vin‑cdtb在大肠杆菌中的表达和制备的制作方法

文档序号:11126075阅读:来源:国知局

技术特征:

1.vin基因和cdtb基因在同一载体中串联表达载体和工程菌的构建方法,包括如下步骤:1)通过DNA star软件对人粘着斑蛋白(vinculin)和空肠弯曲杆菌细胞扩张毒素B(cdtb)进行B细胞抗原表位分析。确定了vinculin 216-918氨基酸序列和cdtb全长序列,通过linker把两者直接串联,并命名为vin-cdtb,融和基因序列进行人工合成2)通过引物扩增融和基因序列,利用酶切位点插入到pET28a中,并命名为pET28-vincdtb,进行测序;3)转化BL21(DE3),菌株命名为BL21-VC。

2.vincdtb在大肠杆菌中的表达和高效制备方法,其步骤包括:构建含有权利要求1的表达载体和工程菌;诱导表达,超声破碎,取上清进行镍柱亲和纯化,500mM咪唑缓冲液洗脱,获得目的蛋白vin-cdtb。

3.按照权利要求2所制备的vin-cdtb,本发明还提供了用于检测肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)的试剂盒。

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