一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法与流程

文档序号:11837718阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,所述循环双水相体系为聚合物-盐循环双水相萃取体系,其中所述的盐为K2HPO4、 (NH4)3C6H5O7或K3C6H5O7,所述聚合物为L61或L62。

2.根据权利要求1所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,按照如下步骤进行:

(1)样品预处理:得到粗提取的菠萝汁,用福林法测定其中菠萝蛋白酶活性,用考马斯亮蓝法测定其中的蛋白质含量;

(2)双水相体系一次萃取菠萝蛋白酶:称取一定质量的盐,聚合物和粗提取的菠萝汁放入离心管中,加入蒸馏水,并调节体系pH;剧烈震荡后离心,直到溶液完全分相,聚合物和目标物聚集在上相,盐聚集在下相,然后放置于冰箱里,测定上相菠萝蛋白酶的活性,从而得到菠萝蛋白酶活回收率;测定上相蛋白质含量,结合酶的活性得到纯化因子,以此判断萃取效果;

(3)浊点法二次萃取菠萝蛋白酶并回收聚合物:将聚合物相取出,加入适量的蒸馏水进行稀释,调节溶液的pH值,放入水浴锅中保温,并离心,体系分为新的两相,水溶液和目标物聚集在上相,聚合物聚集在下相;

(4)将分离后的聚合物用于下一次的双水相体系中进行循环萃取实验。

3.根据权利要求2所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的体系中的盐为K2HPO4、 (NH4)3C6H5O7或K3C6H5O7;体系中盐的终浓度为8-15%。

4.根据权利要求2所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(2)中所述体系中的聚合物为L61或L62,体系中聚合物浓度为5-15%。

5.根据权利要求4所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(2)中所述体系中的聚合物为L61。

6.根据权利要求2所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(2)中所述体系pH范围为4-10。

7.根据权利要求6所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(2)中所述体系pH为7。

8.根据权利要求2所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(2)中所述放置于冰箱里8℃放置4h。

9.根据权利要求2所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(3)中所述溶液pH为7。

10.根据权利要求2所述的一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法,其特征在于,步骤(3)中所述水浴锅中保温温度为35℃,所述离心条件为35℃下2000转/分钟离心20分钟。

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