通过重组菌株从葡萄糖生产木糖醇的制作方法

文档序号:11109328阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种能够产生木糖醇的重组宿主细胞,其中所述宿主细胞包含:

编码使用D-阿糖醇作为底物并且产生D-木酮糖作为产物的NAD+特异性D-阿糖醇4-氧化还原酶(EC 1.1.1.11)的异源核酸序列;和,

编码使用D-木酮糖作为底物并且产生木糖醇作为产物的NADPH特异性木糖醇脱氢酶的异源核酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞从D-葡萄糖生产D-阿糖醇,特别是在高渗透压培养基下。

3.根据权利要求2所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞不消耗作为唯一碳源的D-阿糖醇。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞选自细菌、真菌和酵母。

5.根据权利要求4所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞是嗜渗的或耐渗的酵母。

6.根据权利要求4所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞是奥默毕赤酵母(Pichia ohmeri)。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的重组宿主细胞,其中该NAD+特异性D-阿糖醇4-氧化还原酶(EC 1.1.1.11)来自大肠杆菌(E.coli)和/或青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)。

8.根据权利要求7所述的重组宿主细胞,其中该NAD+特异性D-阿糖醇4-氧化还原酶(EC 1.1.1.11)包含选自以下的序列或由其组成:SEQ ID No 2或43或具有1-3个氨基酸添加、取代或缺失的序列。

9.根据权利要求8所述的重组宿主细胞,其中编码该NAD+特异性D-阿糖醇4-氧化还原酶(EC 1.1.1.11)的序列包含SEQ ID No 3或SEQ ID No 42的序列,或者由其组成。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的重组宿主细胞,其中该NADPH特异性木糖醇脱氢酶是来自被突变以改变从NADH到NADPH的辅因子特异性的树干毕赤酵母(Pichia stipitis)或氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)的木糖醇脱氢酶。

11.根据权利要求10所述的重组宿主细胞,其中该NADPH特异性木糖醇脱氢酶包含以下序列或由其组成:SEQ ID No 5或8的序列或具有1-3个氨基酸添加、取代或缺失的序列。

12.根据权利要求11所述的重组宿主细胞,其中编码该NADPH特异性木糖醇脱氢酶的序列包含SEQ ID No 6或9的序列,或者由其组成。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞能够在48h培养之后在上清液中产生至少15g/l的木糖醇滴度。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞是选自保藏在CNCM的菌株I-4982、I-4960和I-4981的菌株。

15.根据权利要求1-13中任一项所述的重组宿主细胞,其中该宿主细胞包含编码NAD+特异性D-阿糖醇4-氧化还原酶的序列的若干拷贝和/或编码NADPH特异性木糖醇脱氢酶的序列的若干拷贝。

16.一种用于生产木糖醇的方法,该方法包括培养根据权利要求1-15中任一项所述的重组宿主细胞,并且回收木糖醇。

17.根据权利要求1-15中任一项所述的重组宿主细胞用于生产木糖醇的用途。

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