1.一种具有或不具有血红素的重组血红蛋白蛋白质,其包含作为氧载体的重组血红蛋白四聚体、二聚体和/或亚基并供给替代从动物或人来源分离和/或纯化的天然或原生血红蛋白分子。
2.根据权利要求1所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白亚基是基于来源于智人(Homo sapiens)的141至146个氨基酸的序列构建和表达的重组血红蛋白单体。
3.根据权利要求1所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白二聚体包含任意两个重组血红蛋白亚基,所述重组血红蛋白亚基各自是重组血红蛋白单体并且具有来源于智人的141至146个氨基酸的序列。
4.根据权利要求1所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白四聚体包含任意四个重组血红蛋白亚基,所述重组血红蛋白亚基各自是重组血红蛋白单体并且具有来源于智人的141至146个氨基酸的序列。
5.根据权利要求2所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白亚基包含分别具有SEQ ID No.1至4的α亚基、β亚基、γ1亚基和γ2亚基。
6.根据权利要求3所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白二聚体包含α-β异二聚体、α-γ1异二聚体、α-γ2异二聚体、β-γ1异二聚体和β-γ2异二聚体,所述重组血红蛋白亚基各自具有SEQ ID No.1至4中任一个的氨基酸序列。
7.根据权利要求4所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白四聚体包含2αβ2、2αγ12、2αγ22、2βγ12和2βγ22四聚体,所述重组血红蛋白亚基各自具有SEQ ID No.1至4中任一个的氨基酸序列。
8.根据权利要求1所述的重组血红蛋白蛋白质,其中所述重组血红蛋白亚基包含具有Poly-N或His标签中的至少一种或者不具有Poly-N或His标签。
9.一种制备权利要求1所述的重组血红蛋白分子的方法,其包括构建编码所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体和/或亚基的融合基因;将所述融合基因插入载体中;将所述载体插入宿主生物体中;以及表达权利要求1的所述蛋白质、四聚体、二聚体或亚基。
10.一种药物组合物,其包含在可药用载体中的权利要求1所述的重组血红蛋白蛋白质。
11.一种基于重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体和/或亚基的治疗剂,其包含权利要求1所述的重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体和/或亚基以及活性剂,所述活性剂选自化学治疗剂、放射治疗剂、细胞标记剂或荧光标记剂中的一种或多种,所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体和/或亚基直接与所述活性剂缀合或者通过可切割或不可切割的接头间接与所述活性剂缀合。
12.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白亚基是基于来源于智人的141至146个氨基酸的序列构建和表达的重组血红蛋白单体。
13.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白二聚体包含任意两个重组血红蛋白亚基,所述重组血红蛋白亚基各自是重组血红蛋白单体并且具有来源于智人的141至146个氨基酸的序列。
14.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白四聚体包含任意四个重组血红蛋白亚基,所述重组血红蛋白亚基各自是重组血红蛋白单体并且具有来源于智人的141至146个氨基酸的序列。
15.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白蛋白质在所述重组血红蛋白蛋白质的一个或多个亚基处连接有一个或多个所述接头分子。
16.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白蛋白质包含具有Poly-N或His标签中的至少一种或者不具有Poly-N或His标签。
17.根据权利要求12所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白亚基包含分别具有SEQ ID No.1至4的α亚基、β亚基、γ1亚基和γ2亚基。
18.根据权利要求13所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白二聚体包含α-β异二聚体、α-γ1异二聚体、α-γ2异二聚体、β-γ1异二聚体和β-γ2异二聚体,所述重组血红蛋白亚基各自具有SEQ ID No.1至4中任一个的氨基酸序列。
19.根据权利要求14所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白四聚体包含2αβ2、2αγ12、2αγ22、2βγ12和2βγ22四聚体,所述重组血红蛋白亚基各自具有SEQ ID No.1至4中任一个的氨基酸序列。
20.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基在与所述活性剂缀合之前被一个或多个官能团化学修饰,所述化学修饰包括使所述重组血红蛋白分子与以下一种或多种对于用于所述化学修饰的不同化学反应的化合物反应:
a)对于胺反应,所涉及的化合物包括酸酐;乙烯酮;NHS酯;异硫氰酸酯;异氰酸酯;包括氟苯基酯和羰基叠氮化物的活性酯;磺酰氯;羰基化合物,之后被还原性胺化;环氧化物;碳酸酯;氟苯;亚氨酸酯;羟甲基膦衍生物;曼尼希缩合;重氮基衍生物;4-磺基-2,3,5,6-四氟苯酚;羰基二咪唑;磺基-NHS和通过吡哆醛-5-磷酸基仿生转氨基作用的N端修饰;
b)对于硫醇反应,所涉及的化合物包括马来酰亚胺、卤代烷、卤代乙酰胺、二硫化物、硫代硫酸酯、含氮丙啶试剂、丙烯酰基衍生物、芳基化剂和乙烯基砜衍生物;
c)对于羧酸酯反应,所涉及的化合物包括重氮烷和重氮基乙酰基化合物、羰基二咪唑和碳二亚胺;
d)对于羟基反应,所涉及的化合物包括环氧化物和环氧乙烷、羰基二咪唑、碳酸酯、氯甲酸酯、化学和酶促氧化、烷基卤素和异氰酸酯;
e)对于天然化学连接,所涉及的化合物包含硫酯;
f)对于N-端修饰,所涉及的化合物包含N-端丝氨酸或苏氨酸,利用其高碘酸盐氧化来生成用于与羟胺、肼或酰肼、碳二亚胺偶联的醛;
g)对于生物正交官能团的引入,所涉及的化合物包含发生后续生物正交缀合反应的炔烃和叠氮化物,所述后续生物正交缀合反应包括炔烃和叠氮化物的偶极加成Huisgen 1,3-偶极加成、叠氮化物和三芳基膦的施陶丁格连接、炔烃和四嗪的Diels-alder反应以及炔烃和四唑的偶联;
h)对于光化学反应,所涉及的化合物包含光亲和标记剂、二氮丙啶衍生物、二苯甲酮和蒽醌;
i)对于金属介导的反应,所涉及的化合物包含金属类卡宾和钯活化的烯丙基试剂。
21.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述可切割的接头包含甲醇胺基、二硫化物基、尿素基、缩醛胺基、碳酸酯基、酯基、氨基甲酸酯基、磷酸酯基、酰胺基、乙缩醛基、亚胺基、肟基、醚基和磺胺基接头。
22.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述不可切割的接头包括烷基接头和芳基接头。
23.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述化学治疗剂包括5-氟尿嘧啶、替莫唑胺、顺铂及其他抗癌药物。
24.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述放射治疗剂包括铑-105络合物、钐-153络合物及其他相关络合物。
25.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述细胞或荧光标记剂包含一种或多种荧光蛋白、非蛋白质有机荧光团、荧光纳米颗粒和金属类发光染料。
26.根据权利要求11所述的治疗剂,其中所述癌症包括胰腺癌、白血病、头颈癌、结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、鼻咽癌、食管癌、前列腺癌、胃癌和脑癌。
27.一种药物组合物,其包含治疗有效量的权利要求11所述的基于重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基的治疗剂,所述组合物施用于患有癌症的有需要的受试者。
28.根据权利要求27所述的组合物,其中所述治疗剂的治疗有效量为在≤0.0024g/kg所述受试者,并且所述受试者是人。
29.根据权利要求27所述的组合物,其中所述治疗剂的治疗有效量为在≤0.03g/kg所述受试者,并且所述受试者是动物。
30.根据权利要求27所述的组合物,其还包含可药用载体、盐、缓冲剂、水或其组合。
31.根据权利要求27所述的组合物,其中所述施用的途径包括静脉内注射、腹膜内注射和皮下注射,并且所述组合物的施用可为单剂量每周一次,或者可为多剂量每周一次。
32.根据权利要求27所述的组合物,其中所述癌症包括胰腺癌、白血病、头颈癌、结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、鼻咽癌、食管癌或脑癌。
33.根据权利要求27所述的组合物,其中所述癌症是包括肝细胞癌的肿瘤、肝癌祖细胞诱发的肿瘤、成胶质细胞瘤或三阴性祖细胞诱发的肿瘤。
34.根据权利要求27所述的药物组合物,其中所述组合物的pH在5.5至9.5的范围内。
35.根据权利要求27所述的药物组合物,其中所述组合物的pH为7.2至8.0。
36.一种用于制备权利要求11所述的治疗剂的方法,所述方法包括:
a)提供重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基;
b)使用不同的柱色谱方法来纯化所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基;
c)通过交联剂来稳定所述重组血红蛋白蛋白质或四聚体以形成交联的重组血红蛋白蛋白质或四聚体;
d)对所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基进行化学修饰,包括与一种或多种官能团反应,之后使所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基与活性剂缀合;或者使活性剂与可切割或不可切割的接头缀合以形成接头-活性剂缀合物,之后使所述缀合物与所述重组血红蛋白蛋白质、四聚体、二聚体或亚基连接。
37.根据权利要求36所述的方法,其中所述化学修饰包含以下一种或多种反应或修饰:
a)胺反应,其中所涉及的化合物包括酸酐;乙烯酮;NHS酯;异硫氰酸酯;异氰酸酯;包括氟苯基酯和羰基叠氮化物的活性酯;磺酰氯;羰基化合物,之后被还原性胺化;环氧化物;碳酸酯;氟苯;亚氨酸酯;羟甲基膦衍生物;曼尼希缩合;重氮基衍生物;4-磺基-2,3,5,6-四氟苯酚;羰基二咪唑;磺基-NHS,以及通过吡哆醛-5-磷酸基仿生转氨基作用的N-端修饰;
b)硫醇反应,其中所涉及的化合物包括马来酰亚胺、卤代烷、卤代乙酰胺、二硫化物、硫代硫酸酯、含氮丙啶试剂、丙烯酰基衍生物、芳基化剂和乙烯基砜衍生物;
c)羧酸酯反应,其中所涉及的化合物包括重氮烷和重氮基乙酰基化合物、羰基二咪唑和碳二亚胺;
d)羟基反应,其中所涉及的化合物包括环氧化物和环氧乙烷、羰基二咪唑、碳酸酯、氯甲酸酯、化学和酶促氧化、烷基卤素和异氰酸酯;
e)天然化学连接,其中所涉及的化合物包含硫酯;
f)N-端修饰,其中所涉及的化合物包含N-端丝氨酸或苏氨酸,利用其高碘酸盐氧化来生成用于与羟胺、肼或酰肼、碳二亚胺偶联的醛;
g)生物正交官能团的引入,其中所涉及的化合物包含发生后续生物正交缀合反应的炔烃和叠氮化物,所述后续生物正交缀合反应包括炔烃和叠氮化物的偶极加成Huisgen 1,3-偶极加成、叠氮化物和三芳基膦的施陶丁格连接、炔烃和四嗪的Diels-alder反应,以及炔烃和四唑的偶联;
h)光化学反应,其中所涉及的化合物包含光亲和标记剂、二氮丙啶衍生物、二苯甲酮和蒽醌;
i)金属介导的反应,其中所涉及的化合物包含金属类卡宾和钯活化的烯丙基试剂。
38.根据权利要求36所述的方法,其中所述可切割的接头包含甲醇胺基、二硫化物基、尿素基、缩醛胺基、碳酸酯基、酯基、氨基甲酸酯基、磷酸酯基、酰胺基、乙缩醛基、亚胺基、肟基、醚基和磺胺基接头。
39.根据权利要求36所述的方法,其中所述不可切割的接头包括烷基接头和芳基接头。
40.根据权利要求36所述的方法,其中所述活性剂是化学治疗剂,所述化学治疗剂包括5-氟尿嘧啶、替莫唑胺、顺铂及其他抗癌药物。
41.根据权利要求36所述的方法,其中所述活性剂是细胞/荧光标记剂,所述细胞/荧光标记剂包含一种或多种荧光蛋白、非蛋白质有机荧光团、荧光纳米颗粒和金属类发光染料。
42.权利要求10所述的组合物用于使来自动物或人受试者的组织或者在动物或人受试者中的组织局部氧合的用途。
43.根据权利要求42所述的用途,其中所述组织是癌性肿瘤组织。
44.根据权利要求42所述的用途,其中所述组织是缺氧的。
45.根据权利要求42所述的用途,其中所述组织是离体的。
46.根据权利要求42所述的用途,其中所述组织是正常器官组织。
47.权利要求10所述的组合物在制备用于在有需要的动物或人受试者中治疗缺氧病症的药物中的用途。
48.权利要求10所述的组合物在制备用于在有需要的动物或人受试者中治疗失血性休克的药物中的用途。
49.权利要求11所述的治疗剂在制备用于在有需要的受试者中靶向并诱导癌细胞凋亡的药物中的用途,其中所述药物包含治疗有效量的权利要求11所述的治疗剂。
50.权利要求11所述的治疗剂在制备用于在有需要的受试者中抑制肿瘤转移和降低复发的药物中的用途,其中所述药物包含治疗有效量的权利要求11所述的治疗剂。
51.权利要求11所述的治疗剂用于癌细胞或肿瘤细胞或祖细胞或癌干细胞的活细胞成像和诊断成像的用途。