抗BRDU抗体及使用方法与流程

本发明涉及人源化抗BRDU抗体和人源化抗BRDU衍生物抗体，及使用人源化抗BRDU抗体和人源化抗BRDU衍生物抗体的方法。
背景技术：
：半抗原结合抗体可以用作捕获组件用于治疗性和诊断性应用。例如，半抗原结合实体(如荧光团、螯合试剂、肽、核酸、蛋白质、脂质、纳米颗粒和许多其他物质)可以与半抗原结合抗体和抗体衍生物反应。这使得能够有效检测这类“有效负载(payload)”，以及捕获、累积在希望的位置、交联及其他抗体介导的效应。由于半抗原的特征和组成可影响半抗原结合实体的组成和“行为”(包括大小、溶解性、活性、生物物理特性、PK、生物学效应等)，高度希望开发多种不同的半抗原结合实体。从而，可能将所选择的半抗原与给定的有效负载匹配，以产生优化的半抗原缀合物。随后，可将最优半抗原结合实体与该缀合物组合，以产生最优的抗体-半抗原-有效负载复合物。还希望具有人源化的半抗原结合实体，如抗体衍生物。这使得能够开展干扰(如治疗性应用中的免疫原性)风险显著降低的应用。本文所述的抗体结合BRDU以及BRDU衍生物。这些抗体在本文中称为“BRDU结合”或“抗BRDU”抗体。发明概述本发明提供抗BRDU抗体和抗BRDU衍生物抗体，及使用抗BRDU抗体和抗BRDU衍生物抗体的方法。本文中报道的一个方面是人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。此抗体特异性结合BRDU。在一个实施方案中，该抗体在重链可变结构域的第30位具有脯氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在重链可变结构域的第58位具有苯丙氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在重链可变结构域的第108位具有苏氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸，重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸，及重链可变结构域第108位的氨基酸残基苏氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含：(1)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(2)重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸；(3)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；(4)重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸；(5)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；和(6)重链可变结构域第108位的氨基酸残基色氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:02的HVR-H1。在一个实施方案中，该抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:03的HVR-H2。在一个实施方案中，该抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H2。在一个实施方案中，该抗体进一步包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体在轻链可变结构域的第49位包含氨基酸残基赖氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在轻链可变结构域第98位包含氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含轻链可变结构域第49位的氨基酸残基赖氨酸和轻链可变结构域第98位的氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体(1)包含重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸、重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸和重链可变结构域第108位的氨基酸残基苏氨酸；及(2)包含轻链可变结构域第49位的氨基酸残基赖氨酸和轻链可变结构域第98位的氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含：(1)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(2)重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸；(3)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；(4)重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸；(5)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；(6)重链可变结构域第108位的氨基酸残基色氨酸；(7)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(8)轻链可变结构域第49位的氨基酸残基赖氨酸；(9)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；(10)轻链可变结构域第98位的氨基酸残基亮氨酸；和(11)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)与氨基酸序列SEQIDNO:09具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与氨基酸序列SEQIDNO:10具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列，其中(1)包含重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸、重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸和重链可变结构域第108位的氨基酸残基苏氨酸；和(2)包含轻链可变结构域第49位的氨基酸残基赖氨酸和轻链可变结构域第98位的氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含VH序列SEQIDNO:09。在一个实施方案中，该抗体包含VL序列SEQIDNO:10。本文中报道的一个方面是包含VH序列SEQIDNO:09和VL序列SEQIDNO:10的抗体。在一个实施方案中，该抗体是全长IgG1抗体或全长IgG4抗体。在一个实施方案中，该抗体是单克隆抗体。在一个实施方案中，该抗体是结合BRDU的抗体片段。本文中报道的一个方面是鼠抗体的人源化形式，该鼠抗体包含源自氨基酸序列SEQIDNO:11的重链可变结构域和源自氨基酸序列SEQIDNO:12的轻链可变结构域，且特异性结合BRDU。在一个实施方案中，该抗体在重链可变结构域的第30位具有脯氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在重链可变结构域的第58位具有苯丙氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在重链可变结构域的第108位具有苏氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸，重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸，及重链可变结构域第108位的氨基酸残基苏氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在轻链可变结构域的第49位包含氨基酸残基赖氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体在轻链可变结构域的第98位包含氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体包含轻链可变结构域第49位的氨基酸残基赖氨酸和轻链可变结构域第98位的氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。在一个实施方案中，该抗体(1)包含重链可变结构域第30位的氨基酸残基脯氨酸、重链可变结构域第58位的氨基酸残基苯丙氨酸和重链可变结构域第108位的氨基酸残基苏氨酸；及(2)包含轻链可变结构域第49位的氨基酸残基赖氨酸和轻链可变结构域第98位的氨基酸残基亮氨酸(Kabat编号)。本文中报道的一个方面是包含本文中报道的抗体和可药用载体的药物制剂。本文中报道的一个方面是本文中报道的抗体用作药物。本文中报道的一个方面是本文中报道的抗体在制备药物中的用途。附图简述图1.A：进行SEC-MALLS分析来鉴定和表征抗TfR/BRDU双特异性抗体与BRDU标记的DNA的复合物，以及游离双特异性抗体和游离BRDU-DNA。复合物在244.9kDaMW处从柱洗脱，游离双特异性抗体在215.4kDaMW处检测到，游离BRDU-DNA在16.4kDaMW处检测到。B：进行SEC-MALLS分析来鉴定和表征抗TfR/BRDU双特异性抗体与BRDU标记的DNA的复合物，以及游离双特异性抗体和游离BRDU-DNA。复合物显示6.8nm的流体动力学半径，而游离双特异性抗体显示6.2nm的流体动力学半径。发明详述I.定义如本文所使用，重链和轻链的所有恒定区和结构域的氨基酸位置按照Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991)中描述并在本文中称为“Kabat编号”的Kabat编号系统编号。具体而言，Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991)的Kabat编号系统(参见647-660页)用于κ和λ同种型的轻链恒定结构域CL，KabatEU指数编号系统(参见661-723页)用于恒定重链结构域(CH1、铰合部、CH2和CH3)。用于本文目的的“受体人构架”是包含源自下文定义的人免疫球蛋白构架或人共有构架的轻链可变结构域(VL)构架或重链可变结构域(VH)构架的氨基酸序列的构架。“源自”人免疫球蛋白构架或人共有构架的受体人构架可以包含其相同氨基酸序列，或者它可以包含氨基酸序列改变。在一些实施方案中，氨基酸改变的数目为10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人构架在序列上与VL人免疫球蛋白构架序列或人共有构架序列相同。“亲和力”指分子(例如抗体)的单个结合部位与其结合配偶体(例如抗原)之间非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，本文所用的“结合亲和力”指内在的结合亲和力，其反映结合对(例如抗体和抗原)的成员之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力一般可通过解离常数(Kd)来表示。亲和力可以通过本领域公知的方法来测量，包括本文中所述的那些。用于测量结合亲和力的具体的说明性和示例性实施方案在下文中描述。“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一个或多个改变的抗体，与不具有这类改变的亲本抗体相比，这类改变导致抗体对抗原的亲和力的改善。术语“抗BRDU抗体”和“结合BRDU的抗体”指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合BRDU，使得该抗体可以在靶向BRDU中用作诊断剂和/或治疗剂。术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用并涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们显示希望得到的抗原结合活性。“抗体片段”指除完整抗体以外，包含完整抗体的部分的分子，该部分结合该完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；及从抗体片段形成的多特异性抗体。术语“嵌合”抗体指这样的抗体，其中部分重链和/或轻链源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同的来源或物种。抗体的“种类”指其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在5个主要的抗体种类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，这些种类中的几种可以进一步划分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同种类的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。本文所用的术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒剂包括但不限于放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂或化疗药物(例如氨甲喋呤、阿霉素、长春花生物碱(长春花新碱(vincristine)、长春灭瘟碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、苯丙氨酸氮芥(melphalan)、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其他嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，如核溶解酶；抗生素；毒素，如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体；及下文公开的多种抗肿瘤剂或抗癌剂。术语“源自”指通过在至少一个位置引入改变来从亲本氨基酸序列衍生氨基酸序列。因此，衍生的氨基酸序列在至少一个对应的位置(抗体Fc区的KabatEU指数编号系统编号)上不同于对应的亲本氨基酸序列。在一个实施方案中，源自亲本氨基酸序列的氨基酸序列在对应的位置上有一个以上氨基酸残基不同于亲本氨基酸序列。在一个实施方案中，源自亲本氨基酸序列的氨基酸序列在对应的位置上有十个以上氨基酸残基不同于亲本氨基酸序列。在一个实施方案中，源自亲本氨基酸序列的氨基酸序列在对应的位置上有15个以上氨基酸残基不同于亲本氨基酸序列。因此，亲本氨基酸序列形成所衍生的氨基酸序列的基础。“效应子功能”指可归因于抗体的Fc区且随抗体种类而变的那些生物学活性。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和依赖补体的细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；依赖抗体的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；及B细胞激活。药物(例如药物制剂)的“有效量”指对在必要的剂量和时期内达到希望得到的治疗或预防结果有效的量。本文的术语“Fc区”用来定义免疫球蛋白重链的C端区域，其包含至少部分恒定区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基端。但是，Fc区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文另有说明，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号按照Kabat,E.A.等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991),NIHPublication91-3242中所述的EU编号系统，也称为EU指数。“构架”或“FR”指高变区(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR一般由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列一般按以下顺序出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，指具有基本类似于天然抗体结构的结构或具有包含本文所定义的Fc区的重链的抗体。术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，指已将外源核酸引入其中的细胞，包括这类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括最初转化的细胞及从其衍生的后代，而不考虑传代数。后代的核酸含量可以并非与亲本细胞完全相同，而是可以包含突变。本文包括具有与在最初转化的细胞中筛选或选择的功能或生物学活性相同的功能和生物学活性的突变体后代。“人抗体”是具有这样的氨基酸序列的抗体，该氨基酸序列对应于由人或人细胞产生或源自利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列。人抗体的此定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。“人共有构架”是代表人免疫球蛋白VL或VH构架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的构架。通常，该人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列亚组。通常，该序列亚组是Kabat,E.A.等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991),NIHPublication91-3242,1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，该亚组是Kabat等,上文中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，该亚组是Kabat等,上文中的亚组III。“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含至少一个且通常为两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部HVR(例如CDR)对应于非人抗体的那些，而全部或基本上全部FR对应于人抗体的那些。人源化抗体可以可选地包含源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如非人抗体)的“人源化形式”指已进行了人源化的抗体。本文所用的术语“高变区”或“HVR”指抗体可变结构域的在序列上高变和/或形成结构确定的环(“高变环”)的区域中的每一个。通常，天然四链抗体包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。HVR一般包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列变异性和/或涉及抗原识别。示例性高变环存在于氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)(Chothia,C.和Lesk,A.M.,J.Mol.Biol.196(1987)901-917)。示例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)存在于L1的氨基酸残基24-34、L2的氨基酸残基50-56、L3的氨基酸残基89-97、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-65和H3的氨基酸残基95-102(Kabat,E.A.等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991),NIHPublication91-3242)。除VH中的CDR1外，CDR一般包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其是接触抗原的残基。SDR包含在CDR的称为缩短的CDR或a-CDR的区域内。示例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)存在于L1的氨基酸残基31-34、L2的氨基酸残基50-55、L3的氨基酸残基89-96、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-58和H3的氨基酸残基95-102处(参见Almagro,J.C.和Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633)。除非另有说明，本文按照Kabat等,上文编号可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如FR残基)。“免疫缀合物”是与一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒剂)缀合的抗体。“个体(individual)”或“对象(subject)”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于饲养的动物(例如牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类(例如人类和非人灵长类，如猴)、兔和啮齿类(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，该个体或对象是人。“分离的”抗体是已从其天然环境的成分分开的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至通过例如电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析(例如离子交换或反相HPLC)测定的纯度大于95％或99％。用于评估抗体纯度的方法的综述参见例如Flatman,S.等,J.Chrom.B848(2007)79-87。“分离的”核酸指已从其天然环境的成分分开的核酸分子。分离的核酸包括包含在通常含有该核酸分子的细胞中的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或不同于其天然染色体位置的染色体位置上。“分离的编码抗BRDU抗体的核酸”指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括单个载体或分开的载体中的这种(类)核酸分子，及存在于宿主细胞中的一个或多个位置上的这种(类)核酸分子。本文所用的术语“单克隆抗体”指获自基本上同质的抗体群体的抗体，即除了例如包含天然存在的突变或在产生单克隆抗体制剂期间出现的可能的变体抗体(这类变体通常以较小的量存在)外，包含在该群体中的各个抗体相同和/或结合相同的表位。与通常包含抗不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体抗抗原上的单个决定簇。因此，修饰词“单克隆”指抗体获自基本上同质的抗体群体的特征，而不解释为需要通过任意具体的方法来产生该抗体。例如，将要按照本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术来制备，其包括但不限于杂交瘤法、重组DNA法、噬菌体展示法和利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文描述用于制备单克隆抗体的这类方法和其他示例性方法。“裸抗体”指未与异源部分(例如细胞毒性部分)或放射性标记缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物制剂中。“天然抗体”指天然存在的具有不同结构的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是由二硫键结合在一起的两条相同的轻链和两条相同的重链组成的约150,000道尔顿的异源四聚体糖蛋白。从N端至C端，每条重链具有可变区(VH)，也称为可变重链结构域或重链可变结构域，随后是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N端至C端，每条轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，随后是恒定轻链(CL)结构域。根据其恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体的轻链分配至两个类型之一，称为κ和λ。术语“包装说明书”用来指通常包含在治疗性产品的商业包装中的说明书，其包含关于适应症、用法、剂量、施用、联合治疗、禁忌症的信息和/或有关这类治疗性产品的用途的警告的信息。就参考多肽序列而言的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为在比对序列并在必要时引入缺口来达到最大百分比序列同一性，而不将任意保守取代视为序列同一性的部分之后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。可以以本领域技术之内的多种方式来实现测定百分比氨基酸序列同一性为目的的比对，例如，使用公开可得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较的序列的全长内达到最大比对所需的任意算法。但是，为了本文的目的，用序列比较计算机程序ALIGN-2来产生％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，源代码已随用户文件提交美国版权办公室,WashingtonD.C.,20559，它在美国版权办公室注册在美国版权注册号TXU510087之下。ALIGN-2程序从Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,California公开可得，或者可以从源代码编译。ALIGN-2程序应编译用在UNIX操作系统上，包括数字UNIXV4.0D。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变动。在使用ALIGN-2来进行氨基酸序列比较的情况下，按以下计算给定氨基酸序列A与给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(其可以备选地叙述为，具有或包含与给定氨基酸序列B的某％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)：100乘以分数X/Y其中X是在该程序的A和B的比对中通过序列比对程序ALIGN-2评分为相同的匹配的氨基酸残基的数目，且其中Y是B中的氨基酸残基的总数。应理解，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度时，A与B的％氨基酸序列同一性将不等于B与A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中使用的所有％氨基酸序列同一性值都是用ALIGN-2计算机程序按前一段落中所述获得。术语“药物制剂”指这样的制备物，其处于这样的形式，使得包含在其中的活性成分的生物学活性有效，且不包含对将要施用该制剂的个体具有不可接受的毒性的附加成分。“可药用载体”指药物制剂中除活性成分外的成分，其对个体无毒性。可药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。本文所用的术语“BRDU”指具有化学式5-溴-2’-脱氧尿苷的溴脱氧尿苷。其他缩写是BrdU、BUdR、BrdUrd。本文所用的“治疗”(及其语法变形)指改变所治疗的个体的自然过程的尝试中的临床干预，且可以为了预防而进行或在临床病理过程中进行。希望得到的治疗作用包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接的病理学结果、预防转移、减慢疾病进展速率、改善或缓和疾病状态、及缓解或改善的预后。在一些实施方案中，用本发明的抗体来延迟疾病的发展或减慢疾病的进展。术语“可变区”或“可变结构域”指抗体重链或轻链的涉及该抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的构架区(FR)和三个高变区(HVR)(参见例如Kindt,T.J.等KubyImmunology,第6版,W.H.FreemanandCo.,N.Y.(2007),第91页)。单个VH或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域筛选互补的VL或VH结构域的文库，来分离结合该特定抗原的抗体。参见例如Portolano,S.等,J.Immunol.150(1993)880-887；Clarkson,T.等,Nature352(1991)624-628。本文所用的术语“载体(vector)”指能够增殖与它连接的另一核酸的核酸分子。该术语包括作为自主复制核酸结构的载体，以及掺入它所引入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与它们有效连接的核酸的表达。这类载体在本文中称为“表达载体”。术语“半抗原”指只有在附着于大负载者(carrier)(如蛋白质)时才可引出免疫反应的小分子。示例性半抗原有苯胺、邻、间和对氨基苯甲酸、醌、肼屈嗪(hydralazine)、卤烷、荧光素、生物素、BRDU、洋地黄毒苷、茶碱和二硝基苯酚。在一个实施方案中，半抗原是生物素或洋地黄毒苷或茶碱或碳硼烷或BRDU。在一个实施方案中，半抗原是BRDU。术语“缀合至…的BRDU”指直接或间接共价连接至另一部分(如效应核酸、多肽或标记)的BRDU残基。在一个优选实施方案中，该另一部分是核酸。术语“共价复合物形成”指例如在抗BRDU抗体和BRDU之间形成非共价复合物后，在复合物中的两个配偶体之间形成共价键。共价键的形成在无需加入其他反应物的情况下发生。II.组合物和方法在一方面，本发明基于结合BRDU的人源化抗体。本文提供这些抗体。通过用对含有BRDU的核酸的结合特异性作为抗体的通用有效负载特征，本发明的抗体例如用作用于结合含有BRDU的核酸的单特异性抗体，及用作用于诊断或治疗所有种类疾病的多特异性抗体。A.示例性抗BRDU抗体在一方面，本发明提供分离的结合BRDU的抗体。在某些实施方案中，该抗BRDU抗体是人源化抗BRDU抗体。在某些实施方案中，本文报道的抗BRDU抗体结合含有BRDU的核酸而不干扰核酸的生物学活性。因此，如果抗体是单特异性抗体，则这些抗体可以用于改善含有BRDU的核酸的药代动力学特性。另外，如果抗体是这样的双特异性或多特异性抗体，则这些抗体可以用于靶向递送含有BRDU的核酸，该双特异性或多特异性抗体的一种结合特异性针对BRDU且可以用作通用有效负载特异性，而第二结合特异性特异性结合例如细胞表面分子并提供双特异性或多特异性抗体的靶向特征/成分。对于靶向递送核酸(即有效负载核酸)至或入细胞，希望修饰尽可能少地引入有效负载核酸。通过将核酸与多肽缀合，在核酸中引入了显著的修饰。备选地，可能将核酸与非核苷酸半抗原缀合。与从缀合至多肽所产生的修饰相比，从其产生的核酸修饰较少。但非核苷酸半抗原(如生物素、洋地黄毒苷、茶碱、荧光素)仍例如在其结构上显著不同于核苷酸。因此，与非核苷酸半抗原的缀合仍可以产生不可耐受的修饰。现已发现，胸苷类似物即溴脱氧尿苷(BRDU)可以用于提供半抗原，该半抗原一方面可以被抗体识别，另一方面不在有效负载核酸中引入显著的修饰。一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含选自以下的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含选自以下的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:02的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含选自以下的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:03的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含选自以下的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:02的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:03的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含选自以下的至少一个、至少两个或全部三个VHHVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3和含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。在另一实施方案中，该抗体包含含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3、含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3和含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-L2。在另一实施方案中，该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。另一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含选自以下的至少一个、至少两个或全部三个VLHVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。另一方面，本发明的抗BRDU抗体包含：(a)包含选自以下的至少一个、至少两个或全部三个VHHVR序列的VH结构域：(i)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；和(b)包含选自以下的至少一个、至少两个或全部三个VLHVR序列的VL结构域：(i)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。另一方面，本发明提供抗BRDU抗体，其包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗BRDU抗体是人源化的。已发现，人源化抗BRDU抗体在特定位置需要特定残基，以维持非人源化亲本抗体的特征。人源化抗BRDU抗体在重链可变结构域中的Kabat位置30处包含氨基酸残基P。人源化抗BRDU抗体在重链可变结构域中的Kabat位置58处包含氨基酸残基F。人源化抗BRDU抗体在重链可变结构域中的Kabat位置108处包含氨基酸残基T。在一个实施方案中，人源化抗BRDU抗体包含以上实施方案的任一个中的HVR，且进一步包含受体人构架，例如人免疫球蛋白构架或人共有构架。在一个实施方案中，人源化抗BRDU抗体包含含有以上实施方案的任一个中的HVR-H的VH，且进一步包含以下的一个或多个：-重链可变结构域第30位的P；和/或-重链可变结构域第58位的F；和/或-重链可变结构域第108位的T；和/或-轻链可变结构域第49位的K；和/或-轻链可变结构域第98位的L(所有位置均按照Kabat)。重链可变结构域的Kabat位置30对应于SEQIDNO:09和11的残基号30。重链可变结构域的Kabat位置58对应于SEQIDNO:09和11的残基号58。重链可变结构域的Kabat位置108对应于SEQIDNO:09和11的残基号108。轻链可变结构域的Kabat位置49对应于SEQIDNO:10和12的残基号49。轻链可变结构域的Kabat位置98对应于SEQIDNO:10和12的残基号98。可以引入这些改变(回复突变)来提高人源化抗BRDU抗体的结合亲和力。另一方面，抗BRDU抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:09具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列包含取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含该序列的抗BRDU抗体保留结合BRDU的能力。在某些实施方案中，在SEQIDNO:09中取代、插入和/或缺失了总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失存在于HVR之外的区域(即在FR中)。可选地，抗BRDU抗体包含SEQIDNO:09中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，该VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01或02的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:03或04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。另一方面，提供抗BRDU抗体，其中该抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:10具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列包含取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含该序列的抗BRDU抗体保留结合BRDU的能力。在某些实施方案中，在SEQIDNO:10中取代、插入和/或缺失了总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，取代、插入或缺失存在于HVR之外的区域(即在FR中)。可选地，抗BRDU抗体包含SEQIDNO:10中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，该VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。另一方面，提供抗BRDU抗体，其中该抗体包含上文提供的任意实施方案中的VH，及上文提供的任意实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQIDNO:09和SEQIDNO:10中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在本发明的另一方面，任意以上实施方案的抗BRDU抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗BRDU抗体是抗体片段，例如Fv,Fab、Fab’、scFv、双抗体或F(ab’)2片段。在另一实施方案中，该抗体是本文定义的全长抗体，例如完整的IgG1或IgG4抗体或其他抗体种类或同种型。在另一方面，任意以上实施方案的抗BRDU抗体可以单独地或组合地掺入以下1-5章节中所述的任意特征：1.抗体亲和力可以通过用以下测定所述的Fab形式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定(RIA)来测量Kd。例如，通过在未标记抗原的滴定系列的存在下用最小浓度的(125I)-标记抗原平衡Fab，然后用抗-Fab抗体包被的平板捕获结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见例如Chen,Y.等,J.Mol.Biol.293(1999)865-881)。为了确定用于测定的条件，用50mM碳酸钠(pH9.6)中的5μg/ml的捕获抗-Fab抗体(CappelLabs)过夜包被多孔板(ThermoScientific)，然后用含2％(w/v)牛血清白蛋白的PBS在室温(约23℃)下封闭2至5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目的Fab的系列稀释混合(例如，与Presta,L.G.等,CancerRes.57(1997)4593-4599中的抗-VEGF抗体Fab-12的评估一致)。然后过夜孵育目的Fab；但是，孵育可以持续更长时期(例如约65小时)，以确保达到平衡。然后，将混合物转移至捕获平板在室温下孵育(例如孵育1小时)。然后去除溶液，用含0.1％聚山梨酸酯20()的PBS洗涤平板8次。平板干燥后，加入150μl/孔的闪烁体(MICROSCINT-20TM；Packard)，在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上计数平板10分钟。选择给出小于或等于最大结合的20％的每种Fab的浓度用于竞争结合测定。备选地，可以使用-2000或-3000或T-100(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，用表面等离振子共振测定来测量Kd。例如，将抗原按～10个响应单位(RU)固定在CM5芯片，并用它在25℃下测量Kd值。简言之，按照供应商的说明书，用N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物传感芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。在按5μl/分钟的流速注入前，用10mM柠檬酸钠pH4.8将抗原稀释至5μg/ml(～0.2μM)，以达到约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺来封闭未反应的基团。对于动力学测量，按约25μl/分钟的流速在25℃下注入两倍系列稀释于含0.05％聚山梨酸酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)的Fab(0.78nM至500nM)。通过同时拟合结合传感图和解离传感图，用简单的1:1Langmuir结合模型(EvaluationSoftware版本3.2)计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。将平衡解离常数(Kd)计算为比值koff/kon。参见例如Chen,Y.等,J.Mol.Biol.293(1999)865-881。如果通过以上表面等离振子共振测定测量的结合速率(on-rate)超过106M-1s-1，则可以通过使用荧光淬灭技术来测定结合速率，如在分光计，如装配停流的分光光度计(AvivInstruments)或具有搅拌杯的8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中测量，该技术在浓度逐渐提高的抗原的存在下测量含20nM抗-抗原的抗体(Fab形式)的PBSpH7.2在25℃下的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的提高或降低。2.抗体片段在某些实施方案中，本文提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段，及下文所述的其他片段。某些抗体片段的综述参见Hudson,P.J.等Nat.Med.9(2003)129-134。scFv片段的综述参见例如PluckthünA.,inThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,113卷,Rosenburg和Moore编辑,(Springer-Verlag,NewYork)(1994),269-315页；还参见WO93/16185；及US5,571,894和5,587,458。包含补救受体结合表位残基且具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的讨论参见US5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合部位的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。参见例如EP404,097；WO1993/01161；Hudson,P.J.等,Nat.Med.9(2003)129-134；及Hollinger,P.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90(1993)6444-6448。三抗体和四抗体还描述于Hudson,P.J.等,Nat.Med.9(2003)129-134中。单结构域抗体是包含抗体的重链可变结构域的全部或部分或轻链可变结构域的全部或部分的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如6,248,516B1)。可以通过包括但不限于本文所述的完整抗体的蛋白酶解消化以及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌(E.coli)或噬菌体)产生的多种技术来制备抗体片段。3.嵌合抗体和人源化抗体在某些实施方案中，本文提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于例如US4,816,567；和Morrison,S.L.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81(1984)6851-6855中。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如衍生自小鼠、大鼠、仓鼠、兔、或非人灵长类(如猴)的可变区)和人恒定区。在另一实例中，嵌合抗体是“种类转换”抗体，其中种类或亚类已从亲本抗体的种类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，人源化非人抗体来降低对人类的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR，例如CDR(或其部分)衍生自非人抗体，FR(或其部分)衍生自人抗体序列。人源化抗体还将可选地包含至少部分人恒定区。在一些实施方案中，用对应的来自非人抗体(例如从其衍生HVR残基的抗体)的残基取代人源化抗体中的一些FR残基，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。人源化抗体和制备它们的方法综述于例如Almagro,J.C.和Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633中，并进一步描述于例如Riechmann,I.等,Nature332(1988)323-329；Queen,C.等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA86(1989)10029-10033；US5,821,337、US7,527,791、US6,982,321；US7,087,409；Kashmiri,S.V.等,Methods36(2005)25-34(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan,E.A.,Mol.Immunol.28(1991)489-498(描述“表面重建”)；Dall’Acqua,W.F.等,Methods36(2005)43-60(描述“FR改组”)；Osbourn,J.等,Methods36(2005)61-68；及Klimka,A.等,Br.J.Cancer,83(2000)252-260(描述FR改组的“指导选择”方法)中。可以用来进行人源化的人构架区包括但不限于：用“最适”法选择的构架区(参见例如Sims,M.J.等,J.Immunol.151(1993)2296-2308)；衍生自具体亚组的轻链或重链可变区的人抗体的共有序列的构架区(参见例如Carter,P.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89(1992)4285-4289；和Presta,L.G.等,J.Immunol.151(1993)2623-2632)；人成熟(体细胞突变)构架区或人种系构架区(参见例如Almagro,J.C.和Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633)；和衍生自筛选FR文库的构架区(参见例如Baca,M.等,J.Biol.Chem.272(1997)10678-10684和Rosok,M.J.等,J.Biol.Chem.271(1996)22611-22618)。4.多特异性抗体在某些实施方案中，本文提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同部位具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，该结合特异性中的一种针对BRDU，另一种针对任意其他抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以与BRDU的两个不同表位结合。还可以用双特异性抗体来将细胞毒剂定位至表达BRDU的细胞。双特异性抗体可以作为全长抗体或抗体片段制备。用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein,C.和Cuello,A.C.,Nature305(1983)537-540；WO93/08829；及Traunecker,A.等,EMBOJ.10(1991)3655-3659)和“杵入臼”改造(参见例如US5,731,168)。还可以通过以下来制备多特异性抗体：用于制备抗体Fc-异二聚体分子的工程静电引导作用(WO2009/089004)；交联两种或多种抗体或片段(参见例如US4,676,980和Brennan,M.等,Science229(1985)81-83)；用亮氨酸拉链来产生双特异性抗体(参见例如Kostelny,S.A.等,J.Immunol.148(1992)1547-1553)；使用用于制备双特异性抗体片段的“双抗体”技术(参见例如Holliger,P.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90(1993)6444-6448)；使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber,M.等,J.Immunol.152(1994)5368-5374)；按例如Tutt,A.等,J.Immunol.147(1991)60-69中所述制备三特异性抗体。本文还包括具有三个或多个功能性抗原结合部位的改造抗体，包括“章鱼抗体”(参见例如US2006/0025576)。本文的抗体或片段还可以包括含有与BRDU以及另一不同抗原结合的抗原结合部位的“双重作用Fab”或“DAF”(参见例如US2008/0069820)。本文的抗体或片段还可以包括WO2009/080251、WO2009/080252、WO2009/080253、WO2009/080254、WO2010/112193、WO2010/115589、WO2010/136172、WO2010/145792和WO2010/145793中所述的多特异性抗体。在本文报道的一个实施方案中，本文报道的多特异性抗体是双特异性二价抗体。在一个实施方案中，本文报道的双特异性二价抗体的特征在于包含：a)特异性结合第一抗原的第一全长抗体的重链和轻链；和b)特异性结合第二抗原的第二全长抗体的修饰重链和修饰轻链，其中恒定结构域CL和CH1相互取代。基于此双特异性二价抗体型式的抗体称为CrossMab。在一个实施方案中，该双特异性二价抗体的特征在于包含：a)特异性结合第一抗原的第一全长抗体的重链和轻链；和b)特异性结合第二抗原的第二全长抗体的重链和轻链，其中重链的N端通过肽接头连接至轻链的C端。基于此双特异性二价抗体型式的抗体称为单臂单链Fab(OascFab)。5.抗体变体在某些实施方案中，考虑本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可以希望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。可以通过在编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。这类修饰包括例如从抗体的氨基酸序列缺失残基和/或在抗体的氨基酸序列内插入残基和/或取代抗体的氨基酸序列内的残基。可以进行缺失、插入和取代的任意组合来达到最终的构建体，只要最终的构建体具有希望的特征，例如抗原结合。a)取代、插入和缺失变体在某些实施方案中，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。进行取代诱变的目的位点包括HVR和FR。表1中在“优选的取代”的表头下显示保守取代。表1中在“示例性取代”的表头下提供更实质性的改变，如下文参考氨基酸侧链种类进一步描述。可以在目的抗体中引入氨基酸取代，并针对希望的活性(例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC)筛选产物。表1原残基示例性取代优选的取代Ala(A)Val；Leu；IleValArg(R)Lys；Gln；AsnLysAsn(N)Gln；His；Asp,Lys；ArgGlnAsp(D)Glu；AsnGluCys(C)Ser；AlaSerGln(Q)Asn；GluAsnGlu(E)Asp；GlnAspGly(G)AlaAlaHis(H)Asn；Gln；Lys；ArgArgIle(I)Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸LeuLeu(L)正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；PheIleLys(K)Arg；Gln；AsnArgMet(M)Leu；Phe；IleLeuPhe(F)Trp；Leu；Val；Ile；Ala；TyrTyrPro(P)AlaAlaSer(S)ThrThrThr(T)Val；SerSerTrp(W)Tyr；PheTyrTyr(Y)Trp；Phe；Thr；SerPheVal(V)Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸Leu氨基酸可以按照共同的侧链性质分组：(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。非保守取代将需要将这些种类之一的成员换为另一种类。一类取代变体涉及取代亲本抗体(例如人源化抗体或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，所得到的选择用于进一步研究的一种或多种变体将相对于亲本抗体具有某些生物学特性(例如提高的亲和力、降低的免疫原性)的修饰(例如改善)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。示例性取代变体是亲和力成熟的抗体，其可以例如用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术(如本文所述的那些)方便地产生。简言之，突变一个或多个HVR残基，将变体抗体展示在噬菌体上，并针对具体的生物学活性(例如结合亲和力)进行筛选。可以在HVR中进行改变(例如取代)，例如以改善抗体亲和力。可以在HVR“热点”(即由在体细胞成熟过程中以高频率发生突变的密码子编码的残基)(参见例如Chowdhury,P.S.,MethodsMol.Biol.207(2008)179-196)和/或SDR(a-CDR)中进行这类改变，针对结合亲和力测试所得到的变体VH或VL。通过构建二级文库并从二级文库重新选择的亲和力成熟已描述于例如Hoogenboom,H.R.等inMethodsinMolecularBiology178(2002)1-37中。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如易错PCR、链改组或寡核苷酸定点诱变)中的任一种来在选择用于成熟的可变基因中引入多样性。然后产生二级文库。然后筛选该文库来鉴定具有希望的亲和力的任意抗体变体。引入多样性的另一种方法涉及HVR定点途径，其中随机化几个HVR残基(例如每次4-6个残基)。可以例如用丙氨酸扫描诱变或模拟来明确地鉴定出涉及抗原结合的HVR残基。尤其是通常靶向CDR-H3和CDR-L3。在某些实施方案中，取代、插入或缺失可以发生在一个或多个HVR内，只要这类改变不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在HVR中进行不实质性降低结合亲和力的保守改变(例如本文提供的保守取代)。这类改变可以在HVR“热点”或SDR之外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，各HVR未改变，或包含不超过一个、两个或三个氨基酸取代。如Cunningham,B.C.和Wells,J.A.,Science244(1989)1081-1085所述，用于鉴定可以靶向进行诱变的抗体的残基或区域的方法称为“丙氨酸扫描诱变”。在此方法中，鉴定残基或靶残基组(例如带电荷的残基，如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如丙氨酸或多聚丙氨酸)取代，以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在证明对最初的取代的功能敏感性的氨基酸位置引入其他取代。备选地或此外，用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体和抗原之间的接触点。这类接触残基和邻近残基可以作为取代的候选残基靶向或消除。可以筛选变体来确定它们是否包含希望的特性。氨基酸序列插入包括长度在一个残基至含有一百或更多个残基的多肽的范围内的氨基端和/或羧基端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N端蛋氨酰残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N或C端与酶(例如，对于ADEPT)或增加抗体的血清半衰期的多肽的融合。一个优选的变体是单半胱氨酸变体，其中重链可变结构域中Kabat位置53的氨基酸残基是半胱氨酸。b)糖基化变体在某些实施方案中，改变本文提供的抗体来提高或降低该抗体糖基化的程度。通过改变氨基酸序列，使得产生或去除一个或多个糖基化位点，可以方便地实现对抗体进行糖基化位点的加入或缺失。在抗体包含Fc区时，可以改变附着于Fc区的糖类。哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分枝的双触角寡糖，其一般通过N连接附着于Fc区的CH2结构域的Asn297(参见例如Wright,A.和Morrison,S.L.,TIBTECH15(1997)26-32)。寡糖可以包括多种糖类，例如甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及在双触角寡糖结构的“茎”中附着于GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以进行本发明的抗体中的寡糖的修饰来产生具有某些改善的特性的抗体变体。在一个实施方案中，提供具有缺乏(直接或间接)附着于Fc区的岩藻糖的糖类结构的抗体变体。例如，这种抗体中的岩藻糖的量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。相对于通过例如WO2008/077546中所述的MALDI-TOF质谱法测量的附着于Asn297的所有糖结构(例如复合、杂合和高甘露糖结构)的总和，通过计算Asn297处的糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖的量。Asn297指定位在Fc区中的约297位(Fc区残基的EU编号)的天冬酰胺残基；但是，由于抗体中小的序列变异，Asn297也可以定位在297位上游或下游约±3氨基酸，即在294位和300位之间。这类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能(参见例如US2003/0157108；US2004/0093621)。涉及“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”的抗体变体的出版物的实例包括：US2003/0157108；WO2000/61739；WO2001/29246；US2003/0115614；US2002/0164328；US2004/0093621；US2004/0132140；US2004/0110704；US2004/0110282；US2004/0109865；WO2003/085119；WO2003/084570；WO2005/035586；WO2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki,A.等,J.Mol.Biol.336(2004)1239-1249；Yamane-Ohnuki,N.等,Biotech.Bioeng.87(2004)614-622。能够产生去岩藻糖基化的抗体的细胞系的实例包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka,J.等,Arch.Biochem.Biophys.249(1986)533-545；US2003/0157108；及WO2004/056312，尤其是在实施例11中)和敲除细胞系，如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除的CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki,N.等,Biotech.Bioeng.87(2004)614-622；Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.94(2006)680-688；和WO2003/085107)。还提供具有二等分寡糖的抗体变体，例如其中附着于抗体Fc区的双触角寡糖被GlcNAc二等分。这类抗体变体可以具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。这类抗体变体的实例描述于例如WO2003/011878、US6,602,684和US2005/0123546中。还提供在附着于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。这类抗体变体可以具有改善的CDC功能。这类抗体变体描述于例如WO1997/30087、WO1998/58964和WO1999/22764中。c)Fc区变体在某些实施方案中，可以向本文提供的抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸修饰，从而产生Fc区变体。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置处含有氨基酸修饰(例如取代)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc区)。在某些实施方案中，本发明考虑具有一些但不是全部效应子功能的抗体变体，这使得它成为其中抗体的体内半衰期重要但某些效应子功能(如补体和ADCC)不必要或有害的应用所希望的候选者。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定来确认CDC和/或ADCC活性的降低/减损。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定来确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达Fc(RIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达总结在Ravetch,J.V.和Kinet,J.P.,Annu.Rev.Immunol.9(1991)457-492的第464页上的表3中。评估目的分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于US5,500,362(参见例如Hellstrom,I.等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA83(1986)7059-7063和Hellstrom,I.等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA82(1985)1499-1502)；US5,821,337(参见Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166(1987)1351-1361)中。备选地，可以利用非放射性测定方法(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.MountainView,CA)；和CytoTox非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI))。用于这类测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。备选地或此外，可以在体内，例如在诸如公开于Clynes,R.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA95(1998)652-656中的动物模型的动物模型中评估目的分子的ADCC活性。还可以进行C1q结合测定来确认抗体不能结合C1q，并因此缺乏CDC活性。参见例如WO2006/029879和WO2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体活化，可以进行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro,H.等,J.Immunol.Methods202(1996)163-171；Cragg,M.S.等,Blood101(2003)1045-1052；及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood103(2004)2738-2743)。还可以用本领域已知的方法进行FcRn结合和体内清除/半衰期测定(参见例如Petkova,S.B.等,Int.Immunol.18(2006)1759-1769)。具有减少的效应子功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个取代的那些(US6,737,056)。这类Fc变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或多个处具有取代的Fc突变体，包括具有残基265和297至丙氨酸的取代的所谓“DANA”Fc突变体(US7,332,581)。描述了某些具有改善或减少的与FcR的结合的抗体变体(参见例如US6,737,056；WO2004/056312；及Shields,R.L.等,J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604)。在某些实施方案中，抗体变体包含具有一个或多个改善ADCC的氨基酸取代(例如Fc区的298、333和/或334位(残基的EU编号)的取代)的Fc区。在一些实施方案中，例如，如US6,194,551、WO99/51642和Idusogie,E.E.等,J.Immunol.164(2000)4178-4184中所述，在Fc区中进行改变，该改变导致改变(即改善或减少)的C1q结合和/或依赖补体的细胞毒性(CDC)。具有增加的半衰期和改善的与新生儿Fc受体(FcRn)(其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer,R.L.等,J.Immunol.117(1976)587-593和Kim,J.K.等,J.Immunol.24(1994)2429-2434))的结合的抗体描述于US2005/0014934中。那些抗体包含其中具有一个或多个取代的Fc区，该取代改善Fc区与FcRn的结合。这类Fc变体包括在Fc区残基238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中的一个或多个处具有取代的那些，例如，Fc区残基434的取代(US7,371,826)。关于Fc区变体的其他实例，还参见Duncan,A.R.和Winter,G.,Nature322(1988)738-740；US5,648,260；US5,624,821；和WO94/29351。d)半胱氨酸改造的抗体变体在某些实施方案中，可以希望产生半胱氨酸改造的抗体，例如“thioMAb”，其中用半胱氨酸残基取代抗体的一个或多个残基。在具体实施方案中，取代的残基存在于抗体的可接近部位。通过用半胱氨酸取代那些残基，从而将反应性巯基放置在抗体的可接近部位，并可以用于将抗体缀合至其他部分，如药物部分或接头-药物部分，以产生本文进一步描述的免疫缀合物。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸取代以下残基中的任意一个或多个：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；重链Fc区的S400(EU编号)。半胱氨酸改造的抗体可以按例如美国专利号7,521,541中所述产生。e)抗体衍生物在某些实施方案中，可以进一步修饰本文提供的抗体来包含本领域已知且易于得到的附加的非蛋白质部分。适合用于衍生化抗体的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯比咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(同聚物或随机共聚物)、葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、propropyleneglycol同聚物、prolypropyleneoxide/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛可以在制备中具有优势。聚合物可以具有任意分子量，且可以分枝或不分枝。附着于抗体的聚合物的数目可以不同，且如果附着超过一个聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可以根据包括但不限于抗体要改善的具体特性或功能、抗体衍生物是否将在确定的条件下用于治疗等的考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型。在另一实施方案中，提供抗体和可通过暴露于照射来选择性加热的非蛋白质部分的缀合物。在一个实施方案中，该非蛋白质部分是碳纳米管(Kam,N.W.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102(2005)11600-11605)。照射可以具有任意波长，且包括但不限于不损害普通细胞，但加热非蛋白质部分至杀死靠近抗体-非蛋白质部分的细胞的温度的波长。f)异二聚化为了产生多特异性抗体，可以有必要促进异二聚体重链配对的形成。存在几种进行CH3修饰来迫使异二聚化的方法，其详细描述于例如WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO2007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012058768、WO2013157954、WO2013096291中。在所有这类方法中，通常以互补方式改造第一重链的CH3结构域和第二重链的CH3结构域二者，使得每个CH3结构域(或包含它的重链)不再可与其自己同二聚化，而是迫使与互补的改造的另一CH3结构域异二聚化(使得第一和第二CH3结构域(随之第一和第二重链)异二聚化，而不形成两个第一或两个第二CH3结构域之间的同二聚体)。考虑将这些用于改善重链异二聚化的不同方法作为与本文报道的多特异性抗体中减少轻链错配和Bence-Jones型副产物的重链和/或轻链修饰(一个结合臂中的VH和VL交换/取代和在CH1/CL界面引入带相反电荷的带电荷氨基酸的取代)组合的不同选择。在本发明的一个优选实施方案中(在多特异性抗体在重链中包含CH3结构域的情况下)，通过“杵入臼”技术改变本发明的多特异性抗体的CH3结构域，“杵入臼”技术以几个实例详细描述于例如WO96/027011；Ridgway,J.B.等,ProteinEng.9(1996)617-621；Merchant,A.M.等,Nat.Biotechnol.16(1998)677-681；WO98/050431中。在此方法中，改变两个CH3结构域的相互作用表面，以增加包含这两种CH3结构域的两条重链的异二聚化。(两条重链的)两个CH3结构域中的每一个可以是“杵”，而另一个是“臼”。二硫键的引入进一步稳定异二聚体(Merchant,A.M.等,NatureBiotechnol.16(1998)677-681；Atwell,S.等,J.Mol.Biol.270(1997)26-35)，并提高异二聚体的产率。因此，在一个实施方案中，该多特异性抗体(在每条重链中包含CH3结构域)进一步表征为：多特异性抗体的第一重链的第一CH3结构域和多特异性抗体的第二重链的第二CH3结构域各自在包含抗体CH3结构域之间的原界面的界面处遇见。其中改变该界面，以促进多特异性抗体的形成，其中该改变表征为：i)改变一条重链的CH3结构域，使得在与多特异性抗体内的另一条重链的CH3结构域的原界面遇见的一条重链的CH3结构域的原界面内，用具有较大侧链体积的氨基酸残基取代氨基酸残基，从而在一条重链的CH3结构域的界面内产生凸起，该凸起可放置在另一条重链的CH3结构域的界面内的凹陷中，和ii)改变另一条重链的CH3结构域，使得在与多特异性抗体内的第一CH3结构域的原界面遇见的第二CH3结构域的原界面内，用具有较小侧链体积的氨基酸残基取代氨基酸残基，从而在第二CH3结构域的界面内产生凹陷，该凹陷内可放置第一CH3结构域的界面内的凸起。优选地，具有较大侧链体积的氨基酸残基选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。优选地，具有较小侧链体积的氨基酸残基选自丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、缬氨酸(V)。在一个实施方案中，通过引入半胱氨酸作为每个CH3结构域的对应位置上的氨基酸来进一步改变两个CH3结构域，使得两个CH3结构域之间可以形成二硫键。在一个优选实施方案中，该多特异性抗体在“杵链”的第一CH3结构域中包含氨基酸T366W突变，在“臼链”的第二CH3结构域中包含氨基酸T366S、L368A、Y407V突变。也可以在CH3结构域之间使用附加的链间二硫键(Merchant,A.M.等,NatureBiotech.16(1998)677-681)，例如通过将氨基酸Y349C突变引入“臼链”的CH3结构域和将氨基酸E356C突变或氨基酸S354C突变引入“杵链”的CH3结构域。在一个优选实施方案中，该多特异性抗体(其在每条重链中包含CH3结构域)在两个CH3结构域之一中包含氨基酸S354C、T366W突变，在两个CH3结构域的另一个中包含氨基酸Y349C、T366S、L368A、Y407V突变(一个CH3结构域中附加的氨基酸S354C突变和另一个CH3结构域中附加的氨基酸Y349C突变形成链间二硫键)(Kabat编号)。考虑将进行CH3修饰来迫使异二聚化的其他技术作为备选，其描述于例如WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO2007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012058768、WO2013157954、WO2013096291中。在一个实施方案中，使用EP1870459A1中所述的异二聚化方法。此方法基于在两条重链间的CH3/CH3结构域界面中的特定位置处引入带相反电荷的带电荷氨基酸的取代/突变。在一个优选实施方案中，该多特异性抗体在(多特异性抗体的)第一重链的CH3结构域中包含氨基酸R409D、K370E突变，在(多特异性抗体的)第二重链的第二CH3结构域中包含氨基酸D399K、E357K突变(Kabat编号)。在另一实施方案中，该多特异性抗体在“杵链”的CH3结构域中包含氨基酸T366W突变，在“臼链”的CH3结构域中包含氨基酸T366S、L368A、Y407V突变，此外，在“杵链”的CH3结构域中包含氨基酸R409D、K370E突变，在“臼链”的CH3结构域中包含氨基酸D399K、E357K突变。在另一实施方案中，该多特异性抗体在两个CH3结构域之一中包含氨基酸S354C、T366W突变，在两个CH3结构域的另一个中包含氨基酸Y349C、T366S、L368A、Y407V突变，或者该多特异性抗体在两个CH3结构域之一中包含氨基酸Y349C、T366W突变，在两个CH3结构域的另一个中包含氨基酸S354C、T366S、L368A、Y407V突变，此外，在“杵链”的CH3结构域中包含R409D、K370E突变，在“臼链”的CH3结构域中包含氨基酸D399K、E357K突变。在一个实施方案中，使用WO2013/157953中所述的异二聚化方法。在一个实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸T366K突变，而第二CH3结构域包含氨基酸L351D突变。在另一实施方案中，第一CH3结构域进一步包含氨基酸L351K突变。在另一实施方案中，第二CH3结构域进一步包含选自Y349E、Y349D和L368E的氨基酸突变(优选L368E)。在一个实施方案中，使用WO2012/058768中所述的异二聚化方法。在一个实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸L351Y、Y407A突变，第二CH3结构域包含氨基酸T366A、K409F突变。在另一实施方案中，第二CH3结构域进一步在T411、D399、S400、F405、N390或K392位包含氨基酸突变，例如选自：a)T411N、T411R、T411Q、T411K、T411D、T411E或T411W；b)D399R、D399W、D399Y或D399K；c)S400E、S400D、S400R、S400K、F405I、F405M、F405T、F405S、F405V或F405W、N390R、N390K或N390D、K392V、K392M、K392R、K392L、K392F或K392E。在另一实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸L351Y、Y407A突变，第二CH3结构域包含氨基酸T366V、K409F突变。在另一实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸Y407A突变，第二CH3结构域包含氨基酸T366A、K409F突变。在另一实施方案中，第二CH3结构域进一步包含氨基酸K392E、T411E、D399R和S400R突变。在一个实施方案中，使用WO2011/143545中所述的异二聚化方法，例如在选自368和409的位置处进行氨基酸修饰。在一个实施方案中，使用WO2011/090762中所述的异二聚化方法，其也使用上述杵入臼技术。在一个实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸T366W突变，第二CH3结构域包含氨基酸Y407A突变。在一个实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸T366Y突变，第二CH3结构域包含氨基酸Y407T突变。在一个实施方案中，该多特异性抗体属于IgG2同种型，且使用WO2010/129304中所述的异二聚化方法。在一个实施方案中，使用WO2009/089004中所述的异二聚化方法。在一个实施方案中，第一CH3结构域包含用带负电荷氨基酸(例如谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)，优选K392D或N392D)取代氨基酸残基K392或N392，第二CH3结构域包含用带正电荷氨基酸(例如赖氨酸(K)或精氨酸(R)，优选D399K、E356K、D356K或E357K，更优选D399K和E356K)取代氨基酸残基D399、E356、D356或E357。在另一实施方案中，第一CH3结构域进一步包含用带负电荷氨基酸(例如谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)，优选K409D或N409D)取代氨基酸残基K409或R409。在另一实施方案中，第一CH3结构域进一步或备选地包含用带负电荷氨基酸(例如谷氨酸(E)或天冬氨酸(D))取代氨基酸残基K439和/或K370。在一个实施方案中，使用WO2007/147901中所述的异二聚化方法。在一个实施方案中，第一CH3结构域包含氨基酸K253E、D282K和K322D突变，第二CH3结构域包含氨基酸D239K、E240K和K292D突变。在一个实施方案中，使用WO2007/110205中所述的异二聚化方法。B.抗BRDU抗体核酸复合物siRNA和含有半抗原的siRNA衍生物siRNA设计和构建的一般原则为本领域技术人员公知，此处将不详细考虑。我们的模块靶向方法的重要特征是将siRNA连接至半抗原或含有半抗原的部分，而不使siRNA功能性或半抗原和bsAb(双特异性抗体)的半抗原结合结构域之间的相互作用受损。为了直接将半抗原与所选择的siRNA偶联，选择了双链siRNA衍生物的有义链的3’端。之前发现siRNA中的此位置耐受附加的实体(如胆固醇(25))而不影响siRNA活性。与此一致，已观察到，3’-半抗原缀合的siRNA衍生物的功效(即它们降低靶mRNA水平的能力)与未修饰的siRNA相同(13)。作为附加的修饰，可以将荧光化合物如Cy5附着至有义链的5’端，以使得能够显示和追踪siRNA(例如Dig-siRNA-Cy5)。按我们的经验，半抗原偶联至有义链的5’端也产生具有良好活性的siRNA，但不优于偶联至3’端。含有半抗原的纳米颗粒半抗原偶联的siRNA可以直接与bsAb复合。这些复合物能够特异性递送siRNA至在其表面表达各靶抗原的细胞。但是，siRNA在胞内小泡上和胞内小泡中(通过内化作用)的累积本身在大多数情况下并不导致特异性基因敲减。原因是未修饰的siRNA累积在内体区室中而不逃逸进入胞质(13)。为了能够递送入胞质，可将siRNA包装入在其表面携带半抗原的纳米颗粒(1、2、26、27、3、28、29、30、5、31、32、9)。在掺入(大)纳米颗粒的结构中时，这些半抗原需可被bsAb接近。已描述了用于有效siRNA递送的多种纳米颗粒，其中许多包含PEG。因此，产生含有半抗原的纳米颗粒的一种方式是用半抗原偶联的PEG衍生物作为用于纳米颗粒产生的成分。这些试剂掺入制剂产生了半抗原装饰的纳米颗粒(例如Dig-LNP中的siRNA)。半抗原装饰的纳米颗粒在一些情况下也可以通过将半抗原偶联的siRNA配制为标准纳米颗粒来产生。令人惊奇地，这产生了半抗原分子以抗体可接近的方式暴露于其表面的纳米颗粒。荧光标记的siRNA可以以相同的方式掺入半抗原装饰的纳米颗粒而不丧失荧光信号。这可以用于显示和追踪含有半抗原的bsAb靶向纳米颗粒。两类已建立的纳米颗粒是动态聚缀合物(DPC)和脂基纳米颗粒(LNP)。含有半抗原缀合的PEG脂质的DPC和LNP已用于构建用于细胞靶向的siRNA部分(13)。DPC包括支架试剂，如聚丁基和氨基乙烯醚(PBAVE)，其是通过用聚乙二醇(PEG)可逆共价修饰而免受非特异性细胞相互作用的溶内体(endosomolytic)聚合物。siRNA和靶抗原都可以通过接头附着于聚合物，该接头稳定(例如对于半抗原连接)或能够进行pH依赖性有效负载释放(30、32、33)。半抗原装饰的DPC可以按确定的摩尔比(例如1:1或2:1)与bsAb符合，以产生bsAb靶向DPC。bsAb加载含有siRNA的DPC导致可通过SEC-MALLS检测的分子量和流体动力学半径增加。例如，不含bsAb的Dig-聚合物-siRNADPC是含有估计分子量在300-720kDa之间、流体动力学半径为7-10nm的分子的多分散液。加入bsAb形成半抗原-聚合物-siRNADPC-bsAb复合物提高分子量范围至500-1100kDa，提高流体动力学半径至9-12.5nm(13)。LNP包含聚乙二醇(PEG)-脂质，其亲脂酰基链锚定微粒中的亲脂PEG分子。这确保微粒稳定性和结构完整性。PEG-脂质的酰基链可具有多种长度。已成功使用的LNP包含PEG-脂质，该PEG-脂质具有由18个methandiyl基团组成且认为不可交换的相对长的C18锚，或由16个methandiyl基团组成且高度可交换的较短的C16锚(34、35)。PBS中的单独或与bsAb复合的含半抗原缀合siRNA的LNP可以通过动态光散射(DLS)来分析，以测定其流体动力学半径和多分散指数(Pdi)。可以将LNP与bsAb一起在室温孵育(～25℃；至多3小时)，并通过DLS测定微粒大小和多分散性的变化时程(13、36)。我们成功使用的半抗原装饰的LNP制剂包含总计1.4mol％PEG-脂质，其中0.4或0.04mol％为半抗原偶联(Dig修饰)C18PEG-脂质。其余不含半抗原的PEG-脂质包含C16脂质锚，以使得能够进行有效的LNP去保护和高siRNA转移/转染功效(34、35、36)。使用这类LNP，以1.7nM的IC50达到了至多90％敲减的敲减效率。此外，与用其他siRNA制剂(37)获得的结果不同，用这些LNP未观察到任何免疫刺激效应(13)。引用的文件：1.Akinc,A.等,Mol.Ther.18(2010)1357-1346.2.Bhattarai,S.R.等,Pharm.Res.27(2010)2556-2568.3.Lee,S.K.等,Meth.Enzymol.502(2012)91-122.4.Leus,N.G.等,Int.J.Pharm.459(2014)40-50.5.Semple,S.C.等,Nat.Biotechnol.28(2010)172-176.6.Song,E.等,Nat.Biotechnol.23(2005)709-717.7.Toloue,M.M.和Ford,L.P.,MethodsMol.Biol.764(2011)123-139.8.Yu,B.等,AAPSJ11(2009)195-203.9.Zimmermann,T.S.等,Nature441(2006)111-114.10.Beck,A.等,Nat.Rev.Immunol.10(2010)345-352.11.Weidle,U.H.等,CancerGenomicsProteomics10(2013)1-18.12.MetzS.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA108(2011)8194-8199.13.Schneider,B.等,Mol.Ther.NucleicAcids.1(2012)e46.14.Jung,S.H.等,Proteins19(1994)35-47.15.Reiter,Y.等,ProteinEng.8(1995)1323-1331.16.Reiter,Y.等,Nat.Biotechnol.14(1996)1239-1245.17.Ridgway,J.B.等,ProteinEng.9(1996)617-621.18.Molina,M.A.等,CancerRes.61(2001)4744-4749.19.Baselga,J.,Eur.J.Cancer37(2001)Suppl.4,S16-S22.20.Kies,M.S.和Harari,P.M.,Curr.Opin.Investig.Drugs3(2002)1092-1100.21.Chitnis,M.M.等,Clin.CancerRes.14(2008)6364-6370.22.Mansfield,E.等,Blood90(1997)2020-2026.23.Brinkmann,U.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88(1991)8616-8620.24.Pastan,I.等,CancerRes.51(1991)3781-3787.25.Soutschek,J.等,Nature432(2004)173-178.26.Chan,D.P.等,Biomaterials34(2013)8408-8415.27.Jhaveri,A.M.和Torchilin,V.P.,FrontPharmacol.5(2014)77.28.Malhotra,M.等,Int.J.Nanomedicine8(2013)2041-2052.29.MieleE.等,Int.J.Nanomedicine7(2012)3637-3657.30.Rozema,D.B.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA104(2007)12982-12987.31.Tiera,M.J.等,Curr.GeneTher.13(2013)358-369.32.Wolff,J.A.和Rozema,D.B.,Mol.Ther.16(2008)8-15.33.Wong,S.C.等,NucleicAcidTher.22(2012)380-390.34.Akinc,A.等,Mol.Ther.17(2009)872-879.35.Sou,K.等,Bioconjug.Chem.11(2000)372-379.36.Tao,W.等,Mol.Ther.18(2010)1657-1666.37.Robbins,M.等,Oligonucleotides19(2009)89-102.38.Grote,M.等,MethodsMol.Biol.901(2012)247-263.39.Haas,A.K.等,MethodsMol.Biol.901(2012)265-276.40.Aigner,A.,Curr.Pharm.Des.14(2008)3603-3619.41.Leucuta,S.E.,Curr.Drug.Deliv.10(2013)208-240.42.Burris,T.P.等,Mol.Endocrinol.13(1999)410-417.43.Collins,M.L.等,NucleicAcidRes.25(1997)2979-2984.C.重组方法和组合物抗体可以用例如US4,816,567中所述的方法和组合物产生。在一个实施方案中，提供分离的编码本文所述的抗BRDU抗体的核酸。这种核酸可以编码含有抗体的VL的氨基酸序列和/或含有抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在另一实施方案中，提供一个或多个包含这种核酸的载体(例如表达载体)。在另一实施方案中，提供包含这种核酸的宿主细胞。在一个这种实施方案中，宿主细胞包含以下(例如已用以下转化)：(1)包含编码含有抗体的VL的氨基酸序列和含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体；或(2)包含编码含有抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，该宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供制备抗BRDU抗体的方法，其中该方法包括在适于表达抗体的条件下培养上文提供的含有编码抗体的核酸的宿主细胞，并可选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。对于抗BRDU抗体的重组产生，分离例如上文所述的编码抗体的核酸，并插入一个或多个载体用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。这种核酸可以用常规方法(例如通过使用能够特异性结合编码抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)容易地分离和测序。适合用于克隆或表达编码抗体的载体的宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，尤其是在不需要糖基化和Fc效应子功能时，可以在细菌中产生抗体。抗体片段和多肽在细菌中的表达参见例如US5,648,237、US5,789,199和US5,840,523。(还参见Charlton,K.A.,In:MethodsinMolecularBiology,248卷Lo,B.K.C.(编辑),HumanaPress,Totowa,NJ,2003),245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)。表达后，可以从可溶性级分中的细菌细胞糊分离抗体，并可以进一步纯化。除原核生物外，诸如丝状真菌或酵母的真核微生物也是编码抗体的载体的适宜的克隆或表达宿主，包括糖基化途径已“人源化”，导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株。参见Gerngross,T.U.,Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；和Li,H.等,Nat.Biotech.24(2006)210-215。适合用于表达糖基化抗体的宿主细胞也衍生自多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴定了许多可以与昆虫细胞结合使用，尤其是用于转染草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)细胞的杆状病毒毒株。植物细胞培养物也可以用作宿主。见例如US5,959,177、US6,040,498、US6,420,548、US7,125,978和US6,417,429(描述用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。脊椎动物细胞也可以用作宿主。例如，可以使用适应悬浮生长的哺乳动物细胞系。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是SV40转化的猴肾CV1细胞系(COS-7)；人胚肾细胞系(描述于例如Graham,F.L.等,J.GenVirol.36(1977)59-74中的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(描述于例如Mather,J.P.,Biol.Reprod.23(1980)243-252中的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；buffalo大鼠肝细胞(BRL3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(HepG2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562)；描述于例如Mather,J.P.等,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68中的TRI细胞；MRC5细胞；及FS4细胞。其他有用的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub,G.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77(1980)4216-4220)；及骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。适合用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述参见例如Yazaki,P.和Wu,A.M.,MethodsinMolecularBiology,248卷,Lo,B.K.C.(编辑),HumanaPress,Totowa,NJ(2004),255-268页。D.测定可以通过本领域已知的多种测定针对其物理/化学性质和/或生物学活性鉴定、筛选或表征本文提供的抗BRDU抗体。结合测定和其他测定一方面，例如通过已知的方法(如ELISA、Western印迹等)针对其抗原结合活性测试本发明的抗体。另一方面，可以用竞争测定来鉴定与本文报道的抗体竞争结合BRDU的抗体。在示例性竞争测定中，在溶液中孵育固定的BRDU，该溶液包含结合BRDU的第一标记抗体和针对其与该第一抗体竞争结合BRDU的能力进行测试的第二未标记抗体。该第二抗体可以存在于杂交瘤上清中。作为对照，在溶液中孵育固定的BRDU，该溶液包含该第一标记抗体但不包含该第二未标记抗体。在允许该第一抗体与BRDU结合的条件下孵育后，去除过量的未结合抗体，并测量与固定的BRDU结合的标记的量。如果测试样品中与固定的BRDU结合的标记的量相对于对照样品实质性减少，则表明该第二抗体与该第一抗体竞争结合BRDU。参见Harlow,E.和Lane,D.,Antibodies:ALaboratoryManual,第14章,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1988)。E.免疫缀合物本发明还提供包含与一种或多种细胞毒剂(如化疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的蛋白质毒素、酶活性毒素或其片段)或放射性同位素缀合的本文的抗BRDU抗体的免疫缀合物。在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物缀合，该药物包括但不限于美登木素生物碱(maytansinoid，参见US5,208,020、US5,416,064和EP0425235B1)；auristatin，如monomethylauristatin药物部分DE和DF(MMAE和MMAF)(参见US5,635,483、US5,780,588和US7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；棘孢霉素(calicheamicin)或其衍生物(参见US5,712,374、US5,714,586、US5,739,116、US5,767,285、US5,770,701、US5,770,710、US5,773,001和US5,877,296；Hinman,L.M.等,CancerRes.53(1993)3336-3342；和Lode,H.N.等,CancerRes.58(1998)2925-2928)；蒽环类抗生素(anthracycline)，如柔红霉素或阿霉素(参见Kratz,F.等,Curr.Med.Chem.13(2006)477-523；Jeffrey,S.C.等,Bioorg.Med.Chem.Lett.16(2006)358-362；Torgov,M.Y.等,Bioconjug.Chem.16(2005)717-721；Nagy,A.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA97(2000)829-834；Dubowchik,G.M.等,Bioorg.&Med.Chem.Letters12(2002)1529-1532；King,H.D.等,J.Med.Chem.45(200294336-4343；和US6,630,579)；氨甲喋呤；长春酰胺；紫杉烷(taxane)，如多西紫杉(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、larotaxel、tesetaxel和ortataxel；单端孢霉烯(trichothecene)；及CC1065。在另一实施方案中，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的本文所述的抗体，该酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链、α-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleuritesfordii)蛋白质、香石竹毒蛋白(dianthin)蛋白质、美洲商陆(Phytolacaamericana)蛋白质(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordicacharantia)抑制剂、麻风树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、sapaonariaofficinalis抑制剂、白树毒素(gelonin)、米托洁林(mitogellin)、局限曲霉素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)和单端孢霉烯(tricothecenes)。在另一实施方案中，免疫缀合物包含与放射性原子缀合形成放射性缀合物的本文所述的抗体。可用多种放射性同位素来产生放射性缀合物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu的放射性同位素。在放射性缀合物用于检测时，它可以包含用于闪烁照相研究的放射性原子，例如TC99m或I123，或者用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)的自旋标记物，如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。可以用多种双功能蛋白质偶联剂来产生抗体和细胞毒剂的缀合物，如3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸-琥珀酰亚胺基酯(SMCC)、亚胺基硫烷(IT)、亚胺基酯的双功能衍生物(如己二酰亚氨酸二甲基酯HCl)、活性酯(如如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛(如戊二醛)、二-叠氮基化合物(如二(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、二-重氮基衍生物(如二-(对-重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如2,6-二异氰酸甲苯酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，可以按照Vitetta,E.S.等,Science238(1987)1098-1104中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳14标记的3-甲基二乙烯三胺五乙酸1-异硫氰基苄酯(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性药物的“可切割接头”。例如，可以使用酸敏感(labile)接头、肽酶敏感接头、光敏感接头、二甲基接头或包含二硫化物的接头(Chari,R.V.等,CancerRes.52(1992)127-131；美国专利号5,208,020))。本文的免疫缀合物或ADC明确考虑但不限于用包括但不限于BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB和SVSB((4-乙烯砜)苯甲酸琥珀酰亚胺基酯)的市售交联剂(例如来自PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)制备的这类缀合物。F.用于诊断和检测的方法和组合物本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。在一个实施方案中，提供用于诊断方法或检测方法的抗BRDU抗体。这种方法可以是体外或体内方法。在某些实施方案中，提供标记的抗BRDU抗体。标记包括但不限于直接检测的标记或部分(如荧光标记、生色标记、电子密度标记、化学发光标记和放射性标记)，以及例如通过酶促反应或分子相互作用间接检测的部分(如酶或配体)。示例性标记包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I，荧光团如稀土螯合物或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹磺酰、伞形酮、萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(US4,737,456))、萤光素、2,3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶(例如葡糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡糖-6-磷酸脱氢酶)，杂环氧化酶(如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)，与利用过氧化氢来氧化染料前体的酶(如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶)偶联，BRDU/抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记，稳定自由基等。G.药物制剂通过将具有希望的纯度的这种抗体与一种或多种可选的可药用载体(Osol,A.(编辑)Remington'sPharmaceuticalSciences第16版(1980))混合，以冻干制剂或水溶液的形式制备本文所述的抗BRDU抗体的药物制剂。可药用载体一般在所利用的剂量和浓度下对受体无毒性，且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸、柠檬酸和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯己双铵；氯苄烷铵；苄索氯铵；苯酚；丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他糖类，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性可药用载体进一步包括间质药物分散剂，如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，如rHuPH20(BaxterInternational,Inc.)。包括rhuPH20的某些示例性sHASEGP和使用方法描述于US2005/0260186和US2006/0104968中。在一方面，将sHASEGP与诸如软骨素酶的一种或多种附加的糖胺聚糖酶组合。示例性冻干抗体制剂描述于US6,267,958中。水性抗体制剂包括描述于US6,171,586和WO2006/044908中的那些，后一种制剂包括组氨酸-乙酸缓冲液。本文的制剂还可以根据所治疗的具体适应症的需要包含一种以上活性成分，优选相互无不利影响的具有互补活性的那些。这类活性成分以对预期目的有效的量适宜地组合存在。活性成分可以包载在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊(例如，分别为羟甲基纤维素微囊或明胶微囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊)中、胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳、纳米颗粒和纳米囊(nanocapsule))中或粗滴乳状液中。这类技术公开于Remington'sPharmaceuticalSciences第16版,Osol,A.(编辑)(1980)中。可以制备缓释制剂。缓释制剂的适宜的实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质是成形物品的形式，例如膜或微囊。待用于体内施用的制剂通常是无菌的。无菌可以容易地例如通过滤过无菌滤膜来达到。H.治疗方法和组合物本文提供的任意抗BRDU抗体可以用于治疗方法。一方面，提供用作药物的抗BRDU抗体。在某些实施方案中，提供用于治疗方法的抗BRDU抗体。另一方面，本发明提供抗BRDU抗体在制造或制备药物中的用途。另一方面，本发明提供包含本文提供的任意抗BRDU抗体的药物制剂。在一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任意抗BRDU抗体和可药用载体。本发明的抗体可以在治疗中单独或与其他活性剂(agent)组合使用。例如，本发明的抗体可以与至少一种附加的治疗剂共同施用。上文指出的这类联合治疗涵盖组合施用(两种或多种治疗剂包含在相同或分开的制剂中)和分开施用，在这种情况下，本发明的抗体的施用可以在施用附加治疗剂和/或佐剂之前发生、与施用附加治疗剂和/或佐剂同时发生和/或在施用附加治疗剂和/或佐剂之后发生。本发明的抗体还可以与放射治疗组合使用。可以通过任意适宜的手段来施用本发明的抗体(和任意附加治疗剂)，其包括胃肠外、肺内和鼻内，如果希望进行局部处理，则可以病灶内施用。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹腔内或皮下施用。部分取决于施用是短暂的还是长期的，可以通过任意适宜的途径来给药，例如通过注射，如静脉内或皮下注射。本文考虑多种给药方案，包括但不限于在多种时间点单次或多次施用、快速推注施用和脉冲输注。将以符合良好医疗实践的方式配制、给药和施用本发明的抗体。此背景中考虑的因素包括所治疗的具体障碍、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、障碍的病因、递送活性剂的部位、施用方法、施用日程及医疗从业者已知的其他因素。无需但可选地用目前用来预防或治疗所讨论的障碍的一种或多种活性剂配制抗体。这类其他活性剂的有效量取决于存在于制剂中的抗体的量、障碍或处理的类型及上文讨论的其他因素。这些通常以相同的剂量，并用本文所述的给药途径施用，或者本文所述剂量的1％至99％，或以任意剂量，并通过经验/临床上确定为适当的任意途径施用。对于疾病的预防或治疗，本发明的抗体(在单独使用或与一种或多种其他附加治疗剂组合使用时)的适当剂量将取决于待治疗的疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重度和过程、为了预防性还是治疗性目的而施用抗体、之前的治疗、患者的临床病史和对抗体的反应及主治医师的判断。在一次或一系列的治疗中适宜地对患者施用抗体。取决于疾病的类型和严重度，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.5mg/kg-10mg/kg)的抗体可以是例如通过一次或多次分开的施用或通过连续输注来对患者施用的初始候选剂量。取决于上述因素，一个典型的日剂量可以从约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于在几天或更长时间内反复施用，取决于病症，治疗通常将持续直至出现希望的疾病症状抑制。抗体的一个示例性剂量将在从约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围内。因此，可以对患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意组合)的一个或多个剂量。这类剂量可以间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2至约20或例如约6个剂量的抗体)。可以施用最初较高的负荷剂量，然后施用一个或多个较低的剂量。通过常规技术和测定容易地监测此治疗的进展。应理解，可以用本发明的免疫缀合物取代抗BRDU抗体来进行以上制剂或治疗方法的任一个；或除了抗BRDU抗体之外，用本发明的免疫缀合物来进行以上制剂或治疗方法的任一个。III.制成品在本发明的另一方面，提供包含用于治疗、预防和/或诊断上述障碍的材料的制成品。制成品包含容器及容器上或伴随容器的标签或包装说明书。适宜的容器包括例如瓶、小管、注射器、IV溶液袋等。容器可以形成自多种材料，如玻璃或塑料。容器容纳本身或与另一组合物组合时对治疗、预防和/或诊断病症有效的组合物，且可以具有无菌接口(例如容器可以是具有可通过皮下注射针头穿孔的塞子的静脉内溶液袋或小管)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装说明书指示该组合物用于治疗所选择的病症。此外，制成品可以包含：(a)组合物包含在其中的第一容器，其中该组合物包含本发明的抗体；和(b)组合物包含在其中的第二容器，其中该组合物包含其他细胞毒性剂或其他治疗剂。本发明的此实施方案中的制成品可以进一步包含指示该组合物可以用来治疗特定病症的包装说明书。备选地或此外，制成品可以进一步包含第二(或第三)容器，该容器包含可药用缓冲液，如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸缓冲盐溶液、林格溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包含商业和用户角度希望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释液、滤器、针头和注射器。应理解，任意以上制成品可以包含本发明的免疫缀合物来取代抗BRDU抗体；或除了抗BRDU抗体之外，包含本发明的免疫缀合物。IV.具体实施方案1.人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。2.人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:02的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。3.人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:03的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。4.人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:02的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:03的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。5.人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:13的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。6.人源化抗BRDU抗体，其中该抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:02的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:13的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3。7.实施方案1至6中任一个的人源化抗BRDU抗体，其进一步包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3。8.实施方案1至7中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体在重链的第30位具有脯氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。9.实施方案1至8中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体在重链的第58位具有苯丙氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。10.实施方案1至9中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体在重链的第108位具有苏氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。11.实施方案1至10中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体在轻链的第49位具有赖氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。12.实施方案1至11中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体在轻链的第98位具有亮氨酸氨基酸残基(Kabat编号)。13.实施方案1至12中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含以下一个或多个：-重链可变结构域第30位的P；和/或-重链可变结构域第58位的F；和/或-重链可变结构域第108位的T；和/或-轻链可变结构域第49位的K；和/或-轻链可变结构域第98位的L(所有位置均按照Kabat)。14.实施方案1至13中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:09具有至少95％序列同一性的VH序列，及与氨基酸序列SEQIDNO:10具有至少95％序列同一性的VL序列。15.实施方案1至13中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含源自重链可变结构域氨基酸序列SEQIDNO:11的VH氨基酸序列，及源自轻链可变结构域氨基酸序列SEQIDNO:12的VL氨基酸序列。16.实施方案1至13中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是包含重链可变结构域SEQIDNO:11和轻链可变结构域SEQIDNO:12的非人抗BRDU抗体的人源化变体。17.实施方案1至16中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含具有氨基酸序列SEQIDNO:09的VH。18.实施方案1至17中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含具有氨基酸序列SEQIDNO:10的VL。19.实施方案1至18中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是全长IgG1抗体或全长IgG4抗体。20.实施方案1至19中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是单克隆抗体。21.实施方案1至20中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是二价抗体。22.实施方案1至21中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是双特异性抗体。23.实施方案1至22中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含：a)特异性结合第一抗原的第一全长抗体的重链和轻链；和b)特异性结合第二抗原的第二全长抗体的修饰重链和修饰轻链，其中恒定结构域CL和CH1相互取代；由此第一抗原或第二抗原是BRDU。24.实施方案1至22中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含：a)特异性结合第一抗原的第一抗体的轻链；和b)特异性结合第一抗原的第一抗体的重链，在其C端缀合至源自特异性结合第二抗原的第二抗体的scFv或scFab；由此第一抗原或第二抗原是BRDU。25.实施方案1至20中任一个的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是结合BRDU的抗体片段。26.复合物，其包含实施方案1至25中任一个的人源化抗BRDU抗体和含有BRDU的核酸。27.共价复合物，其包含实施方案3至25中任一个的人源化抗BRDU抗体和缀合至半胱氨酸残基的BRDU。28.药物制剂，其包含实施方案1至25中任一个的人源化抗BRDU抗体或实施方案26至27中任一个的复合物和可药用载体。29.实施方案1至25中任一个的人源化抗BRDU抗体的用途，用于递送含有BRDU的核酸至细胞。30.实施方案1至25中任一个的人源化抗BRDU抗体的用途，用于递送含有BRDU的核酸通过血脑屏障。V.实施例以下是本发明的方法和组合物的实例。应理解，由于上文所提供的一般描述，可以实施多种其他实施方案。实施例1从小鼠杂交瘤分离和表征编码鼠抗BRDU抗体的VH和VL结构域的cDNA直接从杂交瘤克隆获得鼠抗BRDU抗体的VH和VL结构域的蛋白质和(DNA)序列信息。随后进行的实验步骤是：(i)从产生抗体的杂交瘤细胞分离RNA；(ii)将此RNA转化为cDNA，转移入含有VH和VL的PCR片段；(iii)将这些PCR片段整合入用于在大肠杆菌中繁殖的质粒载体，并测定其DNA(和推测的蛋白质)序列。从杂交瘤制备RNA用RNeasyMiniKit(Qiagen)从杂交瘤细胞分离mRNA。在RLT缓冲液中裂解约106个细胞，将裂解物放在Qiashredder柱上。使用RNeasyMini柱浓缩和洗涤mRNA。通过RACEPCR产生编码VH和VH的DNA片段、将这些DNA片段克隆入质粒并测定其DNA和氨基酸序列：按照厂家的流程用SMARTRacecDNA扩增试剂盒(Clontech)进行特异性抗体cDNA序列的cDNA产生和扩增。对于特异性扩增，分别使用来自试剂盒的通用引物及来自抗体轻链和重链恒定区的特异性引物。通过凝胶电泳纯化PCR产物，并从琼脂糖提取(QIAquickGel提取试剂盒；Qiagen)。将PCR产物克隆入pCR4-TOPO载体(用于测序的TOPOTA克隆试剂盒，LifeTechnologies)。转化大肠杆菌细胞后，挑取5-10个克隆，按照标准技术分离质粒DNA，并对所克隆的插入片段进行DNA序列分析。SEQIDNO:12中显示抗BRDU抗体的鼠VL序列。SEQIDNO:11中显示抗BRDU抗体的鼠VH序列。实施例2鼠抗BRDU抗体的VH和VL结构域的人源化按以下人源化鼠BRDU结合抗体：WO2011/003557和WO2011/003780中描述了包含来自小鼠杂交瘤的具有κ轻链的IgG1种类鼠抗BRDU抗体的VH和VL结构域的编码序列和氨基酸序列的产生和表征。基于此信息，基于人种系构架IGHV1-18-01和KGKV3-15-01组合产生了对应的人源化抗BRDU抗体。SEQIDNO:09中显示人源化VH的氨基酸序列，SEQIDNO:10中显示人源化VL的氨基酸序列。实施例3重组抗BRDU抗体的组成、表达和纯化将鼠抗BRDU抗体可变区与人源恒定区组合形成单特异性或双特异性嵌合抗体。单特异性抗BRDU抗体和特异性结合BRDU以及不同的非BRDU靶标(例如受体酪氨酸激酶或IGF-1R)的双特异性抗BRDU抗体的产生需要：(i)设计和定义这类分子的氨基酸和核苷酸序列；(ii)在转染的培养哺乳动物细胞中表达这些分子；和(iii)从转染细胞的上清纯化这些分子。按之前在WO2012/093068中所述进行这些步骤。通常，为了产生具有鼠抗BRDU抗体的结合特异性的IgG种类的抗体，将VH序列符合读框地融合至IgG1亚类的人Fc区的CH1-铰合部-CH2-CH3的N端。类似地，将VL序列符合读框地融合至人CLκ恒定区的N端。为了产生包含BRDU结合特异性以及对其他靶标的特异性的双特异性抗体衍生物，将抗BRDU抗体、scFv或Fab片段符合读框地融合至之前所述抗体的重链的C端。在许多情况下，通过引入之前已描述过的VH44-VL100二硫键(例如Reiter,Y.等,Naturebiotechnology14(1996)1239-1245)来进一步稳定所应用的抗半抗原scFv。表达质粒：包含用于表达重链和轻链的表达盒的表达质粒分别组装在哺乳动物表达载体中。由此，编码单个元件的基因区段按上文所述连接。Kabat,E.A.等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991),NIHPublicationNo91-3242中给出了关于可以从其推测密码子选择的人轻链和重链的核苷酸序列的一般信息。κ轻链的转录单位由以下元件组成：-来自人巨细胞病毒(hCMV)的立即早期增强子和启动子；-合成的5’-UT，包括Kozak序列；-鼠免疫球蛋白重链信号序列，包括信号序列内含子；-克隆的可变轻链cDNA，其放置：5’端的唯一BsmI限制位点放置，剪接供体位点，3’端的唯一NotI限制位点；-基因组人κ基因恒定区，包括内含子2小鼠Ig-κ增强子(Picard,D.和Schaffner,W.Nature307(1984)80-82)；和-人免疫球蛋白κ多腺苷酸化(“polyA”)信号序列。γ1重链的转录单位由以下元件组成：-来自人巨细胞病毒(hCMV)的立即早期增强子和启动子；-合成的5’-UT，包括Kozak序列；-修饰的鼠免疫球蛋白重链信号序列，包括信号序列内含子；-克隆的单特异性可变重链cDNA或克隆的双特异性融合scFv-可变重链cDNA，其放置：5’端唯一BsmI限制位点，剪接供体位点，和3’端唯一NotI限制位点；-基因组人γ1重链基因恒定区，包括小鼠Igμ增强子(Neuberger,M.S.,EMBOJ.2(1983)1373-1378)；和-人γ1免疫球蛋白多腺苷酸化(“polyA”)信号序列。除κ轻链或γ1重链表达盒外，这些质粒包含：-潮霉素抗性基因；-Epstein-Barr病毒(EB病毒,EBV)的复制起点oriP；-来自载体pUC18的复制起点，其允许此质粒在大肠杆菌中复制；和-β-内酰胺酶基因，其在大肠杆菌中赋予氨苄青霉素抗性。重组DNA技术：用Sambrook,J.等,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版,ColdSpringHaborLaboratoryPress(1989)中所述的标准克隆技术进行克隆。所有分子生物学试剂均为市售(如果未另作说明)，并按照厂家的说明书使用。包含编码序列、突变或其他遗传元件的DNA由GeneartAG,Regensburg合成。DNA序列通过在SequiServe(SequiServeGmbH,德国)进行的双链测序测定。DNA和蛋白质序列分析和序列数据管理：用VectorNTIAdvancesuitversion9.0进行序列创建、作图、分析、注释和说明。抗BRDU抗体和衍生物的表达：通过瞬时转染悬浮人胚肾293(HEK293)细胞来表达抗BRDU抗体。为此，将对应的单特异性或双特异性抗体的轻链和重链构建在携带上述原核和真核选择标记的表达载体中。在大肠杆菌中扩增这些质粒，纯化，随后用于瞬时转染。用CurrentProtocolsinCellBiology(2000),Bonifacino,J.S.,Dasso,M.,Harford,J.B.,Lippincott-Schwartz,J.和Yamada,K.M.(编辑),JohnWiley&Sons,Inc中所述的标准细胞培养技术进行细胞的处理。在37℃/8％CO2下在适当的表达培养基中培养细胞。转染当日，按1-2x106个活细胞/ml将细胞接种在新鲜培养基中。在Opti-MEMI培养基(Invitrogen,USA)中制备DNA与转染试剂的复合物，250ml最终转染体积包含250μg摩尔比1:1的重链和轻链质粒DNA。转染后7天通过14,000g离心30分钟并滤过无菌滤器(0.22μm)来澄清含有单特异性或双特异性抗体的细胞培养物上清。上清保存于-20℃，直至纯化。为了测定细胞培养物上清中抗体和衍生物的浓度，应用了亲和HPLC层析。为此，将在含有200mMKH2PO4、100mM柠檬酸钠、pH7.4的溶液中，含有结合A蛋白的单特异性或双特异性抗体或其衍生物的细胞培养物上清加至AppliedBiosystemsPorosA/20柱。通过应用含有200mMNaCl、100mM柠檬酸钠、pH2.5的溶液来从层析材料进行洗脱。使用UltiMate3000HPLC系统(Dionex)。通过UV吸光度和峰面积的积分来定量所洗脱的蛋白质。纯化的IgG1抗体作为标准品。抗BRDU抗体的纯化：转染7天后，收集HEK293细胞上清。通过使用A蛋白-SepharoseTM亲和层析(GEHealthcare,瑞典)的亲和层析和Superdex200大小排阻层析在两个步骤中从上清纯化包含在其中的重组抗体。简言之，将包含抗体的澄清培养物上清加至用PBS缓冲液(10mMNa2HPO4、1mMKH2PO4、137mMNaCl和2.7mMKCl，pH7.4)平衡的MabSelectSuReProteinA(5-50ml)柱上。用平衡缓冲液洗出未结合的蛋白质。用50mM柠檬酸缓冲液pH3.2洗脱抗体(或衍生物)。用0.1ml2MTris缓冲液pH9.0中和含有蛋白质的级分。然后，混合洗脱的蛋白质级分，用AmiconUltra离心过滤装置(MWCO:30K，Millipore)浓缩，并上样在用20mM组氨酸、140mMNaCl、pH6.0平衡的Superdex200HiLoad26/60凝胶过滤柱(GEHealthcare,瑞典)上。使用按照Pace等,ProteinScience4(1995)2411-2423根据氨基酸序列计算的摩尔消光系数，通过以320nmOD作为背景校正测定280nm光密度(OD)，来测定纯化的抗体和衍生物的蛋白质浓度。混合单体抗体积分，快速冷冻，并保存于-80℃。提供部分样品用于随后的蛋白质分析和表征。通过存在和缺乏还原剂(5mM1,4-二硫苏糖醇)情况下的SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色来确认抗体的均一性。按照厂家的说明书(4-20％Tris-甘氨酸凝胶)使用Pre-Cast凝胶系统(Invitrogen,USA)。在还原条件下，IgG相关多肽链按类似于计算分子量的表观分子大小显示在SDS-PAGE上。通过A蛋白分析了所有构建体的表达水平。在这类非优化的瞬时表达实验中，平均蛋白质产率在每升细胞培养物上清6mg至35mg纯化蛋白质之间。图1显示表达和纯化结合BRDU和BRDU衍生物的人源化抗体的结果。还原和非还原SDSPAGE显示用A蛋白(MabSelect)和SEC纯化后在Kabat53位具有和没有半胱氨酸的人源化抗体的组成和均一性。分子量标记在未标记的泳道中。在还原条件下可作为单一条带检测到抗体H链(50k处的靠上条带)和L链(25k处的靠下条带)，不存在可见量的其他蛋白质污染物。实施例5BRDU结合双特异性抗体与含有BRDU的有效负载形成复合物应用SEC-MALLS分析来评价运铁蛋白受体(TfR)和溴脱氧尿苷(BRDU)结合双特异性抗体(bsAb)是否能够和以什么程度结合含有BRDU的有效负载。因此，按2:1的化学计量比将BRDU-DNA加至TfR-BRDUbsAb(350μg；2.5mg/ml)，并在室温孵育30分钟以形成bsAb/有效负载-复合物。作为对照试剂，我们制备了游离bsAb(2.5mg/ml)和游离BRDU-DNA(3.2mg/ml)。BRDU-DNA(BRDU-ACCAAGCCTAGAGAGGAGCAATACAACAGTACATATCGCGTGGTAAGCGT；SEQIDNO:14)每个DNA分子在DNA的5’端包含一个BRDU。复合物和对照试剂保存于-80℃，直至分析。对由此产生的复合物和对照试剂进行SEC-MALLS分析来鉴定和表征游离bsAb、游离有效负载及二者的复合物。在配有WyattminiDawnTREOS/QELS和OptilabrEX检测器的DionexUltimate3000HPLC上进行SEC-MALLS分析。分析物按1mg/ml溶解在PBS缓冲液pH7.4中，按0.5ml/分钟流速加至Superdex20010/300GL柱，并用PBS缓冲液pH7.4洗脱60分钟。这些分析的结果(图1中所示)显示，含有BRDU的DNA与bsAb形成确定的复合物。这些复合物按244.9kDa的MW从柱洗脱(图1A)，并显示6.8nm的流体动力学半径(图1B)，允许计算每个bsAb分子约两个(1.8)个DNA分子的化学计量比。与之相比，游离bsAb按215.4kDa的MW检测到，测定其流体动力学半径在6.2nm。游离BRDU-DNA按16.4kDa的MW检测到。因此，显示了TfR-BRDUbsAb有效和按化学计量地结合含有BRDU的DNA，以2:1的摩尔比产生复合物。实施例6通过质谱分析法分析BRDU结合抗体用肽-N-糖苷酶F(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim,德国)通过酶处理去除N聚糖后，通过之前进行还原和不进行还原的电喷雾离子化(ESI)质谱分析法来确认BRDU结合抗体及其轻链和重链的同一性和完整性。用TCEP进行还原。用等度甲酸梯度在自装G25-Sephadex-Superfine柱上进行脱盐。在配有nanoESI源(TriVersaNanoMate,Advion)的Q-TOF仪器(maXis,Bruker)上记录ESI质谱(+ve)。MS参数设置如下：转移：FunnelRF，400Vpp；ISCID能量，0eV；多极RF，400Vpp；四极：离子能量，3.0eV；低质量：850m/z；源：干燥气体，8L/分钟；干燥气体温度，160℃；碰撞室：碰撞能量，8eV；碰撞RF：3800Vpp；离子冷却器：离子冷却器RF，800Vpp；转移时间：140μs；PrePuls保存，20μs；扫描范围m/z600至2000。用MassAnalyzer软件(内部开发)进行数据评价。所观察到的脱糖BRDU结合抗体及其轻链和重链的分子量符合从氨基酸序列计算的理论分子量。权利要求书(按照条约第19条的修改)1.人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:04的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；进一步包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3；其中抗体包含：-重链可变结构域第30位的P；和-重链可变结构域第58位的F；和-重链可变结构域第108位的T；和-轻链可变结构域第49位的K；和-轻链可变结构域第98位的L(所有位置均按照Kabat)。2.人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:01的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:13的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:05的HVR-H3；进一步包含：(a)含有氨基酸序列SEQIDNO:06的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQIDNO:07的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQIDNO:08的HVR-L3；其中抗体包含：-重链可变结构域第30位的P；和-重链可变结构域第58位的F；和-重链可变结构域第108位的T；和-轻链可变结构域第49位的K；和-轻链可变结构域第98位的L(所有位置均按照Kabat)。3.权利要求1至2中任一项的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:09具有至少95％序列同一性的VH序列，及与氨基酸序列SEQIDNO:10具有至少95％序列同一性的VL序列。4.权利要求1至2中任一项的人源化抗BRDU抗体，其中抗体是包含重链可变结构域SEQIDNO:11和轻链可变结构域SEQIDNO:12的非人抗BRDU抗体的人源化变体。5.权利要求1至4中任一项的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含氨基酸序列为SEQIDNO:09的VH。6.权利要求1至5中任一项的人源化抗BRDU抗体，其中抗体包含氨基酸序列为SEQIDNO:10的VL。7.复合物，其包含权利要求1至6中任一项的人源化抗BRDU抗体和含有BRDU的核酸。8.共价复合物，其包含权利要求2至6中任一项的人源化抗BRDU抗体和缀合至半胱氨酸残基的BRDU。9.药物制剂，其包含权利要求1至6中任一项的人源化抗BRDU抗体或权利要求7至8中任一项的复合物，以及可药用载体。10.包含以下的抗体的用途：a)特异性结合第一抗原的第一抗体的轻链；和b)特异性结合第一抗原的第一抗体的重链，在其C端缀合至源自特异性结合第二抗原的第二抗体的scFv或scFab；由此第一抗体或第二抗体是权利要求1至6中任一项的抗BRDU抗体；用于递送含有BRDU的核酸至细胞。11.权利要求10的用途，其中抗BRDU抗体包含与氨基酸序列SEQIDNO:09具有至少95％序列同一性的VH序列，及与氨基酸序列SEQIDNO:10具有至少95％序列同一性的VL序列。12.权利要求10至11中任一项的用途，其中抗BRDU抗体是包含重链可变结构域SEQIDNO:11和轻链可变结构域SEQIDNO:12的非人抗BRDU抗体的人源化变体。当前第1页1 2 3