秋水仙 碱、紫杉醇、长春碱、长春新碱、他莫昔芬、非那雄胺、多西他赛以及丝裂霉素 C。
12. 如权利要求10所述的方法，其中通过使所述细胞与Ap〇2L/TRAIL接触而诱导所述 细胞凋亡信号。
13. 用于治疗癌症的方法，其包括向哺乳动物给药有效量的权利要求1所述的化合物。
14. 用于抑制IAP蛋白与胱天蛋白酶蛋白结合的方法，其包括使所述IAP蛋白与权利要 求2所述的化合物接触。
15. 用于治疗哺乳动物中与IAP过表达相关的疾病或病症的方法，其包括向所述哺乳 动物给药有效量的权利要求2所述的化合物。
16. 在细胞中诱导细胞凋亡的方法，其包括向所述细胞引入权利要求2所述的化合物。
17. 使细胞对细胞凋亡信号敏感的方法，其包括向所述细胞引入权利要求2所述的化 合物。
18. 如权利要求17所述的方法，其中通过使所述细胞与选自以下的化合物接触而诱导 所述细胞凋亡信号：阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟-2'-脱氧尿苷、吉西他滨、甲氨喋呤、博来霉 素、顺钼、环磷酰胺、阿霉素（多柔比星）、米托蒽醌、喜树碱、拓扑替康、秋水仙酰胺、秋水仙 碱、紫杉醇、长春碱、长春新碱、他莫昔芬、非那雄胺、多西他赛以及丝裂霉素 C。
19. 如权利要求17所述的方法，其中通过使所述细胞与Ap〇2L/TRAIL接触而诱导所述 细胞凋亡信号。
20. 用于治疗癌症的方法，其包括向哺乳动物给药有效量的权利要求2所述的化合物。
21. 药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物和至少一种药学可接受的载体、稀释 剂或赋形剂。
22. 药物组合物，其包含权利要求2所述的化合物和至少一种药学可接受的载体、稀释 剂或赋形剂。
【文档编号】C07D417/14GK104159897SQ201380012308
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2013年1月3日 优先权日:2012年1月3日
【发明者】F·科昂, L·J·加扎德, V·H-W·徐, J·A·弗吕加勒 申请人:库里斯公司, 遗传技术研究公司