一种L‑鸟氨酸的分离纯化方法与流程

文档序号:12007610阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种L-鸟氨酸的分离纯化方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)离子交换:将L-鸟氨酸转化液经氨型732树脂吸附后用水反洗树脂至流出液清澈,用1.0N氨水洗脱,洗脱液再过流D335-OH型树脂除去阴离子杂质得到L-鸟氨酸纯化液;(2)纳滤:采用800分子量纳滤膜过滤L-鸟氨酸纯化液得到L-鸟氨酸纳滤清液,用3倍浓缩液体积的去离子水分3次清洗浓缩液后,弃去浓缩液,收集含L-鸟氨酸产品的纳滤透析液;(3)调pH、脱色:用盐酸调节鸟氨酸纳滤清液的pH至4.5,用活性炭进行脱色,活性炭的用量为鸟氨酸纳滤清液的0.5%(质量分数),脱色温度为50℃,脱色时间为30min,用0.22μm滤膜过滤得脱色液;(4)反渗透浓缩:将L-鸟氨酸脱色液经反渗透膜浓缩至原体积一半得到L-鸟氨酸脱氨后的预浓缩液;(5)浓缩结晶:将预浓缩液在真空度≥0.095,蒸发温度50℃条件下浓缩至浓缩度含量≥80%的浓缩液,将浓缩液放至5℃冰箱保温2h得到L-鸟氨酸结晶;离子交换步骤中L-鸟氨酸转化液的方法,包括以下步骤:①底物的获得:将精氨酸陶瓷膜过滤液经711氨型树脂吸附,用2.0N氨水洗脱,得到精氨酸阳柱纯化液;②转化培养:向精氨酸纯化液中加入精氨酸酶发酵培养液进行转化,精氨酸的浓度为50g/L,精氨酸酶用量为4mL/L,温度为30℃,pH为9.5,反应时间为20h,即得;转化培养步骤中所述精氨酸酶的制备方法如下:a、斜面培养:将菌株MQO-154在无菌条件下接种到斜面培养基上进行培养,培养温度为35℃,培养时间为24h;b、种子扩大培养:从步骤(1)的斜面培养基上挑取菌落,加水稀释获得菌体溶液,稀释后的浓度为3×105-5×105个/mL,将菌体溶液接种到种子培养基上进行扩大培养,接种量为10%(v/v),接种时菌体溶液的浓度为3×105-5×105个/mL,扩大培养的温度为30℃,培养时间为24h;0-10h,摇床转速100r/min,10-20h,摇床转速120r/min,20-24h,摇床转速100r/min;c、发酵培养:将扩大培养后的菌体接种到发酵液体培养基中,接种量为10%(v/v),于30℃,170r/min的摇床上发酵24h,得到含精氨酸激酶的发酵培养液;d、30L发酵罐培养:将步骤(3)中发酵培养后的发酵液接种到30L发酵罐的培养基中,接种量为10%(v/v),接种时菌体溶液的浓度为3×105-5×105个/mL,控制罐压强为0.05MPa,在35℃条件下培养28h,搅拌转速为600-800rpm,风量为1:0.8,控制溶氧量为30-40%,全程用无菌饱和氨水控制pH为6.7-7.0,中途补糖控制残糖为1%,放罐残糖为0%,发酵后得精氨酸脱亚胺酶;所述斜面培养基的组成为:葡萄糖25g,鱼蛋白胨15g,KH2PO40.6g,MgSO4·7H2O0.5g,K2HPO41.5g,琼脂16g,加纯净水至1L,用NaOH调pH至为7.0,灭菌温度115℃,15min;斜面培养基用NaOH调pH至为7.0,灭菌温度115℃,15min;所述种子培养基的组成为:葡萄糖25g,乙酸铵9g,KH2P040.59g,K2HPO41.5g,MgSO4·7H200.5g,FeSO40.05g,MnSO40.05g,VB1HCl0.005g,琼脂16g,加纯净水至1L,用NaOH调pH至7.0,灭菌温度115℃,15min;种子培养基用NaOH调pH至7.0,灭菌温度115℃,15min;所述发酵培养基的组成为:葡萄糖25g,鱼蛋白胨15g,玉米浆10g,酵母膏1g,KH2PO40.5g,MgSO4·7H2O0.5g,FeSO40.05g,MnSO40.05g,VB1HCl0.005g,用自来水配成1L溶液,用NaOH调pH至7.0,灭菌温度121℃,灭菌时间20min;发酵培养基用NaOH调pH至7.0,灭菌温度121℃,灭菌时间20min;所述菌株MQO-154的保藏编号为:CGMCCNo.10728;保藏单位为:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;保藏日期为:2015年4月21日;保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
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