生物可降解双亲性聚合物、由其制备的聚合物囊泡及在制备肺癌靶向治疗药物中的应用的制作方法

本发明涉及一种生物可降解聚合物材料及其应用，具体涉及一种侧链含双硫五元环功能基团的生物可降解双亲性聚合物及聚合物囊泡以及在肺癌靶向治疗中的应用，属于医药材料领域。
背景技术：
：生物可降解聚合物具有非常独特的性能而被广泛应用于生物医学的各个领域，如手术缝合线、骨固定器械、生物组织工程支架材料、和药物控制释放载体等。合成的生物可降解聚合物主要有脂肪族聚酯（聚乙交酯PGA、聚丙交酯PLA、丙交酯-乙交酯共聚物PLGA、聚己内酯PCL）、聚碳酸酯（聚三亚甲基环碳酸酯PTMC）等是最常用的生物可降解聚合物，已获得美国食品药物管理部门（FDA）的许可。但是，现有的生物可降解聚合物如PTMC、PCL、PLA和PLGA等结构比较单一，缺乏可修饰官能团，往往难以提供循环稳定的药物载体或是稳定的表面修饰涂层。聚碳酸酯的降解产物主要是二氧化碳和中性的二元醇，不产生酸性降解产物。其中功能性环状碳酸酯单体可和环酯类单体如GA、LA和ε-CL等，以及其它环状碳酸酯单体共聚，得到不同性能的生物可降解聚合物。另外，由现有技术制备的生物可降解聚合物得到的生物可降解纳米载体存在体内循环不稳定、肿瘤细胞摄取低、细胞内药物浓度低的问题，这导致纳米药物的药效不高，还存在毒副作用。由功能性生物可降解聚合物可制备胶束纳米，其在体内循环稳定，但只能装载疏水性小分子抗癌药物，而对穿透能力强的亲水性小分子抗癌药物以及毒副作用小的亲水性生物大分子药物如蛋白药物和核酸类药物无能为力，极大地限制了其作为药物载体的应用。癌症是威胁人类健康的主要杀手，其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。肺癌在世界上尤其是在我国的发病率居高不下。手术只能对早期的肺癌患者有利，而对于中晚期无效。肺癌的治疗存在难以早期诊断、愈后差、易转移、易耐药的特点。纳米药物是治疗肺癌的一个关键点和希望所在。但是现有技术中，尚缺乏在体内循环稳定、特异性靶向肺癌、细胞内快速释放药物、毒副作用小的高效纳米药物，尤其是缺少能够运输亲水性小分子抗癌药物的纳米载体。技术实现要素：本发明的目的是提供一种生物可降解双亲性聚合物、由其制备的聚合物囊泡、及其作为抗肺癌药物的载体在制备肺癌靶向治疗药物中的应用。为达到上述目的，本发明具体的技术方案为：一种生物可降解双亲性聚合物，其化学结构式为：其中，R1选自以下基团中的一种：、、、、、R2选自以下基团中的一种：、、、、、；其中，k为43～170，x为10～30，y为40～200；m为86～340。本发明公开的生物可降解双亲性聚合物，疏水嵌段含有含双硫五元环功能基团的环碳酸酯单元；可以为二嵌段聚合物：也可以为三嵌段聚合物：优选的技术方案中，R1选自以下基团中的一种：R2选自以下基团中的一种：。优选的，上述生物可降解双亲性聚合物化学结构式中，k为113～170，x为20～26，y为100～190，m为226～340。上述生物可降解双亲性聚合物侧链含有双硫，可以在引发剂存在下，在溶剂中，由含双硫五元环功能基团的环状碳酸酯单体和其他环酯单体、环碳酸酯单体开环聚合得到；所述其他环碳酸酯单体包括三亚甲基环碳酸酯(TMC)、侧链含有三甲氧基苯甲缩醛的环状碳酸酯（PTMBPEC）、侧链含有双硫吡啶的环状碳酸酯（PDSC）和丙烯酸酯三羟甲基乙烷环碳酸酯（AEC）。所述其他环酯单体包括丙交酯(LA)、乙交酯（GA)和己内酯（CL）。含双硫五元环功能基团的环状碳酸酯单体（CDC）的化学结构式如下：。比如，上述环碳酸酯单体（CDC）可以在二氯甲烷中、以单甲氧基聚乙二醇为引发剂、双（双三甲基硅基）胺锌为催化剂和TMC开环共聚合，形成CDC与TMC单元无规排列的二嵌段聚合物；其反应式如下：本发明公开的侧链含双硫的双亲性聚合物具有生物可降解性，其疏水部分的分子量是亲水部分分子量的三倍及以上，可通过溶剂置换法、透析法、或薄膜水化法等方法来制备得到聚合物囊泡结构。制备的聚合物囊泡为纳米尺寸，粒径40-180纳米，可以作为治疗肺癌的药物的载体；在囊泡的疏水膜中装载疏水性小分子抗肺癌药物紫杉醇、多西紫杉醇等，也可以在囊泡的大的亲水内腔中装载亲水性抗肺癌药物，尤其是亲水性小分子抗癌药物如盐酸多柔比星、盐酸表阿霉素、盐酸伊利替康和盐酸米托蒽醌。这样克服了现有的由双亲性聚合物形成的胶束载体只能装载疏水药物的缺陷和现有技术中没有能高效装载、并稳定体内循环的亲水性小分子抗癌药物的载体的缺陷；上述生物可降解双亲性聚合物的亲水段PEG的末端可以化学偶联肿瘤特异性靶向分子如cRGD、cNGQ或者cc-9等多肽制备得到肿瘤特异靶向的生物可降解双亲性聚合物。本发明还公开了聚合物囊泡，可以由上述生物可降解双亲性聚合物制备得到；或者由上述肿瘤特异靶向的生物可降解双亲性聚合物制备得到；或者由上述生物可降解双亲性聚合物与肿瘤特异靶向的生物可降解双亲性聚合物制备得到，比如上述生物可降解双亲性聚合物和肿瘤特异靶向的生物可降解双亲性聚合物按照不同比例混合，可制备具有不同靶向密度的聚合物囊泡，即得到肺癌靶向自交联囊泡，来可以增加囊泡纳米药物在肺癌细胞中的摄取量；也可以由生物可降解双亲性聚合物制备的交联囊泡或自交联囊泡的外表面偶联肿瘤细胞特异性靶向分子来制备肺癌靶向交联囊泡和肺癌靶向自交联囊泡，以增加肺癌细胞的摄取量，比如在囊泡的PEG端通过迈克尔加成键合cRGD、cNGQ或者cc-9。上述生物可降解双亲性聚合物和肿瘤特异靶向的生物可降解双亲性聚合物可在不加入任何物质的情况下自行交联，得到自交联聚合物囊泡和肺癌靶向自交联聚合物囊泡；或是在催化量的还原剂如二硫代苏糖醇（DTT）或谷胱甘肽（GSH）催化下，制备得到交联聚合物囊泡和肺癌靶向交联聚合物囊泡。自交联囊泡、肺癌靶向自交联囊泡、交联囊泡和肺癌靶向交联囊泡在囊泡疏水膜内形成了稳定的化学交联，从而可在体内稳定长循环；但内吞进入癌细胞后，在细胞内大量还原性物质存在环境下，形成的交联会快速解除（解交联），快速释放出药物，高效杀死肺癌细胞。所以本发明请求保护上述生物可降解双亲性聚合物在制备治疗肺癌的纳米药物中的应用；进一步的地，本发明还公开了上述聚合物囊泡在制备治疗肺癌的纳米药物中的应用，包括由侧链含双硫的生物可降解双亲性聚合物制备的聚合物囊泡、自交联聚合物囊泡，由肿瘤特异靶向的生物可降解双亲性聚合物独自或者和生物可降解双亲性聚合物制备的肺癌靶向自交联聚合物囊泡、肺癌靶向交联聚合物囊泡在制备靶向治疗肺癌的纳米药物中的应用。基于本发明聚合物制备的抗肺癌纳米药物为囊泡抗肺癌纳米药物。由于上述方案的实施，本发明与现有技术相比，具有以下优点：1.本发明利用含双硫五元环功能基团的环状碳酸酯单体、以聚乙二醇为引发剂、和TMC或LA通过活性可控开环聚合共聚合得到分子量可控、分子量分布较窄的侧链含双硫的生物可降解双亲性聚合物；由于硫硫五元环基团不影响环碳酸酯单体的开环聚合，因此聚合过程无需现有技术中的保护和脱保护过程，简化了操作步骤。2.本发明公开的侧链含双硫的生物可降解双亲性聚合物具有生物可降解性，可以制备聚合物囊泡和肺癌靶向囊泡，装载不同性质的药物，可以不加入任何物质而自行交联，形成稳定的自交联聚合物囊泡纳米药物，从而克服了现有技术中纳米药物体内循环不稳定、药物易早释、造成毒副作用的缺陷。3.本发明公开的自交联囊泡纳米药物的交联具有可逆性，即支持体内长循环，可在肺癌细胞高富集；但是进入肺癌细胞内后却可以快速解交联，释放出药物，实现高效特异性地杀死肺癌细胞而不具有毒副作用。克服了现有技术中交联纳米药物过于稳定、而在细胞内药物释放缓慢、造成耐药性的缺陷。4.本发明公开的生物可降解聚合物囊泡和肺癌靶向囊泡，可以不加入任何物质而制备自交联囊泡，制备方法简便，从而克服了现有技术中制备交联纳米药物时候存在的必须加入交联剂等物质以及需要复杂的操作和提纯过程等缺陷。5.本发明公开的双亲性聚合物自组装制备的自交联聚合物囊泡可用于亲水小分子抗癌药物的控制释放体系，从而克服了现有生物可降解纳米胶束载体仅适用装载疏水小分子药物的缺陷和现有技术中没有能高效装载、并稳定体内循环的亲水性小分子抗癌药物的缺陷；进一步地，可制备肺癌靶向的自交联囊泡，在肺癌的高效靶向治疗方面具有更广泛的应用价值。附图说明图1为实施例二中聚合物PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的氢核磁谱图；图2为实施例六中聚合物PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)的核磁谱图；图3是实施例十五中交联囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)粒径分布（A）及电子投射显微镜图片（B），交联囊泡稳定性的测试（C）及还原响应性测试（D）图；图4为实施例十五中载DOX·HCl交联囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的体外释放图；图5是实施例二十四中载DOX·HCl交联囊泡cRGD20/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的体外释放图；图6是实施例二十六中靶向交联囊泡cRGD/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)对A549肺癌细胞的毒性结果图；图7是实施例二十六中载DOX·HCl靶向交联囊泡cRGD/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)对A549肺癌细胞的毒性结果图；图8是实施例二十八中载DOX·HCl靶向交联囊泡cRGD/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)在小鼠体内的血液循环研究结果图；图9为实施例二十九中载DOX·HCl靶向交联囊泡cNGQ/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)在小鼠体内的血液循环研究结果图；图10为实施例三十三中载DOX·HCl靶向交联囊泡cRGD/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)对荷皮下肺癌小鼠的生物分布结果图；图11为实施例三十四中载DOX·HCl靶向交联囊泡cNGQ/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)对荷皮下肺癌小鼠的生物分布结果图；图12为实施例三十六中载DOX·HCl靶向交联囊泡cRGD/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)在皮下荷肺癌小鼠的治疗图，其中A为肿瘤生长曲线，B为小鼠治疗后肿瘤图片，C为体重变化，D为生存曲线；图13为实施例三十七中载DOX·HCl靶向交联囊泡cNGQ/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)在皮下荷肺癌小鼠的治疗图，其中A为肿瘤生长曲线，B为体重变化曲线，C为生存曲线；图14为实施例三十九中载DOX·HCl靶向交联囊泡cRGD/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)在原位荷肺癌小鼠的治疗图，其中A为肿瘤生长曲线，B为体重变化曲线，C为生存曲线；图15为实施例四十中载DOX·HCl靶向交联囊泡cNGQ/PEG6k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)在原位荷肺癌小鼠的治疗图，其中A为肿瘤生长曲线，B为体重变化曲线，C为生存曲线。具体实施方式下面结合实施例和附图对本发明作进一步描述：实施例一含双硫五元环功能基团的环状碳酸酯单体（CDC）的合成一水合硫氢化钠（28.25g，381.7mmol）溶在400mLN，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，50℃加热至完全溶解，逐滴加入二溴新戊二醇（20g，76.4mmol），反应48小时。反应物减压蒸馏除去溶剂DMF，然后用200mL蒸馏水稀释，用250mL乙酸乙酯萃取四次，最后有机相旋蒸得到黄色粘稠状化合物A，产率：70%；溶解在400mL的四氢呋喃（THF）中的化合物A在空气中放置24小时，分子间巯基氧化成硫硫键，得到化合物B，产率；>98%；在氮气保护下，化合物B（11.7g，70.5mmol）溶于干燥过的THF（150mL）中，搅拌至完全溶解。接着冷却到0℃，加入氯甲酸乙酯（15.65mL，119.8mmol），然后逐滴加入Et3N（22.83mL，120.0mmol）。待滴加完毕后，该体系在冰水浴条件下继续反应4h。反应结束后，过滤掉产生的Et3N·HCl，滤液经旋转浓缩，最后用乙醚进行多次重结晶，得到黄色晶体，即含双硫五元环功能基团的环状碳酸酯单体（CDC），产率：64%。实施例二两嵌段侧链含双硫五元环聚合物PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.52mmol）CDC单体和0.4g（3.85mmol）的三亚甲基碳酸酯（TMC）溶在3mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.1g（0.02mmol）CH3O-PEG5000和0.5mL的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mol/L），接着把反应器密封好，转移出手套箱，40℃油浴中反应2天后，冰乙酸终止反应，冰乙醚中沉淀，最终经过过滤、真空干燥得到PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19.0k)。核磁图见附图1，1HNMR(400MHz,CDCl3):2.08(t,-COCH2CH2CH2O-),3.08(s,-CCH2),3.30(m，-OCH3)，3.65（t，-OCH2CH2O-），4.28(t,-COCH2CH2CH2O-),4.31(m,-CCH2)。核磁计算出下式中k=114，x=26，y=186。GPC测分子量：34.5kDa，分子量分布：1.48。实施例三两嵌段侧链含双硫五元环聚合物Mal-PEG6k-P(CDC4.8k-co-TMC19.2k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.52mmol）CDC单体和0.4g（3.85mmol）的TMC溶在3mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.12g（0.02mmol）Mal-PEG6000和0.1mol/L的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mol/L），接着把反应器密封好，转移出手套箱，40℃油浴反应2天后，冰乙酸终止反应，冰乙醚中沉淀，最终经过过滤、真空干燥得到Mal-PEG6k-P(CDC4.8k-co-TMC19.2k)。1HNMR(400MHz,CDCl3):2.08(t,-COCH2CH2CH2O-),3.08(s,-CCH2),3.30(m，-OCH3)，3.65（t，-OCH2CH2O-），4.28(t,-COCH2CH2CH2O-),4.31(m,-CCH2)，和6.70（s，Mal）。核磁计算出下式中，k=136，x=25，y=188。GPC测的分子量：38.6kDa，分子量分布：1.42。实施例四两嵌段侧链含双硫聚合物NHS-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.52mmol）CDC单体和0.4g（3.85mmol）的TMC溶在3mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.1g（0.015mmol）NHS-PEG6500和0.5mL的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mol/L），接着把反应器密封好，转移出手套箱，40℃油浴反应2天后，冰乙酸终止反应，冰乙醚中沉淀，最终经过过滤、真空干燥得到NHS-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)。1HNMR(400MHz,CDCl3):2.08(t,-COCH2CH2CH2O-),3.08(s,-CCH2),3.30(m，-OCH3)，3.65（t，-OCH2CH2O-），4.28(t,-COCH2CH2CH2O-),4.31(m,-CCH2)，和2.3（s，NHS）。核磁计算出下式中k=145，x=24.0，y=182。GPC测分子量：37.6kDa，分子量分布：1.38。实施例五两嵌段侧链含双硫五元环聚合物PEG1.9k-P(CDC1.9k-co-TMC4.1k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.52mmol）CDC单体和0.2g（1.93mmol）的TMC溶在1mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.1g（0.05mmol）CH3O-PEG1900和0.5mL的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mol/L），40℃油浴反应2天，后处理同实施例二，得到PEG1.9k-P(CDC1.9k-co-TMC3.9k)。反应式和1HNMR特征峰同实施例二。核磁计算出式中k=46，x=10，y=40。GPC测分子量：14.5kDa，分子量分布：1.36。实施例六两嵌段侧链含双硫聚合物PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)的合成在氮气环境下，0.08g（0.42mmol）CDC和0.3g（2.1mmol）的丙交酯（LA）溶在2mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.1g（0.02mmol）CH3O-PEG5000和0.1mol/L的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mL），40℃油浴反应2天，后处理同实施例二，得到PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)。核磁见附图2，1HNMR(400MHz,CDCl3):1.,59(s,-COCH（CH3)O-),3.08(s,-CCH2),3.30(m，-OCH3)，3.65（t，-OCH2CH2O-），4.31(m,-CCH2)，5.07(s,-COCH（CH3)O-)。核磁计算出下式中，k=114，x=19，y=101。GPC测的分子量：24.3kDa，分子量分布：1.32。实施例七两嵌段侧链含双硫聚合物PEG6.5k-P(CDC5.8k-co-LA28.3k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.57mmol）CDC和0.5g（3.5mmol）的LA溶在3mL二氯甲烷中，加入密封反应器，然后加入0.11g（0.015mmol）CH3O-PEG6500和0.5mL的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mol/L），40℃油浴反应2天，后处理同实施例二，得到PEG6.5k-P(CDC5.8k-co-LA28.3k)。反应式和1HNMR特征峰同实施例六。核磁计算出式中k=148，x=30，y=200。GPC测分子量：42.4kDa，分子量分布：1.43。实施例八两嵌段侧链含双硫聚合物Mal-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.52mmol）CDC和0.5g（5.56mmol）的LA溶在4mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.15g（0.025mmol）Mal-PEG6000和0.1mol/L的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mL）40℃油浴反应2天，后处理同实施例二，得到Mal-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)。1HNMR(400MHz,CDCl3):1.59(s,-COCH（CH3)O-),3.08(s,-CCH2),3.30(m，-OCH3)，3.65（t，-OCH2CH2O-），4.31(m,-CCH2)，5.07(s,-COCH（CH3)O-)，和6.70（s，Mal）。核磁计算出下式中k=136，x=19，y=129。GPC测分子量：32.5kDa，分子量分布：1.44。实施例九三嵌段聚合物P(CDC3.8k-TMC18.8k)-PEG5k-P(CDC3.8k-TMC18.8k)的合成在氮气环境下0.8g（7.84mmol）的TMC和0.16g（0.83mmol）CDC溶在8mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，后加入0.1g（0.02mmol）的HO-PEG-OH5000和1mL的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.2mol/L），40℃油浴反应2天，后处理同实施例二，得到三嵌段聚合物P(CDC3.8k-TMC18.8k)-PEG5k-P(CDC3.8k-TMC18.8k)。1HNMR特征峰同实施例二。核磁计算出下式中，m=114，x=20，y=184。GPC测的分子量：78.9kDa，分子量分布：1.54。实施例十两嵌段侧链含双硫聚合物NHS-PEG7.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)的合成在氮气环境下，0.1g（0.52mmol）CDC和0.4g（2.8mmol）的LA溶在3mL二氯甲烷中，加入密封反应器里，然后加入0.013mmol的NHS-PEG7500和1mL的催化剂双（双三甲基硅基）胺锌的二氯甲烷溶液（0.1mol/L），密封反应器，转移出手套箱，40℃油浴反应2天，后处理同实施例二，得到NHS-PEG7.5k-P(CDC4.8k-co-LA19.0k)。1HNMR(400MHz,CDCl3):1.,59(s,-COCH（CH3)O-),3.08(s,-CCH2),3.30(m，-OCH3)，3.65（t，-OCH2CH2O-），4.31(m,-CCH2)，5.07(s,-COCH（CH3)O-)和2.3（s，NHS）。核磁计算出下式中，k=170，x=20，y=96。GPC测分子量：42.3kDa，分子量分布：1.45。实施例十一靶向两嵌段聚合物CC9-PEG7.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)的合成环状多肽CSNIDARAC(cc9)偶联的聚合物CC9-PEG7.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)的合成分为两步，第一步如实施例十制备NHS-PEG7.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)；第二步为CC9与其通过酰胺化反应键合。先将上述聚合物NHS-PEG7.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)溶解在DMF中，加入两倍摩尔量的CC9，30℃反应两天、透析、冻干，得到CC9-PEG6.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)，通过核磁和BCA蛋白试剂盒测试计算CC9接枝率为91%。实施例十二靶向两嵌段聚合物cRGD-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)的合成环状多肽c(RGDfC)(cRGD-SH)偶联的聚合物cRGD-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)的合成分为两步，第一步如实施例八制备Mal-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)；第二步cRGD-SH的巯基与其通过迈克尔加成反应键合。先将聚合物Mal-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)溶在0.5毫升DMF中，加入2毫升的硼酸缓冲溶液（pH8.0），再加入1.5倍摩尔量的cRGD-SH，30℃反应两天，透析、冷冻干燥得到最终产物cRGD-PEG6k-P(CDC3.6k-co-LA18.6k)，通过核磁和BCA蛋白试剂盒测试计算cRGD接枝率为94%。实施例十三靶向两嵌段聚合物cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的合成环状多肽c(RGDfK)(cRGD)偶联的聚合物cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的合成分为两步，第一步如实施例四制备NHS-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)；第二步cRGD的氨基与其通过酰胺化反应键合。先将上述聚合物NHS-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)溶解在DMF中，加入两倍摩尔量的cRGD，30℃反应两天后，透析除去游离cRGD，冷冻干燥得到cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)，通过核磁和BCA蛋白试剂盒测试计算cRGD接枝率为88%。实施例十四靶向两嵌段聚合物cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的合成环状多肽cNGQGEQc（cNGQ）偶联的聚合物cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的合成分为两步，第一步如实施例四制备NHS-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)；第二步为cNGQ的氨基与其通过酰胺化反应键合。先将上述聚合物NHS-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)溶在DMF中，加入两倍摩尔量的cNGQ，30℃反应两天后，透析除去游离cNGQ，冷冻干燥得到cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)，通过核磁和BCA蛋白试剂盒计算cNGQ接枝率为92%。采用上述类似的制备方法可以制备多种侧链含双硫的生物可降解双亲性聚合物，原料比例以及表征见表1。表1各个聚合物制备条件、产物的核磁及GPC表征结果实施例十五溶剂置换法制备自交联聚合物囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)采用溶剂置换法制备聚合物囊泡。100μL的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的DMF溶液（10mg/mL）滴加到900μL磷酸盐缓冲溶液（PB，10mM，pH7.4）中，在37℃（200rmp）摇床中放置过夜进行自交联，然后装入透析袋（MWCO7000）中透析过夜，换五次水，透析介质为PB（10mM，pH7.4）。得到的自交联囊泡的尺寸由动态光散射粒度分析仪（DLS）测的形成的纳米囊泡为130nm，粒径分布很窄，见图3A，由图3B可知，TEM测得纳米粒子为中空的囊泡结构，自交联囊泡在高倍稀释和胎牛血清存在下仍然保持不变的粒径和粒径分布（图3C），但在模拟肿瘤细胞还原环境下快速释放，解交联（图3D）。由此可知，得到的囊泡可自交联，并具有还原敏感的解交联的性质。实施例十六透析法制备自交联聚合物囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)采用透析法制备聚合物囊泡。100μL的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的DMF溶液（10mg/mL）装入透析袋（MWCO7000）中，在PB（10mM，pH7.4）中、37℃（200rmp）摇床中放置过夜自行交联，然后PB中透析24小时，换五次液。DLS测交联囊泡为80nm左右，粒径分布0.08。实施例十七薄膜水化法制备自交联聚合物囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)采用薄膜水化法制备聚合物囊泡。2mg的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的溶于0.5mL的低沸点有机溶剂中，如二氯甲烷或乙腈中，在25毫升的尖底烧瓶中，旋蒸在底部形成薄膜，然后再0.1mBar的真空度下继续抽干24小时。加入2mL的PB（10mM，pH7.4）在37℃下搅拌把薄膜剥离表面，并搅碎，超声20分钟（200rmp），不断搅拌24小时，得到的囊泡自行交联。DLS测定自交联囊泡的尺寸为180nm左右，粒径分布0.25。实施例十八溶剂置换法制备交联聚合物囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)如实施例十五制备聚合物囊泡，滴加完毕后加入DTT（浓度为0.09µM），在37℃交联12小时，然后装入透析袋（MWCO7000）中透析过夜，换五次液。得到的自交联囊泡的尺寸为109nm左右，粒径分布0.13.实施例十九cNGQ偶联的靶向自交联聚合物囊泡cNGQ/PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)制备实施例十四中得到的靶向聚合物cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和实施例二得到的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)二者混合溶于DMF中，如实施例十五制备cNGQ偶联的靶向自交联聚合物囊泡。靶向聚合物的PEG分子量比非靶向的PEG要长，保证靶向分子更好的支出表面。两者按不同比例混合可制备表面具有不同靶向分子的自交联囊泡。优选方案为前者含量为5-30wt.%。DLS测定其尺寸为90-120nm左右，粒径分布0.05-0.15。实施例二十cRGD偶联的靶向自交联囊泡cRGD/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的制备采用薄膜水化法制备cRGD偶联的靶向自交联聚合物囊泡。1.6mg的实施例二得到的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的DMF溶液（10mg/mL）及0.4mg的实施例十三中得到的cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)溶于0.5mL的低沸点有机溶剂中，如二氯甲烷或乙腈中，如实施例十七制备得到的自交联囊泡为88nm左右，粒径分布0.08。两者按不同比例混合可制备表面具有不同靶向分子的自交联囊泡。优选方案为前者含量为5-30wt.%。实施例二十一CC9偶联的靶向自交联囊泡CC9/P(CDC3.8k-LA18.8k)-PEG4k-P(CDC3.8k-LA18.8k)的制备实施例八制备的Mal-PEG6k-P(CDC3.6k-LA18.6k)和P(CDC3.8k-LA18.8k)-PEG4k-P(CDC3.8k-LA18.8k)混合按照如实施例十六所述透析方法制备囊泡。然后加入0.5毫升的4M硼酸缓冲溶液（pH8.0）调节溶液pH至7.5-8.0，再按照Mal摩尔量的1.5倍加入CC9，通过迈克尔加成反应键合，30℃反应两天后，透析。DLS测定为110nm，粒径分布0.16。核磁和BCA蛋白试剂盒测试计算多肽的接枝率为90%。两种聚合物者按不同比例混合可制备表面具有不同靶向分子的自交联囊泡。优选方案为前者含量为5-30wt.%。采用上述类似的制备方法可以制备多种自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡，原料比例以及表征见表2。表2自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡的制备和表征聚合物溶剂置换法透析法薄膜水化法尺寸(nm)粒径分布PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)√1300.14PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)√1020.11cRGD20/PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)√880.08cNGQ20/PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)√960.18PEG2k-P(CDC1.9k-TMC4.1k)√670.12PEG6.5k-P(CDC5.8k-LA28.3k)√1780.20PEG3.4k-P(CDC1.9k-TMC4.1k)√420.15P(CDC3.8k-TMC18.8k)-PEG5k-P(CDC3.8k-TMC18.8k)√1430.21N3-PEG1.9k-P(CDC2.7k-PDSC2.6k)√1000.13AA-PEG3k-P(CDC3.9k-PDSC4.8k)√1620.18Ally-PEG6k-P(CDC2.9k-CL14.2k)√1240.21AK-PEG5k-P(CDC3.8k-GA7.6k)√890.14实施例二十二自交联聚合物囊泡PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的药物装载及体外释放采用溶剂置换法制备聚合物囊泡，DOX·HCl的装载采用pH梯度法，利用囊泡内外pH的不同来包裹亲水药物DOX·HCl。100μL的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的DMF溶液（10mg/mL）滴加到900μL柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液（10mM，pH4.0）中，在37℃（200rmp）摇床中放置5小时，然后加入0.05mL的PB（4M，pH8.1）建立pH梯度，随后立即加入DOX·HCl，摇床中放置5-10小时允许药物进入囊泡中，同时自交联。最后装入透析袋（MWCO7000）中透析过夜，换五次水，透析介质为PB（10mM，pH7.4）。载不同比例的药（10%-30%）的自交联囊泡的粒径在105-124nm，粒径分布在0.10-0.15。荧光光谱仪测定DOX·HCl的包裹效率为63%-77%。DOX·HCl的体外释放实验是在37℃恒温摇床中震荡（200rpm）进行，每组各有三个平行样。第一组，载DOX·HCl的自交联囊泡在加入10mMGSH模拟细胞内还原环境PB(10mM,pH7.4)中；第二组，载DOX·HCl的自交联囊泡在PB(10mM,pH7.4)；载药自交联囊泡的浓度为30mg/L，取0.6mL放入透析袋（MWCO:12,000）中，每个试管中加入相应的透析溶剂25mL，在预定的时间间隔，取出5.0mL透析袋外部介质用作测试，同时向试管中补加5.0mL相应介质。使用荧光仪测定溶液中药物浓度。附图4为DOX·HCl累积释放量与时间的关系，从图中可以看出，加入模拟肿瘤细胞内GSH后，其释放明显要快于没加GSH的样本，说明载药自交联囊泡在10mM的GSH的存在下，能有效释放药物。实施例二十三靶向自交联囊泡Ally-PEG6k-P(CDC2.9k-CL14.2k)的载疏水药物PTX及释放用溶剂置换法制备聚合物囊泡。10µL的紫杉醇PTX的DMF溶液（10mg/mL）和90μL的Ally-PEG6k-P(CDC2.9k-CL14.2k)的DMF溶液（10mg/mL）混合，然后滴加到900μL磷酸盐缓冲溶液（10mM，pH7.4，PB）中，在37℃（200rmp）摇床中放置过夜进行自交联，然后装入透析袋（MWCO7000）中透析过夜，换五次水，透析介质为PB（10mM，pH7.4）。PTX的含量在0-20wt.%，得到的自交联囊泡尺寸为130-170nm，粒径分布0.1-0.2。TEM测得为囊泡结构，具有还原敏感的解交联性质。PTX的包裹效率为50%-70%）。体外释放实验设计同实施例二十二，加GSH后疏水药物释放明显要快于没加GSH样本。实施例二十四靶向自交联囊泡cRGD20/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的载药及释放用薄膜水化法制备聚合物囊泡,pH梯度法装载DOX·HCl。1.6mg的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)及0.4mg的cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)溶于0.5mL的低沸点有机溶剂中，如二氯甲烷或乙腈中，在25毫升的尖底烧瓶中，旋蒸在底部形成薄膜，然后再0.1mBar的真空度下继续抽干24小时。加入2mL柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液（10mM，pH4.0）中，在37℃下搅拌把薄膜剥离表面，并搅碎，超声20分钟（200rmp），不断搅拌24小时，自交联。DLS测定交联囊泡的尺寸为90nm左右，粒径分布0.10。在上述囊泡溶液中加入0.05mL的PB（4M，pH8.1）建立pH梯度，随后立即加入DOX·HCl，摇床中放置5-10小时。然后装入透析袋（MWCO7000）中对PB透析过夜，换五次液。载不同比例药量（10%-30%）之后，粒径112-121nm，粒径分布0.10-0.15，DOX·HCl的包裹效率61%-77%。体外释放实验设计同实施例二十二，附图5可看出，加入10mMGSH后，药物有效释放，速度明显要快于没加GSH的样本。实施例二十五靶向自交联囊泡cNGQ20/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的载药及释放采用透析法制备囊泡，pH梯度法装载盐酸表阿霉素（Epi·HCl）。80μL的PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)的DMF溶液（10mg/mL）及20μL的cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)的DMF溶液（10mg/mL）均匀混合之后，直接装入透析袋（MWCO7000）中，在柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液（10mM，pH4.0）中，在37℃摇床中放置4小时自交联，后对相同的介质透析12小时，换五次液。DLS测交联囊泡为96nm，粒径分布0.18。在上述囊泡溶液中加入0.05mL的PB（4M，pH8.5）建立pH梯度，随后立即加入Epi·HCl，摇床中放置5-10小时。然后装入透析袋（MWCO7000）中对PB透析过夜，换五次液。载不同比例药（10%-30%），粒径98-118nm，粒径分布0.10-0.15，Epi·HCl的包裹效率为64%-79%。Epi·HCl体外释放实验设计同实施例二十二。采用上述类似的制备方法可以研究多种自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡对多种亲水抗癌小分子药物如盐酸多柔比星(DOX·HCl)、盐酸表阿霉素（Epi·HCl）、盐酸伊利替康(CPT·HCl)和盐酸米托蒽醌(MTO·HCl)以及疏水抗癌药物紫杉醇、多烯紫杉醇的载药量和包封率，见表3。表3自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡载亲水药物的载药量、包封率实施例二十六MTT法测试空自交联囊泡和空靶向自交联囊泡对A549细胞的毒性采用MTT法测试空的囊泡的细胞毒性，使用A549人肺癌细胞。以5×104个/mL将A549细胞种于96孔板，每孔100μL，24小时后养至细胞贴壁70%左右。然后，实验组各孔中分别加入含有不同浓度（0.0001-1.5mg/mL)的囊泡样品（以实施例十五的空的自交联囊泡和实施例十九的空靶向自交联囊泡cRGD/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)为例），另设细胞空白对照孔和培养基空白孔（复4孔）。培养24小时后，每孔加入MTT（5.0mg/mL）10μL，继续培养4小时后每孔加入150μLDMSO溶解生成的结晶子，用酶标仪于492nm处测吸光度值（A），以培养基空白孔调零，计算细胞存活率。附图6为自交联囊泡的细胞毒性结果，可看出，当交联囊泡的浓度从0.75增到1.5mg/mL时，A549的存活率仍高于90%，说明该交联囊泡具有良好的生物相容性。实施例二十七MTT法测载药自交联囊泡和载药靶向自交联囊泡对A549肺癌细胞的毒性。用MTT法测试囊泡对A549细胞的毒性。细胞的培养和实施例二十六相同，只是实验组各孔加样时，把载药交联囊泡和载药靶向自交联囊泡、实施例二十二的载DOX·HCl的自交联囊泡、实施例二十四的载DOX·HCl靶向自交联囊泡cRGD/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和实施例二十五的载DOX·HCl靶向自交联囊泡cNGQ/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)加入各对应孔中，DOX·HCl浓度范围为0.01、0.1、0.5、1、5、10、20和40μg/mL；靶向分子含量从10%、20%到30%；无靶向载药自交联囊泡及游离DOX·HCl组作为对照组。共同培养4小时后，吸出样品换上新鲜培养基继续孵育44h后。而后的MTT加入、处理和测定吸光度同实施例二十六。附图7是载药自交联囊泡cRGD/PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)对A549细胞的毒性；可看出，载DOX·HCl的30%cRGD靶向自交联囊泡对A549细胞的半致死浓度（IC50）为2.13μg/mL，远远低于无靶向对照囊泡，也低于自由药物（4.89μg/mL），说明本发明的载药靶向自交联囊泡能有效靶向到肺癌细胞，在细胞内释放药物，最终杀死癌细胞。实施例二十八MTT法测试载药自交联囊泡和载药靶向自交联囊泡对H460细胞的毒性。采用MTT法测试囊泡对H460人肺癌细胞的毒性。细胞的培养和实施例二十六相同，只是实验组各孔加样时，把不同cc-9含量、不同药量的载药靶向交联囊泡，以载CPT·HCl靶向自交联囊泡CC9/P(CDC3.8k-LA18.8k)-PEG4k-P(CDC3.8k-LA18.8k)为例，加入各对应孔中，CPT·HCl浓度范围为0.01、0.1、0.5、1、5、10、20和40μg/mL；靶向分子含量从10%、20%到30%；无靶向载药交联囊泡、和游离CPT·HCl组作为对照组。共同培养4小时后，吸出样品换上新鲜培养基继续孵育44h后。而后的MTT加入、处理和测定吸光度同实施例二十六。结果表明，无靶向载药自交联囊泡对H460细胞的IC50为4.85μg/mL，特别是载DOX·HCl的30%CC9靶向交联囊泡对H460细胞的IC50为2.17μg/mL，远低于DOX脂质体注射液里葆多DOX-LPs（35.2μg/mL），低于自由药物（3.09μg/mL。说明本发明的载药靶向交联囊泡能有效靶向到肺癌细胞，并在细胞内释放药物，最终杀死癌细胞。采用上述类似的方法研究了多种载药自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡对肺癌细胞的毒性，药物为亲水抗癌小分子药物为盐酸多柔比星(DOX·HCl)、盐酸表阿霉素（Epi·HCl）、盐酸伊利替康(CPT·HCl)和盐酸米托蒽醌(MTO·HCl)以及疏水抗癌药物紫杉醇、多烯紫杉醇，结果见表4。实施例二十九载药的自交联囊泡CLPs和靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs的血液循环所有动物实验操作符合苏州大学动物实验中心规定。实验选用体重为18~20克左右，4~6周龄的Balb/C裸鼠。囊泡由PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)以及按不同比例混合的cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)组成，当cRGD比例为20%时，粒径为100纳米，粒径分布为0.10，命名为cRGD20/CLPs，药物为DOX·HCl。将载DOX·HCl的无靶向囊泡CLPs、靶向囊泡cRGD20/CLPs、无交联靶向囊泡cRGD20/PEG-PTMC和DOX·HCl通过尾静脉注射小鼠体内（DOX药量为10mg/kg），在0、0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时定点取血约10μL，通过差量法准确计算血液重量，再加如100μL浓度为1%的曲拉通和500μLDMF萃取（其中含有20mM的DTT，1M的HCl）；然后离心（20000转/分钟，20分钟）后，取上层清液，通过荧光测得每个时间点DOX·HCl的量。图8中横坐标为时间，纵坐标为每克血液中的DOX·HCl占总的DOX注射量（ID%/g）。由图可知，DOX·HCl的循环时间很短，2小时已很难检测到DOX，而交联囊泡在24小时后仍有8ID%/g。由计算可知，靶向载药自交联囊泡、载药自交联囊泡和无交联靶向囊泡在小鼠体内的消除半衰期分别为4.49、4.26和1.45小时，而DOX·HCl的仅为0.27小时，所以靶向载药自交联囊泡在小鼠体内稳定，有较长循环时间。其他载药靶向自交联囊泡、载药自交联囊泡的血液循环实验的操作和计算方法相同，结果在表4。实施例三十载药的自交联囊泡CLPs和靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs的血液循环如实施例二十五，由cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)组成的靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs，以及无靶向的自交联囊泡CLP装载DOX·HCl后，尾静脉注射入Balb/C裸鼠中，同实施例二十九研究其血液循环，DOX·HCl和脂质体阿霉素里葆多DOX-LPs用于对照组。结果如图9所示，cNGQ20/CLPs和CLPs在48小时后仍有5.0ID%/g。由计算可知，靶向自交联囊泡和自交联囊泡在小鼠体内的消除半衰期分别为4.99和4.79小时，所以其在小鼠体内稳定，有较长的循环时间。结果在表4。实施例三十一自交联囊泡和靶向自交联囊泡在荷A549肺癌小鼠的活体成像活体成像实验选用体重为18~20克左右，4~6周龄的Balb/C裸鼠，在皮下注射5×106个A549人肺癌细胞，大约3~4周后，肿瘤大小为100~200mm3时开始实验。以由cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)制备的自交联囊泡cRGD20/CLPs和无靶向自交联囊泡CLPs为例。将荧光物质cy-7标记的cRGD20/CLPs和无靶向的CLPs通过尾静脉注射小鼠体内，然后在不同时间点1、2、4、6、8、12、24、48小时用小动物活体成像仪来追踪囊泡的去向。实验结果可知，cRGD20/CLPs在肿瘤部位很快积累，且在48小时后荧光仍然很强。说明cRGD20/CLPs能主动靶向及富集到肿瘤部位。其他靶向自交联囊泡、自交联囊泡的活体成像实验的操作和计算方法相同，结果在表4。实施例三十二载药自交联囊泡CLPs和靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs在荷A549肺癌小鼠的活体成像实验活体成像实验中肿瘤的接种以及尾静脉给药同实施例三十一。如实施例二十五制备的载Epi·HCl的、cy-7标记的CLPs和cNGQ20/CLPs，发现二者都可在肿瘤部位很快积累，CLPs在4-6小时消失，而cNGQ20/CLPs在48小时后肿瘤部位荧光仍然很强，说明cNGQ20/CLPs能主动靶向及富集到肿瘤部位。结果在表4。实施例三十三载药自交联囊泡CLPs和载药靶向自交联囊泡CC9/CLPs在荷H460肺癌小鼠的活体成像实验活体成像实验选用体重为18~20克左右，4~6周龄的Balb/C裸鼠，在皮下注射5×106个H460人肺癌细胞，大约3~4周后，肿瘤大小为100~200mm3时开始实验。由CC9-PEG6.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)和PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)制备的靶向自交联囊泡CC9/CLPs和载药自交联囊泡CLPs用cy-5标记，装载了疏水药物多烯紫杉醇DTX，同实施例三十二操作来研究活体成像。实验结果可知，载DTX的CC9/CLPs可在肿瘤部位很快积累，并在48小时后肿瘤部位荧光仍然很强。说明CC9/CLPs能主动靶向及富集到肿瘤部位，而载药无靶向自交联囊泡在2小时进入肿瘤后很快代谢，且强度低，结果在表4。实施例三十四载药自交联囊泡CLPs和靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs在荷A549肺癌小鼠的体内生物分布活体成像实验中肿瘤的接种以及尾静脉给药同实施例三十一。由cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)制备的载DOX·HCl的靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs和无靶向自交联囊泡CLPs尾静脉注射小鼠体内（DOX·HCl：10mg/kg），12小时后处死老鼠，将肿瘤及心，肝，脾，肺和肾组织取出，清洗称重后加入500μL1%的曲拉通通过匀浆机磨碎，再加入900μLDMF萃取（其中含有20mM的DTT，1M的HCl）。离心（20000转/分钟，20分钟）后，取上层清液，通过荧光测得每个时间点DOX·HCl的量。图10中横坐标为组织器官，纵坐标为每克肿瘤或组织中的DOX·HCl占总DOX·HCl注射量（ID%/g）。cRGD20/CLPs、CLPs和DOX·HCl注射12小时在肿瘤积累的DOX·HCl量分别为6.54、2.53和1.02ID%/g，cRGD20/CLPs是CLPs和DOX·HCl的3和6倍，说明载药cRGD20/CLPs通过主动靶向在肿瘤部位积累较多，结果在表4。实施例三十五载药自交联囊泡CLPs和靶向自交联囊泡cNGQ/CLPs在荷A549肺癌小鼠的体内生物分布肿瘤的接种、尾静脉给药以及动物的操作同实施例三十四。载DOX·HCl的cNGQ20/CLPs、无靶向CLPs和脂质体阿霉素里葆多DOX-LPs尾静脉注射小鼠体内（DOX·HCl：10mg/kg）。6小时后，cNGQ20/CLPs、CLPs和DOX-LP在肿瘤积累的DOX·HCl量分别为8.63、3.52和1.82ID%/g，cNGQ20/CLPs是后两者的2和5倍，说明载药cNGQ20/CLPs通过主动靶向在肿瘤部位积累较多。结果如图11。实施例三十六载药自交联囊泡CLPs和靶向自交联囊泡CC9/CLPs在荷H460肺癌小鼠的体内生物分布荷H460肺癌小鼠的建模同实施例三十三，尾静脉给药以及动物的操作同实施例三十四。载DTX的CC9/CLPs、无靶向CLPs和DOX-LPs尾静脉给药。6小时后CC9/CLPs、CLPs和DOX-LPs在肿瘤积累的DTX量分别为9.02、2.42和1.82ID%/g，CC9/CLPs是CLPs和DOX-LPs的4和5倍，说明载药CC9/CLPs通过主动自靶向在肿瘤部位积累，如表4。实施例三十七载药靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs和自交联囊泡CLPs在荷A549皮下肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率实验选用体重为18~20克左右，4~6周龄的Balb/C裸鼠，在皮下注射5×106个A549人肺癌细胞，大约两周后，肿瘤大小为30~50mm3时开始实验。由cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)按1∶5混合制备的载DOX·HCl的靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs、CLPs、自由DOX·HCl以及PBS分别在0、4、8和12天通过尾静脉注射小鼠体内（DOX药量为10mg/kg）。在0~18天，每两天称量小鼠的体重，游标卡尺测量肿瘤体积，肿瘤体积计算方法为：V=（L×W×H）/2，（其中L为肿瘤的长度，W为肿瘤的宽度，H为肿瘤的厚度）。持续观察小鼠的生存到45天。由图12中可知，cRGD20/CLPs治疗组18天时，肿瘤得到明显抑制，而载药CLPs组肿瘤有一定的增长。DOX·HCl虽然也能抑制肿瘤的增长，但其小鼠体重在12天时降低了21%，说明对小鼠的毒副作用很大。相比之下cRGD20/CLPs和CLPs组的小鼠体重几乎没有改变，说明载药自交联囊泡对小鼠没有毒副作用。cRGD20/CLPs治疗组在60天后全部存活，DOX·HCl组在42天时已全部死亡，PBS组在43天时也全部死亡。因此，本发明的靶向自交联囊泡载药后可有效抑制肿瘤的增长，对小鼠没有毒副作用，还可以延长荷瘤老鼠的生存时间。实施例三十八载药靶向自交联囊泡cNGQ/CLPs和自交联囊泡CLPs在荷A549皮下肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率皮下A549肿瘤模型的建立、尾静脉给药方式和数据采集同实施例三十七。由cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)按1：5混合制备的载DOX·HCl的靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs、无靶向CLPs、DOX-LPs以及PBS尾静脉注射。由图13中可知，cNGQ20/CLPs治疗组18天时，肿瘤得到明显抑制，而载药CLPs组肿瘤有增长，小鼠体重几乎没有改变。DOX-LPs虽然也能抑制肿瘤的增长，但DOX-LPs组的小鼠体重在12天时降低了18%，说明其对小鼠的毒副作用很大。cNGQ20/CLPs治疗组在68天后全部存活，DOX·HCl组在32天时已全部死亡，PBS组42天时也全部死亡。因此，载药靶向自交联囊泡可有效抑制肿瘤，对小鼠没有毒副作用，可延长荷瘤老鼠的生存时间。实施例三十九载药靶向自交联囊泡CC9/CLPs和自交联囊泡CLPs在荷H460皮下肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率皮下H460肿瘤模型的建立同实施例三十三，尾静脉给药方式和数据采集同实施例三十七。肿瘤大小为30~50mm3时开始实验，由CC9-PEG6.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)和PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)按1：5混合制备装载CPT·HCl的靶向自交联囊泡CC9/CLPs、无靶向CLPs、自由CPT·HCl以及尾静脉注射。结果发现在CC9/CLPs治疗18天时，肿瘤得到明显抑制，而载药CLPs组肿瘤有少量增长，小鼠体重几乎没有改变。CPT·HCl虽然也能抑制肿瘤的增长，但CPT·HCl组小鼠体重在10天时降低了18%。CC9/CLPs治疗组在72天后全部存活，CPT·HCl组在28天时已全部死亡，PBS组在37天时也全部死亡。实施例四十载药靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs和自交联囊泡CLPs在荷A549原位肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率实验选用体重为18~20克左右，4~6周龄的Balb/C裸鼠，在肺部直接注射5×106个带有生物发光的A549人肺癌细胞（A549-Luc），大约10天后，通过小动物活体成像系统观察，老鼠肺部出现荧光，成功建立A549原位肺癌模型。接着，如实施例二十，由cRGD-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)按1：5混合制备的载DOX·HCl的靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs、CLPs、DOX·HCl以及PBS分别在0、4、8和12天通过尾静脉注射小鼠体内（DOX·HCl：10mg/kg）。从0~16天，每四天称量小鼠的体重，用小动物活体成像仪监测小鼠肺部肿瘤生物发光强弱，观察小鼠的生存到45天。见图14，cRGD20/CLPs治疗组16天内，肺部肿瘤生物发光强度持续减弱，而载药CLPs组肺部的肿瘤生物发光强度有一定增长，但两组体重几乎没有改变。DOX·HCl虽然也能抑制肿瘤的增长，但DOX·HCl组的小鼠体重在4天时降低了21%，说明其对小鼠的毒副作用很大。cRGD20/CLPs治疗组在45天后全部存活，DOX·HCl组在30天时已全部死亡，PBS组在20天时也全部死亡。因此，载药靶向自交联囊泡cRGD20/CLPs可有效抑制原位肺癌肿瘤的增长，对小鼠没有毒副作用，并有效延长荷瘤老鼠的生存时间。实施例四十一载药靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs和自交联囊泡CLPs在荷A549原位肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率A549原位肺癌的小鼠模型的建立、给药方式以及检测方式同实施例四十。由cNGQ-PEG6.5k-P(CDC4.6k-co-TMC18.6k)和PEG5k-P(CDC4.9k-co-TMC19k)按1：5混合制备的载DOX·HCl的靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs、无靶向CLPs、DOX-LPs以及PBS尾静脉注射。结果如图15所示，cNGQ20/CLPs治疗组16天内，肿瘤生物发光强度持续减弱，而载药CLP组肿瘤生物发光强度有一定增长，小鼠的体重几乎没有改变。DOX-LPs虽然也能抑制肿瘤增长，但DOX-LPs的小鼠体重在4天时降低了21%。cNGQ20/CLPs治疗组在45天后全部存活，DOX-LPs组在32时已全部死亡，PBS组在23天时也全部死亡。因此，载药靶向自交联囊泡cNGQ20/CLPs同样可有效抑制原位肺癌肿瘤的增长，对小鼠没有毒副作用，还可以延长荷瘤老鼠的生存时间。实施例四十二载药靶向自交联囊泡CC9/CLPs和自交联囊泡CLPs在荷A549原位肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率A549原位肺癌的小鼠模型的建立、给药方式以及检测方式同实施例四十。由cc9-PEG6.5k-P(CDC3.8k-co-LA13.8k)和PEG5k-P(CDC3.7k-co-LA14.6k)按1：5混合制备装载CPT·HCl的靶向自交联囊泡CC9/CLP、无靶向CLPs、CPT·HCl以及PBS注射入小鼠。CC9/CLPs治疗组16天时，肿瘤生物发光强度减弱，而载药CLPs组的肿瘤生物发光强度有一定增长，小鼠体重几乎没有发生改变。CPT·HCl虽然也能抑制肿瘤的增长，但CPT·HCl组的小鼠体重在3天时降低了21%，说明其对小鼠的毒副作用很大。CC9/CLPs治疗组在40天后全部存活，CPT·HCl组34时已全部死亡，PBS组21天时全部死亡。因此，载药靶向自交联囊泡CC9/CLPs可有效抑制原位肺癌肿瘤的增长，无毒副作用，并能延长荷瘤老鼠的生存时间。实施例四十三载药靶向自交联囊泡cRGD/CLPs和自交联囊泡CLPs荷A549原位肺癌的小鼠中的抑瘤效果、体重变化和存活率由AA-PEG3k-P(CDC3.9k-PDSC4.8k)和PEG1.9k-P(CDC3.6k-PDSC4.6k)按1：5混合制备装载PTX的自交联囊泡。然后如实施例二十一通过囊泡表面的的丙烯酸酯（AA）和cRGDfC的巯基的迈克尔加成反应制备载PTX的靶向自交联囊泡cRGD/CLP。DLS测定为85nm，粒径分布0.10。核磁和BCA蛋白试剂盒测试计算多肽的接枝率为92%。A549原位肺癌的小鼠模型的建立、给药方式以及检测方式同实施例四十。载PTX的cRGD/CLPs、无靶向自交联囊泡CLPs、Taxol以及PBS分别注射入小鼠。载PTX的cRGD/CLPs治疗组16天内，肿瘤生物发光强度持续减弱，而无靶向的CLPs组的肿瘤生物发光强度有增长，两组小鼠体重几乎没有发生改变。PTX虽然也能抑制肿瘤的增长，但PTX组的小鼠体重在12天时降低了10%，说明其对小鼠的毒副作用很大。载PTX的cRGD/CLPs治疗组在41天仍然存活，PTX组老鼠在29时已全部死亡，PBS组在32天时也全部死亡。因此，载PTX的cRGD/CLPs可有效抑制原位肺癌肿瘤的增长，无毒副作用，并可延长荷瘤老鼠的生存时间。采用上述类似的实验方法研究了多种载不同药物的自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡对荷肺癌的小鼠的影响，结果见表4。表4载药自交联聚合物囊泡和靶向自交联聚合物囊泡对肺癌的体内外抗肿瘤结果当前第1页1 2 3