棉蚜微卫星标记组合及其引物和应用的制作方法

文档序号:13218985阅读:来源:国知局
技术特征:
1.一种棉蚜微卫星标记组合,其特征在于,包括19个棉蚜微卫星标记:Ago34、Ago40、Ago47、Ago55、Ago91、Ago96、Ago98、Ago100、Ago127、Ago133、Ago139、Ago141、Ago148、Ago151、Ago156、Ago161、Ago170、Ago184、Ago188;所述19个棉蚜微卫星标记的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1-19所示。2.用于检测权利要求1所述的棉蚜微卫星标记组合的引物组,其特征在于,包括SEQIDNO.20-57所示的引物。3.用于检测权利要求1所述的棉蚜微卫星标记组合的试剂盒,其特征在于,包括权利要求2所述的引物组。4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包括以下试剂中的一种或几种:PCR缓冲液,Mg2+、DNA聚合酶、dNTPs。5.一种棉蚜微卫星标记的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取棉蚜基因组DNA;(2)合成SEQIDNO.20-57所示的引物,并使用荧光染料对正向引物5’端进行标记,获得荧光标记后的棉蚜微卫星引物组;(3)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板,利用荧光标记后的棉蚜微卫星引物组进行PCR扩增获得扩增产物;(4)对扩增产物中的单色荧光标记DNA片段进行分离和多态性检测。6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,PCR扩增体系为:10×缓冲液2.5μL,10mmol/LdNTPs2.0μL,10μmol/L正向引物0.4-2.0μL,10μmol/L反向引物0.4-2.0μL,5U/μLTaq酶0.2μL,25ng/μLDNA1-2μL,使用PCR纯等级水补足至25μL体系。7.根据权利要求5或6所述的检测方法,其特征在于,PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,54-58℃退火30s,72℃延伸15-60s,28-36个循环;72℃延伸10min。8.权利要求1所述的棉蚜微卫星标记组合、权利要求2所述的微卫星引物组、权利要求3或4所述的试剂盒在棉蚜遗传背景分类中的用途。
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